香烟烟雾提取物经aPKC√ζ-NRF2上调大鼠气道上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶表达

目的 观察香烟烟雾提取物（CSE）是否通过不典型蛋白激酶Cι/ζ (aPKCι/ζ) -红系衍生的核因子相关因子2（NRF2）信号通路调控大鼠气道上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）。方法 用Western blot法检测γ-GCS、NRF2和p-aPKCι/ζ蛋白，免疫细胞化学法观察γ-GCS蛋白表达，反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测γ-GCS mRNA，免疫荧光法检测NRF2蛋白。结果 NRF2蛋白在CSE 3h组主要表达在胞核，其胞核蛋白高表达。p-aPKCι/ζ蛋白在CSE 3h组显著高于对照组（P＜0.05）。γ-GCS蛋白及其mRNA在CSE 3h组较对照组显著增强（P＜0.05）。预先加入aPKCι/ζ抑制剂RO813220，NRF2胞质蛋白表达增强，p-aPKCι/ζ蛋白、γ-GCS蛋白及其mRNA均明显低于CSE 3h组（均P <0.05）。相关性分析显示NRF2与γ-GCS、p-aPKCι/ζ呈正相关，p-aPKCι/ζ与NRF2、γ-GCS呈正相关（P＜0.05）。结论 CSE可能通过aPKCι/ζ-NRF2调节γ-GCS表达。     

支气管哮喘豚鼠肺组织中丝裂原活化蛋白激酶对γ-谷氨酰半胱氨酸合酶的作用

目的： 研究在支气管哮喘豚鼠肺组织中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路对γ-谷氨酰半胱氨酸合酶（γ-GCS）的影响。方法: 成年雄性豚鼠20只随机分成哮喘组和对照组，每组10只，以腹腔内注射联合雾化吸入卵蛋白复制哮喘模型。测支气管肺泡灌洗液（BALF）细胞总数并进行分类计数；原位杂交和RT-PCR测肺组织中γ-GCS-h mRNA表达；免疫组化测γ-GCS、磷酸化细胞外激活蛋白激酶（p-ERK）、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)和磷酸化 p38（p-p38）在肺组织中的表达;Western blotting 测 p-ERK、p-JNK和p-p38在肺组织中的表达；双酶法测γ-GCS的活性。结果: （1）哮喘组BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞明显多于对照组 (P<0.01)。（2）免疫组化显示肺组织中p-ERK、p-p38、p-JNK和γ-GCS 蛋白质表达哮喘组明显高于对照组（P<0.01）；Western blotting 亦显示肺组织中p -ERK、p-JNK和p-p38 蛋白质表达哮喘组均明显高于对照组。（3)原位杂交和RT-PCR显示在肺组织中γ-GCS-h mRNA 表达哮喘组明显高于对照组(P<0.01)。（4) γ-GCS活性哮喘组明显高于对照组（P<0.01）。（5）直线相关性分析显示：在肺组织中p-ERK、p-p38与γ-GCS-h mRNA、γ-GCS蛋白质呈显著正相关，p-JNK与γ-GCS-h mRNA、γ-GCS蛋白质无明显相关性。结论: 支气管哮喘豚鼠肺中 p-ERK、p-p38、p-JNK和γ-GCS表达均增加；p-ERK和p-p38可能上调γ-GCS表达。     

慢性阻塞性肺疾病大鼠中磷酸化蛋白激酶B与γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶的表达研究

目的通过观察慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠模型中γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）与磷酸化蛋白激酶B（p-PKB）的表达,研究p-PKB和γ-GCS在COPD中可能的参与机制。方法28只健康雄性Wistar大鼠随机分为COPD组和对照组。采用每日熏香烟和两次气管内注入脂多糖（LPS）法制作COPD大鼠模型。检测肺组织中1-GCS活性,原位杂交检测肺组织中γ-GCS mRNA的表达,免疫组化和Western印迹分析肺组织中γ-GCS与p-PKB蛋白水平。结果γ-GCS活性在COPD组大鼠中明显高于对照组,组间差异有统计学意义（P〈0．05）。原位杂交显示COPD组大鼠支气管、肺泡上皮细胞与小动脉平滑肌细胞γ-GCS mRNA广泛表达,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。COPD组大鼠γ-GCS与p-PKB免疫组化可见肺泡、支气管壁细胞及小血管平滑肌细胞胞浆有较强蛋白阳性信号;图像定量分析显示COPD组γ-GCS与p-PKB蛋白表达高于对照组,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。Westernblot显示,γ—GCS与p-PKB在COPD组蛋白表达高于对照组,且差异有统计学意义（P〈0．05）。SPSS10．0直线相关分析得出p-PKB蛋白表达与γ-GCS活性、mRNA及蛋白表达呈正相关。结论COPD大鼠肺组织1．GCS蛋白和mRNA表达增高,p-PKB蛋白也有相应高表达,提示p-PKB和γ-GCS可能在COPD的发病机制中起作用,且PKB可能参与了γ-GCS的信号转导。     

转录因子Nrf2/Bach1及MAPK激酶调控γ-GCS在大鼠慢性阻塞性肺疾病中的作用

目的： 研究转录因子红系衍生核因子相关因子-2(Nrf2)及 BTB-CNC异体同源体1(Bach1)在慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织中的表达,探索其感受氧化应激调控谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达的可能机制。方法: 复制慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型,通过免疫组化、Western blotting、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术研究肺组织Nrf2、Bach1、γ-GCS　mRNA及其蛋白和p-ERK、p-p38、p-JNK蛋白的表达。结果： 免疫组化结果显示COPD组p-ERK、p-p38、γ-GCS、Nrf2蛋白水平较对照组升高（P<0.01）,而Bach1、p-JNK蛋白水平无差异（P>0.05）;Western blotting结果显示COPD组p-ERK、p-JNK、Nrf2核蛋白质水平较对照组升高（P<0.01）,Bach1、p-p38浆蛋白水平较对照组升高(P<0.01）而Bach1 核蛋白水平较对照组降低(P<0.01）;RT-PCR结果显示,COPD组Nrf2、 Bach1 mRNA水平较对照组无差异（P>0.05）, 而γ-GCS mRNA水平升高（P<0.01）;直线相关分析结果表明,γ-GCS mRNA表达水平与Nrf2、p-ERK、p-p38总蛋白质水平,Nrf2、p-ERK、p-JNK核蛋白水平和Bach1、p-p38浆蛋白质水平均呈正相关（P<0.01）,而与Bach1 核蛋白质水平呈负相关（P<0.01）;Nrf2 核蛋白质水平与p-ERK、p-JNK核蛋白水平呈正相关（P<0.01）,而Bach1 核蛋白质水平与p-ERK、p-JNK核蛋白水平呈负相关（P<0.01）。结论: 在慢性阻塞性肺疾病的发病过程中转录因子Nrf2 /Bach1可能在核内竞争反向调节抗氧化基因γ-GCS的表达; 信号转导蛋白p-ERK、p-JNK在调控Nrf2 /Bach1核内平衡中起重要作用,且调控主要发生在转录后水平;γ-GCS可能还存在其它转录调节机制。     

红霉素对吸烟大鼠肺内TGF-β1和γ-GCS表达的影响

目的： 探讨红霉素对吸烟大鼠肺内转化生长因子-β₁（TGF-β₁）和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）的影响以及在慢性阻塞性肺疾病治疗中的抗氧化作用。方法: Wistar大鼠30只，随机抽取20只被动吸烟4周后，10只继续吸烟8周作为吸烟组、10只吸烟加红霉素灌胃作红霉素治疗组，另10只作对照组。测定气道阻力和肺顺应性，采用免疫组织化学法、免疫细胞化学法和原位杂交法检测气道上皮细胞TGF-β₁和γ-GCS蛋白、肺泡巨噬细胞两者蛋白及其mRNA表达。结果: 吸烟组大鼠气道阻力增高，肺顺应性降低，TGF-β₁和γ-GCS蛋白及其mRNA表达均明显增高（P<0.05），红霉素治疗组气道阻力有所降低、肺顺应性增高，TGF-β₁和γ-GCS蛋白及其mRNA表达均低于吸烟组，但高于对照组（P<0.05）。吸烟组TGF-β₁与γ-GCS表达呈正相关（P<0.05），而红霉素治疗组无明显相关性。结论: 红霉素干预后吸烟大鼠肺内TGF-β₁和γ-GCS表达降低，提示红霉素可能在COPD治疗中发挥一定的抗氧化作用。     

PPARγ影响γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶活性及表达在大鼠慢性阻塞性肺疾病中的作用

目的： 探讨过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPARγ)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)活性及表达的影响,及在COPD发病中的作用。方法：用每天熏香烟和2次气管内滴入脂多糖（LPS）法制作大鼠COPD模型,同时利用PPARγ激活剂罗格列酮(RGZ)对其进行干预,测定3组大鼠肺功能和病理变化结果;并检测3组大鼠肺内ROS含量和γ-GCS活性;应用免疫组化、免疫印迹(Western blotting)、原位杂交和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测PPARγ、γ-GCS mRNA及蛋白在3组大鼠肺组织中的表达情况。结果：RGZ干预组大鼠肺功能指标（FEV0.3、FEV0.3/FVC%与PEF）均较COPD组明显好转;光镜下COPD组肺组织病理变化符合COPD的特征性改变,RGZ干预组肺组织病理变化较COPD组显著减轻;RGZ干预组ROS含量较COPD组显著减少,而γ-GCS活性较COPD组升高;PPARγ、γ-GCS mRNA及其蛋白质表达在COPD组均较对照组明显增高（均P<0.01）,而在RGZ干预组均较COPD组增高（均P<0.0５）;直线相关分析显示PPARγ蛋白与γ-GCS活性呈正相关(r=０.634,P<0.01),与ROS含量无明显相关性(r=0.214, P>0.05);PPARγ蛋白与γ-GCS蛋白及mRNA表达呈正相关（r=0.553、r=0.442, 均P<0.01）。结论：RGZ活化PPARγ可减轻COPD氧化/抗氧化失衡程度,对COPD的防治起重要作用;另外,PPARγ可能通过减少肺内ROS的产生,增强γ-GCS活性及其基因表达而在COPD中起重要的抗氧化保护作用。     

磷脂酰肌醇-3激酶、蛋白激酶B及γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶在慢性阻塞性肺疾病患者中的表达

目的观察慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者中磷脂酰肌醇-3激酶（H3K）、蛋白激酶B（PKB）与γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）的表达,研究P13K、PKB通路和γ-GCS的关系。方法将手术切馀的肺癌患者肺组织标本（16例）分为COPD组和对照组,每组8例,检测肺组织中γ—GCS活性,原位杂交检测肺组织中γ-GCSmRNA的表达,免疫组化分析肺组织中H3K、PKB与γ-GCS的蛋白水平。结果COPD组中1．GCS活性明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）。原位杂交显示COPD组支气管、肺泡上皮细胞与小动脉平滑肌细胞γ-GCSmRNA广泛表达,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。P13K、PKB与γ-GCS免疫组化在COPD组可见肺泡、支气管壁细胞及小血管平滑肌细胞胞浆中皆有蛋白阳性信号表达,图像定量分析显示COPD组H3K、PKB与γ—GCS蛋白表达显著高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）。直线相关分析得出H3K、P-PKB蛋白表达与γ-GCS活性、mRNA及蛋白表达呈正相关。结论COPD患者肺组织γ-GCS蛋白和mRNA表达增高,P13K、p-PKB蛋白也有相应高表达,提示P13K、PKB和γ-GCS可能在COPD的发病机制中发挥作用,且可能参与了γ-GCS的信号传导通路。     

Nrf2在支气管哮喘豚鼠炎症细胞中调控γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶的表达

目的：探讨核因子相关因子-2(Nrf2)调控γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)在支气管哮喘豚鼠肺泡灌洗液(BALF)炎症细胞中的表达。方法：38只健康雄性豚鼠随机分为对照组（A组）、哮喘组（B组）和地塞米松治疗组（C组），卵蛋白致敏法复制哮喘模型，检测3组豚鼠肺组织匀浆中丙二醛（MDA）浓度，收集BALF，行细胞计数和分类。离心，细胞涂片行免疫细胞化学和原位杂交，检测Nrf2、Bach1、γ-GCS蛋白和mRNA。结果：（1）B组嗜酸性粒细胞数（EOS）比例高于A组和C组；（2）肺组织中MDA浓度B组高于A组和C组；（3）γ-GCS原位杂交A组A值高于B组和C组；Nrf2、Bach1原位杂交A值3组差异无显著；（4）γ-GCS 免疫细胞化学B组A值低于A组；Nrf2细胞核内阳性率 B组低于A组和C组；Bach1细胞核内阳性率B组高于A组和C组；（5）γ-GCS mRNA表达（A值）与Nrf2核内阳性率呈正相关，与Bach1核内阳性率呈负相关；B组BALF 中γ-GCS mRNA表达（A值）与EOS比例呈负相关。结论：支气管哮喘豚鼠体内存在氧化/抗氧化失衡，炎症反应使γ-GCS在豚鼠支气管哮喘炎症细胞中的表达降低，地塞米松可以通过调节Nrf2/Bach1核转位而增加γ-GCS表达。     

银杏酮酯对抑郁大鼠脑内ERK1 / 2 及其磷酸化水平的影响

目的:探讨银杏酮酯对抑郁大鼠前额叶与海马区细胞外信号调节激酶(ERK1/2)及其磷酸化水平的影响。方法:将50只成年SD大鼠随机分为对照组、模型组、银杏酮酯低、中、高剂量组。用慢性轻度不可预见性应激配合分养方法建立抑郁大鼠模型,采用荧光实时PCR检测大鼠前额叶、海马ERK1/2和磷酸化p-ERK1/2 mRNA表达水平,采用蛋白印迹法检测大鼠前额叶、海马ERK1/2蛋白和磷酸化p-ERK1/2蛋白的表达水平。结果:与给药前比较,银杏酮酯低、中、高剂量组旷场试验得分显著提高(P0.05),模型组旷场试验得分差异无统计学意义(P0.05)。模型组前额叶与海马p-ERK1/2 mRNA与蛋白质的表达水平显著低于对照组(P0.05),银杏酮酯低、中、高剂量组前额叶与海马p-ERK1/2 mRNA与蛋白表达水平较模型组显著升高(P0.05),各组ERK1/2 mRNA与蛋白的表达水平差异无显著统计学意义(P0.05)。结论:银杏酮酯可改善抑郁模型大鼠的抑郁样行为,其机制可能与上调前额叶与海马ERK1/2磷酸化水平有关。     

Smad通路参与ERK通路诱导血管平滑肌细胞增殖的过程

目的： 探讨Smad通路是否参与细胞外信号调节激酶(ERK)通路诱导血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的过程及其可能机制。方法：将人脐动脉平滑肌细胞（hUASMCs）分为对照组、血小板源性生长因子（PDGF）组、ERK阻断剂组和PDGF+ERK阻断剂组。用MTT法测hUASMCs的增殖活性(A值)，用免疫组化法测hUASMCs内细胞核增殖抗原（PCNA）、磷酸化ERK和磷酸化Smad蛋白的表达，用RT-PCR法测hUASMCs内Smad2/3 mRNA的表达。结果：PDGF组hUASMCs的增殖活性(A值)及hUASMCs内的PCNA、磷酸化ERK和磷酸化Smad2/3蛋白的表达都明显高于其它各组(P<0.01)；各组hUASMCs内Smad2/3 mRNA的表达没有差异。结论： Smad通路可在蛋白水平参与ERK通路诱导VSMCs的增殖过程。     

可卡因－苯丙胺调节转录肽激活ERK促进海马神经元合成BDNF

目的： 探讨细胞外信号调节激酶(ERK)通路在可卡因－苯丙胺调节转录肽（CART）上调大鼠海马神经元脑源性神经营养因子（BDNF）表达中的作用。方法： 取18 d的SD大鼠胚胎（E18），分离海马神经元,体外原代培养7 d，以不同剂量CART处理细胞，用Western blotting方法分别检测不同处理时点p-ERK表达。再以ERK通路特异性阻断剂PD98059（25 μmol/L）预处理细胞，进一步观察CART对p-ERK表达及BDNF合成的影响。 结果： 同对照组比较，CART处理组海马神经元p-ERK表达明显增高（P<0.01），BDNF合成增加。PD98059能阻断内源性ERK磷酸化、也能阻断CART诱导的ERK磷酸化，同时抑制CRAT引起的BDNF合成。结论： CART通过激活ERK促进海马神经元BDNF的合成，从而发挥神经营养作用。     

上调表达Smad7显著抑制TGF-β介导的大鼠腹膜间皮细胞Smad2的表达

目的： 探讨外源性转入并上调表达抑制性信号蛋白Smad7对TGF-β₁作用下大鼠腹膜间皮细胞Smad2表达的影响。 方法： 通过脂质体介导的方法，将表达Smad7的重组质粒（PCDNA3-Smad7）转染培养的大鼠腹膜间皮细胞，分别培养于不同浓度TGF-β₁培养液(0、1.25、2.5和10 μg/L)，用RT-PCR及Western blotting的方法检测不同时间（0、5、15、30、60和120 min）Smad2、Smad7表达的水平。 结果： 正常间皮细胞Smad2 mRNA和蛋白在TGF-β₁刺激后5 min开始表达，呈时间依赖性，在30 min达到高峰，而后逐渐减弱；Smad7 mRNA和蛋白也在TGF-β₁刺激后5 min可见表达，但此后逐渐减弱，30 min达到最低，60 min又开始逐渐增强。Smad2 和Smad7 mRNA和蛋白，随TGF-β₁浓度的增高而表达增强。转染后大鼠腹膜间皮细胞可见Smad7 mRNA和蛋白表达显著上调，并可持续高表达。转染后的腹膜间皮细胞在TGF-β₁刺激下，Smad2 mRNA及蛋白的表达均低下，刺激0、5、15、30、60 和120 min后Smad2 mRNA表达分别低33%、56%、67%、71%、63%和57%（P<0.05）。Smad2蛋白表达分别低78%、89%、89%、88%和76%（P<0.05）。 结论： 上调表达抑制性信号蛋白Smad7可显著抑制腹膜间皮细胞中受体调控信号蛋白Smad2的表达和活性，提示Smad7可能对TGF-β₁起反向调控作用。     

转化生长因子β1对香烟诱导的大鼠肺泡巨噬细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合酶表达的影响

目的：探讨转化生长因子（TGF）-β1对香烟诱导的大鼠肺泡巨噬细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合酶（γ-GCS）和活化蛋白(AP)-1亚单位c-fos mRNA及其蛋白表达的影响。方法:通过支气管肺泡灌洗获取大鼠肺泡巨噬细胞，随机分为对照组、香烟组和TGF-β1组。TGF-β1组加入终浓度为3 μg/L的TGF-β1,2 h后除对照组外，余2组均加入香烟烟雾提取物,对照组加入磷酸盐缓冲液。分别用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和免疫细胞化学方法检测肺泡巨噬细胞中γ-GCSh(重链亚单位)及c-fos mRNA和蛋白的表达。结果:香烟组γ-GCSh和c-fos mRNA及其蛋白表达水平显著高于对照组(分别P<0.05,P<0.01)。TGF-β1组γ-GCSh mRNA及其蛋白表达水平明显低于香烟组(均P<0.01)；而c-fos mRNA及其蛋白表达水平明显高于香烟组(均P<0.01)。结论:转化生长因子-β1参与香烟所致慢性阻塞性肺疾病肺氧化/抗氧化失衡的发病机制。     

Nrf2-ARE信号通路在间歇性低氧胰腺组织中的作用及银杏叶提取物的干预机理

目的 观察Nrf2-ARE信号通路对慢性间歇性低氧胰腺组织的影响及银杏叶提取物对其的干预机理。方法 选取C57BL/6雄性小鼠、Nrf2基因敲除型雄性小鼠各54只,随机分为常氧对照组1、2,间歇性低氧组1、2,Nrf2激活剂组,抗体阻断组,银杏叶提取物（EGB）低、中、高浓度组,每组6只。除常氧对照组外,其余各组小鼠循环给予氮气和氧气建立间歇性低氧模型。Nrf2激活剂组腹腔注射莱菔硫烷,抗体阻断组腹腔注射抗Nrf2抗体,EGB低、中、高浓度组分别予EGB50、100、200 mg/（kg·d）灌胃,常氧对照组予等量生理盐水干预。干预10周后用Western-Blot和RT-PCR分别检测胰腺组织中Nrf2、HO-1、NQO1、γ-GCS蛋白和mRNA的表达水平。结果 野生型小鼠中,与间歇性低氧组比较,Nrf2、HO-1、NQO1和γ-GCS在Nrf2激活组、EGB高浓度组中蛋白和mRNA表达均升高,在抗体阻断组中蛋白和mRNA表达均降低（P＜0.05）;基因敲除型小鼠中,与间歇性低氧组比较,HO-1在Nrf2激活组、EGB高浓度组中蛋白和mRNA表达均升高（P＜0.05）;NQO1在EGB中浓度组中蛋白和mRNA表达均升高（P＜0.05）;γ-GCS在EGB中、高浓度组中蛋白和mRNA表达均升高（P＜0.05）。结论 间歇性低氧导致的氧化应激参与了OSAS的发生发展过程,可能是OSAS胰腺组织损伤的主要病理生理机制。EGB通过促进Nrf2-ARE信号通路介导的抗氧化反应,保护胰腺组织免受间歇性低氧诱导的损伤。     

自发性高血压大鼠一侧颈动脉去外膜后结构和功能的变化

目的： 研究自发性高血压大鼠（SHR）去除一侧颈动脉外膜后血管结构和功能的变化。方法: 8只13周龄雄性SHR作为SHR对照组，8只同周龄雄性WKY大鼠作为正常血压对照组（WKY组）。机械和化学方法去除大鼠右侧颈动脉外膜，左侧作假手术对照。4周后，电磁流量计测量双侧颈动脉血流量，放免法测定血浆及双侧颈动脉血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）浓度。取双侧颈动脉制成光镜标本，病理图像分析系统测定颈动脉管腔横截面积（LA）、内弹力层围绕面积（IELA）、外弹力层围绕面积（EELA），评价内膜和中膜增生程度。RT－PCR法检测颈动脉血管紧张素转换酶2 mRNA（ACE2 mRNA）表达，免疫组化法检测ACE2 mRNA、蛋白激酶C-ζ（PKC-ζ）和胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）蛋白表达。结果: （1）SHR对照组双侧血管内膜比WKY组明显增生(P<0.01)，中膜面积显著大于WKY组（P<0.05, P<0.01）；去外膜侧内膜增生较外膜完整侧显著（P<0.05）；（2）SHR对照组去外膜侧血流速度明显少于WKY组和SHR对照组外膜完整侧（均P<0.01）；（3）SHR对照组血浆及双侧颈动脉AngⅡ浓度均明显高于WKY组 (P<0.01)，去外膜侧颈动脉AngⅡ浓度明显高于外膜完整侧（P<0.01）；（4）SHR对照组双侧血管ACE2 mRNA表达均显著少于WKY组（P<0.01），去外膜侧ACE2 mRNA表达显著少于外膜完整侧（P<0.01）；（5）SHR对照组PKC-ζ和ERK1/2在双侧血管的表达均显著高于WKY组（P<0.01），去外膜侧PKC-ζ和ERK1/2表达显著高于外膜完整侧（P<0.01）。结论: SHR去除一侧颈动脉外膜后血管内膜增生明显，中膜面积增大，血流速度减慢；这一变化可能与ACE2 mRNA表达减少、PKC-ζ和ERK1/2蛋白表达增加有关。     

低氧诱导因子-1α参与低氧预处理诱导的心肌血管生成

目的：研究低氧诱导因子-1α（HIF-1α）在低氧预处理（HPC）诱导心肌血管生成中的作用,并探讨其细胞信号转导的机制。方法：雄性SD大鼠随机分为对照组和HPC组。动物置于低氧仓内，持续通入10% O2和90% N2 4 h复制低氧预处理模型。用Ⅷ因子免疫组化染色检测HPC后7 d和21 d心肌组织微血管密度。制备心肌组织蛋白提取物，分别以磷酸化的细胞外信号调节激酶（ERK1/2）抗体和HIF-1α抗体检测HPC后1 d、7 d和21 d p-ERK1/2活性及HIF-1α表达。结果：HPC后7 d和21 d心肌组织微血管密度分别较对照组高36.99%和37.76%（均P<0.01）；p-ERK1/2活性在HPC后1d 较对照组高18.67%；HPC诱导HIF-1α的表达，其表达高峰出现在HPC后1 d。结论：HPC可以促进心肌微血管生成，其机制涉及ERKs活化和HIF-1α表达上调。     

KIM-1对AGEs诱导的肾小管上皮细胞EMT和凋亡的影响及其机制

目的：探讨肾损伤分子1(KIM-1)对晚期糖基化终末产物（AGEs）诱导的人近端肾小管上皮HK-2细胞上皮-间充质转化（EMT）和凋亡的影响及其可能的机制。方法：将HK-2细胞分为对照组、AGEs组、AGEs+阴性对照小干扰RNA(NC siRNA)组和AGEs+KIM-1 siRNA组。免疫荧光检测KIM-1蛋白的表达;Western blot检测KIM-1、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E-cadherin、Bcl-2、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、caspase-3、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白水平;RT-qPCR检测KIM-1 mRNA的表达;MTS检测细胞活力;TUNEL染色和annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞活性氧（ROS）水平。结果：与对照组比较,AGEs处理后的HK-2细胞中KIM-1蛋白、KIM-1 mRNA和α-SMA蛋白表达呈时间依赖性升高,E-cadherin蛋白表达和细胞活力呈时间依赖性降低,凋亡率呈时间依赖性升高,Bcl-2蛋白表达降低,Bax和cas...     

内源性H2S在CCK-8减轻脂多糖所致急性肺损伤中的作用

目的：探讨内源性硫化氢(H₂S)在八肽胆囊收缩素(CCK-8)减轻脂多糖（LPS）所致急性肺损伤(ALI)中的作用。方法: 将84只SD大鼠随机分为正常对照组、LPS组（经气管内滴注LPS复制ALI）、NaHS(H₂S供体)+LPS组、炔丙基甘氨酸［胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）抑制剂，PPG］+LPS组、CCK-8+LPS组、PPG+CCK-8+LPS组和CCK- 8组。给药后分别于4 h和8 h处死动物，测定肺湿/干比值；光镜观察肺组织形态学改变；化学法检测血浆H₂S含量，肺组织MDA含量、MPO活性和CSE活性；放免法检测肺组织P-selectin含量；RT-PCR检测肺组织CSE mRNA的表达；并行支气管肺泡灌洗，检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量。结果: 气管内滴注LPS可引起肺组织明显的形态学改变；肺湿/干比值、BALF中蛋白含量及肺组织MDA、MPO活性和P-selectin水平增高；血浆H2S含量、肺组织CSE活性及CSE mRNA表达下降。预先给予NaHS或CCK-8可显著减轻LPS所致的上述改变，且血浆H₂S含量、肺组织CSE活性及CSE mRNA表达高于相应的LPS组；预先给予PPG可加重LPS所致的肺损伤，而血浆H₂S含量、肺组织CSE活性及CSE mRNA表达分别低于相应的LPS组和CCK-8+LPS组。结论: CCK-8可通过内源性H₂S介导的抗氧化、抑制PMN黏附聚集等效应发挥减轻LPS所致肺损伤的作用。     

PLGF参与Ang II诱导的心脏成纤维细胞激活

 目的：探讨胎盘生长因子（PLGF）在血管紧张素II（Ang II）激活心脏成纤维细胞(CFs)中的表达及其作用。方法：原代分离培养并鉴定新生SD大鼠CFs。蛋白免疫印迹检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、PLGF和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2),免疫荧光观察α-SMA的表达,WST-1法检测细胞增殖,RT-PCR检测PLGF、I型和III型胶原蛋白的mRNA表达水平。结果：(1)Ang II组PLGF mRNA 表达明显高于对照组（P<0．01),联用替米沙坦后,PLGF mRNA表达水平下降;Ang  II组PLGF蛋白表达水平高于对照组（P<0.05); (2)PLGF诱导CFs增殖及α-SMA蛋白表达增加（P<0.05）;PLGF干预CFs 60 min后,p-ERK1/2蛋白水平表达明显高于对照组（P<0.01);(3)Ang II+anti-PLGF组与Ang II组比较,细胞增殖和α-SMA蛋白表达水平下降（P<0.05）,I型和III型胶原蛋白mRNA表达水平亦下调（P<0.05）。结论：PLGF可能参与Ang II诱导的CFs增殖和纤维化过程。     

罗格列酮对阿霉素肾病大鼠肾组织中PPARγ、TGF-β1表达的影响

目的：探讨阿霉素肾病大鼠肾组织中过氧化物酶体增殖物激活受体（PPARγ）、转化生长因子β₁（TGF-β₁）表达和罗格列酮对阿霉素肾病大鼠的肾脏保护作用及其可能机制。方法: 将大鼠随机分成3组，正常对照组（n=6）、阿霉素肾病组（n=7）、罗格列酮治疗组（n=7），12周后测大鼠尿蛋白、血浆白蛋白、血脂和血肌酐、尿素氮，用免疫组化检测肾组织NF-κB p65的核转位及ELISA（夹心法）检测肾组织NF-κB p65的活性，RT-PCR测肾皮质PPARγ mRNA及TGF-β₁ mRNA的表达及免疫印迹检测肾皮质PPARγ、TGF-β₁蛋白表达，并进行相关分析。 结果: 与阿霉素肾病组相比，罗格列酮治疗组大鼠24 h尿蛋白排泄减少，血清白蛋白升高，血甘油三酯和胆固醇下降,差异显著(P＜0.01),肾脏病理损害减轻；肾组织NF-κB p65活化和TGF-β₁ mRNA和蛋白的表达均明显受抑制，而肾皮质PPARγ mRNA和蛋白表达显著增强，差异显著（P＜0.01)；阿霉素肾病组和罗格列酮治疗组大鼠肾组织中NF-κBp65活性与PPARγ mRNA表达呈直线负相关（r=－0.8305, P＜0.01）；肾组织中PPARγ mRNA与TGF-β₁ mRNA表达呈直线负相关（r=－0.7938, P＜0.01 ）。结论:罗格列酮作用于阿霉素肾病大鼠后，可能通过上调PPARγ表达，部分抑制肾组织NF-κB p65活性，进而抑制肾组织中TGF-β₁ 表达，从而使系膜基质沉积减少，肾组织病变减轻。