核酸扩增-液相杂交法检测沙眼衣原体DNA

目的：探讨用核酸扩增（PCR）－液相杂交法检测沙眼衣原体DNA的效果。方法：用PCR－液相杂交法对616份临床标本进行了沙眼衣原体检测，并与培养法比较，对与培养法结果不相符合的标本及部分阴性标本进行连接酶链反应（LCR）复检。结果：PCR－液相杂交相法检测沙眼衣原体特异性良好。灵敏度达到0.1fg，临床标本沙眼衣原体DNA阳性检出率为27.6％，显著高于培养法的6.3%（P＜0.001）。以培养法为标准，此法的灵敏度为100％。以LCR法为标准，此法的灵敏度为97.2％,特异度为80.7%，2者具有较好的相符性。结论：PCR－液相杂交法检测沙眼衣原体DNA操作简便，特异性强，灵敏度高，适合临床应用。     

大环内酯类药物次抑菌浓度诱导沙眼衣原体耐药的实验研究

目的：探讨沙眼衣原体对大环内酯类药物的分子耐药机制。方法：13例沙眼衣原体临床敏感株经红霉素、阿奇霉素、交沙霉素诱导耐药后与未耐药之前的敏感株和标准株E—UW-5／Cx比较,检测基因23SrRNA和核糖体蛋白L4的位点突变。结果：耐药株显现出对红霉素、阿奇霉素和交沙霉素低耐药性,MIC较敏感株分别增加了16、16、8倍。药物敏感性结果显示相对于红霉素、阿奇霉素,沙眼衣原体治疗交沙霉素的易感性最好。敏感株和耐药株的L4的PCR扩增产物的序列均出现G274A、C276T、C339T、C466G位点突变,考虑与大环内酯类药物耐药无关。耐药株的23SrRNA基因PCR扩增产物中出现了A2057G、A2059G和T2611C的突变。结论：沙眼衣原体对大环内酯类药物的耐药分子基础是23SrRNA基因的点突变。     

3411例非淋球菌性前列腺炎病原学分析

目的研究病人前列腺液培养结果及药敏情况,分析引起前列腺炎的原因,协助临床治疗。方法解脲支原体检查使用培养法,采用珠海银科生产的培养基,沙眼衣原体检查采用上海凯创的试剂盒。结果3411例非淋球菌性前列腺炎患者普通细菌培养中阳性1949份,占57.14%。其中G+球菌1708株,G-杆菌118株,G+杆菌122株,霉菌1例,沙眼衣原体阳性208例,解脲支原体阳性297例。条件致病菌-腐生葡萄球菌、表皮葡萄球菌比例增加。药敏试验提示细菌耐药性严重。结论细菌性前列腺炎致病菌以G+球菌为主,占87.6%,沙眼衣原体、解脲支原体也是病因之一,谨慎使用广谱抗生素。     

荧光定量PCR检测生殖道内沙眼衣原体感染的应用

目的 评价DNA定量测定技术在生殖道衣原体感染诊断中的应用价值.方法 比较荧光定量DNA测定与传统检测手段对衣原体感染的检测结果.结果 用荧光定量PCR法测定DNA来检测沙眼衣原体(CT)感染,其敏感性和特异性均比传统的方法高.结论 CT-DNA定量测定不宜用作短期判愈,在沙眼衣原体诊断中具有巨大的潜力.     

输卵管妊娠与沙眼衣原体和解脲支原体感染的相关研究

目的 探讨输卵管妊娠与沙眼衣原体和解脲支原体感染的关系.方法 分别采用聚合酶链反应（PCR）技术、ELISA法,将60例妇科经剖腹探查或腹腔镜手术证实并行患侧输卵管切除的患者作为观察组,40例同期行绝育术及妇科良性疾病而行子宫、附件或输卵管切除术者作为对照组,测定宫颈分泌物和手术标本中的沙眼衣原体DNA、解脲支原体DNA以及两组患者血清中抗沙眼衣原体抗体和解脲支原体抗体.结果 宫颈分泌物检测出沙眼衣原体DNA,输卵管妊娠组21例（35%）,对照组4例（10%）;血清沙眼衣原体抗体阳性,输卵管妊娠组18例（30%）,对照组2例（5%）;手术标本检测出沙眼衣原体DNA 15例（25%）,对照组1例（2.5%）.两组比较,差异有显著性（P〈0.01）.结论 沙眼衣原体、解脲支原体与输卵管妊娠的发生有着密切关系.沙眼衣原体、解脲支原体感染所致宫颈炎、盆腔炎与输卵管妊娠有密切联系.     

实时荧光定量PCR检测沙眼衣原体的研究

目的 采用TaqMan探针建立检测沙眼衣原体的实时荧光定量PCR(real-time PCR)方法.方法 根据沙眼衣原体外膜蛋白A的基因(ompA)序列设计引物和探针,以克隆的ompA部分基因片段作DNA模板,建立实时荧光定量检测方法.结果 建立的荧光定量PCR检测方法的最低检出限为5 copies/反应,检测线性范围100107线性关系良好(r2=0.997),比巢式PCR敏感100倍;且与鹦鹉热衣原体、淋球菌、解脲脲原体、大肠杆菌等病原菌DNA以及人基因组DNA均无交叉反应,表明该方法具有良好的特异性.以巢式PCR作参比,建立的荧光定量PCR法检测沙眼衣原体的阳性符合率为100.00％,阴性符合率为95.09％,总符合率为96.81％.结论 建立的检测沙眼衣原体实时荧光定量PCR具有特异性强和敏感性高的特点,可快速检测样本中微量沙眼衣原体DNA,适用于对沙眼衣原体进行大规模筛选.     

现场快速相关点检测作为沙眼抗生素靶向治疗指导的比较研究

背景:沙眼是沙眼衣原体反复感染结膜导致的疾病,居致盲感染性眼病的首位。旨在消除沙眼的控制项目多使用SAFE策略(手术,抗生素,面部清洁及环境改善)。该策略中A项针对治疗C株沙眼衣原体感染,治疗的时机选择基于临床出现显著沙眼炎型滤泡(TF)的患病率。然而,TF与C株衣原体感染相     

湘南地区泌尿生殖道感染沙眼衣原体的基因型分布

目的 了解湘南地区泌尿生殖道感染沙眼衣原体分离株的基因型(血清型)分布情况.方法应用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性分析,对湘南部分地区泌尿生殖道感染沙眼衣原体病人的62份阳性标本进行了基因分型. 结果沙眼衣原体基因型中, E型25份,D型14份, F型9份,G型7份,J型4份;有3份不典型基因型,未进一步分型.结论湘南地区泌尿生殖道沙眼衣原体感染的基因型别以E型为主,其次为D型、F型、G型、J型.     

湘南地区泌尿生殖道感染沙眼衣原体的基因型分布

目的：了解湘南地区泌尿生殖道感染沙眼衣原体分离株的基因型（血清型）分布情况。方法：应用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性分析，对湘南部分地区泌尿生殖道感染沙眼衣原体病人的62份阳性标本进行了基因分型。结果：沙眼衣原体基因型中，E型25份，D型14份，F型9份，G型7份，J型4份；有3份不典型基因型，未进一步分型。结论：湘南地区泌尿生殖道沙眼衣原体感染的基因型别以E型为主，其次为D型、F型、G型、J型。     

生殖道沙眼衣原体和解脲支原体感染与自然流产的相关性研究

目的探讨生殖道沙眼衣原体和解脲支原体感染与自然流产的关系。方法选取我院自然流产患者(自然流产组)及人工流产患者(对照组),各60例。两组均采集宫颈分泌物及蜕膜组织进行沙眼衣原体和解脲支原体培养,分析结果。结果自然流产组宫颈分泌物及蜕膜组织中沙眼衣原体、解脲支原体、沙眼衣原体+解脲支原体感染率均高于对照组(P<0.01)。结论生殖道沙眼衣原体和解脲支原体感染率与自然流产关系密切,可作为确定自然流产病因的指标。     

沙眼衣原体基因分型及其应用

本文分别以沙眼衣原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ，Ｃｔ）隐蔽性质粒引物（Ｐｐ）及主要外膜蛋白基因（ｏｍｐ；）引物（Ｐｍ）．用ＰＣＲ扩增Ｃｔ特异性ＤＮＡ，并用单链构象多态性（Ｓｉｎｇｌｅ－ｓｔｒａｎｄｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｐｏｉｙｍｏｒｐｈ－ｉｓｍ，ＳＳＣＰ）作基因分型。４２６份标本中，９２例质粒ＰＣＲ阳性，用质粒ＰＣＲ阳性标本作ｏｍｐ：ＰＣＲ，６６例为阳性。其中５２例标本经ＳＳＣＰ分析显示７种不同的电泳图谱，１８例与标准株ＴＥ５５电泳图谱相同。其中两份标本分别取羊水及新生儿睑结膜，其ＳＳＣＰ图谱相同，表明两株Ｃｔ核酸序列完全相同。在分子水平上证实了Ｃｔ的垂直传播。临床标本可先采用敏感的质粒ＰＣＲ作初筛。阳性者再作ｏｍｐ１ＰＣＲ进行基因分型。应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ对Ｃｔ作基因分型，在分子流行病学研究中有重要意义。     

宫外孕组织沙眼衣原体感染的研究

建立检测沙眼衣原体的ＰＣＲ方法，计算机辅助设计的引物位于编码沙眼衣原体主要外膜蛋白（ＭＯＭＰ）的基因区内，扩增产物为１４４ｂｐ。该引物具有高度的特异性和敏感性，其最小检出量为５ｆｇ。应用该引物检测了５２份宫外孕组织中沙眼衣原体ＤＮＡ，测得宫外孕患者沙眼衣原体的阳性率为４０．４％，明显高于对照组的１２．５％（Ｐ＜０．０１），从ＤＮＡ水平证实在宫外孕组织内存在沙眼衣原体     

多重、非对称PCR-FP技术同步检测沙眼衣原体和解脲支原体

目的：应用多重PCR．荧光偏振（FP）技术建立一种可靠、简单经济、快速的同步检测沙眼衣原体、解脲支原体的新方法,并推向临床应用．方法：以与沙眼衣原体dnaB样蛋白、解脲支原体UreC各血清型保守区序列互补的2对特异而无交叉反应的引物在同一反应体系中行多重、非对称聚合酶链反应扩增246例临床样本,应用沙眼衣原体、解脲支原体特异探针混合物与上述非对称扩增PCR产物孵育杂交,荧光偏振检测技术检测,并与常规检测方法测定结果比较．结果：应用多重、非对称PCR-FP技术同步检测泌尿生殖系感染临床标本246例,其中沙眼衣原体感染阳性56例,占22．7％;解脲支原体感染阳性62例,占25．2％;沙眼衣原体、解脲支原体混合感染阳性28例,占11．2％．与常规方法检测结果比较,两者对感染阳性的检测符合率为100％．结论：初步建立了具有良好的特异性、仅需一次扩增即可方便简单地检测沙跟衣原体、解脲支原体的同步检测新方法,对于相关感染的筛查及预防、预后判断具有重要价值．     

宫颈糜烂与沙眼衣原体、解脲支原体感染的关系及治疗的临床观察

目的：探讨宫颈糜烂合并宫颈分泌物检测沙眼衣原体（CT）或（和）解脲支原体（uu)阳性患者的治疗。方法：采用DNA分子杂交技术对178例宫颈中，重度糜烂患者进行宫颈分泌物检测CT和uu，检测出阳性106例，对此106随机分组治疗：治疗组59例，采用局部物理治疗加口服阿奇霉素类药物；对照组47例，采用局部物理治疗。结果：治疗组中度，重度宫颈糜烂的有效率均明显高于对照组，差异有显著性（P＜0．05），结论：沙眼衣原体和解脲支原体是引起宫颈糜烂的一种因素，宫颈糜烂合并CT或uu感染者治疗上应加用影响胞浆蛋白质合成的抗生素药物如阿奇霉素。     

绿脓杆菌基因组DNA G+C mol%含量的测定

目的 探讨绿脓杆菌基因组DNA的提取及测定G C mol％含量的方法。方法 采用巨量法与微量法相结合的方法，首先提取绿脓杆菌和大肠杆菌K12的染色体DNA,再用DNA G Cmol％测定装置测定Tm值。并计算绿脓杆菌G C mol％。结果 提取了高纯度的绿脓杆菌染色体DNA,并计算出G Cmol％为63．40％。结论 本方法灵敏度和准确度高，可作为细菌分类和菌种鉴定的一种重要指标。     

应用PCR检测男性泌尿生殖系衣原体感染

应用ＰＣＲ技术对男性泌尿生殖系感患者１２５例行沙眼衣原体检测,其中尿道炎６４例,前列腺炎２８例,附睾炎１９例,尿道以上的尿路感染者１５例。结果显示其阳性率分别为４３．７％、４２．８％、３１．５％、０％。由此说明,沙眼衣原体在男性尿道及生殖道有较高的感染率,对男性尿道炎、前列腺炎及附睾炎患者,有必要进行常规衣原体检测。ＰＣＲ技术检测沙眼衣原体快速、敏感、特异性强,适合临床应用。     

冠心病外周血单核细胞肺炎衣原体病原体检测的意义

目的:探讨冠心病患者外周血单核细胞(PBMC)中肺炎衣原体(Cpn)病原体检测的方法及临床意义。方法:选择150例冠心病(冠心病组)及55例非冠心病(对照组)患者,使用低渗溶血法制备PBMC,直接免疫荧光(DIF)检测Cpn包涵体,巢式PCR(nPCR)法测定外周血单核细胞中肺炎衣原体DNA。结果:150例冠心病患者Cpn包涵体阳性20例,阳性率13.3%,55例对照组中仅1例阳性,阳性率为1.8%,CpnDNA两组间阳性率分别32.7%(49/150)及1.8%(1/55),冠心病组与对照组比较包涵体及DNA检测的阳性率明显增高,(相对危险度分别为26.2、8.3,95%的可信区间分别为3·52~194·98,1·09~63·46)。结论:Cpn病原体阳性反映患者体内存在Cpn感染状态,包涵体与DNA检测两者间具有一致的阳性检出,但包涵体检测更省时省力。     

不规则阴道出血患者沙眼衣原体和解脲脲原体感染136例临床分析

目的:了解不规则阴道出血患者沙眼衣原体和解脲脲原体感染的情况.方法:采用衣原体检测试剂盒(胶体金法)及解脲脲原体抗原免疫荧光检测对我院妇科门诊136例不规则阴道出血患者行沙眼衣原体和解脲脲原体检测.结果:此类病人沙眼衣原体的阳性率为24.26%,解脲脲原体阳性率为41.18%,总阳性率为62.5%. 结论:不规则阴道出血患者,通过常规对症或行激素治疗无效时,应做沙眼衣原体和解脲脲原体检测,尤其是有非婚性行为史、年龄＜30岁,患中度以上宫颈炎、无采用避孕措施者更应检测.     

用PCR检测慢性前列腺炎的病原微生物

1996～ 1998年对 187例慢性非细菌前列腺炎患者应用多聚酶链反应 (PCR)技术检测其前列腺液中沙眼衣原体、解尿支原体及淋球菌。结果在前列腺液中 :沙眼衣原体阳性率为 2 8 34 % ,解尿支原体阳性率占 15 5 1% ,淋球菌阳性率仅为1 6 0 %。结果表明沙眼衣原体及解尿支原体是慢性非细菌性前列腺炎的病原体之一。     

沙眼衣原体荧光PCR试剂盒的研制及临床考核

【目的】用荧光PCR(fluorescencePCR ,F PCR)方法研制沙眼衣原体 (chlamydiaTrachomatis,CT)DNA检测试剂盒 ,通过临床验证考核其性能 ,并与其它方法比较。【方法】设计合成了CTF PCR诊断试剂盒。检测了 5 16份临床分泌物标本 ,以McCoy细胞培养法和Abbott公司的LCx试剂盒为对照。【结果】阳性率 2 1 1% ,灵敏性 98 2 % ,特异性 99 8%。【结论】F PCR显著优于培养法 ,与LCx相当。F PCR试剂盒可以检测CT的真实感染情况 ,对于临床诊断和疗效考察有一定的指导意义。