壮骨止痛方对骨质疏松大鼠Wnt/β-catenin 信号通路、血清 Sclerostin 水平的影响

目的:探讨壮骨止痛方对骨质疏松雌鼠Wnt/β-catenin信号通路以及Sclerostin含量的影响。方法:将实验动物分为假手术组、模型组、壮骨止痛方高剂量治疗组、壮骨止痛方低剂量治疗组、雌二醇组5组,用酶联免疫法测定大鼠血清中β-catenin、Sclerostin的水平。结果:模型组大鼠血清β-catenin降低、Sclerostin水平上升,经壮骨止痛方药物干预后,大鼠血清β-catenin水平明显升高、Sclerostin水平明显下降。结论:壮骨止痛方药物可以提升Wnt/β-catenin信号通路的表达,降低血清Sclerostin的水平,达到预防治疗骨质疏松的作用。     

补肾活血颗粒对去势骨质疏松大鼠OPG/RANK/RANKL系统的影响

目的:观察补肾活血颗粒对去势骨质疏松大鼠骨组织骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、核因子κB受体活化因子(RANK)mRNA表达及其骨密度的影响,探讨补肾活血颗粒治疗骨质疏松的作用机制,为临床使用补肾活血中药防治骨质疏松症(OP)提供实验依据。方法:将雌性SD大鼠80只随机分为模型组、补肾活血颗粒治疗组、倍美力阳性对照组、正常对照组4组;除正常组外,其余各组大鼠行双侧卵巢去除术,正常组大鼠行假手术处理;各组大鼠给予相应处理12 W。采用双能X线骨密度仪测定大鼠右股骨上干骺端骨密度、HE染色观察骨组织形态改变、免疫组织化学染色方法及荧光定量PCR检测骨组织OPG、RANK、RANKL相关蛋白和基因的表达。结果:补肾活血颗粒能够显著增加去势骨质疏松大鼠的骨密度;提高其骨组织OPG、RANK mRNA及蛋白的表达水平,降低RANKL mRNA及蛋白的表达水平;作用与阳性对照组相当。结论:补肾活血颗粒可显著增强去势骨质疏松大鼠的骨密度,促进OPG、RANK mRNA和蛋白的表达及抑制RANKL mRNA和蛋白表达是其部分作用机制。     

骨质疏松治疗新进展：OPG／RANK／RANKL系统及靶向药denosumab

研究发现护骨素（osteoprotegerin,OPG）／核因子2κB受体活化因子配体（receptor activator of NF2κB ligand,RANKL）／核因子2kB受体活化因子（receptor activator of NF2κB,RANK）系统在阐明骨质疏松发生机制中有重要作用。糖皮质激素、PTH、雌激素、IL—I、IL－6、TNF等激素与细胞因子几乎都是通过OPG／RANK／RANKL系统参与骨代谢的调控作用。本文就OPG／RANKL/RANK系统与骨质疏松及靶向药denosumab做一综述。     

中医药治疗慢性肾脏疾病矿物质和骨代谢异常相关信号通路研究进展

中医药在治疗慢性肾脏病矿物质和骨代谢异常（CKD-MBD）具有一定优势,近年来出现许多中药复方及中药单体治疗CKD-MBD的研究。通过文献检索发现,中药治疗CKD-MBD相关通路的机制研究中,以中药自拟复方研究为主,作用途径涉及纤维细胞生长因23/Klotho（FGF23/Klotho）信号通路、Wnt/β-连环蛋白（Wnt/β-catenin）信号通路、核转录因子-κB受体活化因子/核转录因子-κB受体活化因子配体/骨保护素（RANK/RANKL/OPG）系统等多条信号通路,中药能通过调节此系列信号通路改善钙磷代谢、骨代谢紊乱、调控炎症反应、氧化应激、细胞凋亡和自噬,从而治疗CKD-MBD。该文将对这些信号通路和中药治疗CKD-MBD在作用机制领域取得的研究成果进行介绍,以期为中药治疗CKD-MBD的相关研究提供思路和参考。     

RANKL/RANK/OPG系统及其在激素性骨坏死中的作用

近几年的研究表明,核因子kB受体活化因子配基/核因子kB受体活化因子/骨保护蛋白(RANKL/RANK/OPG)系统对保持骨重建的动态平衡具有重要意义;糖皮质激素通过影响RANKL/RANK/OPG系统的正常功能导致骨量减少;对RANKL/RANKL/RANK/OPG系统的外源性干预可阻断和逆转骨质吸收.糖皮质激素时RANKL/RANK/OPG系统影响的研究为治疗激素所致骨坏死开辟了广阔的前景.本文拟对近年对RANKL/RANK/OPG系统及其在激素性骨坏死中的病机和治疗研究进展作一综述.     

补肾中药基于OPG/RANKL/RANK信号通路对原发性骨质疏松症作用机制的研究进展

原发性骨质疏松症(primary osteoporosis,POP)是老年男性及绝经后女性常见的退行性骨代谢疾病,其并发症所导致的致残率或致死率已成为全球公共难题。骨保护素(osteoprotegerin,OPG)/核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)/核因子-κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factor-κB,RANK)信号通路与骨代谢有着密切的联系。中药通过该信号通路治疗POP具有明显的优势,尤以补肾类中药最为突出。但是,关于补肾中药基于该信号通路治疗POP的调节机制仍然缺乏相对全面且系统的归纳总结。因此,基于OPG/RANKL/RANK信号通路在骨代谢的调节机制,从单味中药及中药复方的角度综述补肾中药防治POP的作用机制,为今后POP相关基础及临床研究提供理论依据。     

从RANK/RANKL/OPG信号通路探讨四仙逐痹汤减轻CIA模型大鼠骨破坏的作用机制

目的 观察四仙逐痹汤对类风湿关节炎模型大鼠骨破坏的作用，并初步探索其作用机制。方法 雄性SD大鼠40只随机分为对照组、模型组、四仙逐痹汤组、甲氨蝶呤组。除对照组外，其余3组均采用牛II型胶原与不完全弗氏佐剂构建CIA大鼠模型，间断性进行大鼠关节炎评分及左后足关节肿胀度测量，HE染色法观察大鼠踝关节组织形态学变化，免疫印迹法(WB)和实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测关节核因子κB受体活化因子(RANK)、核因子-κB配体受体活化剂(RANKL)、骨保护素(OPG)蛋白及mRNA表达水平。结果 与模型组相比，四仙逐痹汤组及甲氨蝶呤组大鼠关节炎评分以及关节肿胀度明显改善，炎性细胞数量明显减少，关节破坏减轻；与模型组相比，RANK、RANKL蛋白和mRNA表达下调(P<0.05),OPG蛋白和mRNA表达水平上调(P<0.05)。结论 四仙逐痹汤可减轻CIA模型大鼠骨破坏，其机制可能与RANK/RANKL/OPG信号通路相关。     

盘龙七片调节骨保护素/核因子κB受体活化因子配体信号通路对去卵巢骨质疏松大鼠的影响

目的:探讨盘龙七片对去卵巢骨质疏松大鼠骨保护素(OPG)/核因子κB受体活化因子配体(RANKL)信号通路的影响.方法:75只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性药物对照组(17β-雌二醇,1 mg/kg)、盘龙七片低剂量组(0.26 g/kg)、盘龙七片高剂量组(1.29 g/kg),每组15只,除假手术组外,...     

基于OPG/RANKL/RANK信号通路探讨三补一活方治疗兔激素性股骨头坏死的机制

目的：探究激素性股骨头坏死(steriod-inducd avascular necrosis of femoral heard, SANFH)的分子机制及三补一活方治疗SANFH的物质基础和生物效应靶点。方法：采用改进的马血清加甲泼尼龙琥珀酸钠的方法制备兔SANFH动物模型,造模5周后随机选取造模兔、正常兔各2只,进行股骨头组织病理学检查,证实造模成功后将动物分成正常组、模型组、三补一活方组3组,每组8只;于分组后第1天,三补一活方组给予三补一活方颗粒剂混悬药液10 mL灌胃,模型组及正常组给予等量生理盐水灌胃,连续灌胃8周。每组随机选取6只动物,采用空气栓塞法处死并取标本待检。采用免疫组化法检测骨保护素(orthopantomgraphy, OPG)/核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand, RANKL)/核因子κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factor-κB,RANK)信号通路相关蛋白OPG、RANKL、RANK的表达水平,采用实时聚合酶链反应定量检测...     

OPG/RANK/RANKL系统与骨质疏松症的相关研究进展

骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factor-kappa B,RANK)和核因子κB受体活化因子配体(receptoractivator of nuclear factor-kappa B ligand,RANKL)系统是近年来发现的一组调控破骨细胞分化激活的细     

壮骨止痛方对体外培养成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的观察壮骨止痛方对体外培养成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法取新生SD大鼠颅骨进行成骨细胞原代培养,传代后随机分为4组:假手术组、模型组、对照组、中药组。培养3代后进行鉴定,加入相应含药血清干预48 h。测定各组成骨细胞Wnt3a、β-catenin、LRP5、GSK3βmRNA及蛋白的表达情况。结果与假手术组比较,模型组β-catenin、LRP5蛋白及mRNA降低(P0.05),GSK3β蛋白及mRNA升高(P0.05)。与模型组比较,对照组和中药组β-catenin、LRP5蛋白及mRNA表达升高(P0.05),GSK3β蛋白表达降低(P0.05),中药组GSK3βmRNA表达降低(P0.05)。与对照组比较,中药组β-catenin蛋白及mRNA表达升高(P0.05),GSK3βmRNA表达降低(P0.05)。结论壮骨止痛方可通过上调Wnt3a、β-catenin、LRP5蛋白的表达,下调GSK3β的表达调控Wnt/β-catenin信号通路。     

补体成分3与骨质疏松症关系的研究进展

骨质疏松症是老年人常见病,目前相关研究证实骨质疏松症与免疫系统之间存在联系,骨保护素(osteoprotegrin,OPG)/核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)/核因子κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factor-κB,RANK)信号通路是连接二者的关键通路。补体系统是重要的免疫系统,补体成分3在补体系统中占据重要地位。研究表明,补体成分3与骨质疏松症之间存在密切关系。开展补体成分3及其他免疫系统成分与骨质疏松症关系的研究,有助于为骨质疏松症的诊治提供新的方向。本文简要概述了补体系统,分析了OPG/RANKL/RANK信号通路在骨质疏松症发生发展中的作用机制,就补体成分3及其他免疫系统成分与骨质疏松症的关系的研究进展进行了综述。     

黄芪甲苷通过调控FoxO3a/Wnt2/β-catenin通路抑制去卵巢大鼠骨质疏松的作用

目的:通过调控转录因子叉头框蛋白O3a(FoxO3a)/分泌型糖蛋白2(Wnt2)/β-连环蛋白(β-catenin)通路评价黄芪甲苷对去卵巢大鼠骨质疏松的作用,并探讨其作用机制。方法:雌性SD大鼠随机均分6组,分别为假手术组,模型组,阳性药组(尼尔雌醇,1.5 mg·kg-1),黄芪甲苷低、中、高剂量组(20,40,80 mg·kg-1),每组8只。通过摘除大鼠双侧卵巢复制绝经后大鼠骨质疏松模型。术后6周,灌胃给药,每日1次,连续8周。酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测大鼠骨钙素(bone gla protein,BGP),降钙素(calcitonin,CT),骨保护素(osteoprotegerin,OPG),核转录因子-κB(NF-κB)受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL),丙二醛(malondialdehyde,MDA),过氧化氢酶(catalase,CAT),谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量,双能X射线骨密度检测仪分别测定股骨和腰椎的骨密度值(bone mineral density,BMD),采用三点弯曲法测量胫骨生物力学指标,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠股骨组织中β-catenin,FoxO3a,Wnt2,p66~(shc),p-p66~(shc)蛋白的表达。结果:与模型组比较,黄芪甲苷组CT和OPG水平显著升高,BGP和RANKL水平则显著降低(P0.05,P0.01);黄芪甲苷显著升高腰椎、股骨的BMD和胫骨的最大载荷及最大应力(P0.05,P0.01);同时,黄芪甲苷显著降低MDA水平(P0.05),升高CAT,SOD和GSH-Px水平(P0.05,P0.01)。Western blot显示,黄芪甲苷显著降低p-p66~(shc)/p66~(shc)水平(P0.05);升高β-catenin和Wnt2蛋白表达水平(P0.05,P0.01),抑制FoxO3a蛋白表达水平(P0.01)。结论:黄芪甲苷能够有效缓解氧化应激介导的去卵巢大鼠的骨质疏松,该作用可能与其调节FoxO3a/Wnt2/β-catenin通路有关。     

补肾中药对骨质疏松症的治疗及其信号通路调节作用的研究进展

有关补肾中药对于骨质疏松症的治疗及其信号通路调节作用的研究较多,但缺乏系统性的归纳总结。该文综合整理和分析了近10年来淫羊藿、骨碎补、蛇床子、杜仲、补骨脂、续断等经典补肾中药对骨质疏松症的治疗作用及其信号通路的调节作用。根据现有研究结果得出如下结论：（1）补肾中药主要通过BMP-Smads、Wnt/β-catenin、MAPK、PI3K/AKT等信号通路,促进成骨细胞的骨形成作用;通过OPG/RANKL/RANK、雌激素、CTSK等信号通路抑制破骨细胞的骨吸收作用,达到治疗骨质疏松症的目的。淫羊藿、骨碎补、蛇床子、补骨脂可通过上调BMP-Smads、Wnt/β-catenin信号通路中BMP-2、Smad1/5/8、Wnt3a及β-catenin等关键蛋白及基因的表达,促进成骨细胞的骨形成;淫羊藿、骨碎补、蛇床子、杜仲、补骨脂、续断通过介导OPG/RANKL/RANK信号通路,上调OPG和OPG/RANKL的表达,抑制破骨细胞的骨吸收。（2）补肾中药能通过多种途径防治骨质疏松症：淫羊藿中的淫羊藿苷、骨碎补中的柚皮苷、蛇床子中的蛇床子素、补骨脂中的补骨脂素既可以通过调控BMP-Smads、Wnt/β-catenin等信号通路促进骨形成,又可以活化OPG/RANKL/RANK、CTSK等信号通路抑制骨吸收。（3）补肾中药对防治骨质疏松症的信号通路的相互联系（crosstalk）和整体动物实验的研究有待进一步深入,有待阐明其多靶点和多途径的作用机制与综合调控作用。     

温肾通络止痛汤对去卵巢模型大鼠骨密度与血清生化指标的影响

目的:通过观察温肾通络止痛汤对去卵巢模型大鼠骨代谢的影响,探究其治疗绝经后骨质疏松症的机制。方法:选用3个月龄SD雌性大鼠72只,60只行双侧卵巢切除(OVX)后,随机分为模型组(OVX组),戊酸雌二醇组,温肾通络止痛汤高剂量组、中剂量组、低剂量组,其余12只为假手术组。通过骨密度和骨代谢生化指标测定,评价温肾通络止痛汤治疗绝经后骨质疏松症的效果。结果:温肾通络止痛汤可以防止去卵巢SD雌性大鼠胫骨骨密度降低,减少血清白细胞介素-6(IL-6)、核因子κB受体活化因子配基(RANKL)表达,提高血清骨保护素(OPG)水平,从而降低血清RANKL/OPG比值,达到抗骨质疏松的作用。结论:温肾通络止痛汤治疗绝经后骨质疏松症的作用机制主要为下调血清IL-6、降低RANKL/OPG比值,从而抑制破骨细胞活性,提高骨密度。     

骨伤三号方对骨质疏松压缩性骨折模型鼠的影响及部分机制

目的:探讨骨伤三号方对骨质疏松压缩性骨折模型鼠的治疗效果,同时探讨其对OPG/RANKL/核因子-κB信号通路的影响。方法:将30只雌性Sprague Dawley(SD)鼠随机分为2组,空白组(10只)及造模组(20只),20只造模术首先接受双侧卵巢切除术,术后4周再采用剪断L1-5节段椎体前缘以模拟骨质疏松压缩性骨折模型,共有18只大鼠成模,将其随机分为模型组及干预组,每组9只。干预组大鼠找造模成功后接受骨伤三号方灌胃,1次/d。空白组及模型组接受等量生理盐水灌胃,1次/d。各组均干预4周。干预结束后比较各组大鼠生物力学变化,用HE染色法观察各组大鼠骨痂形态结构变化,酶联免疫吸附试验检测各组血清OPG、核因子-κB水平变化;Western Blotting检测骨折组织RANK水平变化。结果:与空白组比较,造模组大鼠弹性模量、最大载荷降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,干预组弹性模量、最大载荷显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色显示干预4周后空白组可见成熟骨小梁形成,骨质疏松性骨折组骨痂邻近原骨小梁细小松散,向骨性骨痂转化过程明显延迟;干预组形态介于正常骨折组和骨质疏松性骨折组之间。与空白组比较,模型组及干预组大鼠OPG明显下降,核因子-κB、RANK明显升高,经过中药干预后大鼠OPG水平上调,核因子-κB、RANK表达减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:骨伤三号方可能通过OPG/RANKL/核因子-κB信号通路加速骨质疏松压缩性骨折的愈合。     

薯蓣皂苷元对大鼠成骨细胞增殖、分化及OPG/RANKL mRNA表达的影响

目的:研究薯蓣皂苷元对体外培养的大鼠成骨细胞增殖、分化及护骨素/核因子κB受体活化因子配基(OPG/RANKL) mRNA的影响,探讨薯蓣皂苷元预防与治疗骨质疏松的作用机制。方法:在体外培养的大鼠成骨细胞培养基中分别加入不同浓度的薯蓣皂苷元作用不同时间,用MTT法检测药物对成骨细胞增殖的影响,检测成骨细胞内ALP活性分析药物对成骨细胞分化的影响,用半定量RT-PCR检测成骨细胞内OPG/RANKL mRNA的表达量,分析药物对破骨细胞重要信号传导通路OPG/RANKL/RANK系统的影响。结果:3.64×10-8-3.64×10-7mol/L的薯蓣皂苷元作用于大鼠成骨细胞3d,可促进成骨细胞的增殖(P<0.01),上调成骨细胞内OPG/RANKL mRNA的比值(P<0.01);作用7d,可提高成骨细胞内ALP活性(P<0.05或P<0.01)。结论:适量浓度薯蓣皂苷元可促进成骨细胞的增殖、分化及抑制破骨细胞的形成。     

姜黄素对佐剂性关节炎大鼠血清骨保护素和核因子κB受体活化因子配体蛋白表达及骨密度的影响

目的观察姜黄素对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠血清骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)表达以及骨密度的影响,探讨姜黄素防止类风湿关节炎(rhuematoid arthritis,RA)骨破坏的作用机制。方法取SD大鼠30只,随机分为模型组、姜黄素组及正常组,第28天腹主动脉取血,采用ELISA法来检测血清中RANKL、OPG蛋白的表达,取血后处死大鼠,剥离大鼠右侧胫骨,行骨密度检查。结果 (1)与正常组比较,造模组即模型组与姜黄素组大鼠血清RANKL均显著升高(P0.01),血清OPG显著降低(P0.01),RANKL/OPG比值显著升高(P0.01);(2)与模型组比较,治疗组即姜黄素组血清RANKL显著降低(P0.01),血清OPG均显著升高(P0.01),RANKL/OPG比值均显著降低(P0.01);(3)3组大鼠胫骨整体骨密度无显著性差异(P0.05),姜黄素组大鼠兴趣区骨密度值显著高于模型组(P0.01)。结论姜黄素对AA大鼠具有良好的治疗作用,能够通过调节血清RANKL及OPG的表达,来调节OPG/RANKL通路,从而提高AA大鼠骨密度,抑制其骨丢失。     

益肾活血止痛方对骨转移癌大鼠胫骨组织OPG、RANKL、RANK表达的影响

目的探讨益肾活血止痛方治疗骨转移癌的可能作用机制。方法 40只SD大鼠随机分为中药组、唑来膦酸组、模型组、假手术组,每组10只。除假手术组外其余各组采用大鼠乳腺癌Walker 256细胞悬液3μl缓慢注射于大鼠胫骨骨髓腔内建立骨转移癌模型。于造模后第5天开始给药,唑来膦酸组给予唑来膦酸溶液于第5、7、9、12、14、16、19天腹腔注射,每次30μg/kg;中药组给予益肾活血止痛方0.5 ml(浓度1.92 g/ml)灌胃,假手术组及模型组给予等量生理盐水0.5 ml灌胃,每日1次,连续3周。观察各组大鼠肿瘤体积,X线摄片对骨质破坏程度进行评分,HE染色观察胫骨组织病理形态;检测胫骨组织中骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子(RANK)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)蛋白及mRNA表达。结果与模型组比较,中药组和唑来膦酸组大鼠胫骨肿瘤体积及骨质破坏减少,胫骨组织OPG蛋白及mRNA表达升高,RANKL、RANK蛋白及mRNA表达降低(P0.05)。中药组和唑来膦酸组各指标组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论益肾活血止痛方可抑制大鼠骨转移癌的生长,其机制可能与其激活胫骨组织OPG表达,抑制RANKL和RANK的活化有关。     

肾阳虚大鼠血清对OB-OC共育体系中β-catenin/OPG/RANKL表达的影响及淫羊藿苷的调控作用

目的:观察肾阳虚大鼠血清对共育体系中骨保护素(OPG),胞质蛋白(β-catenin)及核转录因子-κB受体活化因子配体(RANKL)蛋白表达的影响及淫羊藿苷对其的调控,进一步探究其诱导骨质疏松发生的可能机制。方法:取16只雄性SD大鼠,随机分为空白组和模型组,每组8只,模型组以10 mL·kg-1腺嘌呤灌胃建立肾阳虚模型,造模成功后收集血清。体外分离培养成骨细胞(OB)和破骨细胞(OC),采用茜素红、碱性磷酸酶(ALP)及姬姆萨染色观察并鉴定OB,OC用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定,transwell小室建立OB-OC共育体系,设置淫羊藿苷组(100μmol·L-1),空白组,淫羊藿苷(100μmol·L-1)+血清组(10%肾阳虚血清),血清组(10%肾阳虚血清)及Dickkopf1(DKK-1)药物组(100μg·L-1),干预共育体系2 d后,对OC进行计数,微板酶标法检测培养液中TRAP及ALP的含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组OPG,β-catenin及RANKL蛋白的表达。结果:与空白组比较,血清组ALP活性,β-catenin及OPG蛋白表达均明显降低(P0. 05),而OC数量,TRAP活性及RANKL蛋白的表达明显升高(P0. 05);与血清组比较,淫羊藿苷组ALP活性显著降低(P0. 01),与淫羊藿苷组比较,淫羊藿苷+血清组ALP活性及OPG蛋白表达明显降低(P0. 05),TRAP活性及RANKL表达明显升高(P0. 05)。结论:肾阳虚大鼠血清能诱导骨质疏松的发病,其作用机制可能是通过降低ALP活性,下调OPG及β-catenin蛋白的表达,同时提高TRAP活性,上调RANKL蛋白的表达来实现的。