EB病毒的BHRF1蛋白对鼻咽癌细胞凋亡抑制作用的研究

由于ＥＢ病毒基因组可在多数鼻咽癌癌组织中被发现，而且许多鼻咽癌患者的血清中ＥＢ病毒的抗体（ＩｇＡ）呈阳性，因此目前认为ＥＢ病毒感染与鼻咽癌的发病有一定的关系。ＢＨＲＦ１为一种早期表达蛋白，在所有野生型ＥＢ病毒的裂解液中均可被检测到。其序列高度保守，因而猜测其在ＥＢ病毒的生长周期中起着重要的作用。ＢＨＲＦ１与癌基因ｂｃｌ－２的表达产物具有高度的同源性，也因此考虑二者在功能及作用机理上有相似之处。为了确定ＢＨＲＦ１在鼻咽癌细胞中的功能，作者构建了ＢＨＲＦ１的高表达载体ｐｃＤＮＡ３，并将其转入鼻咽癌细…     

鼻息肉组织中细胞增殖与凋亡相关基因蛋白的表达及意义

目的 探讨以嗜酸粒细胞浸润为主病理特征的鼻息肉细胞细胞增殖和凋亡的规律,以加深对鼻息肉病理机制的了解。方法 以免疫组化染色法对２６例（２６侧）鼻息肉和１４例（１４侧）正常下鼻甲组织行增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇ ｃｅｌｌ ｎｕｃｌｅａｒ ａｎｔｉｇｅｎ,ＰＣＮＡ）及与细胞凋亡相关基因Ｂａｘ、抑凋亡基因Ｂｃｌ－２检测。结果 ①鼻息肉粘膜上皮ＰＣＮＡ、Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ阳性表达均显著高于下鼻甲组织,但Ｂｃｌ－２与Ｂａｘ阳性表达百分率的比值与下鼻甲组织无明显差异,表明鼻息肉上皮细胞凋亡趋势较为明显;②鼻息肉组织中腺体、嗜酸粒细胞Ｂｃｌ－２的阳性表达显著高于Ｂａｘ而下鼻甲组织中二者则差异无显著性。结论 鼻息肉上皮细胞有显著的增殖特性;凋亡基因Ｂａｘ和抑凋亡基因Ｂｃｌ－２表达失衡使细胞凋亡肥抑制是鼻息肉组织     

E1A基因抗癌作用及其在头颈肿瘤治疗中的应用

人类腺病毒 5型早期区域 1Ａ(Ａｄ5 Ｅ1Ａ)是近年来发现具有抑癌作用的基因 ,它可以通过多种途径抑制肿瘤的形成和转移。对ｅｒｂＢ2高表达的肿瘤细胞通过转录水平抑制ｅｒｂＢ2的表达 ,从而抑制肿瘤的形成和转移 ;对ｅｒｂＢ2低表达的肿瘤细胞 ,通过依赖和非依赖ｐ5 3的途径和调节肿瘤细胞的免疫反应及控制细胞的增殖等抑制肿瘤的形成 ,通过抑制不同蛋白酶的活性和增强转移抑制基因ｎｍ2 3的表达抑制肿瘤的转移。另外 ,Ｅ1Ａ基因可阻断ＮＦ ＫＢ的活性和调节细胞内基因表达增加肿瘤细胞对放射治疗和化学治疗的敏感性。Ｅ1Ａ基因的临床应用…     

凋亡相关基因Bcl—2,Bcl—X,Bax和Bak在人扁桃体表达

通过检测凋亡相关基因Ｂｃｌ－２,Ｂｃｌ－Ｘ,Ｂａｘ和Ｂａｋ在扁桃体表达来了解扁桃体凋亡的发生及定位。方法应用免疫组织化学方法检测Ｂｃｌ－２,Ｂｃｌ－Ｘ,Ｂａｋ和Ｂａｘ在２４例扁桃体的表达,应用ＡＰＡＡＰ和ＰＡＰ法检测Ｂｃｌ－２,Ｂｃｌ－Ｘ,Ｂａｘ和Ｂａｋ基因蛋白分别与ＣＤ３,ＣＤ２１和ＣＤ６８在其中１０例偏桃的联合表达。结果促凋亡基因Ｂａｋ,Ｂａｘ蛋白主要在扁桃体生发中心的亮区呈过表达,而抑凋亡基     

抑凋亡基因Bcl—X在鼻息肉中表达的初步研究

目的：探讨细胞凋亡基因Ｂｃｌ－２，Ｂｃｌ－Ｘ，Ｂａｋ和Ｂａｘ蛋白在鼻息肉中的表达及意义。方法：应用免疫组织化学方法（ＡＰＡＡＰ法）检测Ｂｃｌ－２，Ｂｃｌ－２，Ｂａｋ和Ｂａｘ蛋白在６例鼻息肉中的表达。结果：６例鼻息肉上皮Ｂｃｌ－Ｘ均呈强阳性表达，３例（３／６）Ｂｃｌ－２阳性表达，２例（２／６）Ｂａｋ弱阳性表达，１例（１／６）Ｂａｘ阳性表达。结论：鼻息肉上皮抑凋亡基因Ｂｃｌ－Ｘ蛋白表达上调和促调亡基因     

鼻咽癌组织中bcl-2基因断裂和bcl-2蛋白表达的检测及意义

为探讨ｂｌｃ－２基因与鼻咽癌发生的关系，采用分子原位杂交和免疫组化技术，检测４１例鼻咽癌组织中ｂｃｌ－２基因的两个断裂热点和蛋白表达。结果：４１例鼻咽癌发生ｂｃｌ－２基因表裂者４例，阳性率为９．８％，３４例出现ｂｃｌ－２蛋白阳性表达，阳性率为８２．９％；鼻咽良性病变阴性。ｂｃｌ－２基因断裂和蛋白表达与鼻咽癌组织学分级间无明显关系；ｂｃｌ－２蛋白表达与ｂｃｌ－２基因断裂间无相对应关系。提示：ｂｃｌ－     

EB病毒BHRF1基因表达对鼻咽癌细胞增殖周期影响的研究

目的：了解ＥＢ病毒编码ＢＨＲＦ１基因表达对鼻咽癌细胞增殖周期的影响。方法：本研究通过构建ＢＨＲＦ１高表达载体并将其转入鼻咽癌细胞株ＣＮＥ２细胞中，检测转染后稳定表达ＢＨＲＦ１癌细胞的增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ，ＰＣＮＡ）表达和喜树碱作用前后细胞周期分布的改变。结果：ＢＨＲＦ１的表达可促使癌细胞的ＰＣＮＡ表达下降，Ｇ１期细胞增多，Ｓ期细胞减少；而在喜树碱作用后，ＢＨＲＦ１－ＣＮＥ２细胞的凋亡率明显小于对照组，其Ｇ１期细胞数下降，Ｓ期细胞数升高。结论：ＢＨＲＦ１基因的表达可通过调节细胞周期分布、抑制细胞凋亡的发生以增强细胞的生存能力，而可能与鼻咽癌的发生有关     

千斤藤碱对头颈部恶性肿瘤细胞诱导分化的研究

为观察千斤藤碱（Ｓｔｅｐｈｏｌｉｄｉｎｅ，ＳＴ）对头颈部恶性肿瘤细胞株诱导分化作用，采用ＡＢＣ免疫组化结合图象分析仪及流式细胞仪，以维甲酸（ｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄ，ＲＡ）作对照，通过细胞形态学、细胞增殖动力学的研究，定量检测了癌基因Ｃ－ｍｙｃ、ｂｃｌ－２及抑癌基因ｐ５３蛋白。结果表明：经无毒剂量的千斤藤碱及维甲酸处理后，头颈部恶性肿瘤细胞株的细胞形态趋向良性分化，细胞接触抑制部分恢复，集落形成率和细胞增殖指数明显降低，癌基因Ｃ－ｍｙｃ、ｂｃｌ－２蛋白明显降低，ｐ５３蛋白明显增高。结论：千斤藤碱及维甲酸对头颈部恶性肿瘤有诱导分化作用，其机理可能是通过抑制癌基因的表达，增加抑癌基因的表达，改变细胞的形态结构和生物学特性，促进癌细胞的分化。     

喉鳞状细胞癌标本中真核细胞起始因子4E和碱性成纤维细胞生长因子的检测

真核细胞起始因子 (ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｉｎｉｔｉａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ 4Ｅ ,ｅＩＦ4Ｅ)参与从“ｍＲＮＡ池”中选择某一“弱ｍＲＮＡ”形成复合体[1] 。大多数哺乳动物中碱性成纤维细胞生长因子 (ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ)ｍＲＮＡ具有较为典型的“弱ｍＲＮＡ”结构。本实验探讨ｂＦＧＦｍＲＮＡ转录和其蛋白质表达与喉鳞状细胞癌临床病理特征的关系以及喉鳞状细胞癌中ｅＩＦ4Ｅ对ｂＦＧＦ的作用和影响。一、材料与方法选用在本科接受手术治疗的 2 0例喉癌病例。标本取自肿瘤组织、切缘 (距…     

bcl-2反义寡聚脱氧核苷酸抑制人喉癌细胞系增殖的研究

目的探讨ｂｃｌ－２反义寡聚脱氧核苷酸在喉癌基因治疗中的可能作用及机理。方法采用人工合成与ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ起始码及其后４个密码子互补的寡聚脱氧核苷酸（简称反义核酸）片段，处理培养的人喉癌细胞系Ｈｅｐ－２细胞，观察其对细胞增殖的影响。同时采用原位分子杂交及免疫组化技术，检测细胞内ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ及Ｂｃｌ－２蛋白水平，分析其变化规律。结果ｂｃｌ－２反义核酸片段对细胞内ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ无明显影响，但可以显著抑制Ｂｃｌ－２蛋白合成，抑制率与反义核酸浓度及作用时间呈正相关。２０．０μｍｏｌ／Ｌｂｃｌ－２反义核酸可以有效地抑制细胞增殖。结论提示ｂｃｌ－２反义核酸可以在翻译水平特异性地抑制Ｈｅｐ－２细胞中Ｂｃｌ－２蛋白的合成与细胞增殖。进一步证明ｂｃｌ－２基因在喉癌的发生发展中具有十分重要的作用。     

Fas基因与EB病毒感染及鼻咽癌的关系

探讨凋亡相关基因Ｆａｓ与ＥＢ病毒感染及鼻咽癌发生的关系。方法应用免疫组化和ＰＣＲ技术分别检测４６例鼻咽癌组织中Ｆａｓ和ＥＢ病毒潜伏膜蛋白的表达水平及ＥＢ病毒ＤＮＡ。化：Ｆａｓ表达异常可能与鼻咽上皮癌变有关;ＥＢ病毒对Ｆａｓ表达可能有抑制作用。     

大鼠嗅球凋亡基因蛋白的表达与蛋白激酶C调控的探讨

目的:明确蛋白激酶Ｃ和凋亡相关基因Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ在大鼠嗅球中的表达分布及相关性,探讨蛋白激酶Ｃ(ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ Ｃ,ＰＫＣ)对大鼠嗅球神经元凋亡的调节作用。方法:取青龄大鼠(４~６个月龄),成龄大鼠(１０~１２月龄);老龄大鼠(２４~２６月龄)各１０只,断头处死,将大鼠嗅球置于４%的多聚甲醛中固定,连续切片,应用免疫组化方法检测ＰＫＣ与凋亡基因Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ在大鼠嗅球中的表达。结果:大鼠嗅球中的ＰＫＣ表达老龄组(７０．４±５．３８)明显高于青龄组(２０．４４±１．２１);而Ｂｃｌ－２的表达青龄组(７０．１６±５．０１)明显高于老龄组(２４．１０±４．００)。差异显著(Ｐ＜０．０１);且ＰＫＣ和Ｂｃｌ－２的表达呈负相关(ｒ＝０．８３７１)。Ｂａｘ随增龄逐渐增多,但差异不显著。结论:大鼠嗅球细胞的凋亡与ＰＫＣ的调节密切相关;推测ＰＫＣ对大鼠嗅球的生长、发育起着重要的负反馈调节作用。     

p27Kipl在喉鳞状细胞癌癌变过程中表达的临床意义

依赖性激酶抑制蛋白 (ｃｙｃｌｉｎ ｄｅｐｅｎ ｄｅｎｔｋｉｎａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ,ＣＤＫＩ)是近年分离得到一类重要的细胞周期调控蛋白 ,参与细胞周期的负调控 ,可防止细胞过度增殖和恶变[1] 。ｐ2 7Ｋｉｐｌ(简写ｐ2 7)基因是新近发现的ＣＤＫＩ家族成员之一 ,其基因定位于 12ｐ12 13.1,编码的ｐ2 7蛋白可抑制细胞从Ｇ1期进入Ｓ期而参与细胞的负调控。本文采用免疫组化法通过对ｐ2 7蛋白在喉鳞状细胞癌 (ｌａｒｙｎｇｅａｌｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ,ＬＳＣＣ)、喉不典型增生病变和喉正常粘膜的表达 ,探讨ｐ…     

在鼠嗅球中凋亡相关基因蛋白的表达及其意义

目的：明确凋亡相关基因Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ在大鼠嗅球中的表达及分布，并探讨其意义。方法：聚健康大鼠青龄组（３￣６个月），成龄组（１２￣１５个月），老龄组（２４￣２６个月）各１０只，将其断头处死，取嗅球，经石蜡包埋，连续切片，免疫组化染色，光镜观察。结果：Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ主要表达于大鼠球中的僧帽细胞。Ｂｃｌ－２阳性细胞表达率青龄组显著高于老龄组（Ｐ〉０．０１）；Ｂａｘ阳性细胞表达率老龄组虽略高于青龄组，但差异不显著（Ｐ〉０．０５）。结论：随着年龄的增长，嗅球中抗凋亡基因Ｂｃｌ－２蛋白表达显著减少，提示凋亡与嗅觉老化的密切关系。推测嗅球中僧帽细胞的凋亡可能是老化性嗅觉障碍的重要因素之一。     

Epstein-Barr病毒与喉鳞状细胞癌发生的相关性研究

我们用原位杂交技术检测了Ｅｐｓｔｅｉｎ Ｂａｒｒｖｉｒｕｓ (ＥＢ病毒 )编码的小片段ＲＮＡ(ＥＢｅｘｏｎｉｃＲＮＡ ,ＥＢＥＲ)在 5 6例喉鳞状细胞癌 (简称鳞癌 )及 2 7例癌旁正常喉粘膜标本中的表达情况。一、材料和方法1.材料 :由哈尔滨医科大学附属第二医院耳鼻咽喉科 1998年 3月～ 2 0 0 0年 3月手术切除的喉癌标本中抽取 5 6例 (剔除病理为非鳞癌的 ,临床资料不全的以及二次手术的 ) ,其中 2 7例同时取癌旁正常喉粘膜作对照。男 41例 ,女 15例。年龄 40～ 78岁 ,平均 5 8.5岁。声门上型 37例 ,声门型 15例 ,声门下型 4例。按细胞分…     

喉鳞状细胞癌中p27和血管内皮生长因子与肿瘤血管形成的关系

我们采用流式免疫荧光技术对 45例喉鳞状细胞癌组织中的抑癌基因ｐ2 7和血管内皮生长因子 (ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ)表达蛋白进行过检测[1,2 ] ,现再用ＦⅧ因子抗体标记肿瘤组织血管内皮细胞 ,计算肿瘤内微血管密度 (ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌｍｉｃｒｏｖｅｓｓｅｌｄｅｎｓｉｔｙ ,ＩＭＶＤ) ,以了解其相互关系。一、材料与方法1 临床资料 :采用河北医科大学第四医院暨省肿瘤医院 1994年 3月～ 1995年 12月经病理证实为喉鳞状细胞癌的所有术前未接受过放射治疗和化学治疗的住院患者 45…     

正常鼻咽上皮和鼻咽癌中FHIT基因变化的初步研究

以往研究表明 ,鼻咽癌频发染色体3ｐ14的缺失 ,故推测该缺失区存在与鼻咽癌发生发展密切相关的抑癌基因[1 ] 。脆性组氨酸三联体 (ｆｒａｇｉｌｅｈｉｓｔｉｄｉｎｅｔｒｉａｄ ,ＦＨＩＴ)基因是 1996年由Ｏｈｔａ等[2 ] 克隆的一个位于 3ｐ14 2区域的候选抑癌基因。其编码蛋白与二腺苷四磷酸 (Ａｐ4Ａ)不对称水解酶有 6 9%的同源性 ,具有Ａｐ4Ａ水解酶活性 ,主要参与细胞生长与生长抑制信号的调控[3 ] 。我们用巢式ＲＴ ＰＣＲ及自动测序法对鼻咽癌组织和正常鼻咽上皮组织中ＦＨＩＴ基因的改变情况进行了研究。一、材料与方法1.标本 :2 8例…     

EB病毒BHRF1基因表达对鼻咽癌细胞增殖能力的影响

为了解ＥＢ病毒编码基因ＢＨＲＦ１的表达对鼻咽癌细胞增殖能力的影响，通过构建携有ＢＨＲＦ１的高表达载体，并转染低分化鼻咽癌细胞株ＣＮＥ２细胞，观察转染后的癌细胞在缺乏营养条件下增殖能力的改变。结果发现：ＢＨＲＦ１的表达能抑制增殖核抗原的表达，并促进其在缺乏营养条件下生存能力。提示ＥＢ病毒编码的ＢＨＲＦ１基因可能与鼻咽癌的发生和发展过程有关。     

EB病毒BHRF1基因表达对鼻咽癌细胞增殖能力的影响

为了解ＥＢ病毒编码基因ＢＨＲＦ１的表达对鼻咽癌细胞增殖能力的影响，通过构建携有ＢＨＲＦ１的高表达载体，并转染低分化鼻咽癌细胞株ＣＮＥ２细胞，观察转染后的癌细胞在缺乏营养条件下增殖能力的改变。结果发现：ＢＨＲＦ１的表达能抑制增殖核抗原的表达，并促进其在缺乏营养条件下生存能力。提示ＥＢ病毒编码的ＢＨＲＦ１基因可能与鼻咽癌的发生和发展过程有关。     

125I标记碱性成纤维细胞生长因子豚鼠腹腔注入耳蜗放射免疫测定和放射自显影观察

实验证实碱性成纤维细胞生长因子 (ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ)对离体听神经元存活与轴突再生有直接营养作用[1] ,耳蜗内灌注ｂＦＧＦ对爆震性听力损伤的修复有促进作用[2 ] 。临床给药途径多为肌肉或静脉注射。我们用12 5Ｉ标记ｂＦＧＦ ,探讨ｂＦＧＦ在豚鼠体内主要脏器分布 ,观察ｂＦＧＦ通过血迷路屏障的可能性 ,为临床合理用药提供理论参考。一、材料和方法1 试剂、仪器及标记方法 :ｂＦＧＦ相对分子质量 1 70 0 0 ,含有 1 5 4氨基酸 ,质量浓度为 1ｇ/Ｌ ,Ｅ Ｃｏｌｉ表达 ;抗人ｂＦＧＦ兔血清…