lncRNA LINC00858靶向微小 RNA-363-3p促进肝癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨LINC00858通过靶向miR-363-3p对肝癌HCCLM3细胞生物学行为的影响.方法 选取2017年1月至2019年1月青海省第五人民医院收治的肝癌病人30例,获取其肝癌组织及其癌旁组织.设置si-NC组、si-LINC00858组、si-LINC00858+anti-miR-NC组和si-LINC00858+anti-miR-363-3p组.实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测LINC00858和miR-363-3p表达水平;双荧光素酶报告实验验证LINC00858和miR-363-3p的靶向关系;CCK-8检测细胞增殖活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法(Western blotting)法检测相关蛋白表达.结果 肝癌组织中LINC00858高表达(2.85±0.27),miR-363-3p低表达(0.58±0.05).LINC00858靶向调控miR-363-3p;抑制LINC00858能够上调p21表达,下调细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达,降低细胞活力、迁移数、侵袭数(P<0.05).干扰miR-363-3p表达逆转了抑制LINC00858表达对肝癌HCCLM3细胞增殖、迁移和侵袭的影响.结论 抑制LINC00858通过靶向上调miR-363-3p抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭.     

长链非编码 RNA LINC01419调控结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移侵袭的机制

目的研究长链非编码 RNA(lncRNA)LINC01419调控结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移侵袭的机制。方法收集漯河市中心医院 2015年 10月至 2018年 5月因结直肠癌手术切除的组织标本 20例,以距离结直肠癌边缘 ≥3 cm的癌旁正常组织标本 20例为对照。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应( qRT-PCR)检测结直肠癌组织中 lncRNA LINC01419和微小 RNA-132-3p(miR-132-3p)表达。构建干扰 lncRNA LINC01419或 miR-132-3p过表达的结直肠癌 SW620细胞, MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡, Transwell检测细胞迁移、侵袭,蛋白质印迹法( Western blotting)检测细胞周期蛋白 D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 1A(P21)、 B细胞淋巴瘤 -2(Bcl-2)蛋白、 Bcl-2相关 X(Bax)蛋白、基质金属蛋白酶 -2(MMP-2)、基质金属蛋白酶 -9(MMP-9)蛋白表达。生物信息学预测结合双荧光素酶报告实验分析 lncRNA LINC01419和 miR-132-3p的靶向关系。 si-LINC01419和 anti-miR-123-3p共转染,观察抑制 miR-132-3p表达对干扰 lncRNA LINC01419诱导的 SW620细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响。结果与癌旁组织［(1.00±0.09)、(1.01±0.08)］比较,结直肠癌组织中 lncRNA LINC01419表达量( 2.74± 0.26)明显增加( P<0.05)miR-132-3p表达量( 0.51±0.05)显著减少( P<0.05)。干扰 lncRNA LINC01419或 miR-132-3p过表达显著抑制 SW620细胞增殖、,迁移、侵袭、 cyclin D1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达,并促进细胞凋亡、 P21、Bax蛋白表达。 lncRNA LINC01419靶向调控 miR-132-3p的表达。抑制 miR-132-3p表达逆转了干扰 lncRNA LINC01419对结直肠癌细胞 SW620增殖、迁移、侵袭的抑制作用,以及对细胞凋亡的促进作用。结论 lncRNA LINC01419通过靶向 miR-132-3p调控结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移侵袭。     

微小 RNA-203a-3p下调 Mink相关肽 1基因表达抑制非小细胞肺癌细胞转移潜能的实验研究

目的 探讨微小RNA-203a-3p(miR-203a-3p)对非小细胞肺癌恶性生物学行为的影响及机制.方法 本研究于2018年7月至2019年6月进行,正常肺上皮细胞BEAS-2B以及肺癌细胞H1299、SPC-A-1、NC-H446购自中国科学院上海细胞库;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-203a-3p和Mink相关肽1(KCNE2)mRNA表达水平;蛋白质印迹法检测KCNE2蛋白表达;将SPC-A-1细胞分为miR-203a-3p(转染miR-203a-3p模拟物)组、miR-con组(转染miR-203a-3p模拟物阴性对照)、si-KCNE2组(转染KCNE2干扰表达载体)、si-con组(转染KCNE2干扰表达载体阴性对照)、miR-203a-3p+pcDNA组(转染miR-203a-3p模拟物和KCNE2过表达载体阴性对照)、miR-203a-3p+pcDNA-KCNE2组(转染miR-203a-3p模拟物和KCNE2过表达载体);四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)法检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期素依赖蛋白激酶6(CDK6)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测miR-203a-3p和KCNE2的靶向关系.结果 与BEAS-2B细胞相比,肺癌细胞H1299、SPC-A-1、NC-H446中miR-203a-3p表达水平显著降低[(0.27±0.05)、(0.18±0.07)、(0.25±0.04)比(1.00±0.24)],KCNE2 mRNA表达水平显著升高[(4.37±0.43)、(5.24±0.34)、(6.39±0.35)比(1.00±0.08)],KCNE2蛋白表达水平显著升高[(0.73±0.07)、(0.75±0.06)、(0.59±0.05)比(0.38±0.04)](P<0.05).与miR-NC组相比,miR-203a-3p组SPC-A-1细胞活性降低[48 h为(0.42±0.05)比(0.55±0.05),72 h为(0.63±0.07)比(0.84±0.09)],迁移细胞数减少[(79.90±5.21)个比(172.13±8.57)个],侵袭细胞数减少[(45.89±3.50)个比(101.83±9.55)个];Cyclin D1、CDK6、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05).与si-NC组相比,si-KCNE2组SPC-A-1细胞活性降低[48 h为(0.44±0.05)比(0.58±0.05),72 h为(0.63±0.08)比(0.94±0.09)],迁移细胞数减少[(71.71±4.52)个比(174.56±13.67)个],侵袭细胞数减少[(35.68±3.27)个比(81.37±5.46)个];Cyclin D1、CDK6、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05).miR-203a-3p靶向调控KCNE2的表达;KCNE2过表达部分逆转miR-203a-3p对肺癌细胞SPC-A-1的作用.结论 miR-203a-3p可通过下调KCNE2抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭.     

白芍总苷调控舌癌HSC3细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

探讨白芍总苷(TGP)对舌癌HSC3细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。TGP作用HSC3细胞或抑制LINC00319表达后,MTT检测HSC3细胞增殖,Transwell检测HSC3细胞的迁移和侵袭,蛋白印迹(Western Blot)检测细胞中CyclinD1、p21、MMP-2和MMP-9蛋白水平,qRT-PCR检测细胞中LINC00319和miR-608水平,双荧光素酶报告基因实验验证LINC00319和miR-608调控关系。TGP或抑制LINC00319表达后,HSC3细胞抑制率、p21蛋白及miR-608水平升高(P<0.05),细胞迁移和侵袭数、CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白水平及LINC00319水平降低(P<0.05)。LINC00319靶向负调控miR-608表达,LINC00319过表达逆转TGP对HSC3细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。TGP可能通过调控LINC00319/miR-608轴抑制舌癌HSC3细胞增殖、迁移和侵袭。     

微小 RNA-216b-5p对骨肉瘤 MG63细胞功能的影响及其与高迁移率族蛋白 B1的靶向关系

目的 探讨微小RNA-216b-5p(miR-216b-5p)对骨肉瘤MG63细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其与高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的靶向关系.方法 将体外培养的MG63细胞分为mimics-NC组、miR-216b-5p mimics组、inhibitor-NC组和miR-216b-5p inhibitor组,采用实时荧光定量PCR检测miR-216b-5p的表达,MTT法、Transwell小室和流式细胞仪分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡能力.采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-216b-5p和HMGB1的靶向关系,蛋白质印迹法(Western blot-ting)检测HMGB1蛋白的表达.结果 与mimics-NC组相比,miR-216b-5p mimics组细胞中miR-216b-5p的表达水平[(5.36±0.54)比(1.00±0.11)]和细胞凋亡率[(20.36±3.15)％比(8.58±1.22)％]明显升高,而细胞增殖活力、侵袭能力和细胞中HMGB1蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05);miR-216b-5p inhibitor组细胞中miR-216b-5p的表达水平[(0.24±0.03)比(0.96±0.08)]和细胞凋亡率[(2.05±0.38)比(9.27±1.16)]较inhibitor-NC组明显降低,而细胞增殖活力、侵袭能力和HMGB1蛋白的表达水平较inhibitor-NC组均明显升高(P<0.05).双荧光素酶报告基因实验证实HMGB1是miR-216b-5p的靶基因.结论 miR-216b-5p可能通过靶向调控HMGB1表达,抑制骨肉瘤MG63细胞增殖、侵袭并诱导细胞凋亡.     

微小 RNA-301b-3p靶向第 10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-301b-3p(miR-301b-3p)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法 本研究起止时间为2019年3—9月.人成骨细胞(hFOB)和骨肉瘤细胞U2OS、MG63购自美国菌种保藏中心.U2OS细胞分为miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)组、miR-301b-3p抑制物(anti-miR-301b-3p)组、anti-miR-301b-3p+小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、anti-miR-301b-3p+第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)小干扰RNA(si-PTEN)组;实时荧光定量PCR(RT-qP-CR)检测miR-301b-3p表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测miR-301b-3p和PTEN的靶向关系.结果 与hFOB细胞相比,U2OS、MG63中miR-301b-3p表达水平[(0.89±0.09),(0.70±0.07)比(0.20±0.02)]显著升高.与anti-miR-NC组比较,anti-miR-301b-3p组U2OS细胞活性[(0.59±0.06)比(1.33±0.13)]显著降低,而凋亡率[(22.06±2.31)％比(7.48±0.78)％]、PTEN蛋白表达[(0.69±0.07)比(0.35±0.03)]显著升高.PTEN是miR-301b-3p的直接靶基因.与anti-miR-301b-3p+si-NC组比较,anti-miR-301b-3p+si-PTEN组U2OS细胞活性[(1.16±0.12)比(0.56±0.06)]显著升高,而凋亡率[(10.28±1.16)比(22.12±2.34)]显著降低.结论 抑制miR-301b-3p表达可通过调控PTEN抑制骨肉瘤细胞增殖,促进细胞凋亡.     

LINC00691负调控miR-512-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 探讨LINC00691对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞恶性生物学行为的影响。方法 RT-qPCR检测30例NSCLC患者癌组织和对应癌旁组织中LINC00691和miR-512-5p的表达。双荧光素酶报告基因实验验证LINC00691和miR-512-5p的靶向关系。将A549细胞分为si-NC组、si-LINC00691组、miR-NC组、miR-512-5p组、si-LINC00691+anti-miR-NC组和si-LINC00691+anti-miR- 512-5p组,MTT和克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式细胞术、Transwell检测细胞凋亡、迁移和侵袭,Western blotting检测细胞中Ki67、Cleaved-caspase3、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达。结果 LINC00691在NSCLC癌组织中表达水平上升（P<0.05）,而miR-512-5p表达水平下降（P<0.05）。LINC00691在A549细胞中负调控miR-512-5p。沉默LINC00691表达或过表达miR-512-5p可降低A549细胞的存活率、克隆形成数、迁移和侵袭数以及Ki67、N-cadherin蛋白表达水平,提高其凋亡率,上调Cleaved-caspase3、E-cadherin蛋白表达水平（P<0.05）。沉默miR-512-5p表达逆转了沉默LINC00691表达对A549细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用及凋亡促进作用。结论 沉默LINC00691可能通过靶向上调miR-512-5p表达来抑制NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进其凋亡。     

舒芬太尼调控 miR-1抑制肝癌细胞 MHCC97-H增殖、侵袭和迁移的机制研究

目的 探讨舒芬太尼调控微小RNA-1(miR-1)表达对人肝癌MHCC97-H细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制.方法 本研究起止时间为2018年3月至2019年9月,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测不同浓度的舒芬太尼对人肝癌MHCC97-H细胞活力的影响,qRT-PCR检测舒芬太尼对MHCC97-H细胞中miR-1表达的影响;通过脂质体转染法将miR-1抑制剂(inhibitor)及阴性对照转染至MHCC97-H细胞,实验分为Control组、舒芬太尼(Sufentanil)组、转染对照(Sufentanil+NC)组和转染(Sufent-anil+miR-1)组.细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测各组MHCC97-H细胞增殖能力,Transwell实验检测各组MHCC97-H细胞侵袭能力,划痕实验检测各组MHCC97-H细胞迁移能力,蛋白质印迹法(Western blotting)检测各组MHCC97-H细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达情况.结果 不同浓度的舒芬太尼对肝癌MHCC97-H细胞活力具有不同程度的抑制作用;与Control组比,Sufentanil组MHCC97-H细胞中miR-1的表达[(1.00±0.09)比(2.25±0.24)]明显升高(P<0.05),细胞增殖[(0.54±0.05)比(0.34±0.03)]、侵袭[(106.24±8.25)个比(51.34±5.02)个]和迁移能力[(37.36±4.01)％比(16.34±1.72)％]降低(P<0.05),MMP-2[(0.33±0.04)比(0.15±0.02)]和MMP-9[(0.24±0.02)比(0.11±0.01)]的表达下调(P<0.05);与Sufentanil+NC组比,Sufentanil+miR-1组MHCC97-H细胞中miR-1的表达[(2.20±0.21)比(1.42±0.15)]明显降低(P<0.05),细胞增殖[(0.32±0.03)比(0.46±0.04)]、侵袭[(52.36±5.14)个比(91.16±6.06)个]和迁移能力[(17.11±1.71)％比(29.85±3.10)％]升高(P<0.05),MMP-2[(0.15±0.02)比(0.27±0.02)]和MMP-9[(0.13±0.01)比(0.19±0.02)]的表达上调(P<0.05).结论 舒芬太尼可通过调控miR-1的表达抑制人肝癌MHCC97-H细胞的增殖、侵袭和迁移,其机制可能与调控MMP-2和MMP-9表达有关.     

miR-130b-3p靶向肝细胞生长因子调控妊娠滋养层细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的研究miR-130b-3p靶向肝细胞生长因子(HGF)调控妊娠滋养层细胞增殖、迁移、侵袭的分子机制。方法以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测正常妊娠妇女胎盘组织和妊娠期子痫前期患者胎盘组织中miR-130b-3p的表达。分别建立抑制miR-130b-3p表达和过表达HGF的JEG-3细胞株,用噻唑蓝法检测细胞活力;用Transwell法检测细胞的迁移及侵袭能力;以蛋白质印迹法检测HGF蛋白的表达,用双荧光素酶报告基因实验验证miR-130b-3p对HGF的靶向作用。结果与正常妊娠妇女胎盘组织(0.29±0.01)相比,妊娠期子痫前期患者胎盘组织(0.60±0.03)中miR-130b-3p的表达显著升高(P<0.05)。anti-miR-NC组和anti-miR-130b-3p组滋养层细胞JEG-3的迁移数分别为85.67±8.67,130.67±12.67,侵袭细胞数分别为74.33±4.66,115.67±12.67,差异有统计学意义(P<0.05)。pcDNA3.1组和pcDNA3.1-HGF组迁移数分别为81.50±12.50,116.00±18.00,侵袭数分别为75.00±8.00,94.50±12.50,差异均有统计学意义(均P<0.05)。anti-miR-130b-3p+si-NC组和anti-miR-130b-3p+si-HGF组迁移细胞数分别为131.67±10.67,108.00±6.00,侵袭细胞数分别为117.30±18.67,96.33±8.67,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-130b-3p通过靶向下调HGF可抑制妊娠滋养层细胞的增殖、迁移和侵袭。     

唑来膦酸对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制

目的 研究唑来膦酸对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其作用机制.方法 将对照组(未做任何处理)、唑来膦酸(ZOL)组(50μmol/L唑来膦酸处理)、miR-con组(转染miR-con)、miR-520a-3p组(转染miR-520a-3p mimics)、ZOL+an?ti-miR-con组(转染anti-miR-con再用唑来膦酸处理)、ZOL+anti-miR-520a-3p组(转染anti-miR-520a-3p再用唑来膦酸处理),均用脂质体法转染至人骨肉瘤细胞(HOS);MTT法检测各组细胞的增殖;Transwell法检测各组细胞的迁移、侵袭;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-520a-3p的表达;蛋白质印迹法(Western blotting)检测各组细胞中T细胞特异性转录因子7(TCF7)的蛋白表达.双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性.结果 与对照组相比,ZOL组HOS细胞的吸光度[(1.05±0.11)比(0.73±0.07)]、迁移细胞数[(86.49±9.17)个比(31.67±4.29)个]、侵袭细胞数[(64.17±7.72)个比(17.82±3.19)个]显著降低,miR-520a-3p的表达明显下调(P<0.05);过表达miR-520a-3p可升高HOS细胞的吸光度[(1.09±0.12)比(0.68±0.09)]、迁移细胞数[(88.49±9.17)个比(35.76±5.14)个]、侵袭细胞数[(64.17±7.72)个比(19.48±4.27)个];TCF7是miR-520a-3p的靶标.抑制miR-520a-3p可逆转ZOL对HOS细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用,且可部分逆转ZOL对HOS细胞中TCF7表达的抑制作用.结论 唑来膦酸可能通过调控miR-520a-3p/TCF7轴抑制骨肉瘤HOS细胞的增殖、迁移和侵袭.     

长链非编码 RNA LINC00346调控微小 RNA-138-5p对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响

目的研究长链非编码 RNA(lncRNA)LINC00346影响宫颈癌细胞增殖和凋亡的分子机制。方法选取 2018年 1—12月于南阳市中心医院手术治疗的 28例宫颈癌病人的宫颈癌组织(实验组)及癌旁正常组织(对照组)为研究对象。根据细胞转染情况分为 si-NC组、 si-LINC00346组、 miR-NC组、 miR-138-5p组、 si-LINC00346+anti-miR-NC及 si-LINC00346+anti-miR-138-5p组;利用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应( qRT-PCR)检测宫颈癌组织和宫颈癌海拉细胞中 LINC00346和微小 RNA(miR)138-5p的表达水平,蛋白质印迹法检测海拉细胞中周期素依赖激酶抑制剂 p21(P21)和胱天蛋白酶 -3(caspase-3)的蛋白含量, MTT法和流式细胞术测定细胞存活率和凋亡率,双荧光素酶报告系统验证 LINC00346和 miR-138-5p的靶向关系。结果与正常癌旁组织相比,宫颈癌组织中 LINC00346含量显著升高［( 2.51±0.08)比( 0.99±0.05)］(P<0.001);转染 si-LINC00346(LINC00346干扰物)后,与 si-NC(阴性对照组)相比, si-LINC00346组宫颈癌海拉细胞中的 LINC00346含量显著下降［( 0.33± 0.03)比( 1.00±0.05)］P21和 caspase-3蛋白含量升高［(0.63±0.04)比( 0.22±0.02);(0.79±0.05)比( 0.30±0.03)］,海拉细胞存活率降低［(52.84±4.39)比(,100.00±6.13)］,凋亡率升高［( 23.39±1.64)比( 8.19±1.00)］,均差异有统计学意义( P<0.001),敲除 LINC00346可降低细胞存活率,提高细胞凋亡率及 P21和 caspase-3蛋白含量;转染野生型 WT-LINC00346的海拉细胞,与 miR-NC对照组相比, miR-138-5p组野生型 WT-LINC00346的萤火虫荧光素酶相对活性显著下降［( 0.24±0.03)比( 0.97±0.05)］。敲除 LINC00346可显著上调 miR-138-5p含量［(2.43±0.07)比( 1.01±0.05)］(P<0.001)。结论 LINC00346通过靶向 miR-138-5p调控宫颈癌海拉细胞增殖和凋亡。     

长链非编码 RNA LINC00662靶向微小 RNA-103a-3p对黑色素瘤细胞增殖和周期的影响

目的探究长链非编码 RNA LINC00662对黑色素瘤细胞增殖和周期的影响,以及分子机制。方法本研究于 2018年 10月至 2020年 2月进行。以体外培养的人皮肤黑色素瘤细胞 A375为研究对象,然后将其分为四组,分别为 si-NC、si-LINC00662、si-LINC00662+anti-miR-NC和 si-LINC00662+anti-miR-103a-3p转染 A375细胞。采用 RT-PCR检测皮肤黑色素瘤组织中 LINC00662和 miR-103a-3p的表达水平, CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,蛋白质印迹法( western blot. ting)检测细胞周期蛋白 1(CyclinD1)、增殖细胞核抗原( PCNA)的蛋白表达。结果与正常组织和正常皮肤细胞相比,在皮肤黑色素瘤组织和细胞株中 LINC00662表达［ 1.24±0.50比 4.17±1.27］上调, miR-103a-3p表达［ 1.17±0.32比 0.64±0.21］显著下调。 LINC00662与 miR-103a-3p靶向结合。与 si-NC组相比, si-LINC00662组 LINC00662表达［ 1.00±0.06比 0.48±0.06］、 OD值和 S期细胞比例［( 34.7±3.5)%比( 20.5±3.0)%］降低, G0/G1期细胞比例［( 57.4±5.2)%比( 74.7±4.8)%］增高, Cyclin D1［1.00±0.01比     

长链非编码 RNA膀胱癌相关转录物 1对微小 RNA-503-5p的靶向关系及对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究长链非编码RNA(lncRNA)膀胱癌相关转录物1(BLACAT1)对微小RNA(miR)-503-5p的靶向关系及结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结肠癌细胞株SW620,LOVO,HT29和人正常结肠黏膜上皮细胞株NCM460中BLACAT1和miR-503-5p的表达.在HT29细胞中转染si-BLACAT1、pcDNA-BLACAT1或miR-503-5p,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞核相关抗原Ki-67(Ki-67)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、活化的多聚ADP-核糖聚合酶(Cleaved PARP)和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved caspase-3)的表达,starbase预测和双荧光素酶报告分析BLACAT1与miR-503-5p之间的靶向关系.si-BLACAT1和anti-miR-503-5p共转染,观察干扰miR-503-5p对沉默BLACAT1诱导的结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响.结果 与NCM460细胞比较,SW620、LOVO和HT29中BLACAT1表达量明显增加[(4.93±0.58)、(5.66±0.53)、(6.17±0.66)比(1.03±0.22)],miR-503-5p表达量减少[(0.72±0.11)、(0.67±0.09)、(0.51±0.08)比(1.04±0.14)](P<0.05).沉默BLACAT1或转染miR-503-5p明显减少HT29细胞的细胞存活率、Ki-67、CyclinD1蛋白表达量,提高细胞凋亡率、Cleaved PARP和Cleaved caspase-3蛋白水平(P<0.05),过表达BLACAT1则反之.BLACAT1靶向miR-503-5p调控其表达.干扰miR-503-5p部分逆转沉默BLACAT1抑制结直肠癌细胞增殖、Ki-67、CyclinD1蛋白表达和诱导结直肠癌细胞凋亡、Cleaved PARP、Cleaved caspase-3蛋白表达的作用.结论 lncRNA BLA-CAT1在表达上调,沉默BLACAT1可通过靶向调控miR-503-5p的表达,来抑制结直肠癌细胞增殖,并诱导细胞凋亡.     

miR-126-5p通过靶向 Peli2影响糖尿病肾病肾小管上皮细胞上皮 -间质转化发生

目的 探讨微小RNA-126-5p(miR-126-5p)通过靶向pellino E3泛素蛋白连接酶家族成员2(Peli2)影响糖尿病肾病肾小管上皮细胞上皮-间质转化(EMT)发生的分子机制.方法 本研究起止时间为2018年12月至2019年12月.体外培养人肾小管上皮细胞HK-2(美国ATCC),分别使用5 mmol/L、30 mmol/L的D-葡萄糖处理细胞48 h,分别记作对照组、模型组.采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测miR-126-5p、Peli2的表达水平.利用脂质体转染法分别将miR-126-5p寡核苷酸模拟物(miR-126-5p mimics)及阴性对照mimic NC序列(miR-NC)、Peli2小分子干扰RNA(si-Peli2)及其阴性对照(si-NC)转染至HK-2细胞,使用30 mmol/L的D-葡萄糖处理细胞48 h.Western blot检测上皮型钙黏蛋白(E-Cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-Cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、锌指蛋白(Snail)表达量;双荧光素酶报告实验验证miR-126-5p与Peli2的靶向关系.结果 与对照组相比,模型组miR-126-5p[(1.00±0.10)比(0.32±0.03)]、E-Cadherin[(0.86±0.09)比(0.35±0.04)]的表达水平显著降低(P<0.05),Peli2[(0.42±0.04)比(1.05±0.11)]、N-Cadherin[(0.45±0.05)比(0.99±0.10)]、Vi?mentin[(0.32±0.03)比(0.92±0.09)]、Snail[(0.22±0.02)比(0.75±0.08)]的表达水平显著升高(P<0.05);转染miR-126-5p mimics,与转染miR-NC相比,E-Cadherin[(0.34±0.03)比(0.75±0.08)]的表达水平显著升高(P<0.05),N-Cadherin[(1.02±0.11)比(0.53±0.05)]、Vimentin[(0.95±0.10)比(0.48±0.05)]、Snail[(0.72±0.07)比(0.36±0.04)]的表达水平显著降低(P<0.05);转染si-Peli2后,与转染si-NC相比,E-Cadherin[(0.24±0.03)比(0.70±0.07)]的表达水平显著升高(P<0.05),N-Cadherin[(1.05±0.12)比(0.50±0.05)]、Vimentin[(0.96±0.10)比(0.38±0.04)]、Snail[(0.74±0.07)比(0.40±0.04)]的表达水平显著降低(P<0.05);miR-126-5p能够特异性结合Peli2,Peli2是miR-126-5p的靶基因;Peli2过表达后可明显逆转miR-126-5p过表达对高糖诱导的HK-2细胞EMT的影响.结论 miR-126-5p通过靶向Peli2抑制糖尿病肾病肾小管上皮细胞EMT发生.     

下调微小 RNA-425-5p靶向第 10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白调控宫颈癌细胞侵袭和迁移的分子机制

目的研究下调微小 RNA(miR)-425-5p靶向第 10号染色体同源缺失性磷酸酶 -张力蛋白( PTEN)调控宫颈癌 Caski细胞侵袭和迁移的分子机制。方法本研究起止时间为 2018年 12月至 2019年 11月。以宫颈癌 Caski细胞为探讨对象,转染 miR-425-5p抑制剂( inhibitor),PTEN siRNA和 miR-425-5p inhibitor共转染到宫颈癌 Caski细胞; MTT法测定细胞增殖, Transwell小室测定细胞侵袭和迁移;在线靶基因预测软件发现 PTEN与 miR-425-5p可能互为靶向关系,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系;蛋白质印迹法( Western blotting)测定上皮钙黏素( E-cadherin)、神经钙黏素( N-cadherin)蛋白表达。结果转染 miR-425-5p inhibitor后的宫颈癌 Caski细胞 miR-425-5p表达量降低［( 0.96±0.15)比( 0.32±0.04)］,增殖［( 0.47±0.05)比( 0.23±0.04)］、侵袭［( 95.32±7.86)比( 63.17±5.22)］及迁移［( 140.88±13.94)比( 89.64±9.57)］能力降低, E-cadherin表达上调［( 0.29±0.05)比( 0.65±     

微小核糖核酸 -200b-3p、血管内皮生长因子 A在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其与复发转移相关性

目的探讨食管鳞状细胞癌组织中微小核糖核酸 -200b-3p(miR-200b-3p)、血管内皮生长因子 A(VEGFA)表达及其与复发转移的关系。方法回顾性收集 2013年 12月至 2015年 12月于河北省退役军人总医院经手术切除且经组织病理证实的 95例食管鳞状细胞癌病人的食管鳞状细胞癌组织及相应的癌旁正常组织。采用实时荧光定量 PCR法检测组织中 miR-200b-3p、VEGFA mRNA表达,采用免疫组化法检测组织中 VEGFA表达。采用 Pearson检验分析食管鳞状细胞癌病人 miR-200b-3p与 VEGFA mRNA表达的相关关系;随访 5年,采用 Kaplan-Meier法分析食管鳞状细胞癌组织中 miR-200b-3p、VEGFA表达与病人复发转移的关系,采用 Cox比例风险模型分析影响食管鳞状细胞癌病人复发转移的危险因素。结果与癌旁正常组织比较,食管鳞状细胞癌组织中 miR-200b-3p表达水平明显降低［( 1.00±0.24)比( 0.67±0.18)P<0.05］VEGFA mRNA和 VEGFA阳性率明显升高［( 1.01±0.26)比( 1.92±0.50)、(17.89%)比( 78.95%), P<0.05］。食管鳞状细,胞癌病,人 miR-200b-3p与 VEGFA mRNA表达呈负相关( r=.0.39,P<0.05)。与非复发转移组比较,复发转移组病人食管鳞状细胞癌组织中 miR-200b-3p表达水平明显降低［(0.78±0.20)比( 0.53±0.14)P<0.05］VEGFA阳性率明显升高［(67.92%)比( 92.86%),P<0.05］。食管鳞状细胞癌组织中 miR-200b-3p、VEGFA表达与病人,组织分化,程度、 TNM分期有关( P<0.05)。 miR-200b-3p低表达者 5年复发转移率     

LncRNA KCNQ1OT1通过调控 miR-506-3p表达调节喉鳞状细胞癌细胞的生物学行为

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)KCNQ1重叠转录物1(KCNQ1OT1)对喉鳞状细胞癌细胞生物学的影响及作用机制.方法 于2019年5月至2020年2月,采用RT-qPCR法检测了45例来自山东大学齐鲁医院桓台分院喉鳞状细胞癌病人的癌组织和癌旁组织及购自上海研生实业有限公司的人胚肺成纤维细胞WI-38和购自中国科学院上海细胞库的喉鳞状细胞癌细胞系(EV-SCC-18、AMC-HN-8和HCC345)中KCNQ1OT1和miR-506-3p表达.以HCC345细胞为研究对象,转染KCNQ1OT1小干扰RNA或共转染KCNQ1OT1小干扰RNA与miR-506-3p抑制剂至HCC345细胞后,MTT法、流式细胞术、Transwell分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭.双荧光素酶报告基因实验验证KCNQ1OT1与miR-506-3p的调控关系.结果 喉鳞状细胞癌组织中KCNQ1OT1表达高于癌旁组织[(0.81±0.09)比(0.27±0.08)],miR-506-3p表达低于癌旁组织[(0.24±0.08)比(0.83±0.09)].喉鳞状细胞癌细胞系(EV-SCC-18、AMC-HN-8和HCC345)中KCNQ1OT1表达均高于WI-38细胞[(2.44±0.22)、(2.69±0.21)、(3.61±0.24)比(1.00±0.13)],miR-506-3p表达均低于WI-38细胞[(0.41±0.13)、(0.30±0.12)、(0.22±0.11)比(1.00±0.12)].与未敲减KCNQ1OT1的HCC345细胞比较,敲减KCNQ1OT1的HCC345细胞活力[(0.41±0.06)比(0.81±0.12)]、迁移数[(86.32±15.21)个比(162.31±20.23)个]和侵袭数[(65.23±12.05)个比(140.26±18.27)个]均降低,细胞凋亡率升高[(34.13±3.60)％比(3.79±2.37)％].KCNQ1OT1在HCC345细胞中负调控miR-506-3p表达.敲减miR-506-3p逆转敲减KCNQ1OT1对HCC345细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响.结论 KCNQ1OT1在喉鳞状细胞癌组织和细胞系中表达升高,其通过靶向miR-506-3p促进喉鳞状细胞癌细胞的恶性生物学行为.