RhD^u、Del型的D基因外显子多态性分析

ＲｈＤ抗原是除ＡＢＯ血型系统之外最具免疫原性的红细胞抗原分子 ,在Ｒｈ血型系统中占重要地位[1] 。Ｄ抗原根据其抗原量的变化表现其抗原性的强弱 ,表型Ｄ— /Ｄ—抗原性最强 ,其次为弱Ｄ (Ｄｕ)、最弱为Ｄｅｌ型[2 ] 。既往对Ｄｕ 及Ｄｅｌ基因结构仅限于推测 ,笔者采用基因检测技术分析构成Ｄｕ、Ｄｅｌ型基因的结构 ,现报告如下。1　材料和方法1 1　Ｄｕ 标本　 5例 ,用血清学技术 2次检定 ,方法按《中国输血技术操作规程》操作[3] 。1 2　Ｄｅｌ标本　 8例 ,经血清学技术检定为Ｒｈ阴性(方法同上 )的标本再用吸收放散试验检定。采用三…     

汉族、藏族和维吾尔族人群RHD基因启动子区检测

目的探讨汉族、藏族和维吾尔族RHD基因启动子区多态性与RhD阴性机制相关性。方法对476例汉族(200例RhD阳性、228例RhD阴性、6例弱D和42例Del型)、57例藏族(50例RhD阳性和7例RhD阴性)和120例维吾尔族(50例RhD阳性和70例RhD阴性)标本,使用PCR-SSP方法检测RHD基因的Upstream盒、Down-stream盒和hybrid盒,使用PCR-SSP法和多重PCR法检测RHD基因启动子区-1~-1 246 bp内的4个RHD基因多态性位点。结果 348例RhD阳性标本(含6例弱D和42例Del型)、76例表型为RhD阴性但RHD基因型为RHD+/RHD-杂合子和RHD+/RHD+纯合子标本中均检测到4个RHD基因特异性多态性位点;而所有229例表型为RhD阴性基因型为RHD-/RHD-纯合子标本均未检测到RHD基因启动子区多态性位点。结论汉族、藏族和维吾尔族RHD基因启动子区多态性可能与RhD阴性机制无关;本研究所建立的RHD基因启动区4个多态性位点PCR-SSP检测方法可用于RHD基因启动区多态性位点研究。     

1例Del表型献血者RHD基因分析

目的:分析云南1例Del表型献血者的RHD基因型。方法:鉴定标本Rh血清学表型,对RHD基因进行PCR-SSP分型检测及10个外显子测序分析,扩增第9外显子进行克隆测序并分析序列,检测RHD基因合子型。结果:本研究病例标本Rh表型为CcD^elee;RHD基因第9外显子包含第8内含子和第9内含子缺失共1 003 bp,缺失发生在两个7 bp的短串联重复序列之间;其余外显子序列无变异;Rh杂交盒检测表明存在1条RHD阴性等位基因。结论:本研究病例标本为RHD基因第9外显子缺失导致的Del型。     

Rh阴性个体表型及RHD基因多态性研究

目的 收集患者做RHD基因分型检测,(C、c、E和e)表型检测,分析医院64例RhD阴性患者不同RHD基因型和表型的分布特征.方法 用荧光定量聚合酶链反应(PCR)法对血清学检测为RhD阴性患者RHD基因进行基因分型;用IgM抗-e、抗-c、抗-C与抗-E标准血清鉴定Rh表型.结果 检测发现RHD缺失型42例,以cce...     

长沙地区RHD阴性献血者RHD基因多态性的研究

ＲＨ血型是继ＡＢＯ血型发现后临床意义最大的一个血型。主要的ＲＨ抗原有ＲＨＤ和ＲＨＣＥ抗原 ,与溶血性输血反应、新生儿溶血病和自身免疫性溶血性贫血有关。其中ＲＨＤ抗原因具有高度免疫原性而最具临床意义[1] 。ＲＨ血型系统抗原由ＲＨＤ基因和ＲＨＣＥ基因编码 ,起初基于白种人的研究认为 ,ＲＨＤ阳性者携带ＲＨＤ和ＲＨＣＥ基因 ,而ＲＨＤ阴性者只有ＲＨＣＥ基因而无ＲＨＤ基因。但后来的研究发现在非洲黑人、澳大利亚人、日本人中一些ＲＨＤ阴性者存在部分或完整的ＲＨＤ基因 ,即ＲＨＤ基因呈现多态性[2 ,3 ] 。本文对长沙地区 73…     

RHD基因的分子遗传学及胎儿RHD基因型的测定

1 RHD基因的分子遗传学 1986年,Tippett[1]提出Rh血型基因双结构学说,即在人类第1号染色体短臂1p34.3-1p36.1上[2,3],有1对紧密连锁高度同源方向相反的基因RHD与RHCE,其3+末端相对,同源性高达96%[4].RHD与RHCE基因分别长57 932bp和58 575 bp[3],RHD基因编码D抗原,RHCE基因编码C、c、E、e等5种抗原,这两种基因被小膜蛋白(SMP1)基因隔开.RHD基因两旁各有1个Rh盒子(Rh box),高度同源.RHD与RHCE基因各有10个外显子与10个内含子[5].     

中国人RHD基因合子型检测分析

目的判定中国人群中RHD基因是否是纯合子。方法从上海地区正常献血者中选取RhD阳性、RhD阴性、Del和其它D变异型样本共50份,采用PCR-RFLP方法扩增Rhesus盒子判断RHD合子型,同时相对实时定量real-time quantitative(RQ)PCR扩增检测RHD基因第5、7外显子的特征区域。结果9份样本在2种方法的检测结果中出现矛盾。进一步对RHD基因的特异性序列进行PCR-SSP及克隆测序分析,证实这9份样本中,4份是DⅥⅢ变异型,2份是Del与RHD711del C等位基因杂合子,另外3份是携带有中国RhD阴性人群中较常见的RHD-CE(2—9)-D RH阴性等位基因。结论中国人Rh血型系统遗传背景较白种人复杂,RHD基因存在较多的变异情况。仅使用单一方法判断RHD合子型及RhD血清学表型容易产生误判,而从Rhesus盒子和RHD基因不同外显子2个角度进行综合判断,可以减少误判。     

浙江汉族人群RHD基因合子型检测

目的了解浙江汉族人群RHD基因合子型多态性情况。方法采用PCR-SSP方法检测438例RhD阳性、弱D表现型、RhD阴性表型个体的RHD基因上、下游盒和杂交盒,根据个体盒子的检测结果推测其合子型。结果198例RhD阳性样本中12例(6.06%)为RHD /RHD-型,其余186例(93.94%)为RHD /RHD 型;32例弱D表现型样本中29例(90.63%)为RHD /RHD-型,3例(9.37%)为RHD /RHD 型;208例RhD阴性样本中53例(25.48%)为RHD /RHD-型,145例(69.71%)为RHD-/RHD-型,10例(4.81%)为RHD /RHD 型。结论浙江汉族人群中RhD阳性、弱D表现型、RhD阴性表型个体RHD基因合子型分布频率不同,RhD阴性人群中存在缺失RHD基因或有完整RHD基因的情况。     

福建省RhD阴性个体RHD基因多态性

为了探讨RhD阴性福建个体的RHD基因结构，设计14对序列特异性引物，应用PCR—SSP技术检测104名福建省RhD阴性献血者的RH基因型，并对部分样本进行吸收放散试验，同时对2例携带RHD基因RhD阴性样本进行DNA序列测定。结果显示，61．54％阴性福建个体完全缺失RHD基因（RHD^-／RHD^-），25．97％RhD携带RHD1227A等位基因（其中62．96％为RHD^＋／RHD^-杂合子，37．04％为RHD^＋／RHD^＋纯合子），8．65％携带RHD-CE（2—9）-D等位基因，1．92％携带RHD710delC等位基因；多数RHD基因缺失存在于dce单倍体中，发现6例RHD基因缺失存在于dCe单倍体（RH基因型为dce／dCe）中，2例存在于dcE单倍体（RH基因型为dce／dcE）中；同时检测8个RHD基因外显予以及RHD1227A等位基因，以预测RhD表型的准确性明显高于单独检测某个RHD基因外显子的准确性（Χ^2=24．43，P〈0.005）。结论：RhD阴性福建个体RHD基因具有多态性；在中国用RHD基因分型完全替代血清学检测RhD表型的条件尚未成熟。     

FCER1A 启动子区基因多态性与儿童哮喘

目的 探讨FCER1A 启动子区基因多态性与儿童哮喘和血清总IgE 水平的关系.方法 基因组DNA 提取自286 例哮喘儿童和212 例健康体检并排除过敏性疾病史儿童血液标本,采用高温连接酶(LDR)反应检测FCER1A 启动子区位点rs2427827 和rs2251746 基因变异,分析两组样本基因型与等位基因分布状况,与GenBank 公布的FCER1A 基因序列(NT＿ 004487.19 GI:224514980 )比较.同时,检测病例组样本血清总IgE 水平,观察其在不同基因型患者中的分布差异.结果 FC-ER1A 启动子区位点rs2427827 和rs2251746 呈多态性,与儿童哮喘无显著关联(P ＝0.524,P ＝0.813 ),儿童哮喘组rs2251746 基因突变与血清总IgE 水平关系密切(P ＝0.041 ).结论 rs2251746 TC 基因型与血清总IgE 水平增高显著相关,可能增加患哮喘发生的风险.     

载脂蛋白M启动子区基因多态性的临床研究进展

载脂蛋白M(apo M)主要存在于高密度脂蛋白中,在脂质和脂蛋白代谢、抗动脉粥样硬化等过程中均发挥着重要作用。研究表明,apo M基因多态性与多种疾病,如冠心病、缺血性脑卒中、糖尿病、类风湿关节炎、慢性阻塞性肺炎、败血症等密切相关。本文就apo M基因启动子区域单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)在疾病中的研究进展进行综述。     

散发性乳癌WIF-1基因启动子区多态性研究

目的探讨WIF-1基因启动子区rs58172684 A/G与rs2336433 C/T位点单核苷酸多态性与散发性乳癌发生的关系。方法采用等位基因特异性扩增（ASA）法对200例乳癌病人和200例正常对照者的WIF-1基因启动子区rs58172684 A/G与rs2336433 C/T位点单核苷酸多态性进行分析,PCR产物进行测序。结果乳癌病人WIF-1基因启动子区rs58172684 A/G与rs2336433 C/T位点基因型频率与正常对照者比较差异具有显著性（χ2=117.475、38.798,P〈0.001）;乳癌病人rs58172684 G等位基因频率显著高于正常对照者（χ2=11.620,P〈0.001）。rs58172684 A/G位点AA、AG、GG等3种基因型和rs2336433 C/T位点CC、CT、TT等3种基因型与年龄、病理分级、组织分型及淋巴结转移无关（P〉0.05）。结论乳癌病人WIF-1基因启动子区rs58172684 A/G与rs2336433 C/T单核苷酸多态性可能与散发性乳癌的发生相关,G等位基因可能为其发生的遗传危险因素。     

SMP1基因外显子多态性研究

目的建立SMP1基因外显子检测方法以探讨SMP1基因多态性。方法根据文献报道并参考Gene-Bank中的基因序列,设计聚合酶链式反应(PCR)扩增SMP1基因7个外显子的8对特异性引物,应用PCR分段扩增SMP1基因7个外显子,PCR产物纯化后直接测序,应用DNAMAN5.2.9序列分析软件分析序列。结果 SMP1基因第1~7外显子长度分别为137、106、113、68、93、60和1 703 bp。SMP1基因第1~6外显子未发现多态性位点,但该基因第7外显子存在1329T>C和1704G>A多态性。结论本研究成功建立SMP1基因外显子检测方法并检测到了SMP1基因第7外显子存在多态性位点。     

部分Rh阴性汉族人RHD基因的多态性

随着分子生物学技术在血型研究方面的应用 ,不断发现ＲｈＤ的多态性有着复杂的遗传背景 ,也发现ＲｈＤ抗原阴性的群体中 ,部分人却携带ＲＨＤ基因。我们采用ＰＣＲ ＳＳＰ方法对血清学已经确定的 2 3名ＲｈＤ抗原阴性、2名ＲｈＤＵ 型和 2名ＲｈＤ抗原阳性的汉族无亲缘关系的供血者进行了ＲＨＤ基因检测 ,结果如下。1　材料与方法1.1　对象　采用盐水抗Ｄ血清试剂普查供血者ＲｈＤ抗原得到的 2 7份初检为ＲｈＤ抗原阴性的供血者血标本。1.2　试剂来源　ＤＮＡ快速抽提试剂盒、ＲＨＤ基因ＰＣＲ试剂盒、ＲｈＤ抗原阳性和阴性的ＤＮＡ标准品由…     

肿瘤坏死因子α启动子区基因多态性与2型糖尿病的相关性

目的:分析肿瘤坏死因子α启动子区第308位G/A基因多态性与中国北方2型糖尿病患者胰岛素抵抗及血脂异常的相关性。方法:选择2003-08/2004-07伊春市第一医院内分泌科收治的2型糖尿病患者60例为对象,为2型糖尿病组,同期选取中国北方健康汉族人54例,为对照组。两组受试者均知情同意。应用放射免疫技术检测两组空腹血浆胰岛素和肿瘤坏死因子α水平。采用全自动生化分析仪检测两组空腹血糖、血浆总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇水平。采用稳态模型分析法评价胰岛素抵抗指数(胰岛素抵抗指数=空腹血糖×空腹血浆胰岛素/22.5)。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法检测两组肿瘤坏死因子α基因多态性。结果:纳入2型糖尿病患者60例和正常对照者54例,均进入结果分析。①2型糖尿病组血浆肿瘤坏死因子α、三酰甘油水平和胰岛素抵抗指数均高于对照组[肿瘤坏死因子α分别为(1.43±0.57),(1.21±0.42)μg/L;三酰甘油分别为(2.72±1.28),(1.62±0.79)mmol/L;胰岛素抵抗指数分别为4.60±0.98,3.28±0.67,P<0.05],高密度脂蛋白胆固醇水平低于对照组[(0.82±0.23),(1.01±0.19)mmol/L,P<0.05]。②2型糖尿病组和对照组携带GA AA基因型的频率分别是0.316和0.093;A等位基因的频率分别是0.175和0.046。③2型糖尿病组携带GA AA基因型胰岛素抵抗指数、肿瘤坏死因子α、三酰甘油水平高于携带GG基因型[胰岛素抵抗指数分别为5.24±1.25,4.07±0.89;肿瘤坏死因子α分别为(1.56±0.24),(1.39±0.37)μg/L;三酰甘油分别为(3.07±0.88),(2.18±1.08)mmol/L,P<0.05],而血浆总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇水平两者比较差异无显著性。结论:肿瘤坏死因子α第308G/A基因突变与中国北方2型糖尿病患者的胰岛素抵抗及血脂异常有关。     

肿瘤坏死因子α启动子区基因多态性与2型糖尿病的相关性

目的：分析肿瘤坏死因子α启动子区第308位G／A基因多态性与中国北方2型糖尿病患者胰岛素抵抗及血脂异常的相关性。 方法：选择2003—08／2004—07伊春市第一医院内分泌科收治的2型糖尿病患者60例为对象，为2型糖尿病组，同期选取中国北方健康汉族人54例，为对照组。两组受试者均知情同意。应用放射免疫技术检测两组空腹血浆胰岛素和肿瘤坏死因子α水平。采用全自动生化分析仪检测两组空腹血糖、血浆总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇水平。采用稳态模型分析法评价胰岛素抵抗指数（胰岛素抵抗指数=空腹血糖&;#215;空腹血浆胰岛素／22．5）。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法检测两组肿瘤坏死因子α基因多态性。 结果：纳入2型糖尿病患者60例和正常对照者54例，均进入结果分析。①2型糖尿病组血浆肿瘤坏死因子α、三酰甘油水平和胰岛素抵抗指数均高于对照组【肿瘤坏死因子α分别为（1．43&;#177;0．57），（1．21&;#177;0．42）μg／L；三酰甘油分别为（2．72&;#177;1．28），（1．62&;#177;0．79）mmol／L；胰岛素抵抗指数分别为4．60&;#177;0．98，3．28&;#177;0．67，P〈0．05]，高密度脂蛋白胆固醇水平低于对照组[（0．82&;#177;0．23），（1．01&;#177;0．19）mmol／L，P〈0．05]。②2型糖尿病组和对照组携带GA＋AA基因型的频率分别是0．316和0．093；A等位基因的频率分别是0．175和0．046。③2型糖尿病组携带GA＋AA基因型胰岛素抵抗指数、肿瘤坏死因子α、三酰甘油水平高于携带GG基因型【胰岛素抵抗指数分别为5．24&;#177;1．25，4．07&;#177;0．89；肿瘤坏死因子α分别为（1．56&;#177;0．24），（1．39&;#177;0．37）μg/L；三酰甘油分别为（3．07&;#177;0．88），（2．18&;#177;1．08）mmol／L，P〈0．051，而血浆总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇水平两者比较差异无显著性。 结论：肿瘤坏死因子α第308G／A基因突变与中国北方2型糖尿病患者的胰岛素抵抗及血脂异常有关。     

118例汉族人群IAT检测RhD阴性个体RHD基因多态性分析

目的观察汉族人群IAT检测RhD阴性个体RHD基因多态性。方法采用常规血清学技术检测RhD、C、c、E、e抗原表型;采用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)方法同时检测RHD基因和RHCE基因。结果抗球蛋白试验(IAT)证实的118例RhD阴性个体中,PCR-SSP方法检测RHD基因结果有28例Del表型个体(23.7%)。在余下的90份真正RhD阴性标本中,有69份标本(76.7%)RHD基因完全缺失;21份标本带有不表达RHD基因。Del表型个体均带有C抗原,带有不表达RHD基因的真正RhD阴性个体大多表现为RhC阳性。结论汉族人群IAT证实的RhD阴性个体呈现RHD基因结构多态性,不表达RHD基因主要以RHD-CE(2-9)-D2为主。     

白细胞介素6基因启动子区两个突变位点多态性检测方法的建立

目的建立一种快速检测IL-6基因启动子区-597G／A、-572G／C多态性的双重实时荧光PCR方法。方法采用1对引物，2对荧光标记探针，结合荧光共振能量转移原理和熔点曲线分析技术，检测IL-6基因启动子区-572G／C，-597G／A2个位点多态性。结果用建立的双重实时荧光PCR方法对123名健康查体者进行检测，发现中国汉族人IL-6基因启动子区-572位点有3种基因型，分别为GG，GC，CC型；-597位点仅发现4名为GA型，其余均为GG型，尚未发现从型。结论双重实时荧光PCR法简便快速，与其他方法比较具有准确、经济的特点，适合临床基因快速分型。