木脂素1对人胃癌细胞株SGC-7901体外抗肿瘤作用

目的研究木脂素1抑制人胃癌细胞株SGC-7901增殖的机理。方法使用倒置显微镜观察不同浓度的木脂素1对人胃癌细胞株SGC-7901细胞形态学变化的影响;采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测木脂素1在不同浓度范围内对人胃癌细胞株SGC-7901细胞存活率的影响,计算半数抑制浓度(IC50);通过流式细胞仪分析木脂素1对SGC-7901细胞凋亡以及细胞周期的影响;通过Western blot法分析木脂素1对SGC-7901细胞凋亡相关蛋白Caspase3、Bcl-2及Bax表达的影响。结果形态学结果显示,木脂素1对SGC-7901细胞有不同程度的杀伤作用,其作用随浓度的增加而增强;在不同浓度范围内(2.5~20μg/m L),木脂素1对SGC-7901细胞存活率表现出不同程度的抑制作用,且呈现出时间和浓度依赖关系(P0.05),其IC50为4.19μg/m L;木脂素1干预SGC-7901细胞48 h后,随着药物浓度增加,凋亡细胞比率、G2/M期细胞比率以及Caspase3和Bax的表达增高(P0.05),而G0/G1期细胞比率和Bcl-2的表达降低(P0.05)。结论木脂素1显著抑制SGC-7901细胞增殖并通过阻滞其于细胞周期的G2/M期而诱导细胞凋亡,其机理可能与活化该细胞中的Caspase3及Bax蛋白以及抑制Bcl-2蛋白表达有关。     

9-顺-维A酸对肺鳞癌细胞株A2细胞周期、凋亡及相关基因表达的影响

目的 探讨9-顺-维 A酸(9-cis RA)对肺鳞癌细胞株A2细胞周期影响和诱导凋亡作用并检测细胞周期相关基因 Cyclin D1、Rb的表达,探讨9-cis RA的抗癌作用机制。方法 体外培养 A2细胞,随机分为两组,实验组加入 9-cis RA使其终浓度为 5μmol/L,对照组加入二甲亚砜使其终浓度为 0.1％,两个组别均按 0、12、24、36、48、72 h共 6个时相培养,用流式细胞仪技术分别检测肿瘤细胞G0/G1期比率、S期比率及凋亡发生率,同时检测Cyclin D1、Rb基因表达率,作对比研究。结果 9-cis RA作用于肺癌细胞 A2后 G0/G1期细胞比率增高,S期细胞比率下降。9-cis RA作用于 A2细胞后凋亡发生率明显升高,Rb基因表达增强,Cyclin D1基因表达受抑制,在 48 h时药物作用达最高峰。凋亡发生率与Rb基因表达呈正相关(r=0.647,p<0.05),与Cyclin D1基因表达呈负相关(r=-0.723,P<0.05)。结论 9-cis RA可能通过激活 Rb基因表达和抑制 Cyclin D1基因表达途径使肺癌细胞明显阻滞在 G0/G1期,抑制肺癌细胞增殖。9-cis RA可明显诱导肺癌细胞调亡,Rb和Cycin D1基因同样在其中发挥着重要作用。     

抑癌基因WTX对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的:探讨WTX基因对人胃癌SGC-7901细胞生物学行为的影响。方法:将WTX重组质粒或空载体质粒用Attractene法转染SGC-7901细胞,以无处理SGC-7901细胞为空白对照,检测不同时间e GFP标记的转染效率;RT-PCR法检测WTX m RNA水平;CCK-8法测定细胞增殖情况;流式细胞技术检测转染效率、凋亡及细胞周期的变化。结果:转染WTX基因48 h后,e GFP表达最强,转染效率达(33.10±4.16)%;与空白对照组和空载体组比较,WTX转染组WTX m RNA表达明显升高;细胞增殖能力明显降低,S期细胞明显增多,而G1期和G2/M期细胞减少(均P<0.05)。各组细胞均未见明显的细胞凋亡。结论:WTX可通过诱导S期阻滞抑制胃癌细胞SGC-7901生长,但不影响细胞凋亡。     

PTEN基因对人胃癌细胞SGC-7901的生物学效应

目的 研究PFEN基因对人胃癌细胞SGC-7901增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法 将携带有PTEN基因的真核表达载体pBabe-Puro-PTEN以及pBabe-Puro，以脂质体介导的基因转染方法转入SGC-7901细胞系中，嘌呤霉素筛选获得稳定表达PTEN基因的转染细胞，通过细胞活力实验、流式细胞仪和DNA凝胶电泳，观察PTEN基因对SGC-7901细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。结果 稳定转染PTEN基因的SGC-7901细胞中PTEN蛋白稳定表达，转染PTEN基因的SGC-7901细胞生长速度较对照组明显减慢。流式细胞仪显示，细胞周期发生G1期阻滞。转染PTEN的细胞在透射电镜下可出现典型的凋亡形态学的改变；细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞特有的“梯状”条带，而对照组没有出现。结论 外源性PTEN基因导入SGC-7901细胞后，可引起SGC-7901细胞G1期阻滞，抑制肿瘤细胞增殖，并促进凋亡的发生。     

RNA干扰沉默STIL基因表达对胃癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨STIL在胃癌中的表达以及沉默STIL基因对胃癌细胞株SGC-7901各生物学活性的影响.方法 采用实时定量PCR（qPCR）法和Western Blot法检测STIL在胃癌及癌旁组织中的表达.构建靶向STIL的SiRNA并转染SGC-7901细胞,以MTT法检测细胞增殖、平板克隆法检测细胞克隆形成,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡.结果 与癌旁组织相比,胃癌组织中STIL在mRNA和蛋白水平表达显著增高.与对照组相比,STIL特异性SiRNA（Si-STIL）转染后,SGC-7901细胞中STIL mRNA表达受到抑制,细胞增殖、克隆形成能力下降,凋亡增加,细胞周期被阻滞于S期.结论 STIL在胃癌组织中高表达,STIL基因沉默可抑制胃癌细胞生长和克隆增殖、抑制有丝分裂期（M期）转换,促进细胞凋亡.     

蛋白激酶B siRNA 转染对胃癌SGC-7901细胞生长增殖的影响

目的:探讨蛋白激酶B（PKB）基因沉默对人胃癌SGC-7901细胞增殖的作用。 方法:应用基因转染技术将蛋白激酶B家族的Akt2 siRNA转染至胃癌细胞中，采用Western blot、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术MTT等方法观察和检测Akt2 siRNA转染后对转染组细胞生长和增殖的影响。结果:与对照组比较，转染Akt2 siRNA组的胃癌SGC-7901细胞生长、增殖速度明显减缓（P＜0.01）， Akt2 siRNA组较对照组细胞的Akt2蛋白表达水平显著下调（P＜0.01）;转染组出现梯状凋亡条带;细胞周期显示转染组细胞聚集在G2/M期。 结论:应用RNAi使蛋白激酶B基因沉默能使人胃癌SGC－7901细胞的生长受到抑制，胃癌细胞增殖速度减缓，其作用机理可能通过诱导细胞凋亡和抑制PI3/K信号传导通路而实现。Akt2有望成为胃癌基因治疗的新靶点。     

金雀异黄素与5-氟尿嘧啶对SGC-7901细胞的抑制作用

目的研究金雀异黄素（genistein，Gen）与5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU）对人胃癌细胞SGC-7901的抑制作用。方法采用MTT法检测Gen和5-FU对SGC-7901细胞的抑制作用，流式细胞术检测细胞周期分布，并在透射电镜下观察细胞超微结构改变。结果Gen和5-Fu单用或联合应用对胃癌SGC-7901细胞的生长均有显著的增殖抑制作用，且呈剂量和时间依赖性。两药联合应用时，当药物效应在0．2～0．8时，具有协同或相加作用（CI≤1）；18．8btmol／L的Gen作用后，62．97％的SGC-7901细胞阻滞在G2／M期；8．84μmol／L的5-FU作用后，63．76％的SGC-7901细胞阻滞在s期；3．06μmol／L的Gen与7．96μmol／L的5-Fu联合应用后，67．46％的SGC-7901细胞阻滞在G0／G1期。Gen和5-FU均可诱导SGC-7901细胞凋亡。结论Gen与5-FU通过阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡而抑制胃癌细胞的生长，对胃癌细胞的增殖抑制具有协同作用。     

曲古菌素A在胃腺癌细胞系SGC-7901中的作用

目的研究曲古菌素A（TSA）在胃腺癌细胞系SGC-7901中的作用。方法四甲基偶氮唑蓝法测定TSA对SGC-7901的细胞毒性，荧光显微镜观察细胞核DNA的变化，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率，Western印迹检测组蛋白H3的乙酰化状态。结果SGC-7901细胞生长曲线表明，TSA浓度增高，细胞生长率下降。细胞凋亡率在75ng／mlTSA作用72h时与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。凋亡细胞DNA变化主要表现为核染色质固缩及断裂，荧光染色增强。流式细胞仪分析出现明显的亚G1期峰，G1期细胞减少，细胞凋亡率达29．54％。TSA作用后，乙酰化的组蛋白如明显增多。结论TSA可以诱导SGC-7901细胞发生凋亡，组蛋白H3的乙酰化状态可能与细胞凋亡有关。     

冬凌草甲素诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡及机制

目的 探讨冬凌草甲素体外诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡和细胞周期阻滞的作用及其机制.方法 10～80 μmol/L冬凌草甲素分别处理SGC-7901细胞后,CCK8法检测冬凌草甲素体外对SGC-7901细胞抑制生长的作用;用流式细胞仪分别观察冬凌草甲素诱导凋亡及细胞周期阻滞.Western blot测定凋亡相关蛋白的表达.结果 冬凌草甲素对SGC-7901细胞有明显的生长抑制作用,并随着药物浓度的增加(10～80 μmol/L)而逐渐增强,呈浓度、时间依赖关系.此外,流式细胞术检测发现,冬凌草甲素浓度为0、10、40、60、80 μmol/L,作用24 h后,G_2/M期细胞数分别是(9.90±1.17)%、(9.94±0.27)%、(11.76±0.16)%、(15.64±1.48)%和(22.59±1.01)%;而S期细胞比例分别为(31.79±1.03)%、(30.90±0.47)%、(29.25±0.80)%、(21.46±1.61)%、(18.81±0.61)%,冬凌草甲素能够使得SGC-7901细胞周期呈剂量依赖性阻滞于G_2/M期;冬凌草甲素浓度为80 μmol/L,作用12、24 h后,凋亡率分别为(12.78±1.54)%、(20.62±2.39)%,明显高于对照组的(9.92±0.56)%,其能使SGC-7901细胞发生凋亡.随着冬凌草甲素作用时间延长,SGC-7901细胞的bel-2蛋白表达逐渐减弱,前体Caapase-3被激活.结论 冬凌草甲素能够诱导SGC-7901细胞产生凋亡,并使细胞周期阻滞在G_2/M期.其凋亡机制可能与下调bcl-2蛋白表达及Caspase-3的激活相关.     

双链蛋白聚糖对胃癌细胞生长作用研究

目的:研究双链蛋白聚糖(biglycan,BGN)对人胃癌细胞系SGC-7901的细胞增殖、周期及凋亡等生长作用影响。方法:构建重组质粒pIRES2-EGFP/BGN,转染胃癌细胞株SGC-7901,获得胃癌稳转细胞株SGC-7901/BGN。通过细胞增殖实验(CCK-8法)、平板克隆实验、流式细胞技术,分别检察BGN过表达对SGC-7901细胞增殖、克隆形成、周期及凋亡的影响。结果:SGC-7901/BGN组胃癌细胞较SGC-7901/空载组生长明显抑制(P<0.01),细胞培养板形成的克隆数明显减少[(209.7±12.6)比(326.0±15.1)];同时过表达BGN可促进胃癌细胞的凋亡[(10.7±1.5)%比(5.3±1.1)%],且将细胞周期阻止在G1期[(55.7±2.1)%比(37.6±1.8)%]。结论:胃癌细胞过表达BGN可抑制胃癌细胞的增殖、克隆形成。BGN可能通过将细胞周期阻滞在G1期、诱导细胞凋亡,从而发挥其生长抑制的生物学效应。     

PTEN基因对人胃癌细胞SGC-7901的生物学效应

目的　研究PTEN基因对人胃癌细胞SGC 790 1增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法　将携带有PTEN基因的真核表达载体pBabe Puro PTEN以及pBabe Puro ,以脂质体介导的基因转染方法转入SGC 790 1细胞系中 ,嘌呤霉素筛选获得稳定表达PTEN基因的转染细胞 ,通过细胞活力实验、流式细胞仪和DNA凝胶电泳 ,观察PTEN基因对SGC 790 1细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。结果稳定转染PTEN基因的SGC 790 1细胞中PTEN蛋白稳定表达 ,转染PTEN基因的SGC 790 1细胞生长速度较对照组明显减慢。流式细胞仪显示 ,细胞周期发生G1期阻滞。转染PTEN的细胞在透射电镜下可出现典型的凋亡形态学的改变 ;细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞特有的“梯状”条带 ,而对照组没有出现。结论　外源性PTEN基因导入SGC 790 1细胞后 ,可引起SGC 790 1细胞G1期阻滞 ,抑制肿瘤细胞增殖 ,并促进凋亡的发生     

腺病毒载体介导的早幼粒细胞白血病基因生长抑制因子诱导胃癌细胞凋亡的机制研究

目的 探讨腺病毒载体介导的早幼粒细胞白血病基因（PML）生长抑制因子诱导胃癌细胞凋亡作用的机制。方法 将人PML全长cDNA插入穿梭质粒pSGCMV，再与腺病毒骨架质粒pPE3共转染293细胞后获得重组病毒。用重组病毒感染胃癌细胞系SGC-7901，采用噻唑蓝比色法、流式细胞术以及免疫细胞化学法对p53和bcl-2在肿瘤细胞内的表达以及细胞凋亡的定性与定量指标进行检测。结果 经腺病毒介导的PML处理的SGC-7901细胞生长受到明显抑制，凋亡细胞发生率升高，且与MOI值呈正相关，MOI值由5增加到20，细胞的生长抑制率从22．4％增加到38．5％，而细胞凋亡率从37．2％增加到49．8％。经腺病毒介导的PML处理的SGC-7901细胞内p53蛋白表达较对照组明显增加，bel-2蛋白的表达则无明显变化。结论 腺病毒介导的PML对胃癌细胞的杀伤主要是通过诱导细胞凋亡，p53蛋白高表达为其诱发胃癌细胞凋亡的机制之一。     

厚朴酚对胃癌细胞增殖及凋亡的影响及机制研究

目的探讨厚朴酚对胃癌细胞增殖及凋亡的影响及机制研究。 方法0(对照组), 20, 40, 80 μmol/L的厚朴酚作用SGC－7901细胞24、48、72 h,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测细胞中B淋巴细胞瘤－2(Bcl－2)、Bcl－2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸蛋白水解酶－3(cleaved caspase 3)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、CyclinE及细胞周期依赖性蛋白激酶2(CDK2)蛋白的表达。所有数据均用SPSS 17.0软件进行统计分析,细胞增殖抑制率、细胞凋亡及细胞周期、蛋白表达量等用( ±s)表示,组间差异采用t检验进行分析。P<0.05表示差异具有统计学意义。 结果20, 40, 80 μmol/L的厚朴酚较对照组细胞活力降低(P<0.01),细胞凋亡率提高(P<0.01),细胞周期阻滞于G1期(P<0.01),Bcl－2,CyclinD1,CyclinE及CDK2表达量下调(P<0.01),Bax、cleaved caspase 3表达量上调(P<0.01)。 结论厚朴酚可能通过调控细胞周期蛋白及细胞凋亡相关蛋白抑制SGC－7901细胞增值,并诱导细胞凋亡。     

热CO2气腹对胃癌细胞杀伤作用的实验研究

目的:体外研究热CO2气腹对人胃癌细胞SGC-7901的杀伤作用,探讨临床上腹腔镜胃癌手术使用热CO2气腹抑制腹膜转移和戳孔种植的可行性。方法:建立体外热CO2气腹实验模型,人胃癌细胞SGC-7901经热CO2气腹(42℃、43℃,1～3 h)处理后,WST-8法检测细胞毒作用,流式细胞术定量分析、Hoechst 33342/PI荧光显微镜观察细胞形态,RT-PCR检测Bax、bcl-2基因mRNA的表达。结果:WST-8法检测显示热CO2气腹能显著抑制人胃癌细胞SGC-7901增殖,43℃作用3 h后,细胞存活率降至(65.83±2.40)%。流式细胞术及细胞形态学结果显示,诱导胃癌细胞凋亡是热CO2气腹作用的主要方式,与温度和作用时间呈正相关。RT-PCR检测结果显示,实验组(43℃,3 h)Bax基因mRNA表达水平显著高于对照组(25℃,3 h)差异有统计学意义(P<0.05);但对bcl-2的表达无明显影响。结论:热CO2气腹通过诱导细胞凋亡对人胃癌细胞有显著的增殖抑制作用,发生机制可能是通过上调Bax的表达促进细胞凋亡。     

Smac基因过表达对胃癌细胞株化疗敏感性影响的研究

目的：观察Smac基因过表达对胃癌细胞株化疗敏感性的影响。方法：采用脂质体lipofec-tamine2000介导的方法,将Smac基因转入胃癌细胞SGC-7901,RT-PCR和Western-blot法检测未转染对照组、空载体pcDNA3．1转染对照组、pcDNA3．1-Smac转染组胃癌细胞中Smac基因的表达。选用紫杉醇（1、5、10ug／mL）处理转染前后的胃癌细胞,四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖活性,倒置显微镜下观察细胞形态变化并摄片。结果：同未转染对照组和空载体pcDNA31转染对照组比较,pcDNA31-Smac转染组SGC-7901细胞SmacmRNA和蛋白表达水平显著增高（F）〈O01）;紫杉醣处理24、48h后,pcDNA3．1-Smac转染组细胞生长抑制率增加（P〈O01）;使用化疗药物后,细胞明显变圆、折光增强、漂浮细胞增多,pcDNA3．1-Smac转染组细胞形态变化最为显著。结论：转染外源性Smac基因并使其在胃癌细胞中过表达,能提高SGC-7901细胞对化疗药物的敏感性。     

TNF-α联合奥沙利铂对胃癌细胞SGC-7901抑制作用的研究

目的:探讨TNF-α联合奥沙利铂对人胃癌细胞株SGC-7901生长抑制、凋亡的影响及其作用机制。方法:应用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度的TNF-α、奥沙利铂及两者联合应用对SGC-7901细胞抑制率;采用Hoechst检测SGC-7901细胞凋亡情况。结果:浓度为20、40、80和160μg/mL的奥沙利铂对SGC-7901的细胞生长抑制率为(29.11±0.63)%、(41.05±0.97)%、(47.69±1.03)%和(56.26±0.93)%,均可抑制细胞增殖(P<0.01);浓度为25 mg/L的TNF-α对SGC-7901细胞的生长抑制率为(2.39±0.65)%,抑制作用不明显,浓度为50、100、150 mg/L的TNF-α对SGC-7901细胞的生长抑制率为(4.51±0.86)%、(4.63±0.53)%和(4.75±1.05)%,可抑制细胞增殖(P<0.05);奥沙利铂(20μg/mL)与25、50、100和150 mg/L的TNF-α联合应用时对SGC-7901的细胞生长抑制率为(36.34±0.76)%、(45.51±0.83)%、(51.47±0.67)%和(58.78±0.97)%,与单用TNF-α(100mg/L)或奥沙利铂(20μg/mL)比较,细胞生长抑制率增加(P<0.01);Hoechst检测结果显示,单独应用100 mg/L TNF-α、单独应用20μg/mL奥沙利铂及两者联合应用均有细胞凋亡现象,且联合用药组细胞凋亡率增高(P<0.01)。结论:TNF-α可增强奥沙利铂对人SGC-7901细胞的促凋亡作用,其机制可能为TNF-α、奥沙利铂分别激活不同的Caspase,并级联和放大有关凋亡信号,因而对细胞凋亡产生了协同作用。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸盐增强肿瘤坏死因子α诱导人胃癌细胞株SGC-7901凋亡作用的研究

目的研究核转录因子-κb（NF—κb）抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）对肿瘤坏死因子α（TNF—α）诱导的人胃癌细胞株SGC-7901生长抑制及凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法应用噻唑蓝（MTr）法检测不同浓度的PDTC和TNF-α以及两者联合应用对SGC-7901细胞增殖的抑制率：采用Hoechst检测SGC-7901细胞凋亡情况：Westernblot检测SGC-7901细胞survivin和easpase-3蛋白的表达。结果PDTC在15、30、60和100μmol／L浓度时．对SGC-7901的细胞生长抑制率分别为（12．14±0．91）％、（20．00±1．11）％、（37．63±1．01）％和（41.46±1．07）％．均可抑制细胞增殖（P〈0．01）。TNF-α为25mg／L时,对SGC．7901细胞的生长抑制率为（2．38±0．67）％,与对照组（1．50±0．81）％相比,差异无统计学意义（F=28．28,P〉0．05）：而在50、100和150mg／L浓度时,对SGC-7901细胞的生长抑制率分别为（4．53±0．85）％、（4．43±0．70）％和（4．74±1．07）％,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）。PDTC15μmol／L分别与25、50、100和150mg／L的TNF．仅联合应用时,对SGC-7901的细胞生长抑制率则分别为（18．94±1．10）％、（30．23±0．89）％、（41．55±0．94）％和（53．34±0．98）％,与单用TNF—α或单用15μmol／LPDTC比较,细胞生长抑制率增加（P〈0．01）。Hoechst检测结果显示,TNF-α100mg／L组、PDTC15μmol／L组及两者联合应用组细胞凋亡率均显著增加（P〈0．01）,且联合用药组细胞凋亡率增高最为显著（P〈0．01）。PDTC（15μmol／L）与TNF-α（100mg／L）联合用药与单用TNF—α（100mg／L）比较,细胞survivin蛋白表达明显降低（P〈0．01）,与单用PDTC（15μmol／L）比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;但caspase-3蛋白的表达联合用药组较两者分别单用时显著增加（P〈0．01）。结论PDTC可增强TNF-α对人SGC-7901细胞的促凋亡作用,其机制可能与PDTC阻断TNF-α诱导的NF—κb活性、下调survivin表达并最终上调凋亡蛋白easpase-3的表达有关。