机器灌注保存供肝在大鼠肝移植中的实验研究

目的观察机器灌注保存供肝在肝脏移植中的应用效果,探讨机器灌注保存供肝的作用机制。方法将大鼠供肝行机器灌注保存,然后行原位肝移植。于术后4h,检测受体血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、血清总胆红素、透明质酸的浓度;光镜下观察肝细胞及肝窦内皮细胞的形态学改变。结果机器灌注组ALT、AST、LDH、血清总胆红素、透明质酸均显著低于对照组(P<0.05)。实验组各保存时相肝细胞及肝窦内皮细胞肿胀、变性和坏死程度均明显轻于同时相对照组。结论机器灌注保存方法对离体肝脏的肝细胞、肝窦内皮细胞有保护作用,移植术后肝功能恢复良好;在保存液、保存温度相同的情况下,机器灌注保存方法在肝功能保护、延长保存时间方面都优于低温缺血保存方法。     

褪黑素对肝脏低温保存损伤的保护作用

目的　探讨MT对肝脏冷保存有无保护作用及其机制。方法　收集SD♂大鼠肝脏灌洗液 ,对反映肝细胞功能的ALT、AST、LDH和反映内皮细胞功能的HA、ET1和反映细胞氧化性损伤的MDA、SOD及光镜和电镜下肝组织形态学变化进行分析 ,同时设立UW液 +褪黑素 (Mel)不同时间及不同Mel浓度冷保存组 ,比较分析Mel的冷保存保护作用及不同时间及不同浓度的Mel对肝脏冷保存保护作用的影响。结果　①UW冷保存随着时间延长肝细胞和内皮细胞损害逐渐加重。②Mel对供肝冷保存损伤有保护作用。其保护机制可能与Mel强大的抗氧化损伤作用有关。③Mel 1× 10 - 5 mol·L- 1、1× 10 - 7mol·L- 1浓度时其保护作用优于Mel 1× 10 - 9mol·L- 1,而Mel 1× 10 - 5 mol·L- 1、1× 10 - 7mol·L- 1浓度间没有差异。提示Mel对肝脏冷保存损伤保护存在着浓度效应 ,随着时间延长Mel对肝脏冷保存损伤保护作用逐渐减弱 ,但优于单纯UW液冷保存组。结论　UW冷保存液对肝脏的冷保存随时间延长保护作用逐渐减弱 ,Mel液对肝脏冷保存损伤有保护作用 ,其机制与Mel的抗氧化损伤作用有关     

左旋卡尼汀对大鼠心脏缺血-再灌注损伤能量代谢的影响

目的：观察左旋卡尼汀对离体大鼠心脏缺血-再灌注损伤的作用及对心肌细胞能量代谢的影响。方法：将制备成功的Langendorff离体心脏模型随机分成3组（各8只）。正常对照组（CON组）：K—H液灌注65min；左旋卡尼汀组（L—CAR组）：离体心脏用K—H液平衡15min后，K—H液中加入5mmol／L左旋卡尼汀继续灌注20min．然后全心停灌20min，再用相同的液体复灌30min；心肌缺血-再灌注组（MIRI组）：整个实验过程同L—CAR组．但灌注液中不含左旋卡尼汀。比色法测定冠脉流出液中乳酸脱氢酶（LDH）含量，高效液相色谱法测定再灌注末心肌组织中腺苷酸的含量。结果：缺血前各组LDH活性差异无统计学意义（P〉0．05），再灌注末L—CAR组LDH含量明显低于MIRI组（P〈0．01），而心肌组织ATP、ADP、总腺苷酸水平及能荷则高于该组（P〈0．05，P〈0．01）。结论：左旋卡尼汀对缺血-再灌注心肌有保护作用，其保护机制与改善心肌能量代谢有关。     

心房肽Ⅲ对离体大鼠心脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察心房肽Ⅲ（APⅢ）对离体大鼠心肌缺血再灌注的保护作用。方法离体心脏停灌30min,造成全心缺血,复灌60min。共取36个心脏随机分为6个组：高、中、低（1×10^-8mol／L、3×10^-8mol／L、1×10^-8mol／L）3个剂量APⅢ组,（缺血再灌注）模型对照组,维拉帕米（10^-7mol／L）对照组和正常对照组。测定复灌第20分钟冠脉流出液中乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）的活性和灌流结束后心肌组织SOD活性和MDA含量。结果灌流液中,3种剂量的APⅢ组和维拉帕米组,SOD活性均显著高于模型对照组（P〈0．05）,LDH活性均低于模型对照组,但无统计学意义（P〉0．05）。心肌组织中,各剂量APⅢ组和维拉帕米组的SOD活性均高于模型对照组（P〈0．01）;各剂量APⅢ组和维拉帕米组MDA的含量均低于模型对照组,高、中剂量APⅢ组（P〈0．05）,而低剂量APⅢ组和维拉帕米组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论APⅢ可以减少心脏I／R中氧自由基的生成,保护心肌,作用优于维拉帕米,并有剂量依赖性。     

低温机器灌注保存供肝对肝窦内皮细胞损伤的研究

目的通过对低温缺血保存再灌注方法与低温机器灌注保存方法的比较,探讨低温机器灌注保存供肝的效果和机制。方法对照组肝脏置入4℃HC-A液中保存,实验组肝脏置入机器灌注系统保存,通过比较低温缺血保存再灌注方法与低温机器灌注保存再灌注后肝脏灌注流出液中丙氨酸转氨酶(ALT)以及透明质酸(HA)的摄取量,光镜下观察肝细胞及肝窦内皮细胞的形态学改变。结果对照组和实验组与健康组比较HA摄取量明显降低(P<0.05),ALT活性显著增高(P<0.05);随肝脏保存再灌注时间延长,实验组与对照组相同时点比较,灌注流出液中HA摄取量明显升高(P<0.05),ALT活性显著降低(P<0.05)。实验组肝组织病理改变均明显轻于对照组。结论低温机器灌注可以减少肝窦内皮细胞的损伤,减轻再灌注损伤,有效延长保存时间。     

HTK液和UW液心肌保存效果的实验研究

目的：在离体鼠心Langendorff灌注模型上,检验并比较HTK液和UW液在低温（0－4℃）心肌保存中的心肌保护作用。方法：实验分为2组,HTK组和UW组,每组8只Wistar大白鼠。快速取下鼠心并悬挂在Langendorff灌注模上灌注和测定血流动力基础值。灌注并低温保存离体鼠心4h.4h后重新复温复灌,再次测定血流动力学值,留取标本测恢复率HTK组优于UW组。心肌水含量两组差异无显著意义,灌注脉出液出肌酶漏出量HTK组明显低于UW组,心肌中ATP和CP含量HTK组高于UW组,心肌细胞超微结构变化HTK组轻于UW组,结率：HTK液和UW液阳比较合适的心肌保护液,对心肌的保存效果HTK液优于UW液。     

NICORANDIL改善心肌保存液保存效果的实验研究

目的：在离体鼠心Langendorff灌注模型上,检验心肌保存液中加入ATP－K离体通道开放剂Nicorandil对心肌保存液保存效果的影响。方法：实验分为4组,UW液组、HTK液组、UW液组＋Nicorandil组和HTK液＋Nicorandil组,每组8只Wistar雄性大白鼠。麻醉和抗凝后,快速取下鼠心并悬挂在Laupeudorff灌注模型上灌注,37℃下测定血流动力学基础值。分别用四种保存液灌停离体鼠心并低温（4℃）保存4小时。重新复温复灌,再次测定血流动力学值,留取标本分别测定心肌水含量、心肌酶漏出量、ATP和CP含量和心肌细胞超微结构变化。结果：心肌血流动力学恢复率,HTK液组高于UW液组;UW液＋Nicorandil组高于UW液组;HTK液＋Nicorandil组高于HTK液组;HTK液＋Nicorandil组 Nicorandil组低于HTK液组;UW液＋Nicorandil略低于UW液组,心肌中ATP和CP含量,HTK组高于UW组;HTK液＋Nicorandil组高于UW液＋Nicorandil组。心肌细胞超微结构变化,HTK液＋Nicorandil组心肌损害最轻,HTK组轻于UW液＋Nicorandil组,UW液组心肌损害最严重。结论：HTK液和UW液都是比较适合的心肌保存液,Nicorandil能够善心肌保存液的保存效果。     

心律平对缺血再灌注心脏保护作用的实验研究

目的 探讨心律平（抗心律失常药）对缺血再灌注心肌的保护效果.方法 大鼠24只,离体心脏灌注,随机分为试验组与对照组：2组均应用停跳液,心脏停跳后,停灌注120 min,再灌注30 min,实验组在停跳液中加入心律平.分别测定再灌注5,10,30 min时,左心室收缩功能（LVDPi）及冠脉流量（Vi）,检测冠脉流出液中CPK-MB、LDH、TnT量;再灌注30 min,取左心室前壁内膜,检查心肌超微结构变化.结果 再灌注5,10,30 min实验组左心肌收缩功能恢复均好于对照组;漏出液中CPK-MB、LDH、TnT含量均少于对照组组.实验组超微结构损害较对照组轻.结论 停跳液中加用心律平,可减少缺血再灌注损伤,有显著的心肌保护作用.     

左旋精氨酸含血停搏液对未成熟心肌的保护效果

目的探讨左旋精氨酸加入ThomasⅡ停搏液对未成熟心肌的保护效果。方法2～3周龄新西兰大白兔20只，随机分为2组，每组10只。建立Langendoff离体心脏灌注模型。对照组：ThomasⅡ号停搏液灌注加低温；实验组：左旋精氨酸加入ThomasⅡ号停搏液灌注并行低温。全心平均停循环90min，再灌注30min。观察指标：冠脉流量恢复率(CFR)、心肌丙二醛(MDA)／超氧化物岐化酶(SOD)含量、心肌三磷酸腺苷(ATP)含量、心肌磷酸肌酸激酶(CK)漏出量和乳酸脱氢酶(LDH)漏出量。结果再灌注末实验组心肌MDA含量低于对照组，而SOD含量高于对照组；实验组CFA和再灌注末心肌ATP含量高于对照组；实验组心肌含水量、CK和LDH漏出量低于对照组。结论左旋精氨酸加入含血ThomasⅡ号停搏液中可改善未成熟心肌的保护作用。     

肝移植中低温机器灌注保存供肝的研究

目的通过对低温缺血保存方法与低温机器灌注保存方法的比较,探讨低温机器灌注保存供肝的效果和机制。方法对照组肝脏置入4℃高渗枸橼酸嘌呤溶液(HC-A)中保存,实验组肝脏置入机器灌注系统保存,通过比较低温缺血保存与低温机器灌注保存后再灌注肝脏流出液中丙氨酸转氨酶(ALT)及肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量,光镜及电镜下观察形态学改变,从多方面阐明低温机器灌注保存供肝方法的优越性。结果对照组和实验组与健康组比较灌注流出液中的TNF-α含量及ALT活性明显升高(P<0.05),实验组与对照组相同时点比较,灌注流出液中TNF-α含量及ALT活性明显降低(P<0.05)。实验组肝组织病理改变均明显轻于对照组。结论低温机器灌注可以减少肝窦内皮细胞的损伤,减轻再灌注损伤,有效延长保存时间。     

肼对离体灌流大鼠肝损伤的影响

<正> 肼是肼类化合物中毒性最大,而且在过去的体内研究中发现对肝脏的损伤也是最强的化合物。某些作者报道动物肼中毒后血浆ALT活性及BSP潴留率均有明显升高,而有些作者如Killane及Sass等则报道肼在体内及体外都明显地抑制ALT活性。本文采用大鼠离体肝脏灌流作为实验模型,用不同剂量肼灌流大鼠离体肝脏,观察了不同时间的乳酸、丙酮酸、ALT、LDH、BSP、K~+、Na~+及总蛋白的变化。结果表明,100ml灌流液含1.5     

丹参对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的：观察丹参对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法取健康雄性大鼠150只,根据数字表法随机分为五组：即假手术组、模型组、丹参高剂量组（100 mg／kg）、中剂量组（30 mg／kg）、低剂量组（10 mg／kg）。丹参组分别于术前灌胃给药,每天1次,连续3 d;假手术组和模型组灌以等量0．9％氯化钠注射液。采用在体大鼠结扎冠状动脉30 min然后松扎冠状动脉180 min造心肌缺血再灌注损伤模型。测定心肌梗死范围,测定血清磷酸肌酸激酶（ CK）、乳酸脱氢酶（ LDH）。结果模型组与假手术组相比,心肌梗死范围及血清CK、LDH活性均显著增加（t＝14．382、21．460,均P＜0．05）。不同剂量丹参组均能明显缩小大鼠心肌缺血再灌注损伤的心肌梗死范围,明显降低血清CK,与模型组比较差异均有统计学意义（ t＝7．426、6．891、11．274,均P＜0．05）。不同剂量丹参组均能明显降低血清LDH,与模型组比较差异均有统计学意义（ t＝22．436、10．843、16．252,均P＜0．05）。结论丹参对心肌缺血再灌注大鼠具有抗氧化应激的作用,对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。     

后处理对肺缺血再灌注丙二醛和谷胱甘肽的影响

目的研究缺血后处理对离体大鼠怖缺血再灌注丙二醛（MDA）和谷胱甘肽（GSH）的影响并分析其可能的作用机制。方法建立离体大鼠肺缺血再灌注损伤模型。12只SD大鼠随机分为2组,每组6只。缺血再灌注（IR）组缺血2h后以Krebs-Henseleit Buffer（KHB）液再灌注1h,后处理（IPostC）组缺血2h后给予重复一次的5min灌注和5min缺血的后处理,即以KHB液行再灌注1h。持续监测及记录肺动脉压（PAP）,缺血前及再灌注末分别留取3ml的灌流液,缺血前、再灌注始及再灌注末分别切取约20mg肺组织制作10％的组织匀浆,灌流液及肺组织匀浆用于测定MDA及GSH的含量,再灌注结束测定肺湿／于重比（W／D）。结果IPostC组MDA、GSH及W／D较IR组明显降低（P〈0．05）。结论缺血后处理能明显减轻离体大鼠肺缺血再灌注损伤。     

纳洛酮对人离体肾脏缺血再灌注损伤的影响

目的 研究纳洛酮对人离体肾脏缺血再灌注损伤的影响。方法 用人离体肾脏，实验组在灌注液中加入纳洛酮（NAL）0.8μg/ml，分别在0－10min、10－20min和20－30min时收集灌注流出液，测定其丙二醛（MDA）、过氧化物歧化酶（SOD）及肾组织匀浆中的Na^ ，K^ -ATP酶、Ca^2 -ATP酶含量，并做病理观察。结果 上述各项指标在用NAL组与对照组比较均无显性差异。结论 NAL对离体肾脏缺血再灌注无明显影响，NAL对在体肾脏缺血再灌注的保护作用不是直接作用在肾脏本身。     

17β-雌二醇后处理对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的研究

目的：探讨17β-雌二醇（17β-estradiol,E2）后处理对缺血再灌注损伤离体大鼠心肌的影响。方法：采用Langendorff装置建立大鼠离体心脏缺血再灌注模型,随机分3组,其中后处理组（Pos组）在复灌时给予3次30s短暂开放／30s阻断,雌激素组（E2组）灌注液中含有17B-雌二醇。定时收集冠脉流出液测定冠脉流量（CF）;检测缺血前及复灌后冠脉流出液中LDH、SOD、CK的含量;测定缺血区心肌梗死面积,电镜下观察心肌超微结构变化。结果：复灌后各时点CF值在Pos,E2组较Isc组恢复好（P〈0．05）,复灌30min后Pos,E2组中CK、LDH漏出量较少,SOD含量较高伙0．05）,Pos,E2组心肌梗死面积减小（P〈0．05）。结论：机械后处理、17β-雌二醇后处理,对离体大鼠心肌有保护作用．雌激素抗氧化功能是后处理的重要机制之一。     

尼可地尔对大鼠供体肺功能和超微结构的影响

目的 研究钾离子通道开放剂尼可地尔对低温保存后大鼠供体肺功能和超微结构的作用。方法 24只健康雄性SD大鼠随机分为3组，A组为常规保存组，EC液灌洗后摘取心肺器官，于4℃恒温冰箱中保存8小时后取出，应用大鼠离体肺灌注模型以5ml／min流量再灌注60分钟；B组为尼可地尔（NCR）组，供体肺灌洗液中含有100μmol／L尼可地尔，余同A组；C组为尼可地尔＋格列本脲（NCR＋GLY）组，灌洗前15分钟根据体重取1mg／kg量选择性钾离子通道阻断剂格列本脲（Glibenclamide，GLY）经静脉给药，余同B组。再灌注过程中每10分钟测定肺动脉压力（mPAP）．每20分钟测定供体肺静脉血氧分压（PvO2），以评定移植肺功能。实验结束时取肺组织观察超微结构改变。结果 B组肺mPAP、PvO2及超微结构改变显著优于A组和C组（P〈0．05）。A组和C组各项指标无显著性差异（P〉0．05），GLY阻断了NCR的有益作用。结论 钾离子通道开放剂可改善低温保存后大鼠供体肺功能和超微结构。     

尾加压素Ⅱ对大鼠离体心脏功能的影响

目的:在大鼠离体心脏灌注模型上，观察尾加压素Ⅱ（urotensin II，UII）对大鼠心脏的影响，探讨UII对心脏作用的可能机制。方法：建立改良的Langendorff离体大鼠心脏灌注模型，观察给予不同浓度的UII后正常大鼠血流动力学的变化及大鼠冠脉流量、冠脉流出液中总蛋白、肌红蛋白含量、乳酸脱氢酶（LDH）和心肌MDA含量。结果：3种不同浓度的尾加压素II（10^10,10^9和10^8mol/L)分别加入50ml KH液中灌注大鼠心脏后，与正常对照组比较，左心室内压最大变化率（＋LVdp/dt)分别降低26．8％、39．27％和59．24％，－LVdp/dt分 和低57.36%、57．3％和65．4％；平均每分冠脉流量分别减少到42．79％、71．43％和80％。UII浓度为10^8mol/L时，冠脉流出液中总蛋白、肌红蛋白含量和乳酸脱氢酶（LDH）含量发生明显改变，分别增加到17．5mg/ml、15．2mg/L和30．8IU/L；心肌MDA含量增加，所有指标与对照组比较有显性差异。结论：UII对大鼠心脏的功能活动具有抑制作用。     

自制多器官保存液在草犬肝脏低温保存的应用

目的研究自制SMO(上海多器官)液对草犬肝脏低温保存的效果。方法采用草犬肝脏非循环离体灌注模型,比较SMO液、UW(威斯康星大学)液和LR(乳酸林格)液对草犬肝脏保存0、12、24、36、48h后,其形态学及生物化学的改变。并进行肝脏移植,观察移植后移植动物存活时间。结果SMO液保存48h之内,肝脏的形态学观测无明显改变。保存48h的肝脏,其各项生化功能SMO组明显优于LR液组(P<0.05);与UW液组比较无显著性差异(P>0.05),但SLCM(肝窦内皮细胞病死率)、HTWC(肝细胞含水量)值两组间有显著性差异(P<0.05)。保存36、48h后保存液pH值,SMO组明显高于UW组(P<0.05)。SMO液低温保存24h后行原位肝移植5例,5例均活过术后24h。结论SMO液保存犬肝48h效果明显优于LR液,与UW液相当,在改善低温保存及再灌注肝脏能量代谢、预防细胞内酸中毒及肝脏原位灌洗等方面,SMO液略优遇UW液。     

丹酚酸B对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的：研究丹酚酸B对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法：大鼠离体心脏采用Langendorff装置,灌注含氧K．H液30min后,夹闭,停止灌流30min,然后再灌注40min。实验分为模型（空白K_H液）组、葛根素（0．24mmol／1）组与丹酚酸B高、中、低浓度（60、30、15gmol／1）组。灌注含氧K．H液20min后加入相应药物灌注10min。实时测定血流动力学指标、左室舒张末期压（LVEDP）、左室发展压（LVDP）、左室收缩压最大变化速率（＋dP/dtmax）、左室舒张压最大下降速率（-dP／dtmax）。收集灌流液,并测定肌酸激酶（CK）的活力;取部分心肌组织测定丙二醛（MDA）含量与超氧化物歧化酶（sou）活性。结果：与模型组比较,丹酚酸B高、中浓度组大鼠离体心脏在复灌10min后L、厂EDP显著降低,LVDP显著升高,＋dP/dtmax。显著升高,-dP／dtmax显著降低（P〈0．01或P〈0．05）;丹酚酸B高浓度组离体大鼠心脏组织CK活性显著减弱（尸〈O．01）,丹酚酸B高、中浓度组大鼠离体心脏MDA含量显著减少,SOD活性显著增强（P〈0．01）;丹酚酸B高、中、低浓度组大鼠离体心脏复灌5min后灌流液显著增加（P〈O．01或P〈0．05）。结论：丹酚酸B对大鼠离体心脏有保护作用,其机制可能是通过清除氧自由基,抵抗氧化应激发挥治疗作用。     

黄芩苷对离体大鼠心肌缺血的保护作用

目的：研究黄芩苷对离体大鼠心肌缺血的保护作用及其机制。方法：将36只SD大鼠分为3组：对照组（n=12）灌流110min，模型组（n=12）灌流25min缺血25min再灌注1h，给药组（n=12）灌流20min后换含5mg／L黄芩苷灌流液灌流5min，后同模型组。监测血流动力学及冠状动脉流出量。测定冠脉流出液中CK及LDH水平？心肌内p38mapk、NF-κ表达量及TNF-α、IL-6水平分别以免疫组化及ELISA法检测。结果：给药组较模型组心功能明显改善：冠脉流出量增多；冠脉流出液中心肌酸磷酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）均有下降（P〈0．05）；心肌组织TNF-α及IL-6含量降低（P〈0．05）；p38mapk、NF-κB表达减弱。结论：黄芩苷对离体大鼠心肌缺血具有保护作用，可能与降低心肌p38mapk、NF-κB等与缺血相关的酶从而下调心肌TNF-α及IL-6表达有关。