小鼠胎肝间质干细胞的纯化与分化多能性研究

目的： 分离纯化小鼠胎肝间质干细胞（flMSCs）并探讨其分化潜能。方法： 通过改良贴壁法分离BABL/c小鼠胎肝间质干细胞；流式细胞术测定细胞周期和表型；体外诱导贴壁细胞向脂肪、软骨、骨组织以及神经细胞分化；化学染色、RT-PCR和免疫细胞化学染色鉴定分化。结果： 改进贴壁法分离的flMSCs呈均一梭形，(83.76±2.88)%处于G₀/G₁期,表达CD44、CD29,不表达造血细胞表面标志CD45、CD11b,诱导后能向脂肪、软骨、骨以及神经方向分化。结论： 贴壁法可以分离纯化小鼠flMSCs，小鼠flMSCs具有较强的分化潜能和“可塑性”，可用于干细胞治疗疾病的进一步研究。     

大鼠骨髓间质干细胞诱导分化为心肌样细胞膜电流的研究

目的： 研究大鼠骨髓间质干细胞（MSCs）诱导分化为心肌样细胞膜电流的状态。方法： 按文献方法进行MSCs的诱导培养和鉴定。诱导后培养4周，用全细胞膜片钳技术，检测胞膜电流，并与未经诱导分化的MSCs进行比较。结果： 未经诱导分化的MSCs不表达内向电流，只表达外向钾电流。MSCs经5-aza诱导后表达心肌特异性肌钙蛋白T，记录到2种膜内向电流，分别为钠电流（I_Na）和L-型钙电流（I_Ca），以及3种外向钾电流，包括瞬间外向钾电流（I_to），超快速激活延迟整流钾电流（I_kur）及缓慢激活延迟整流钾电流（I_ks）。与未经诱导分化的MSCs相比，诱导后MSCs的钾电流以I_kur和I_ks为主。结论： 经5-aza诱导后，MSCs可分化成具有电压依赖性内向I_Na、I_Ca和外向I_to、I_kur、I_ks的心肌样细胞。     

人骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化

目的讨论小型猪心肌细胞(CMs)裂解液对人骨髓间充质干细胞(MSCs)的体外诱导分化作用。方法用5-aza、小型猪CMs裂解液二种方法体外诱导人MSCs的分化,单纯培养基(DMEM)培养为对照组,观察细胞形态改变。用细胞免疫化学、免疫荧光法检测MSCs的α-actin、cTnT、Cx43和CD31的表达,MTT法测定细胞增殖。结果小型猪CMs裂解液诱导人MSCs所得心肌样细胞(CLCs)表达cTnT、Cx43和CD31;5-aza诱导组MSCs表达cTnT和Cx43,不表达CD31;5-aza培养初期对MSCs的增殖具有明显的抑制作用,CMs裂解液促进MSCs的增殖。结论小型猪CMs裂解液培养基可以诱导人MSCs分化为心肌样细胞及内皮样细胞,并且具有很强的促细胞增殖作用,优于目前广泛研究的肌细胞诱导分化剂5-aza。本研究为大规模诱导人MSCs向CMs分化创造了条件。     

Superfect 高效介导PDX-1基因在骨髓间质干细胞表达

目的：构建含有胰腺十二指肠同源框1(PDX-1)基因的真核表达载体，并提高重组载体在骨髓间质干细胞(MSCs)的表达效率，为骨髓MSCs作为糖尿病基因治疗的靶细胞奠定基础。 方法：RT-PCR体外扩增PDX-1 基因，双酶切后整合入相同双酶切的真核表达载体构建重组载体，对重组载体进行酶切分析和序列测定进行鉴定；利用Percoll 细胞分离液体外培养大鼠骨髓MSCs，流式细胞仪检测细胞周期后，Superfect 介导正确重组的载体转染骨髓 MSCs，检测转染效率和细胞存活率从而对转染条件进行优化；G418筛选阳性细胞后，RT-PCR 和Western blotting 检测PDX-1 基因在骨髓 MSCs 中的表达。 结果：重组载体双酶切分析和序列测定证实重组载体构建成功。流式细胞仪显示 85.9%的MSCs处于G₀/G₁期，提示骨髓MSCs具有强大的分化潜能；荧光显微镜下成功转染的细胞呈现全细胞绿色荧光，Superfect 介导的转染效率和细胞存活率与其绝对用量和孵育细胞的时间有关；RT-PCR显示转染后PDX-1基因在骨髓 MSCs表达，随转染时间延长，表达逐渐增强，与Western blotting结果一致。结论：成功构建了含有PDX-1 基因的真核表达载体；Superfect 能高效介导外源性基因在骨髓MSCs 中表达；转染外源性基因的MSCs可望成为一种理想的基因治疗的载体细胞。     

端粒酶逆转录酶基因修饰人骨髓间质干细胞的实验研究

目的： 观察外源性hTERT基因的异位表达对人骨髓间质干细胞（MSCs）端粒酶活性及细胞生命周期的影响。方法： 将携带有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因和人端粒酶逆转录酶（hTERT）目的基因的质粒pEGFP-hTERT通过脂质体转染法转入人骨髓MSCs中，并用G418筛选法进行抗性克隆的筛选与扩增。通过RT-PCR和PCR-ELISA对转染前后hTERT mRNA的表达情况及其对端粒酶活性的影响进行检测。将转染细胞在EGF和bFGF的联合诱导下向神经元样细胞定向诱导分化，并用RT-PCR进行鉴定。结果： 未转染的人骨髓MSCs hTERT mRNA表达阴性，且端粒酶呈阴性而转染hTERT基因的人骨髓MSCs hTERTmRNA表达阳性，且端粒酶呈阳性。转染hTERT基因的人骨髓MSCs在体外已连续传到第35代，而未转染的人骨髓MSCs传到第20-25代左右已衰老死亡。 转染hTERT基因的人骨髓MSCs经EGF和bFGF的联合诱导后，较多细胞出现了典型的神经元样形态，且经RT-PCR检测表明，神经元特征性蛋白微管相关蛋白（MAP₂）和神经丝亚单位M（NF-M）表达增强。结论： 外源性hTERT基因可以在人骨髓MSCs中获得异位表达，并能诱导人骨髓MSCs的端粒酶活性。外源性hTERT基因的异位表达不仅可以使人骨髓间质干细胞的寿命明显延长而且不影响其维持干细胞的多向分化潜能特性。     

干细胞因子与粒细胞集落刺激因子预处理对大鼠骨髓间质干细胞增殖分化的影响

目的：探讨干细胞因子（SCF）和粒细胞集落刺激因子（G-CSF）促进骨髓间质干细胞（MSCs）增殖及促进其向心肌细胞分化的作用。方法：将SD大鼠随机分成对照组、SCF组、G-CSF组和SCF＋G-CSF联合处理组。流式细胞仪检测第4代MSCs细胞周期。用DAPI（25 mg/L）标记的P4MSCs与心肌细胞共培养。在共培养的第1 d至第5 d用免疫荧光技术分别检测心肌特异性肌节肌球蛋白重链（MHC）、肌钙蛋白T（TnT）的表达，统计向心肌样细胞分化的MSCs百分率。结果：（1）SCF和G-CSF联合应用能明显诱导MSCs进入S期，单因子SCF组和G-CSF组与对照组相比，也明显促进MSCs由G₀/G₁期进入S期（P<0.01）。（2）MSCs与心肌细胞共培养后，SCF和G-CSF联合组MSCs表达心肌特异性蛋白MHC及TnT的阳性百分率均显著高于对照组（P<0.01），单细胞因子组MSCs的心肌特异性蛋白MHC及TnT的阳性表达亦高于对照组（P<0.01）。结论： SCF和G-CSF对MSCs具有促增殖、促分化的作用。     

毛囊培养上清液诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化的研究

目的探讨毛囊培养上清液诱导体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向毛囊干细胞横向分化的潜能。方法采用完全贴壁法分离培养大鼠MSCs,取第3代MSCs,用免疫细胞化学染色技术鉴定CD44和CD29。用毛囊培养上清液为条件培养液诱导MSCs,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,对诱导后的细胞进行角蛋白15的免疫细胞化学染色和免疫荧光细胞化学染色,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)进一步鉴定诱导后细胞角蛋白15的表达。结果体外培养的MSCs,CD44、CD29表达阳性。经毛囊上清液诱导后,免疫细胞化学、免疫荧光细胞化学染色鉴定,部分细胞角蛋白15表达阳性;同时RT-PCR也检测到keratin 15 mRNA的表达。结论体外培养的骨髓间充质干细胞经毛囊培养上清液诱导可以分化为毛囊干细胞样的细胞。     

碱性成纤维细胞生长因子和5-氮杂胞苷对大鼠骨髓间充质干细胞分化潜能和细胞增殖的影响

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和5-氮杂胞苷(5-aza)对体外骨髓间充质干细胞(MSCs)细胞增殖与分化潜能的影响。方法:大鼠骨髓中获得MSCs,培养传代,在倒置相差显微镜和透射电镜下观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞周期改变;MTT法检测bFGF和5-aga对MSCs生长的影响;免疫细胞化学方法检测actin、desmin、myoglobin、NSE、GFAP的表达。结果:有心肌样细胞和神经元样细胞的形态变化;MSCs经5-aza以及5-aza加bFGF联合诱导actin、desmin、myoglobin、NSE和GFAP的表达均较对照组显著增高;而经bFGF诱导后,前4种蛋白表达无明显变化,仅GFAP蛋白表达显著增高。结论:5-aza对MSCs细胞生长有抑制作用,而bFGF有明显促增殖作用。MSCs被5-aza诱导分化成心肌样细胞和神经元样细胞,bFGF可使MSCs分化为GFAP阳性的神经胶质样细胞。     

Edaravone-induced differentiation of rat bone marrow mesenchymal stem cells into neuron-like cells in vitro

目的 采用密度梯度离心和差速贴壁法体外分离、培养、纯化及鉴定成年Wistar大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),利用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和依达拉奉联合诱导MSCs定向分化为神经元样细胞. 方法 选用1月龄健康雄性Wistar大鼠,采用Percoll分离液密度梯度离心法获取骨髓中的MSCs,通过差速贴壁法反复传代培养、纯化,取第3代细胞采用流式细胞术、免疫细胞化学等方法检测MSCs的纯度,利用bFGF联合依达拉奉诱导MSCs向神经元样细胞分化,并通过扫描电镜、免疫细胞化学等对诱导后的细胞进行鉴定. 结果 第3代MSCs经免疫细胞化学及流式细胞仪等检测,间充质干细胞特异性的标记物CD44表达阳性,不表达造血干细胞及白细胞的特异性标记物CD34、CD45,MSCs纯度高达95.5％.诱导分化后扫描电镜检测可观察到典型的神经元样细胞结构;免疫细胞化学检测发现,细胞表达神经元特异性烯醇化酶( NSE),不表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP),Nestin的表达随着细胞成熟而减弱. 结论 密度梯度离心和差速贴壁法可获得高纯度的MSCs;依达拉奉能高效地定向诱导MSCs分化为神经元样细胞.     

人突变p27基因对大肠癌细胞生物学行为的影响

目的： 观察人突变p27基因（p27mt）对人大肠癌细胞生长的影响，探讨p27mt基因在大肠癌基因治疗中的作用及可能机制。方法： 以携带突变p27基因复制缺陷型腺病毒（Ad-p27mt）为载体，转染大肠癌细胞SW480；Western blotting方法检测p27mt蛋白的表达；细胞计数法检测p27mt对SW480细胞生长的抑制作用；用流式细胞仪检测细胞周期；用DNA片段分析法检测细胞凋亡。结果： Ad-p27mt转染SW480细胞后，p27在细胞中出现了蛋白高表达;77.96%的细胞阻滞于G₀/G₁期，而Ad-LacZ组及空白对照组分别为27.57%和25.29%；生长曲线显示Ad-p27mt对细胞生长有明显的抑制作用；DNA片段分析示p27mt基因可诱导细胞的凋亡。结论： p27mt对细胞周期有明显的阻滞作用，主要阻滞于G₀/G₁期；p27mt基因对细胞的生长抑制机制与诱导细胞凋亡和细胞周期的阻滞有关。     

In vitro mesenchymal stem cells differentiation into hepatocyte-like cells in the presence and absence of 3D microenvironment

Our study was aimed to select the best growth factor cocktail for differentiation of mesenchymal stem cells (MSCs) into hepatocytes-like cells (HLCs) in absence and presence of three dimensional (3D) microenvironment. Ninety milliliters of bone marrow was aspirated from the iliac bone for separation of MSCs. This study was conducted on 20 patients with advanced liver cirrhosis. They were divided into two groups. Group I; MSCs were plated onto 96-well plates without microenvironment (control group). Group II; MSCs were plated onto 96-well plates with 3D microenvironment. Surface expression of CD271, CD29, and CD34 were analyzed using flow cytometry. MSCs were differentiated in vitro into HLCs by adding four growth factor cocktails in presence and absence of 3D microenvironment. Hepatogenesis was assessed by immunohistochemical analysis of OV6, α-fetoprotein, albumin, and cytokeratin 18 expressions. There was statistically significant increase in the expression of CD271 and CD29 after MSCs culture (P?<?0.001). Heterogeneous cell population composed of MSCs and differentiated HLCs were encountered (40 % hepatocytes and 60 % MSCs). Furthermore, our results showed that growth factor cocktails 1 and 2 gave the best result for differentiation of MSCs into HLCs. MSCs could be feasible, readily available, and novel source for differentiation of MSCs into HLCs for future therapeutic implication.     

人脐静脉来源的间质干细胞体外分离扩增及多向分化的研究

目的： 探讨人脐静脉来源的间质干细胞(MSCs) 的体外分离、纯化、扩增和多向分化条件。 方法： 无菌条件下取正常人脐静脉,1%胶原酶Ⅱ消化脐静脉细胞，以IMDM作为培养基进行培养和纯化细胞，瑞氏染色和电镜观察形态；FACS检测其免疫表型和细胞周期；体外诱导成骨细胞、脂肪细胞分化，von Kossa染色、油红O染色和RT-PCR检测骨钙蛋白、脂蛋白脂酶mRNA的表达以检测细胞向成骨、成脂肪细胞分化情况。 结果： 脐静脉来源的细胞呈纤维样贴壁生长，瑞氏染色和电镜观察具有MSCs特征；FACS检测结果显示, 表达MSCs相关的抗原CD29、CD44、CD105，而CD31、CD13、CD34、CD45、HLA-DR为阴性；体外诱导成骨细胞、脂肪细胞分化成功。 结论： 人脐静脉来源的MSCs的细胞形态、生长特性、免疫表型、多向分化能力与骨髓来源的MSCs相似，可作为满足实验和临床需要的MSCs来源。     

体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化

目的 探讨生长因子在体外能否诱导大鼠骨髓来源的间充质干细胞（BM-MSC）向心肌样细胞分化,是否增强其旁分泌作用.方法 取4周龄雄性SD大鼠骨髓,贴壁法培养BM-MSC至第3代时,应用流式细胞仪检测其表面标志物CD29、CD44、CD105、CD34、CD45、CD31.将细胞随机分为间充质干细胞组（MSC组）和生长因子共培养组（GF-MSC组）.MSC组继续培养传代;GF-MSC组与生长因子[其中包括培养基（IMDM）、2％胎牛血清（FBS）、20 nmol/L地塞米松、100μmo1/L维生素C（VitC）、50 μg/L成纤维细胞生长因子2（FGF-2）、10 μg/L成骨蛋白2（BMP-2）、2μg/L胰岛素样生长因子1（IGF-1）、青霉素和100 mg/L链霉素]共培养.1周后细胞免疫荧光染色检测两组细胞肌钙蛋白Ⅰ（TnⅠ）和结蛋白（Des）表达;反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测两组细胞Tn Ⅰ和Des mRNA的表达;ELISA法检测两组细胞裂解液以及细胞培养上清中的肝细胞生长因子（HGF）和血管内皮生长因子（VEGF）的蛋白水平.结果 体外培养的BM-MSC表达CD29、CD44、CD105,而不表达CD31、CD34、CD45.免疫荧光染色显示GF-MSC阳性表达TnⅠ和Des.RT-PCR结果显示TnⅠ和Des mRNA在GF-MSC有阳性表达,而MSC为阴性表达.GF-MSC组HGF、VEGF在细胞裂解液和细胞培养上清中的蛋白水平（ng/L）高于MSC组（HGF裂解液32.05±0.41比12.10±0.21,培养上清574.21±4.19比169.16±2.41;VEGF裂解液45.66±2.22比30.37±0.54,培养上清487.78±36.29比44.25±1.31;均P＜0.05）.结论 体外与生长因子共培养,可诱导BM-MSC向心肌样细胞分化,并增强其旁分泌作用.     

Adipose tissue-derived mesenchymal stem cells are more potent suppressors of dendritic cells differentiation compared to bone marrow-derived mesenchymal stem cells

Both mesenchymal stem cells (MSCs) and dendritic cells (DCs) are engaged in the regulation of the immune response parallel to their numerous functions.The main objective of this study was to compare the effects of mesenchymal stem cells isolated from human adipose tissue or human bone marrow on the expression of specific cell surface markers as well as the secretion of some cytokines by monocyte-derived dendritic cells. The set of methods used includes cell cultures, magnetic beads isolation of cells, flow cytometry, ELISA and proteome profiler kit assays. The results obtained show that MSCs isolated from human adipose tissue are more potent immunomodulators of differentiation of human DCs in comparison to the bone marrow-derived MSCs. In both cases the percentages of CD14+ cells were increased in co-cultures of MSCs and DCs and at the same time down-regulated the expression of CD80, CD86 and CD83 as in all experiments the effect of adipose tissue MSCs was stronger. Similarly, the secretion of IL-10 by dendritic cells was up-regulated in co-cultures of MSCs and dendritic cells and the effect was stronger when adipose tissue-derived MSCs were used.Taken together all results presented reveal the higher potential of the adipose tissue-derived MSCs to inhibit the differentiation and expression of functionally important co-stimulatory molecules on the surface of monocyte-derived dendritic cells than the bone marrow-derived MSCs.     

胚胎及骨髓间充质干细胞增殖活性与成脂分化能力的比较

背景：间充质干细胞最先在骨髓中发现,且骨髓间充质干细胞的相关研究也最多,但是骨髓间充质干细胞来源有限且含量极低。近年来,已经从人胚胎组织分离出间充质干细胞,其与骨髓间充质干细胞在生物学特性上有很多相似之处,但是二者的成脂诱导能力比较尚无明确报道。 目的：比较人胚胎组织与骨髓来源间充质干细胞体外增殖能力及成脂诱导能力。 方法：采用全骨髓法获得骨髓间充质干细胞,胶原酶消化法获得胚胎组织间充质干细胞。流式细胞术鉴定两种间充质干细胞表面分子标记。用细胞计数方法检测两种间充质干细胞增殖能力。分别向两种细胞培养体系中加入成脂诱导剂诱导14 d,经油红O染色后观察并计数,计算不同来源间充质干细胞的成脂诱导分化率。 结果与结论：从两种不同组织中均可获取梭形贴壁的间充质干细胞,表面标记物CD44、CD73、CD90和CD105均呈阳性表达,CD14、CD34和CD45均为阴性表达;胚胎组织间充质干细胞的增殖能力明显强于骨髓间充质干细胞(P < 0.01)。胚胎组织间充质干细胞和骨髓间充质干细胞经过成脂诱导液诱导14 d后,油红O染色结果均为阳性,但是骨髓间充质干细胞体外成脂能力明显强于胚胎组织间充质干细胞(P < 0.01)。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

Mesenchymal stem cells can be differentiated into endothelial cells in vitro

Human bone marrow-derived mesenchymal stem cells (MSCs) have the potential to differentiate into mesenchymal tissues like osteocytes, chondrocytes, and adipocytes in vivo and in vitro. The aim of this study was to investigate the in vitro differentiation of MSCs into cells of the endothelial lineage. MSCs were generated out of mononuclear bone marrow cells from healthy donors separated by density gradient centrifugation. Cells were characterized by flow cytometry using a panel of monoclonal antibodies and were tested for their potential to differentiate along different mesenchymal lineages. Isolated MSCs were positive for the markers CD105, CD73, CD166, CD90, and CD44 and negative for typical hematopoietic and endothelial markers. They were able to differentiate into adipocytes and osteocytes after cultivation in respective media. Differentiation into endothelial-like cells was induced by cultivation of confluent cells in the presence of 2% fetal calf serum and 50 ng/ml vascular endothelial growth factor. Laser scanning cytometry analysis of the confluent cells in situ showed a strong increase of expression of endothelial-specific markers like KDR and FLT-1, and immunofluorescence analysis showed typical expression of the von Willebrand factor. The functional behavior of the differentiated cells was tested with an in vitro angiogenesis test kit where cells formed characteristic capillary-like structures. We could show the differentiation of expanded adult human MSCs into cells with phenotypic and functional features of endothelial cells. These predifferentiated cells provide new options for engineering of artificial tissues based on autologous MSCs and vascularized engineered tissues.     

人骨髓胚胎样干细胞向多核肌纤维诱导分化的研究

目的: 比较骨髓来源的胚胎样干细胞(ELSCs)与间充质干细胞(MSCs)的体外成肌分化能力。方法:采用胚胎干细胞扩增用的无血清Knockout-DMEM培养基在明胶包被过的培养瓶中培养人骨髓单个核细胞以分离ELSCs,传统方法从相同骨髓中分离MSCs,倒置相差显微镜下观察细胞形态特征,采用免疫荧光染色鉴定多潜能抗原标志的表达。成肌分化液分别培养ELSCs和MSCs,采用免疫染色法检测肌纤维特异性抗原标志肌球蛋白重链(MHC)、成肌素(myogenin)和MyoD蛋白的表达, RT-PCR检测MHC、myogenin和MyoD mRNA的表达,计算MHC阳性肌纤维的比例以比较ELSCs与MSCs的体外成肌分化能力。结果:无血清培养基可从骨髓中分离到弱表达多潜能抗原标志Oct-4、Nanog-3和Sox-2的ELSCs,体积较小,形态纤细均一,在形态方面不同于相同骨髓来源的MSCs,后者不表达多潜能抗原标志。在成肌分化液中培养,ELSCs和MSCs均可被诱导为在蛋白和mRNA水平表达MHC和myogenin的多核肌纤维,但诱导培养10 d时,ELSCs的MHC蛋白阳性肌纤维的比例为(25.7±4.1)%,MSCs为(15.8±7.6)%,ELSCs的成肌分化能力明显高于MSCs(P<0.05)。 结论:骨髓ELSCs能被诱导为多核肌纤维,并具有比来自相同骨髓的MSCs更强的成肌分化能力,ELSCs是肌病治疗更理想的种子细胞。     

人脐血源性MSCs的免疫调节作用

目的 从人脐血中分离、培养间充质干细胞(MSCs)并探讨其对淋巴细胞的免疫调节作用.方法 淋巴细胞分离液分离人脐血单个核细胞,利用贴壁筛选法通过多次传代得到MSCs,流式细胞仪测定细胞表型;将获得的MSCs分别以不同数量加入到外周血混合淋巴细胞培养体系和植物血凝素(PHA)刺激的外周血淋巴细胞转化体系中,用H3-TdR标记β液体闪烁计数仪检测细胞增殖,观察脐血来源的MSCs对混合淋巴细胞反应和淋巴细胞转化的影响.结果 从人脐血中分离获得的贴壁细胞,呈成纤维样的细胞形态,CD29、CD105和CD166表达阳性,CD14、CD34和CD45表达阴性;人脐血源性MSCs在体外对混合淋巴细胞反应和PHA诱导的淋巴细胞转化均具有明显的抑制作用,抑制作用与细胞数量呈正相关.结论 从人脐血中可以成功地分离出MSCs,其对同种异体淋巴细胞具有免疫调节作用,为其作为骨组织工程异基因种子细胞来源打下基础.     

大鼠胎盘来源间充质干细胞的生物学特性

背景：研究报道,人间充质干细胞用于实验动物研究的结果不令人满意,所以考虑使用大鼠胎盘来源的间充质干细胞用于动物实验研究,以期获得更好的实验结果。查阅国内外相关文献,目前尚未发现大鼠胎盘来源间充质干细胞的相关报道。 目的：建立从大鼠胎盘分离间充质干细胞的方法,观察其基本生物学特性。 方法：通过胶原酶消化法从大鼠胎盘分离并得到间充质干细胞。每天用倒置显微镜观察其形态。用MTT法测定其生长动力学并绘制生长曲线。用流式细胞仪检测其表型及细胞周期。通过免疫组化法证实其成脂及成骨分化的潜能。 结果与结论:原代细胞培养8 h后细胞贴壁,24 h内细胞形成集落,第4代细胞大小、形态基本一致,以梭形为主。细胞周期检测提示G0/G1期、S期、G2期的比例分别为83.76%,8.01%,8.23%。免疫表型分析其表达CD29和CD90,不表达CD45。体外诱导实验证实胎盘间充质干细胞具有成脂和成骨分化的潜能。