软海绵酸胶体金免疫检测法的建立与应用

目的 建立并应用软海绵酸(OA)胶体金免疫层析检测法.方法 通过纯化抗OA单抗、制备胶体金、标记单抗、制备胶体金试剂条、样品模拟提取与加标回收检测、贝类染毒提取及检测,建立和优化金标免疫层析法.结果 选择30 nm胶体金颗粒用于单抗标记,金标单抗浓度为200 μg/mL,金标单抗包被量为2.5 μL/cm,二抗包被浓度为1.0 mg/mL,反应时间为3～5 min,对加标贝肉和染毒贝类的检测灵敏度为25 ng/mL.结论 建立了可用于OA检测的胶体金免疫层析检测法,满足规定的贝类OA含量安全阈值,为腹泻性贝毒检测与食品安全检验提供了新的技术方法.     

献血者ABO血型正反定型检测结果分析

目的 分析无偿献血者ABO血型初检结果,以提高ABO血型鉴定的准确率.方法 采用血型初检结果与血型正反定型及相关抗体检测,确定无偿献血的ABO血型.结果 13688例无偿献血ABO血型初检正确13665例,准确率99.83％;血型错误23例,错误率0.17％.正反定型不一致14例,不符合率0.10％.结论 应选择高效价的抗A、抗B血清试剂做ABO血型检测,控制好检测时的环境温度和湿度,以及红细胞与血清试剂反应时间,并定期做好试剂使用前的质控工作.对于正反定型不符合者,应作进一步的血清学鉴定.同时,加强检验工作人员的技能培训,提高ABO血型鉴定的准确率.     

盐水法接合柱凝集法在ABO疑难血型检测中的应用

目的解决柱凝集法检测ABO血型抗原减弱或抗体减低所产生的正反定型不一致。方法将疑难血型患者2%红细胞50μl与50μl抗-A、抗-B标准血清反应,或者将患者的血清(血浆)50μl与ABO试剂细胞A1、B各50μl反应,然后把反应液接合到Liss/Coombs(Anti-IgG+C3d)卡上进行测定;同时利用此法进行抗-A、抗-B标准血清最大稀释度的检测。结果盐水法接合柱凝集法检测17例抗原弱化或抗体减低的疑难血型,全部出现明显阳性反应并符合血型鉴定结果,以此法检测抗-A、抗-B标准血清最大稀释度达到1∶4096。结论盐水法接合柱凝集法测定抗原弱化或抗体减低的ABO血型是一种高效、灵敏、简单易行的方法。     

基于磁珠的ABO血型蛋白质芯片的构建及初步应用分析

目的：构建一种以磁珠为标记物的,用于血型检测的可视化蛋白质芯片。方法用人免疫球蛋白G （IgG）及磁珠标记的抗人IgG进行琼脂糖浓度、点样浓度、温度和固定时间等实验条件的摸索。根据优化的条件,经过铺片、点样、固定、封闭等程序构建ABO血型检测蛋白质微阵列,加入血液样品进行反应,最后用磁珠标记的抗体进行检测。结果通过条件的优化发现,在1．0％的琼脂糖基片表面,以100μg/m L的蛋白质稀释液点样,之后在24℃固定8 h ,能够得到更优的信号强度。检测不同稀释度的抗原抗体,正定型效价可达到1∶8192,反定型可达到1∶4096。检测14例临床样品,结果样点清晰、肉眼可见,且结果判定与试管法一致性达100％。结论成功构建了基于磁珠的血型检测可视化蛋白质微阵列。     

国产METIS 150全自动血型仪参数优化与性能验证

目的对国产METIS 150全自动血型仪进行试验参数优化和性能验证。方法用已知血型标本,分别对标本红细胞稀释法、红细胞悬液加量、试剂红细胞加量、抗-A/抗-B/抗-D稀释倍数及加量、标本血浆加量等可选参数进行预选,以结果正确率最高为依据确定优化参数;优化血型仪参数后,用已知标本对ABO定型和Rh(D)筛查结果的准确性、重复性和方法敏感性进行验证。结果离心条件、反应温度、振荡方式、吸液、注液、洗针等六项厂家推荐参数适当;标本红细胞12μl+300μl盐水制备悬液,25μl/孔红细胞悬液+25μl抗-A、抗-B原液,正定型结果正确率可达100%;25μl/孔红细胞悬液和1∶10稀释抗-D 25μl/孔,Rh(D)筛查结果正确率可达100%;血浆70μl/孔+试剂红细胞25μl/孔,反定型结果正确率可达100%。参数优化后,ABO定型和Rh(D)筛查结果准确率达100%,4份A2B亚型定型正确,4份疑难血型提示结果疑问,1年时间检测全部献血者标本30 694份血型结果无错误。结论参数优化后,METIS 150血型仪检测血型的结果准确可靠,可用于临床供血标本的血型检测。     

影响聚凝胺配血方法因素的探讨

聚凝胺（Polyrene）试验主要用来检测病人血清（浆）中,具有临床意义的异体抗体,以快速、简便、灵敏的特点日益受到我国检验工作者的欢迎,并进入常规操作。该方法不足之处是步骤较多,操作技术要求较高。影响聚凝胺配血方法的常见因素,主要是加样量是否准确。由于血库长期采用盐水法配血,对配血中加样量的准确性重视不够,血浆及红细胞悬液的加样量常偏多,这很容易导致试验中出现假阴性。所以我们着重探讨血浆及红细胞悬液剂量的增加对试验结果的影响。１材料和方法１．１试剂ABO血型分型试剂由南京军区军事医学研究所研制,抗A血清…     

街头采血纸板法ABO血型检测条件优化探讨

目的 探讨纸板法ABO血型检测关键点量化值,为街头采血纸板法ABO血型正定型检测操作方法标准化提供借鉴.方法 对纸板法ABO血型检测过程中试剂血清用量、全血红细胞量以及反应时间等条件的改变对检测凝集程度和结果造成的影响进行比较,初步确定街头采血纸板法ABO血型检测关键点量化值.按照有关量值采用纸板法检测献血者ABO正定...     

联合检测甲胎蛋白和癌胚抗原的胶体金免疫层析试剂的研制及性能评价

目的 建立一种新型的联合检测甲胎蛋白(AFP)和癌胚抗原(CEA)的胶体金免疫层析法(GICA).方法 G4和C2为一对抗AFP单克隆抗体(McAb),A1和C9为另一对抗CEA McAb,G4和A1分别以直线形式平行包被于固相硝酸纤维素(NC)膜上,C2和C9分别与胶体金结合后固定于结合物垫,制备成GICA试剂条.膜上另包被2 mg/mL兔抗鼠IgG抗体,用于检测有效性.结果 利用双抗体夹心原理,建立了可同时检测血清中AFP和CEA的GICA.本法经AFP和CEA标准液测定,试剂的敏感性为AFP (30 μg/L)、CEA (10 μg/L),与血红蛋白、人白蛋白、人球蛋白等无交叉反应,稳定性试验表明试剂可以在室温保存6个月以上.86份经化学发光免疫分析仪定量测定AFP、CEA浓度的临床血清标本用于本法的对比测定,符合性良好.结论 联合检测AFP和CEA的GICA试剂具有结果 可靠、方法 简便、快速等优点,与化学发光法测定结果 符合性良好.     

用ELISA(方法)测定血清淀粉样蛋白P

血清淀粉样蛋白P(SAP)呈糖基化(蛋白),在血清中以两个五聚圆盆状的复合体存在。SAP 由肝脏合成,半衰期为7.8～8.5小时,说明SAP 产生快速而持续以维持血清中稳定浓度在40～50mg/L。为更好了解SAP 的功能,需要快速的测定方法。本文介绍ELISA 测定人SAP 浓度。方法如下:用经蛋白A 层析柱和SAP(琼脂糖CL-4B 柱纯化的抗SAP 包被。同一抗体用辣根过氧化物酶标记作为二抗。反应板每孔中加100μl抗SAP 抗体(20mg/L)溶液,放25℃16～18小时,递经洗涤加100μl 受检标本温育洗涤后,加100μl 标记抗体,按常规洗涤,于492nm 波长读取吸光度。本法从混合人血清分离出的SAP 的纯度>     

布鲁氏菌血清 IgM,IgG 抗体胶体金免疫层析检测方法的建立及初步临床应用

目的　应用胶体金免疫层析技术建立一种快速检测布鲁氏菌 IgM,IgG 抗体的方法,并进行初步的性能验证。方法　采用枸椽酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗重组布鲁氏菌抗原,将鼠抗人 IgG 抗体、鼠抗人 IgM 抗体和兔抗布鲁氏菌抗体喷在硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,对 pH 值和抗体浓度等条件优化;评估试剂盒灵敏度、特异度、交叉反应、准确度、精密度和干扰实验;用该方法对临床的 400 份血清进行检测,试管凝集试验验证其准确性。结果　该试纸条最佳胶体金标记的 pH 值为 7.5,标记重组抗原质量浓度为 30?g/ml。方法的灵敏度和稳定性较好且与其他病原菌无交叉反应。血清总胆红素、血脂和血红蛋白浓度的增高会使试纸条显色结果减弱。对400份临床样本进行检测,其结果与试管凝集试验的符合率为 93.75%。结论　该试验建立的布鲁氏菌 IgM/IgG 抗体的胶体金免疫层析检测方法具有较好的特异度和稳定性,整个检测过程可在 15min 内完成,能够快速检测样品血清,适用于现场快速检测。     

抗-M引起ABO血型正反定型不符一例

献血者胡某,女,22岁,无输血史和妊娠史,2005年8月在我站献血车上体检和化验初筛合格后献血200 m l。实验室检查发现ABO血型正反定型不符,进一步鉴定发现存在盐水反应性抗-M抗体。一、材料和方法1.试剂抗-A、抗-B血型试剂、ABO反定型细胞、谱细胞(上海血液生物医药公司);抗-Lea、抗-AB血型试剂(美国Immucor公司);抗-M、抗-C血型试剂(TITUS公司);抗-D血型试剂(Lorne公司)。2.方法血型鉴定、抗体鉴定、抗体效价测定的操作均按《中国输血技术操作规程》进行。二、结果1.红细胞血型鉴定献血员血型正定型为A型Rh阳性,NN,反定型与Ac、B…     

新生儿血型检测的结果分析

目的：了解新生儿 ABO 正反定型符合率,研究提高新生儿血型测定准确性的方法。方法用传统试管法检测当地新生儿 ABO 血型,以微柱凝胶卡和改良试管法、增强剂法及常规试管法、纸片法、微板法、聚凝胺法等7种方法检测抗-A、抗-B、抗-D 抗体的效价,并进行新生儿血型检测比较。结果新生儿 ABO 正反定型符合率为83％（913/1100）;检测15份抗-A、抗-B、抗-D 抗体的效价,敏感性最高是改良试管法和增强剂法,最差的是纸片法,新生儿标本检测结果类似。结论ABO 正反定型应增加血浆（血清）量并延长孵育时间或选用增强剂,从而提高新生儿血型检测的准确性。     

尿微量白蛋白半定量金免疫层析试条的研制和临床评价

目的建立一种半定量检测人尿液中的微量白蛋白(mA lb)的金免疫层析方法。方法应用一株抗人白蛋白单克隆抗体与胶体金结合,组成胶体金结合物试剂;白蛋白包被在硝酸纤维素膜上,而制成竞争法的试剂条,同时用一定浓度的羊抗鼠IgG抗体作为参比线。结果该法经人白蛋白标准液测定,结果判定可分为<20、20~50、50~200和>200 mg/L 4个半定量区段;137例经散射免疫浊度法定量测定白蛋白浓度的临床尿标本用于该法的对比测定,结果符合性良好。结论该法具有半定量的特点,结果可靠,适用于糖尿病、高血压等并发肾病的早期诊断。方法简便、快速,特别适合中、小医院和门诊部使用。     

烟曲霉硫氧还蛋白还原酶双抗体夹心ELISA法的建立及初步应用

目的建立检测烟曲霉硫氧还蛋白还原酶Gli T(thioredoxin reductase Gli T,TR)的双抗体夹心ELISA法,并用于几种真菌培养上清液中TR蛋白的检测。方法纯化鼠抗人TR单克隆抗体并进行辣根过氧化物酶(HRP)标记。以纯化羊抗TR多克隆抗体为包被抗体,HRP标记鼠抗人TR单克隆抗体为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA法。用方阵滴定法确定包被抗体和检测抗体的最适浓度;对方法的精密度、特异性和最低检测限进行评价;比较分析其检测3种常见曲霉(烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉)培养上清中天然TR蛋白的能力,并与3种常见假丝酵母菌(白假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌)作比较。结果方阵滴定的结果显示最适包被抗体浓度为1μg/m L,最适检测抗体的稀释度为1∶3 000。抗原最低检测限达2.25ng/m L。重组TR浓度为5 ng/m L和20 ng/m L时,批内和批间变异系数分别为8.57%、12.69%和6.73%、10.45%。阻断实验显示该法有较好的特异性,阻断率达84.7%。该法可以检出烟曲霉24 h培养上清中的天然TR,TR含量与烟曲霉菌丝含量呈正相关。本法与另2种曲霉和3种假丝酵母菌培养上清无交叉反应。结论成功建立并优化了检测烟曲霉TR抗原的ELISA法。该法具有良好的精密度及特异性,对烟曲霉感染有潜在的诊断价值。     

非配套PK7300型全自动血型检测系统方法的建立与评价

目的建立并评价针对全自动血型分析系统BECKMAN PK7300的非配套检测系统方法。方法参照厂商推荐参数及其他文献方法对孵育温度、试剂加注量和稀释标本加注量做优化测试;运用正交试验原理对标本血浆的稀释浓度、标本红细胞的稀释浓度,抗-A和抗-B血型定型试剂、Rh D定型试剂的稀释浓度以及试剂红细胞的稀释浓度做评价与验证。结果获得非配套K7300全自动血型检测系统的各项参数:1)正定型检测:标本红细胞稀释浓度1.5%、抗-A、抗-B血型定型试剂稀释浓度1∶40和(或)1∶4;2)反定型检测:标本血浆稀释浓度1∶2.5、试剂红细胞稀释浓度1∶2;3)Rh血型检测:标本红细胞稀释浓度1.5%、Rh D血型定型试剂稀释浓度1∶40;4)孵育时间60 min、孵育温度30℃,标本反应体积25μL、试剂反应体积25μL。结论成功建立了非配套PK7300型全自动血型检测系统,评价结果显示该检测系统特异性好、灵敏度,可满足相关检测要求;通过对标本和试剂稀释倍数的筛选,提高了非配套PK7300全自动血型检测系统的准确性和有效性。     

孕母血型抗体与新生儿ABO溶血病发生的相关性分析

目的探讨产前血型抗体与ABO新生儿溶血病发病（HDN）的相关性。方法对132例O型母亲行产前血型抗体效价检测,新生儿出生后检测血型血清学及胆红素水平,综合评价孕母血型抗体与新生儿ABO溶血病发生的相关性。结果132例夫妻ABO血型不合调查中,O型妻子,A型、B型、AB型丈夫各组发生HDN阳性率分别为38%、38%、26%（P〉0.01）,无统计学意义;孕妇IgG抗-A（B）效价为≤32、64、1282、56和≥512各组HDN阳性率分别为3%、25%、57%和86%、90%（P〈0.01）;132例非O型新生儿组血清总胆红素及间接胆红素分别为42.06±15.02μmol/L和34.56±16.82μmol/L,60例O型新生儿组血清总胆红素及间接胆红素分别为33.04±7.3μmol/L和26.99±9.32μmol/L（P〈0.05）。结论HDN的发生与丈夫血型无关。孕妇血清中IgG抗-A（B）效价越高,ABO-HDN的发生率越高,且随抗体效价增高而增高。发生HDN,新生儿血清总胆红素及间接胆红素也相应增高。     

固相法血型定型试剂在极端气候条件下使用的可行性评估

目的评估固相法血型定型试剂在极端条件下使用的可行性。方法模拟我国存在的4种极端气候条件(高温高湿、高温干燥、严寒干燥和低温高湿),选择全血标本120份,分析、比较固相法血型定型试剂在不同温度、湿度条件下测定ABO/RhD血型的准确性和反应时间。结果各组血型鉴定准确性均为100%。在高温条件下(高温干燥和高温高湿组)的反应时间与对照组相比无统计学差异,但低温高湿和严寒干燥2组与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论固相法血型定型试剂有良好准确性,由于其具备常温保存、结果易于判读等优点,可满足突发事件情况下血液应急保障的需求。     

献血者ABO血型筛查过程中正反定型不符原因分析

常规的ABO定型包括用已知抗体特异性的试剂血清检查红细胞的抗原(正定型)，以及用已知血型的红细胞检查血清中的抗体(反定型)，只有正反定型相符合时，才能正确定型。而ABO抗原的血型或变异型很多，在常规的实验室批量鉴定血型过程中，由于反应时间短、实验室温度低、实验方法的局限，会出现弱抗体、不规则抗体、冷凝集抗     

血型鉴定中出现片状凝块的原因探讨

最近在我科血库常规工作中,经常发现在血型鉴定(玻片法)过程中出现片状凝块,影响了结果的判断,经查发现血型试剂中的钙离子浓度在2.3～2.5mmol/L之间。所以本文认为出现片状凝块与试剂中钙离子浓度有关,特做以下试验加以证实。1　材料与方法1.1　试剂1.1.1　ABO血型定型试剂:抗A和抗B(单克隆抗体)试剂简称试剂,由上海实业科华生物技术有限公司生产。批号:990115,失效期000115。经测抗A试剂钙离子浓度为2.32mmol/L,抗B试剂钙离子浓度为2.49mmol/L。1.1.2　柠檬酸三钠:四川成都化学试剂厂生产,批号900120。1.1.3　络合钙离子后的抗A抗B(…     

Metis-200与Xantus+Poseidon数字血型仪检测效果比较

目的比较Metis-200(深圳爱康)自动血型分析仪与Xantus双机械臂加样器联合Poseidon数字血型仪检测ABO及Rh D血型的效果。方法同时采用两种自动血型仪对本站无偿献血样本24 866份进行平行血型检测、脂血干扰试验、溶血干扰试验和对比分析。结果两种血型分析仪对ABO血型判读准确率均为100%。通过确认,Metis-200和Xantus双机械臂加样器联合Poseidon数字血型仪检出ABO亚型分别为7例、5例(P>0.05);检出不规则抗体分别为16例、9例(P>0.05)。76份不同脂血程度血样在两种仪器上抗干扰试验一次判读正确率均为100%。溶血干扰试验在Hb≤27 g/L时,对UV型微板法结果判读无明显影响,当Hb>27 g/L时对凝集端有影响,对非凝集端无影响;而当Hb≤20 g/L时,对梯形微板法试验结果无明显影响;在Hb>20 g/L时对梯形微板法凝集端无影响,对非凝集端有影响。结论 Metis-200自动血型分析仪较Xantus双机械臂加样器联合Poseidon数字血型仪检测ABO及Rh D血型判读更加准确,速度更快,效率更高,极大地提高了血型批量检测的能力。