索拉菲尼对人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡和P-ERK表达的影响

目的：探讨多分子靶向药物索拉菲尼（sorafenib）对体外人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡的影响及对癌细胞P-ERK表达的影响,并探讨其可能机制。 方法：以MTT法检测索拉菲尼对SGC-7901细胞的杀伤抑制作用;免疫细胞化学法检测胃癌细胞内P-ERK蛋白的表达;流式细胞仪检测胃癌细胞凋亡的变化情况。 结果：索拉菲尼对胃癌细胞生长增殖具有抑制作用,随药物浓度的增加作用也增强,呈剂量—时间双效应关系(P<0.05);经索拉菲尼处理的SGC-7901细胞的P-ERK表达明显下降(P<0.05);细胞凋亡率增高(P<0.05)。 结论：sorafenib在体外对SGC-7901细胞具有明显的抑制作用,主要机制为抑制其P-ERK表达,从而抑制其增殖和促进凋亡。     

冬凌草甲素诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡及机制

目的 探讨冬凌草甲素体外诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡和细胞周期阻滞的作用及其机制.方法 10～80 μmol/L冬凌草甲素分别处理SGC-7901细胞后,CCK8法检测冬凌草甲素体外对SGC-7901细胞抑制生长的作用;用流式细胞仪分别观察冬凌草甲素诱导凋亡及细胞周期阻滞.Western blot测定凋亡相关蛋白的表达.结果 冬凌草甲素对SGC-7901细胞有明显的生长抑制作用,并随着药物浓度的增加(10～80 μmol/L)而逐渐增强,呈浓度、时间依赖关系.此外,流式细胞术检测发现,冬凌草甲素浓度为0、10、40、60、80 μmol/L,作用24 h后,G_2/M期细胞数分别是(9.90±1.17)%、(9.94±0.27)%、(11.76±0.16)%、(15.64±1.48)%和(22.59±1.01)%;而S期细胞比例分别为(31.79±1.03)%、(30.90±0.47)%、(29.25±0.80)%、(21.46±1.61)%、(18.81±0.61)%,冬凌草甲素能够使得SGC-7901细胞周期呈剂量依赖性阻滞于G_2/M期;冬凌草甲素浓度为80 μmol/L,作用12、24 h后,凋亡率分别为(12.78±1.54)%、(20.62±2.39)%,明显高于对照组的(9.92±0.56)%,其能使SGC-7901细胞发生凋亡.随着冬凌草甲素作用时间延长,SGC-7901细胞的bel-2蛋白表达逐渐减弱,前体Caapase-3被激活.结论 冬凌草甲素能够诱导SGC-7901细胞产生凋亡,并使细胞周期阻滞在G_2/M期.其凋亡机制可能与下调bcl-2蛋白表达及Caspase-3的激活相关.     

靶向沉默SPHK1基因诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的探讨用小干扰核酸（SmallinterferingRNA,siRNA）靶向沉默神经鞘氨酸激酶1（sDhingosinekinasel,SPHKl）基因敲除后对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响。方法人工化学合成SPHKlsiRNA和对照siRNA,分别转染胃癌SGC-7901细胞。Westernblot法检测SPHKl、Bcl-2和Bax蛋白的表达;流式细胞术（FlowCytometry,FCM）检测细胞凋亡的变化。结果SPHKlsiRNA转染胃癌SGC-7901细胞后,SPHKl蛋白表达明显下调;与对照组相比,SPHKlsiRNA转染组Bcl一2蛋白表达下调了55％（P〈0．01）,Bax蛋白表达差异无统计学意义,Bcl-2／Bax比值下调54％（P〈0．05）;SPHKlsiRNA转染组早期凋亡细胞明显增多（P〈0．01）,晚期凋亡细胞无明显变化。结论SPHKl特异性siRNA可阻断SGC-7901细胞SPHKl蛋白的表达,并通过影响Bcl-2通路诱导细胞凋亡。     

抑癌基因WTX对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的:探讨WTX基因对人胃癌SGC-7901细胞生物学行为的影响。方法:将WTX重组质粒或空载体质粒用Attractene法转染SGC-7901细胞,以无处理SGC-7901细胞为空白对照,检测不同时间e GFP标记的转染效率;RT-PCR法检测WTX m RNA水平;CCK-8法测定细胞增殖情况;流式细胞技术检测转染效率、凋亡及细胞周期的变化。结果:转染WTX基因48 h后,e GFP表达最强,转染效率达(33.10±4.16)%;与空白对照组和空载体组比较,WTX转染组WTX m RNA表达明显升高;细胞增殖能力明显降低,S期细胞明显增多,而G1期和G2/M期细胞减少(均P<0.05)。各组细胞均未见明显的细胞凋亡。结论:WTX可通过诱导S期阻滞抑制胃癌细胞SGC-7901生长,但不影响细胞凋亡。     

槐耳颗粒对胃癌SGC-7901细胞的作用

目的 观察槐耳颗粒对胃癌SGC-7901细胞生长抑制的影响,探讨槐耳颗粒抗肿瘤的作用.方法 将不同浓度的槐耳颗粒作用于胃癌SGC-7901细胞;采用MTT法、流式细胞仪分析以及TUNEL法检测不同浓度的槐耳颗粒在不同时间对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响.采用方差分析和X~2检验分析结果.结果 槐耳颗粒作用于胃癌SGC-7901细胞后,细胞生长明显受抑制,有明显的凋亡特征性改变;不同时间、不同浓度之间抑制率比较,差异有统计学意义(F=53.33,63.28,P<0.01),作用效果呈明显的时间-剂量依赖性.流式细胞仪分析显示加药组G_0/G_1期细胞比例减少,随着药物浓度的增加凋亡细胞数也增加.槐耳颗粒作用胃癌SGC-7901细胞1～3 d后,细胞凋亡水平显著性升高,4.0 g/L组在24、48、72 h时凋亡指数分别为15.8%、34.5%、52.5%,差异有统计学意义(X~2=299.02,P<0.01).结论 槐耳颗粒能抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,抑制作用具有时间-剂量效应关系,可能是通过诱导胃癌细胞凋亡实现的.     

胃癌的分化程度与细胞凋亡及增殖关系的研究

目的通过研究不同分化程度的胃癌与细胞凋亡及增殖的关系，探讨细胞凋亡在胃癌发生中的作用。方法应用原位细胞凋亡TUNEL检测方法结合免疫组织化学染色方法对81例胃癌患者进行了细胞凋亡及增殖的原位观察和比较。结果高中分化腺癌的凋亡指数明显高于低分化腺癌组，高中分化腺癌与低分化腺癌之间，高中分化腺癌与印戒细胞癌之间，低分化腺癌与黏液腺癌之间，印戒细胞癌与黏液腺癌之间，凋亡指数差异有非常显著性（P〈0．01）。结论分化差的胃癌细胞有逃避细胞凋亡的机制。细胞凋亡受抑制可能在胃癌的浸润和转移中发挥重要作用。高中分化腺癌的凋亡指数高于低分化腺癌，这可能是高中分化腺癌生长较缓慢，预后较好的原因之一。     

微囊化人胃癌细胞SGC-7901模型建立

目的 建立微囊化人胃癌细胞株SGC-7901培养模型.方法 微胶囊制备仪包裹SGC-7901细胞,培养至21 d,噻唑蓝(MTT)比色法观察隔日细胞的生长活性,生物传感分析仪检测隔日培养上清中葡萄糖和乳酸浓度;选取第7、14、21天的微囊化SGC-7901细胞,苏木素-伊红(HE)染色;免疫细胞化学法分别观察微囊前后SGC-7901细胞5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-BrdU)、细胞核抗原(PCNA)及血管内皮生长因子(VEGF)基因表达.结果 MTT结果示培养至第14天,细胞相对数不再增加,随后细胞相对数略下降;微囊化人胃癌细胞培养上清中葡萄糖含量逐渐降低,乳酸上升;至20d后分别为10、100 mmol/L.免疫细胞化学法检测SGC-7901细胞贴壁培养中表达PCNA和VEGF基因;第7和14天,微囊化人胃癌细胞可见PCNA、BrdU及VEGF基因表达;21 d,PCNA和BrdU主要在细胞团外层表达,内层细胞则表达少或不表达,而VEGF均见表达.结论 呈三维立体生长的微囊化胃癌细胞模型生长稳定,相关基因表达稳定.     

奥曲肽对人胃癌细胞的凋亡诱导作用

目的 探讨生长抑素对人胃癌细胞的抑制作用及其作用机理。方法 以生长抑素类似物奥曲肽作用于人胃癌细胞株SGC-7901细胞，以人成纤维细胞株HF作为正常细胞对照，以5-FU作为阳性药物对照，通过MTT实验、荧光显微镜观察及流式细胞术分析，得出结论。结果 一定浓度范围内的奥曲肽对SGC-7901细胞产生抑制作用，其抑制作用具有量效关系和饱和性。奥曲肽对SGC-7901细胞的抑制程度接近于5-FU对他的抑制，而对HF细胞无影响。奥曲肽可诱导SGC-7901细胞凋亡。结论 奥曲肽在体外对SGC-7901细胞具有抑制作用，诱导肿瘤细胞凋亡可能是其作用机理之一。     

蛋白激酶B siRNA 转染对胃癌SGC-7901细胞生长增殖的影响

目的:探讨蛋白激酶B（PKB）基因沉默对人胃癌SGC-7901细胞增殖的作用。 方法:应用基因转染技术将蛋白激酶B家族的Akt2 siRNA转染至胃癌细胞中，采用Western blot、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术MTT等方法观察和检测Akt2 siRNA转染后对转染组细胞生长和增殖的影响。结果:与对照组比较，转染Akt2 siRNA组的胃癌SGC-7901细胞生长、增殖速度明显减缓（P＜0.01）， Akt2 siRNA组较对照组细胞的Akt2蛋白表达水平显著下调（P＜0.01）;转染组出现梯状凋亡条带;细胞周期显示转染组细胞聚集在G2/M期。 结论:应用RNAi使蛋白激酶B基因沉默能使人胃癌SGC－7901细胞的生长受到抑制，胃癌细胞增殖速度减缓，其作用机理可能通过诱导细胞凋亡和抑制PI3/K信号传导通路而实现。Akt2有望成为胃癌基因治疗的新靶点。     

CO_2气腹对人胃癌细胞株SGC-7901增殖和转移能力的影响

目的探讨CO_2气腹与胃癌细胞在裸鼠腹腔增殖、转移及其机理。方法胃癌细胞株SGC-7901注射到30只裸鼠腹腔建立腹腔胃癌脱落细胞模型,随机分为麻醉组、开腹组、CO_2气腹0.5 h组和CO_2气腹1.0 h组。8周后观察肿瘤生长情况,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western-Blot检测各瘤体组织中血管内皮生长因子(VEGF)、大鼠缺氧诱导因子-1a(HIF-1a)、天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、BCL-2的mRNA及蛋白表达水平。结果 CO_2组肿瘤重量明显高于麻醉组及开腹组,CO_2气腹1 h组高于CO_2气腹0.5 h组,开腹组与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05);RT-PCR与Western blot检测结果显示,VEGF,HIF-1a,BCL-2在气腹组中的表达高于对照组及开腹组(P0.05),1 h组表达高于0.5 h组(P0.05),开腹组大于对照组(P0.05),气腹组Caspase-3表达低于对照组及开腹组(P0.05),1 h组表达高于0.5 h组(P0.05),开腹组与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05);结论 CO_2气腹能增强并随着时间增加腹腔脱落胃癌细胞黏附、生长、增殖的能力。     

右美托咪定对胃腺癌SGC-7901细胞生长和转移的影响

目的观察不同浓度右美托咪定对胃腺癌SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法人胃腺癌SGC-7901细胞接种于培养板培养24h,随机分为五组:对照组(C组)、右美托咪定312.5μg/ml组(D1组)、右美托咪定625μg/ml组(D2组)、右美托咪定1 250μg/ml组(D3组)和右美托咪定2 500μg/ml组(D4组)。分别用不同浓度右美托咪定处理胃癌SGC-7901细胞48h后,采用CCK-8法、Transwell法检测细胞增殖、侵袭和迁移。结果与C组比较,D1、D2、D3和D4组SGC-7901细胞活力差异无统计学意义。D1、D2、D3和D4组SGC-7901细胞迁移能力明显高于C组(P0.05或P0.01),且呈剂量依赖性;D1、D2、D3和D4组SGC-7901细胞侵袭能力明显高于C组(P0.05或P0.01),且呈剂量依赖性。结论右美托咪定可促进人胃癌细胞SGC-7901侵袭和迁移,对其增殖无明显影响。     

舒芬太尼对胃癌SGC-7901细胞活力的影响

目的通过不同浓度的舒芬太尼作用于胃癌SGC-7901细胞,研究舒芬太尼对胃癌细胞活力的影响。方法将对数生长期的胃癌细胞随机均分为对照组(C组)、舒芬太尼0.5nmol/L组(0.5nM组)、5nmol/L(5nM组)、50nmol/L(50nM组)和500nmol/L(500nM组)。分别以0、0.5、5、50、500nmol/L浓度的舒芬太尼作用于胃癌细胞,FDA/PI荧光双染观察染毒后的胃癌SGC-7901细胞存活情况;CCK-8试剂盒检测细胞活力;AnnexinV-FITC流式细胞术检测胃癌细胞的凋亡情况;最后运用细胞周期检测试剂盒分析胃癌细胞的细胞周期。结果 FDA/PI双染观察显示,随着舒芬太尼染毒浓度的增高,死亡的胃癌SGC-7901细胞比例不断增加,存活的正常细胞比例下降;CCK-8分析表明药物作用后的胃癌细胞的活力呈下降趋势,与C组比较,12h时500nM组和24、48h时50、500nM组细胞活力明显下降(P0.05或P0.01)。与C组比较,5nM组、50nM组和500nM组细胞凋亡率明显升高(P0.05或P0.01)。运用AnnexinV-FITC/PI凋亡实验发现胃癌细胞凋亡和死亡的数量也随药物浓度的增加而不断增多;最后通过检测染毒后的胃癌细胞,发现与C组比较,5nM、50nM和500nM组G2/M期细胞比例明显升高,S期细胞比例明显降低(P0.01)。结论舒芬太尼可以使胃癌SGC-7901细胞的活力下降,促进胃癌细胞凋亡。     

靶向环氧合酶-2的RNA干扰诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的探讨靶向环氧合酶-2(COX-2)的RNA干扰(RNAi)对胃癌SGC-7901细胞增生和凋亡的影响。方法设计并合成6条COX-2小分子干扰RNA(siRNA)和1条阴性对照siR- NA,用TOPtranfection介导转染胃癌SGC7901细胞,荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Western blot检测胃癌SGC7901细胞中COX-2基因和蛋白的表达,用流式细胞仪检测胃癌细胞凋亡情况,并与对照组进行比较。结果TOPtranfection能够有效介导COX-2 siRNA和阴性对照siRNA转染胃癌SGC7901细胞；TOPtranfection介导的COX-2 siRNA有效抑制了胃癌细胞COX-2 mRNA表达,与对照组相比抑制效率90．0%以上,最高达98．3%,同时抑制胃癌SGC7901细胞COX-2蛋白表达,与阴性对照组及对照组相比,COX-2蛋白抑制率分别为72．0%和72．1%。试验组、阴性对照组及对照组胃癌细胞凋亡率分别为：22．28±3．62、1．23±0．27和1．03±0．14。试验组与阴性对照组(t= 14．214,P＜0．01)和对照组(t=14．378,P＜0．01)比较,差异均具有统计学意义,阴性对照组与对照组比较(t=1．635,P＞0．05)差异无统计学意义。结论靶向COX2的RNA干扰能有效抑制胃癌细胞中COX-2基因和蛋白的表达,同时能明显增加胃癌细胞凋亡、抑制胃癌细胞增生。     

2-脱氧-D-葡萄糖联合氟尿嘧啶对胃癌细胞MGC-803凋亡影响的实验研究

目的探讨糖酵解抑制剂2-脱氧-D-葡萄糖（2-DG）与氟尿嘧啶（5-Fu）单独及联合应用对人胃癌细胞MGC-803增殖及凋亡的影响。方法实验设立2-DG组、5-Fu组、联合组（2-DG＋5一Fu）及空白对照组,将2-DG（10mmol／L）及5-Fu（5．0μg／L）单药及联合用药作用于人胃癌细胞MGC-803,MTT法检测各组MGC-803细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。结果2-DG和5-Fu均可使胃癌细胞增殖受到抑制并可诱导细胞凋亡,两药合用后其作用明显增强。结论2-DG能有效抑制人胃癌细胞MGC-803细胞生长增殖,并诱导其凋亡;2-DG与5-Fu联合应用抗肿瘤作用明显增强。     

二氢青蒿素通过线粒体依赖性途径诱导人胃癌细胞凋亡的机制

目的 探讨二氢青蒿素(DHA)体外诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡的分子作用机制.方法 体外培养人胃癌SGC7901细胞,不同浓度(6.25、12.50、25.00、50.00、100.00μmol/l) DHA作用24、48、72 h后,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖;DHA作用人胃癌SGC7901细胞24 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率;分光光度法检测细胞半胱氨酰大冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)和Caspase-9活性变化;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)荧光染色检测线粒体膜电位(△Ψm)的改变;Western blot法分别测定B-细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和bax蛋白的表达水平;Western blot检测胞质中细胞色素C( Cyto C)的含量变化.结果 DHA对SGC7901细胞增殖抑制具有明显量效和对效关系;与对照组(1.88±0.25)比较,不同浓度DHA作用人胃癌SGC7901细胞24h后,细胞凋亡率[(4.21±0.83)％、(6.92±1.26)％、(9.78±2.55)％、(13.93±2.94)％、(16.02±3.83)％]明显增加(P＜0.05);与对照组(0.091±0.007、0.079±0.006、100.000±0.000)比较,Caspase-3(0.094±0.008、0.196±0.014、0.288±0.017、0.326±0.024、0.491±0.042)和Caspase-9 (0.082±0.008、0.154±0.010、0.176 ±0.012、0.217 ±0.015、0.268±0.024)活性逐步升高(P＜0.05);△Ψm( 74.18±7.84、70.08±6.53、58.66±2.38、48.79±1.31、31.24±0.73)逐渐下降(P＜0.05);不同浓度DHA处理组bax蛋白表达逐渐升高(p＜0.05),bcl-2表达逐步下降(P＜0.05),bcl-2/bax比值(2.37±0.24、1.51±0.21、0.82±0.16、0.64±0.14、0.37±0.07)显著降低,与对照组(3.11±0.28)比较有剂量依赖趋势(P＜0.05);与对照组(0.18±0.04)比较,不同浓度DHA均能剂量依赖地诱导胞质Cyto C表达(0.21±0.05、0.25±0.06、0.38±0.08、0.39±0.09)增加(P＜0.05).结论 DHA具有促进胃癌细胞凋亡的作用,且有剂量依赖的趋势,其机制与线粒体凋亡途径有关.     

miR-195对胃癌BCG823细胞株增殖与凋亡的影响

目的 观察miR-195对胃癌细胞BCG823增殖与凋亡的影响。方法 利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将miR-195的模拟物转染入BCG823细胞中。Real-time聚合酶链反应(PCR)法测定BCG823内miR-195的表达。CCK8法测定细胞生长曲线观察细胞增殖的抑制。流式细胞仪测定细胞凋亡率的变化。JC-1染色检测线粒体膜电位变化。Caspase活性检测试剂盒检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性。结果 对照组24、48、72h吸光值分别为0.214、0.236、0.510、0.702,而转染组24、48、72 h吸光值分别为0.222、0.224、0.330、0.504,转染组凋亡率为21.84％,较对照组(4.24％)显著增加,转染组线粒体电位4.3,较对照组(13.8)显著降低(P＜0.05)。对照组Caspase-3、Caspase-9、Caspase-8活性分别为0.265±0.029、0.652±0.042、0.244±0.047,而转染组Caspase-3、Caspase-9、Caspase-8活性分别为0.504±0.039、0.214±0.037、0.262±0.032。miR-195能使Caspase-3、Caspase-9的活性增加,Caspase-8的活性无显著变化。结论 体外实验初步证明miR-195基因可抑制胃癌细胞株BCG823增殖并诱导其凋亡。     

Leflunomide对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:检测Leflunomide对结肠癌细胞增殖和诱导凋亡作用。方法:实验采用结肠癌细胞株SW260,与不同浓度的Leflunomide药物(0、5、10、20、40、80μg/ml)共同培养,以MTT方法和流式细胞仪技术检测细胞的增殖状态,用TUNEL染色和流式细胞仪技术检测细胞的凋亡。结果:Leflunomide在对结肠癌细胞增殖具有双重影响,即在低浓度下(5μg/ml和10μg/ml)有轻度的促进结肠癌细胞SW620增殖的作用,而提高浓度后(>40μg/ml)则表现为明显的抑制细胞的增殖作用,并随着剂量增加和作用时间延长,抑制作用更为明显,即存在着时相性和量-效依赖性。结论:Leflunomide可抑制结肠癌细胞增殖和诱导凋亡。可能对结肠癌病人有潜在的治疗作用。     

穿心莲内酯体外对人胃腺癌BGC823细胞增殖凋亡的影响

目的探讨穿心莲内酯（andrographolide,AD）对人胃癌细胞株BGC-823细胞增殖、细胞周期以及细胞凋亡的影响。方法分别采用MTT法、流式细胞术和流式细胞仪AnnexinV／PI双染色法检测AD对BGC-823细胞体外增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响：应用光镜和透射电镜观察不同浓度的AD作用后BGC．823细胞形态学改变。结果各浓度组AD均对人低分化胃癌细胞株BGC-823的增殖有抑制作用。并具有时间和浓度依赖关系（均P〈0．05）。浓度7．5μg／ml以下的AD抑制效果较弱,而15．0-60．0μg／ml抑制效果显著提高（P〈0．05）,60．0μg／ml以上抑制率增高不显著（P〉0．05）。24、48和72h的IC50分别为（35．3±4．3）、（25．5±3．5）和（18．2±2．7）μg／ml。BGC-823细胞经AD作用后,G0／G1期细胞的比例增加,S期和G2/M期细胞的比例下降,细胞被阻滞在G0／G1期,呈浓度依赖关系。AD浓度为7．5、10．0和15．0μg／ml组作用24h后,早期凋亡率分别为（19．3±4．7）％、（29．4±4．1）％和（52．7±6．7）％,晚期凋亡率为（10．8±1．8）％、（10．9±4．7）％和（14．7±4．8）％,均显著高于阴性对照组的早期凋亡率[（3．4±1．0）％]和晚期凋亡率[（4．1±0．7）％],差异有统计学意义（均P〈0．05）,并呈浓度依赖关系。结论AD能抑制BGC-823细胞增殖、阻滞其细胞周期在G0／G1期和诱导其细胞凋亡．是潜在的胃癌抗肿瘤中药制剂成分。