血府逐瘀胶囊、血塞通胶囊对溶血磷脂酸诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察血府逐瘀胶囊及血塞通胶囊含药血清对溶血磷脂酸（LPA）诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）增殖效应的影响。方法采用贴块法培养大鼠主动脉VSMC并分为7组：空白血清组,血府逐瘀胶囊含药血清组,血塞通胶囊含药血清组,3组分别＋LPA组,卡托普利含药血清＋LPA组。以四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法观察不同含药血清对细胞增殖的影响;采用流式细胞仪分析细胞周期和DNA含量。结果空白血清＋LPA组、血府逐瘀胶囊含药血清组较空白血清组0D值升高（P〈0．05）,S期指数升高（P〈0．01）。血府逐瘀胶囊含药血清＋LPA组、血塞通胶囊含药血清＋LPA组较卡托普利含药血清＋LPA组0D值降低（P〉0．05,P〈0．01）;S期指数升高（P〈0．01,P〉0．05）。结论LPA、血府逐瘀胶囊对体外培养的VSMC有促增殖作用,血塞通胶囊无促增殖作用。血府逐瘀胶囊、血塞通胶囊对LPA诱导的VSMC增殖有拮抗作用,血塞通胶囊作用更强。其作用机制部分与抑制DNA合成、阻止细胞进入S期有关。     

下瘀血汤对肝癌细胞生物活性及Nanog信号通路表达的影响

目的:研究下瘀血汤对肝癌细胞的作用以及对Nanog信号通路的影响。方法:将HepG2细胞分为空白血清组、低剂量含药血清组、中剂量含药血清组;高剂量含药血清组,通过MTT、流式细胞仪、Transwell测肝癌细胞增殖、凋亡及侵袭情况,实时PCR、蛋白质印迹法测Nanog mRNA、Bcl-2、胱天蛋白酶-3水平。结果:空白血清组肝癌细胞的OD值及侵袭数量高于中剂量、高剂量含药血清组(P<0.05),肝癌细胞凋亡率低于低剂量、中剂量、高剂量含药血清组(P<0.05),高剂量含药血清组肝癌细胞OD值及侵袭数量最少、凋亡最高;空白血清组肝癌细胞中Nanog mRNA及Bcl-2蛋白表达高于低剂量、中剂量、高剂量含药血清组(P<0.05),胱天蛋白酶-3的蛋白表达水平低于低剂量、中剂量、高剂量含药血清组(P<0.05),与低剂量、中剂量剂量含药血清组比较,高剂量含药血清组肝癌细胞中Nanog mRNA及Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05),胱天蛋白酶-3蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:下瘀血汤通可抑制肝癌细胞的活性及其侵袭力、促进癌细胞的凋亡,其作用机制可能调控与Nanog信号通路,从而促进胱天蛋白酶-3的表达、抑制Bcl-2水平有关。     

三七总皂苷对PDGF-BB所致动脉平滑肌细胞增殖周期的影响

目的:研究三七总皂苷对血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)诱导SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞(ASMC)增殖周期的影响及可能作用的机制。方法:将SD大鼠ASMC进行体外培养,采用MTS法检测三七总皂苷对PDGF-BB诱导平滑肌细胞增殖的影响;流式细胞仪分析细胞增殖周期;实时逆转录聚合酶链反应技术检测ASMC中c-fos、cyclin D1和cyclin E1 mRNA表达。结果:PDGF-BB0.02 mg/L能明显升高ASMC光密度值,增加S期细胞比例而降低G0/G1期细胞比例,并上调c-fos、cyclin D1和cyclin E1 mRNA表达。PDGF-BB+三七总皂苷30 mg/L、60 mg/L、180 mg/L组均明显降低PDGF-BB升高的细胞光密度、S期细胞比例而升高G0/G1期细胞比例;明显下调PDGF-BB所致的c-fos、cyclin D1和cyclin E1 mRNA高表达。结论:三七总皂苷可能通过阻止动脉平滑肌细胞由G0/G1期进入S期而抑制PDGF-BB所致的增殖,其作用机制可能与降低c-fos、cyclin D1和cyclin E1 mRNA高表达有关。     

半夏泻心汤及其拆方对胃肠平滑肌细胞增殖的影响

目的:通过观察半夏泻心汤及其拆方对大鼠胃肠平滑肌细胞增殖的影响,探讨其调节胃肠运动的作用机制。方法:提取大鼠胃肠平滑肌细胞,免疫组化方法鉴定后稳定培养;采用血清药理学和MTT法观察半夏泻心汤及其拆方各组对胃肠平滑肌细胞增殖的影响。结果:成功获取胃肠平滑肌细胞;24 h,仅甘补组、辛开苦降组OD值均高于空白组,且有统计学差异(P<0.05);48 h,全方组、辛开组、苦降组、苦降甘补组OD值高于空白组,且有显著性统计学差异(P<0.01);72 h时,测得各用药组OD值均高于空白组,且具有显著性统计学差异(P<0.01)。结论:半夏泻心汤及其拆方各组的含药血清,可以不同程度的促进胃肠平滑肌细胞的增殖,推测其可能是半夏泻心汤调节胃肠运动的作用机制之一。     

乙肝健及其含药血清对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的抑制作用研究

目的探讨乙肝健药液及其含药血清对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的抑制作用。方法培养HepG2.2.15细胞,24 h后加入6组不同浓度乙肝健药液和其含药血清,并与空白对照组、空白血清组对照,继续培养48 h,MTT检测各组细胞存活力;根据MTT结果选取3组浓度乙肝健药物,ELISA法检测各组48 h和96 h后上清液中HBsAg和HBeAg的含量;流式细胞术测定3组不同浓度乙肝健药液48 h后对HepG2.2.15细胞周期的影响。结果乙肝健各药液组和含药血清组细胞OD值均低于空白对照组及空白血清组(P<0.01);乙肝健不同药液组及其含药血清组作用HepG2.2.15细胞48h及96 h后,除乙肝健1组96 h的HBsAg的OD值高于空白对照组和空白血清组外,其余各组OD值均低于空白对照组及空白血清组(P<0.01)。结论乙肝健具有一定抑制HBV体内复制的作用。     

益气化瘀散结方对胃癌SGC-7901细胞PI3K/AKt/Mtor信号通路的影响

目的:通过观察益气化瘀散结方干预后胃癌SGC-7901细胞PI3K/AKt/mTOR信号通路分子的表达变化,探讨益气化瘀散结方影响胃癌细胞增殖的作用机制。方法:体外培养SGC-7901细胞,采用益气化瘀散结方含药血清干预,细胞分为空白血清组及5%、10%、20%益气化瘀散结方含药血清组,药物干预后,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期变化,Western-blot、Real-time PCR技术检测PI3K、AKT、mTOR蛋白及mRNA的表达变化。结果:与空白血清组比较,不同浓度益气化瘀散结方含药血清均能不同程度抑制SGC-7901细胞的增殖,其中10%,20%更为明显,差异有统计学意义(P<0.05),时间上以48 h最为明显;与空白血清组比较,10%,20%益气化瘀散结方含药血清组G0/G1期细胞比例明显升高,S期细胞比例明显降低(P<0.05);与空白血清组比较,不同浓度益气化瘀散结方含药血清组PI3K、AKT、mTOR蛋白及mRNA表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:抑制PI3K/AKt/mTOR信号通路可能是益气化瘀散结方抑制胃癌细胞增殖、调节胃癌细胞生长周期的重要作用机制之一。     

三七总皂苷通过ERK/Akt通路改变HepG2/阿霉素细胞耐药性

目的 观察三七总皂苷对人肝癌阿霉素耐药细胞（HepG2/Adr）耐药性及细胞外调节蛋白激酶（ERK）/蛋白激酶B（Akt）通路主要蛋白表达的影响,从ERK/Akt通路探讨三七总皂苷逆转HepG2/Adr细胞耐药的可能作用机制。方法 利用噻唑蓝（MTT）比色法检测三七总皂苷对HepG2/Adr细胞增殖的影响,利用（100,50,25 mg·L^-1）三七总皂苷分别与（20 μmol·L^-1）阿霉素联合处理HepG2/Adr细胞,同时设置空白组,采用高内涵筛选平台检测药物作用40 min,3 h,6 h阿霉素在HepG2/Adr细胞内的积累;采用蛋白免疫印迹法检测P-糖蛋白/多药耐药基因1/ATP家族所介导的ABC家族转运蛋白（P-gp/MDR1/ABCB1）等耐药相关蛋白及ERK/Akt信号通路主要蛋白表达量;激光共聚焦显微镜检测MDR1在细胞膜上分布的改变。结果 与人肝癌细胞HepG2比较,HepG2/Adr细胞MDR1表达量显著升高（P<0.01）;与阿霉素组比较,三七总皂苷（25,50,100 mg·L^-1）与阿霉素（20 μmol·L^-1）联合给药在体外对HepG2/Adr细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）显著降低（P<0.01）,逆转倍数最高为10倍;与阿霉素组比较,联合给药组3,6 h可明显提高阿霉素在细胞内的积累（P<0.05）,呈剂量依赖性;与空白组和阿霉素组比较,三七总皂苷（50,100 mg·L^-1）与阿霉素（20 μmol·L^-1）联合给药组MDR1,ABC半转运蛋白（ABCG2）,多药耐药相关蛋白1（MRP1）,ERK,磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK）,Akt,磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）,磷酸化mTOR（p-mTOR）的表达明显降低（P<0.05）;与空白组比较,阿霉素组与三七总皂苷（25 mg·L^-1）组MDR1在细胞膜上的分布差异无统计学意义;与空白组和阿霉素组比较,三七总皂苷（100,50 mg·L^-1）组可明显减少MDR1在细胞膜上的分布（P<0.05）。结论 三七总皂苷可抑制ERK/Akt通路,降低MDR1的表达,明显提高阿霉素在HepG2/Adr细胞中的积累,可能是三七总皂苷逆转耐药的机制之一。     

三七含药血清对成纤维细胞功能及VEGF、TGF-β、Collagen Ⅰ表达的影响

目的:探讨三七含药血清对L929成纤维细胞增殖、迁移及血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子-β(TGF-β)、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)表达的影响。方法:将28只SPF级SD大鼠随机分为对照组及三七低、中、高剂量组,制备血清。体外培养小鼠成纤维细胞系L929,对照组给予生理盐水血清,低、中、高剂量组给予相应的三七含药血清干预。CCK-8法检测成纤维细胞增殖,划痕实验检测成纤维细胞迁移,RT-qPCR及Western Blot分别检测VEGF、TGF-β、Collagen Ⅰ的mRNA及蛋白表达。结果:与对照组比较,低剂量组细胞干预24 h后OD值及干预48 h后迁移愈合百分比升高(P<0.05),VEGF、TGF-β蛋白及mRNA表达增加(P<0.05);中剂量组细胞干预24 h后OD值及干预48 h后迁移愈合百分比提高(P<0.05),VEGF、TGF-β、Collagen Ⅰ蛋白及mRNA表达增加(P<0.05);高剂量组细胞干预24 h后OD值及干预48 h后迁移愈合百分比降低(P<0.05),VEGF、TGF-β蛋白及mRNA表达下...     

菟丝子黄酮、雷公藤多苷对体外培养幼鼠生精细胞周期及凋亡的影响

目的通过观察含雷公藤多苷(GTW)、菟丝子黄酮药物血清对体外培养的大鼠睾丸生精细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响,探讨菟丝子黄酮干预GTW所致生殖损伤的作用机制。方法体外培养大鼠睾丸生精细胞,将其分为空白组、9mg GTW组(多苷1号组)、9mg GTW+菟丝子黄酮组(黄酮1号组)、12mg GTW组(多苷2号组)、12mg GTW+菟丝子黄酮组(黄酮2号组),加不同含药血清,于培养24h、48h后,通过MTT法检测含药血清对生精细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测含药血清对生精细胞细胞周期及凋亡的影响。结果生精细胞增殖方面:血清作用24h、48h时,黄酮1号组OD值明显高于多苷1号组;黄酮2号组OD值高于多苷2号组;均具有明显统计学差异(P0.05)。生精细胞S期细胞百分比:黄酮2号组较多苷2号组明显降低(P0.05);而黄酮1号组与多苷1号组比较无统计学意义(P0.05)。生精细胞凋亡方面:黄酮1号组较多苷1号组明显降低(P0.05);而黄酮2号组与多苷2号组比较无统计学意义(P0.05)。结论GTW可使体外培养幼鼠生精细胞增殖能力下降,细胞凋亡增多。菟丝子黄酮可干预生精细胞的分裂周期,同时对生精细胞凋亡有明显的调控作用。     

益气养阴解毒方对5-Fu诱导HepG2细胞凋亡的影响

目的:观察益气养阴解毒方的含药血清与化疗药5-FU体外共同作用于肝癌HepG2细胞后,对细胞增殖和凋亡的影响。方法:备大鼠的益气养阴解毒方的含药血清,分为中药含药血清组、化疗药物5-Fu组和中药含药血清+5-Fu组,并设不含药的空白大鼠血清为对照组,分别作用于HepG2细胞。结果:1益气养阴解毒复方中药含药血清作用于HepG2细胞24h、48h、72h后,对细胞生长未出现明显的抑制作用(与对照组相比,P>0.05);5-FU组及中药含药血清+5-FU组与HepG2细胞共同培养48h、72h后,HepG2细胞的生长明显受到抑制(与对照组相比,P<0.05);中药含药血清与5-FU共同作用于HepG2细胞抑制作用更明显(与5-FU组相比,P<0.05)。2中药含药血清组作用24h、48h、72h后流式细胞术检测到HepG2细胞凋亡指数与空白对照组无明显差异(P>0.05);5-FU组与HepG2细胞共同培养48h、72h后检测到凋亡指数增多(与对照组相比,P<0.05;P<0.01);中药含药血清+5-FU组48h、72h细胞凋亡指数明显高于5-FU组(P<0.05)。结论:益气养阴解毒方含药血清可增强5-FU对HepG2细胞的凋亡诱导作用,这可能是本方与化疗合用增效的重要机制之一。     

柿叶黄酮抑制LDL刺激的大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的:观察柿叶黄酮对低密度脂蛋白(LDL)刺激时离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响.方法:体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,LDL刺激时,应用不同剂量的柿叶黄酮作用24 h后,采用MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态.结果:与对照组相比,LDL可以明显刺激大鼠血管平滑肌细胞的增殖,柿叶黄酮对LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞增殖具有明显的抑制作用(P＜0.05),并呈现剂量依赖性.结论:柿叶黄酮可明显抑制LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞增殖.     

三种抗高血压药对血管平滑肌细胞增殖的影响研究

目的：探讨拉西地平、福辛普利钠、坎地沙坦酯这三类临床常用抗高血压药对人动脉血管平滑肌细胞增殖的影响,对比三者差异,为临床抗高血压用药提供新思路.方法：采用组织块贴壁法原代培养人脐带动脉血管平滑肌细胞,并传2～3代,采用免疫组织化学染色法鉴定;应用MTS法检测拉西地平、福辛普利钠、坎地沙坦酯对人动脉血管平滑肌细胞增殖的作用.结果：组织块贴壁法原代培养HUA-SMCs,传3代后,阳性细胞率为90％;拉西地平、福辛普利钠对人动脉血管平滑肌细胞的增殖均有抑制作用,而坎地沙坦酯对人动脉血管平滑肌细胞增殖的抑制作用无统计学意义.结论：拉西地平、福辛普利钠在治疗高血压时还可以抑制血管平滑肌细胞异常增殖,对血管有保护作用,而另一种抗高血压坎地沙坦酯则无此作用.     

淫羊藿苷对大鼠颈动脉损伤后新生内膜增生和平滑肌细胞凋亡的影响

目的:研究淫羊藿苷对大鼠颈动脉损伤后新生内膜增生和平滑肌细胞凋亡的影响。方法:大鼠44只随机分为正常对照组8只,淫羊藿苷60 mg.kg-1组、淫羊藿苷120 mg.kg-1组和模型组各12只。后3组建立鼠颈动脉球囊损伤术后狭窄模型,淫羊藿苷组术前6 d开始ig至实验结束;模型组以等体积生理盐水ig。术后14 d和28 d分批处死动物。取各组动物颈动脉损伤段,常规制片,HE染色,采用计算机图像分析系统测量内膜面积和中膜面积,并计算新生内膜/中膜面积比(I/M);采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的三磷酸脱氧尿嘧啶缺口末端标记法(TUNEL)检测平滑肌细胞凋亡。结果:给药两组术后14,28 d,损伤部位血管内膜、中膜面积明显小于模型组,差异非常显著(P0.01);球囊损伤后14,28 d,各手术组新生内膜区均出现明显的凋亡细胞,其中淫羊藿苷组较模型组细胞凋亡率显著增高(P0.01),结论:淫羊藿苷可能通过促进平滑肌细胞的凋亡而减轻球囊损伤后新生内膜的增生。     

血府逐瘀汤对野百合碱诱导肺血管重构大鼠肺血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的:观察血府逐瘀汤(XFZYT)对野百合碱(MCT)诱导肺血管重构大鼠肺血管平滑肌细胞增殖与凋亡的干预作用,并探讨其作用机制。方法:雄性SD大鼠54只,随机分为正常对照组、模型组、血府逐瘀汤预防组、血府逐瘀汤治疗组、硝苯地平预防组、硝苯地平治疗组,采用一次性腹腔注射MCT(60mg/kg)复制肺血管重构大鼠模型。药物干预后观察各组大鼠肺血管病理形态学变化,并采用免疫组化技术检测大鼠肺血管增殖细胞核抗原(PCNA)及Caspase-3蛋白表达情况。结果:与模型组比较,各药物组均能使肺小动脉管壁有不同程度变薄、管腔变大(P<0.05～0.01);血管增殖细胞核抗原(PCNA)增殖度下降,Caspase-3蛋白阳性率升高(P<0.05～0.01)。结论:血府逐瘀汤能有效减轻大鼠肺血管重构,其机制可能与调节平滑肌细胞增殖与凋亡有关。     

葛根素与大豆苷元对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的 :研究葛根素与大豆苷元对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用 ,并探讨其机制。方法 :分离培养人脐动脉平滑肌细胞 ,不同浓度葛根素、大豆苷元与细胞共孵育 ,使用MTT法检测细胞活性 ,同时用Rt PCR法检测Survivin ,Bcl xl,Bax ,GapdhmRNA的表达。结果 :葛根素与大豆苷元都可降低细胞增殖活性 ,升高Bax/Gapdh/Bcl xl/Gapdh的比值。与葛根素组相比 ,相同浓度的大豆苷元组细胞活性较低 ,Bax/Gapdh/Bcl xl/Gapdh比值较高。结论 :与葛根素相比 ,大豆苷元抑制血管平滑肌细胞增殖的作用更强。     

铁箍散藤茎的化学成分研究

目的:研究铁箍散 Schisandra propinqua 藤茎的化学成分及药理活性。方法:利用多种色谱技术进行分离纯化,根据化合物理化性质和光谱分析鉴定化合物的结构。用四唑盐(MTT)比色试验测定浸膏及化合物对15%FBS诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响。结果:从铁箍散的石油醚部分分离得到5个化合物,分别鉴定为:galgravin(1),veraguensin(2),2,3-二羟基丙基十八酸酯(3),2,3-二羟基丙基十六酸酯(4),2,3-二羟基丙基二十四酸酯(5)。结论:化合物1~5均为首次从该植物中分离得到,化合物1,2,5对体外血清诱导的平滑肌细胞增殖表现出了一定的抑制作用。     

丹参注射液对活性氧诱导的平滑肌细胞增殖的影响

目的　探讨丹参注射液对H2 O2 诱导的血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响。方法　用H2 O2 刺激VSMC增殖 ,应用氚 -胸腺嘧啶核苷 (3H -TdR)掺入实验观察VSMC的DNA合成 ,同时测定培养液中脂质过氧化物 (LPO)的含量。结果　丹参注射液剂量依赖性地抑制H2 O2 诱导的VSMC的3H -TdR掺入量 ,降低LPO的含量。结论　丹参注射液对预防由活性氧诱导的血管平滑肌细胞增殖所引起的疾病可能具有重要作用。     

染料木素对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖及脂质过氧化的影响

目的:探讨染料木素对主动脉平滑肌细胞(SMC)增殖及抗脂质过氧化作用.方法:培养大鼠主动脉平滑肌细胞,同时加入不同浓度染料木素,观察其对平滑肌细胞增殖和培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、3',5'-环磷酸腺苷(cAMP)、6-酮-前列环素(6-Keto-PGF1α)的影响,细胞增殖测定采用MTT法.结果:与对照组比较,染料木素在0.1～100 μmol/L范围内能明显抑制平滑肌细胞增殖(P＜0.05,P＜0.01),且呈计量依赖性;一定浓度染料木素能提高培养液SOD活性,降低MDA含量,升高cAMP和6-Keto-PGF1α水平.结论:染料木素可能通过提高SOD活性,降低MDA含量,升高cAMP和6-Keto-PGF1α水平抑制平滑肌细胞增殖.     

虎杖抗动脉粥样硬化作用的实验研究

目的通过观察虎杖及其有效成分提取物对兔动脉粥样硬化 (AS)模型的血脂、主动脉和冠状动脉粥样病变程度以及对血管平滑肌细胞增殖的影响,了解虎杖及其提取物在降脂和抗 AS方面的作用.方法 将家兔随机分为五组,对照组喂养正常饮食,余四组予以高脂饮食喂养 18周,其中三组分别予以虎杖、虎杖提取物虎杖苷和大黄素进行干预治疗.结果 (1)虎杖组实验后 TC、 LDL与高脂组比较有极显著差异,虎杖苷组 TC与高脂组比较有显著差异; (2)虎杖组和大黄素组主动脉粥样硬化斑块面积与高脂组比较有显著差异; (3)虎杖对血管平滑肌细胞的增殖有明显抑制作用.结论虎杖原药的降脂、抑制 AS形成和抑制血管平滑肌细胞的增殖的作用优于其有效成分提取物.     

绿藻基根硬毛藻的化学成分及其活性

目的:对绿藻基根硬毛藻Chaetomorpha basiretorsa进行化学成分研究,并对单体化合物进行细胞毒活性筛选以及抗动脉硬化活性筛选。方法:利用正相和反相色谱、SephadexLH20色谱以及反相HPLC等手段进行分离纯化,应用MS,IR和1D,2DNMR等方法鉴定结构;通过MTT法对单体化合物进行细胞毒活性筛选;通过MTT法对单体化合物在犬血管平滑肌细胞模型上进行增殖抑制活性测试。结果:从基根硬毛藻中分离并鉴定了5个化合物,分别为euphol(Ⅰ),loloilide(Ⅱ),4cumylphenol(Ⅲ),zeaxanthin(Ⅳ),lactucaxanthin(Ⅴ)。结论:所有化合物均为首次从本属海藻中分离得到,其中4cumylphenol(Ⅲ)为新天然产物。细胞毒活性试验结果显示所有化合物均无明显活性(IC₅₀>10μg·mL^-1);犬血管平滑肌细胞增殖抑制测试结果表明化合物Ⅰ具有一定的增殖抑制活性,其细胞成活率为(0.32±0.056)%。