半夏泻心汤及不同配伍组对大鼠肝脏 CYP450酶活性的影响

目的:研究半夏泻心汤及不同配伍组对大鼠肝微粒体CYP450亚型酶的影响,从肝脏代谢角度评价半夏泻心汤组方的合理性。方法:将大鼠随机分为全方组、辛开组、苦降组、甘补组及空白对照组,分别灌胃水煎液,运用肝微粒体体外温孵法,对探针底物进行孵育,并结合超高效液相检测方法,测定各探针底物代谢产物的含量,计算代谢速率,以反映各给药组的肝微粒体CYP2C6,CYP2E1,CYP3A1/2亚型酶活性。结果:与空白组相比,全方组,苦降组对各亚型酶均起抑制作用(P<0.01);辛开组对CYP2C6有抑制作用(P<0.01),而对CYP2E1和CYP3A1/2无显著抑制作用;甘补组对CYP2C6和CYP2E1亚型起抑制作用(P<0.01),而对CYP3A1/2无抑制作用。结论:全方对大鼠肝微粒体CYP450酶起抑制作用,比较各配伍组间差异,苦降组抑制作用较其他配伍组显著。     

基于CYP450酶的四逆汤复方配伍减毒机制研究

目的探讨CYP450酶的四逆汤复方配伍减毒机制。方法采用"Cocktail"探针药物法测定CYP1A2和CYP3A4酶活性,使用高效液相色谱仪检测血浆中咖啡因和咪达唑仑两种特异性探针药物的浓度。应用CO示差还原法测定大鼠肝微粒体中CYP450酶含量,通过反转录聚合酶链式反应来检测CYP1A2和CYP3A4 mRNA的表达。结果附子对CYP1A2和CYP3A4酶活性及CYP450酶含量无影响;甘草、附子配伍甘草和四逆汤对CYP1A2和CYP3A4酶活性有诱导作用并且显著增加CYP450酶含量;与对照组比较,甘草组、附子配伍甘草组和四逆汤全方组对CYP3A4 mRNA的表达有不同程度诱导作用。甘草组和四逆汤全方组对CYP1A2 mRNA表达有显著诱导作用,附子配伍甘草组对CYP1A2 mRNA表达无显著影响。结论实验研究表明甘草、附子配伍甘草、四逆汤全方能够诱导CYP1A2和CYP3A4酶活性,显著增加CYP450酶含量;附子配伍甘草对两种酶活性的影响可能由甘草对酶基因表达影响引发,使酶活性增强,从而加快附子毒性成分在体内代谢,从肝药代谢酶角度阐明甘草在四逆汤中对附子起主要减毒作用。     

戊己丸不同配比方对大鼠体外CYP3A1/3A2酶活性的影响

目的:研究戊己丸不同配比方对大鼠体外肝微粒体CYP3A1/3A2酶活性的影响,从"中药配伍-代谢"关系探讨戊己丸的配伍机制.方法:按L9(34)正交表,戊己丸的配比设计为9个受试复方,以睾丸酮为探针药,HPLC检测戊己丸对大鼠体外肝微粒体CYP3A1/3A2酶活性的影响.结果:黄连、吴茱萸、白芍各提取物及戊己丸1号～9号方抑制CYP3A1/3A2的IC50分别为38.96,871.96,15 519.17,43.17,60.47,276.12,133.40,118.08,88.47,64.36,35.13,39.91mg·L-1;黄连及戊己丸均可显著抑制CYP3A1/3A2酶活性,不同配比戊己丸抑制CYP3A1/3A2酶活性作用不同,有统计学差异;随着黄连在戊己丸方中剂量水平的增高,戊己丸组方抑制CYP3A1/3A2酶活性的能力增强,且戊己丸组方中吴茱萸和白芍配比不同可以影响方中黄连抑制CYP3A1/3A2酶活性的程度.结论:戊己丸配比不同,对CYP3A1/3A2酶活性的抑制作用不同,这种差异可能是不同配比戊己丸药效学、药动学差异的原因所在.     

欧前胡素和异欧前胡素对人和大鼠肝微粒体细胞色素P450酶活性的抑制作用

欧前胡索(IM)和异欧前胡素(ISOIM)是伞形科常用中药的主要有效成分,在临床上广泛应用.该文研究了IM和ISOIM对人和大鼠肝微粒体细胞色素P450酶(CYP)活性的抑制作用,并评价它们的相互作用潜能.在体外将系列浓度的IM和ISOIM与人和大鼠肝微粒体孵育30 min,以非那西丁、安非他酮、甲苯磺丁脲、S-美芬妥英、右美沙芬和咪达唑仑为CYP探针底物,应用LC-MS/MS定量检测各探针底物的代谢产物生成量,计算得到的IC50,评价两药对人肝CYP1 A2,2B6,2C9,2C19,206,3A4酶,以及大鼠肝CYP1 A2,2B6,2D2,3A1/2酶的抑制活性,并对抑制强度进行分级.在人肝微粒体中,IM和ISOIM对6个CYP同工酶均有不同程度的抑制作用.它们是1A2和2B6的强抑制剂,抑制1A2的IC50分别为0.05,0.20 μmol·L-1;抑制2B6的IC50分别为0.18,1.07 μmol·L-1.两药还是2C19的中等抑制剂,以及2C9,2D6,3A4的弱抑制剂.在大鼠肝微粒体中,IM和ISOIM是1A2的中等抑制剂,IC50分别为1.95,2.98 μmol·L-1.它们分别是2B6的中等和弱抑制剂,IC50为6.22,21.71 μmol·L-1.两药还是2D2,3A1/2的弱抑制剂.结果表明IM,ISOIM对人肝CYP酶有广泛的抑制作用,它们是CYP1A2和2B6酶的强抑制剂,临床用药时应注意因CYP酶抑制引起的相互作用.     

3种抗心血管病中成药对大鼠肝微粒体CYP4504种亚型的体外活性影响研究

目的:评价参松养心胶囊、芪苈强心胶囊和通脉养心丸3种抗心血管疾病的中成药对大鼠肝微粒体CYP450酶4种亚型CYP1A2、CYP2C11、CYP2D1和CYP3A1的体外活性影响。方法:选取15. 04μmol·L-1咖啡因、4. 98μmol·L-1奥美拉唑、7. 81μmol·L-1美托洛尔和6μmol·L-1咪达唑仑分别为CYP1A2、CYP2C11、CYP2D1和CYP3A1特异性探针底物,三种抗心血管疾病的中成药分别与4种CYP450酶亚型的混合探针底物在大鼠肝微粒体中共孵育,HPLC测定大鼠肝微粒体孵育体系中探针底物剩余量,求出相应酶活性抑制百分数并计算IC50值。结果:与空白组比较,随着三药浓度增高各亚酶活性呈降低趋势(P 0. 05);三药对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP2C11、CYP2D1、CYP3A1的IC50值分别为:参松养心胶囊1. 896、31. 97、12. 37、1. 357μmol·L-1;芪苈强心胶囊 100、1. 513、35. 2、6. 669μmol·L-1;通脉养心丸100、33. 970、0. 566、14. 380μmol·L-1。结论:参松养心胶囊对CYP1A2、CYP3A1有中度抑制作用,芪苈强心胶囊对CYP2C11、CYP3A1有中度抑制作用,通脉养心丸对CYP2D1有强抑制作用,其余作用不明显。     

基于肝脏药物代谢酶研究附子配伍干地黄的减毒机制

测定大鼠肝微粒体中CYP1A2和CYP3A4酶活性,并从蛋白和转录水平上阐明附子配伍干地黄对CYP450酶蛋白和基因表达的影响,探索附子配伍干地黄对其减毒的分子机制。采用"Cocktail"探针药物法进行CYP450酶活性测定;采用CO还原差示法测定肝微粒体中CYP450酶含量并采用RT-PCR测定大鼠肝脏CYP1A2和CYP3A4 mRNA表达量。结果显示,与空白组比较,附子干地黄组CYP1A2和CYP3A4酶活性及mRNA表达显著升高(P0.05);附子组CYP450含量显著降低(P0.01);干地黄组、附子干地黄组CYP450含量显著升高(P0.05)。因此,附子配伍干地黄能够诱导CYP1A2和CYP3A4酶活性,增加CYP450酶含量,加快附子毒性成分的代谢,达到附子减毒作用。     

基于Cocktail探针法的玉屏风散复方配伍研究

目的:以Cocktail探针约物法评价玉屏风散对肝微粒体CYP450主要亚型活性的影响,探讨复方配伍规律.方法:按拆方设计,设计7个组方,采用大鼠肝微粒体孵育体系,测定其对CYP主要亚型的半数抑制浓度(IC50).结果:玉屏风散及拆方对肝药酶CYPs的IC50均大于生药1.0g·L-1,对CYP1 A2,CYP2C19,CYP3A4 而言,玉屏风散及拆方配伍后的IC50较方中主要影响因子的IC50有增大的趋势(对酶活性的影响减小);对CYPs而言,配伍后的实测IC50较线性预测值有减小的趋势.结论:从药物对代谢酶活性影响的角度而言,玉屏风散配伍应用具有一定优势和合理性.     

大黄素在人肝微粒体中的体外代谢研究

目的:研究大黄素对人肝微粒体细胞色素P450酶6种亚型的影响以及在人肝微粒体中的代谢产物和参与酶亚型,为临床合理用药提供参考。方法:采用LC-MS/MS检测方法,建立6种混合探针底物的Cocktail体外方法,快速评价大黄素对CYP450同工酶活性的影响。同时在人肝微粒体孵育体系中加入大黄素和CYP450各亚型酶的特异性抑制剂,检测大黄素的代谢清除率,鉴定大黄素在人肝微粒体中代谢产物和代谢酶表型。结果:大黄素对CYP2D6和CYP2C19有强抑制作用,IC50分别为1.0060μmol·L-1和0.5370μmol·L-1。大黄素在人肝微粒体中有1个氧化代谢产物,参与代谢的酶亚型为CYP1A2、CYP2E1和CYP2C19。结论:大黄素对CYP2D6和CYP2C19有抑制作用,提示在临床上需注意大黄素的用药剂量以及与其他被CYP2D6和CYP2C19代谢的药物合用时的相互作用。     

谷红注射液对CYP450酶的抑制和诱导作用的体内外研究

目的 考察谷红注射液对体外及体内细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)酶的影响。方法 人肝微粒体“Cocktail”探针底物法进行体外酶抑制实验,检测7种探针底物代谢产物的相对生成量,计算半数抑制浓度（half inhibitory concentration,IC50）,评估谷红注射液（0.05%～10%）对7种CYP450亚酶抑制作用。人原代肝细胞体系进行体外酶诱导实验,分别检测酶活性及其m RNA表达水平,评估谷红注射液对CYP450酶诱导作用。采用整体动物法进行体内酶活性实验,检测7种特异性探针底物血浆药物浓度,评估谷红注射液（0.9、3.6 mL/kg）对大鼠7种CYP450亚酶活性的影响。结果 谷红注射液对人肝微粒体CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的IC50值分别为1.98%、7.95%、2.85%、5.39%、4.92%、7.76%和3.41%,均大于0.5%（理论临床最大血药浓度值）;人原代肝细胞CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4 mRNA表达增加>2倍,且前两者呈浓...     

黄芩苷对大鼠和人肝微粒体CYP450酶的抑制作用

目的:观察黄芩苷对大鼠/人肝微粒体细胞色素P450(CYP450)酶活性的抑制作用,比较种属差异性,评价其发生药物相互作用的可能性。方法:通过采用体外肝微粒体温孵体系结合特异性探针底物的方法,结合应用LC-MS/MS检测各探针底物的代谢物的生成量,质谱检测条件为电喷雾离子化(ESI)源,选择性反应监测(SRM)扫描方式,色谱分离条件为ZORBAX Eclipse-plus C₁₈色谱柱(2.1 mm×100 mm,3.5 μm),流动相甲醇-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,流速0.2 mL·min^-1,计算半抑制浓度(IC₅₀)。结果:黄芩苷对大鼠肝微粒体CYP450酶7种亚型均无抑制作用,而对人肝微粒体CYP1A2,CYP2C19和CYP2E1有较弱的抑制作用,IC₅₀分别为39.72,40.91,32.83 μmol·L^-1。结论:黄芩苷对CYP450酶的抑制作用存在种属差异性,是人CYP1A2,CYP2C19,CYP2E1的弱抑制剂,临床静脉用药时,应注意可能因CYP450酶抑制引起的药物相互作用。     

黄芩、黄连配伍前后的主要化学成分含量变化

目的:考察相须药对的配伍对主要活性成分煎出量的影响。方法:选择黄芩-黄连药对为研究对象,以黄芩苷和盐酸小檗碱含量为指标,采用HPLC测定含量,选取加水量、提取次数、提取时间及黄芩-黄连比为考察因素,通过混合均匀设计试验优选煎煮工艺。考察不同比例配伍的黄芩-黄连共煎液与单煎混合液化学成分的异同,并采用三维效应面及三角能级图的形式将两指标成分进行直观对比,重点关注因两味中药在共煎而产生的化学成分动态变化现象。结果:黄连主要活性成分的煎出量与两者的配伍比例显著性相关;而黄芩活性成分的煎出量与煎煮时影响因素有关。黄连用量为黄芩用量2,3,5倍时溶液中两者含量相对较高,其他比例时均较低。结论:可通过研究药对的不同配比与其各自化学成分动态变化关系,揭示其临床使用疗效。     

射干提取物体内体外抑菌作用的研究

目的:研究射干提取物的体内外抑菌作用。方法:通过测定抑菌圈直径考察射干提取物对不同菌株的敏感性;采用2倍稀释法检测射干提取物的最小抑菌浓度(MIC);通过ip金黄色葡萄球菌观察射干提取物低、中、高(0.46,0.92.1.84g.kg-1)3个剂量ig给药7 d对小鼠的致死保护率。结果:肺炎链球菌、铜绿假单胞菌对射干提取物有较强的敏感性,金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、无乳链球菌、化脓链球菌、痢疾志贺菌对射干提取物中度敏感;射干提取物对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、无乳链球菌、化脓链球菌、痢疾志贺菌的最小抑菌浓度(MIC/g.mL-1)分别为0.062 5,0.015 6,0.250 0,0.031 2,0.015 6,0.015 6,0.062 5;射干提取物低、中、高3个剂量组均显著降低金黄色葡萄球菌酵母悬液引起的小鼠死亡率,死亡率分别为45%,35%,30%,与模型对照组死亡率100%比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:射干提取物体内体外对所试菌株均有抑菌作用。     

天王补心丸中生地黄、玄参、天冬和麦冬水提液对大鼠肝CYP450酶含量及其亚型CYP3A, CYP2E1和CYP1A2活性的影响

目的:研究天王补心丸中滋阴类药味生地黄、玄参、天冬和麦冬水提物对大鼠肝肝药酶(CYP450)含量及对亚型CYP3A,CYP2E1,CYP1A2活性的影响,探讨CYP450在天王补心丸代谢中的作用.方法:大鼠灌胃给予生地黄、玄参、天冬和麦冬水提物7d后取肝脏称重并制备肝微粒体,紫外分光光度法测定肝微粒体细胞色素b5(Cytb5),P450的含量及CYP3A的活性,高效液相法测定CYP2E1和CYP1A2的活性.结果:与空白对照组比较,各给药组大鼠肝指数无显著变化;生地黄组CYP450含量极显著减少(P＜0.01),CYP3A活性极显著增加(P＜0.01),CYP1A2活性显著增加(P＜0.05);玄参组CYP450含量减少(P＜0.05),CYP3A和CYP1A2活性均极显著增加(P＜0.01);天冬组Cytb5含量增加(P＜0.05),CYP2E1活性增加(P＜0.05),CYP1A2活性极显著增加(P＜0.01);麦冬组cytb5,CYP450含量无统计学差异,CYP3A活性增加(P＜0.05),CYP2E1活性增加(P＜0.05),CYP1A2活性极显著增加(P＜0.01).结论:天王补心丸中生地黄、玄参降低大鼠肝脏CYP450酶含量并均诱导CYP3A和CYP1A2活性,天冬诱导CYP2E1和CYP1A2活性,麦冬诱导CYP3A,CYP2E1和CYP1A2活性.由于抑制CYP450活性,减少对其他药代谢,滋阴药组在天王补心丸全方配伍中可增强其他各功能组比如补血养血、宁心安神类药味的作用,为探讨天王补心丸的配伍机制提供了理论基础.     

五味子醋制前后主要有效成分的变化规律

目的:探讨五味子醋制前后饮片主要有效成分的变化规律.方法:采用高效液相色谱法,测定五味子醋制前后饮片中木脂素及有机酸类成分的含量变化.结果:醋制后五味子饮片中木脂素类成分含量明显降低,有机酸类成分明显增加,二者比例由1∶16(生品)变为1∶21(醋品).结论:五味子醋制后主要药理作用的改变不仅与木脂素或有机酸成分含量的增减有关,更重要的是2类成分的量比关系发生了明显的变化,对于揭示五味子醋制原理和物质基础与药理改变的相关性具有重要意义.     

黄连生物碱在大鼠在体单向肠灌流模型中的转运特性研究

目的:研究黄连中小檗碱和巴马汀在大鼠肠道的吸收动力学特征.方法:采用大鼠单向肠灌流模型,利用HPLC法分别测定小檗碱和巴马汀的量,计算2种生物碱的肠吸收速率常数(Ka)和表观吸收系数(Papp),分析肠吸收特征.结果:小檗碱和巴马汀在各肠段的吸收有显著性差异,小檗碱( 50 mg·L-1)的Papp为回肠＞十二指肠＞空肠＞结肠,巴马汀(160 mg·L-1)的Papp为回肠＞结肠＞空肠＞十二指肠;质量浓度对小檗碱和巴马汀在同肠吸收的Papp有显著影响;相当浓度的小檗碱和巴马汀的在不同的灌流液中灌流Ka为戊己丸配伍方＞黄连提取物＞标准品.结论:小檗碱和巴马汀在大鼠各肠段均有吸收,在回肠段吸收最好;其吸收不是以简单的被动扩散起作用;以戊己丸和黄连粗提取物给药时可显著促进黄连中生物碱的肠吸收.     

Effects of unprocessed versus vinegar-processed Schisandra chinensis on the activity and mRNA expression of CYP1A2, CYP2E1 and CYP3A4 enzymes in rats

Ethnopharmacological relevance

Schisandra chinensis (SC) is a well-known traditional Chinese herbal medicine that has been used in clinical practices for thousands of years. However, the differences between the effects of unprocessed and vinegar-processed Schisandra chinensis (VSC) on cytochrome P450 (CYP450) activities are poorly understood.

Aim of the study

To evaluate the differences between processed and unprocessed SC on the metabolism of CYP1A2, CYP2E1 and CYP3A4 substrates in rats using a cocktail method based on a developed and validated HPLC method. We also investigate the influence of processing on the levels of CYP mRNA.

Materials and methods

Three probe substrates (theophylline, dapsone and chlorzoxazone) were delivered simultaneously into rats treated with single or multiple doses of processed or unprocessed SC extract. The plasma concentrations of the three probes were profiled by HPLC, and their corresponding pharmacokinetic parameters were calculated. Real-time RT-PCR was performed to determine the effects of processed and unprocessed SC on the mRNA expression of CYP1A2, CYP2E1 and CYP3A4 in the liver.

Results

Treatment with single or multiple doses of either extract of SC induced CYP3A4 enzyme activity and inhibited CYP1A2 enzyme activity in rats. Furthermore, the inhibitory effect of SC was more potent after vinegar processing than without vinegar processing. CYP2E1 enzyme activity was induced after treatment with a single dose but was inhibited after multiple doses. The mRNA expression results were in accordance with the pharmacokinetic results.

Conclusions

These results provide useful scientific data for the safe clinical application of either extract of SC in combination with other drugs, which should lack the side effects induced by other herb–drug interactions.     

黄连-大黄合煎蒽醌类成分溶出变化

目的: 分析大黄-黄连不同配伍比例合煎时大黄中蒽醌类成分的溶出变化。方法: 水煎液经盐酸加热水解、三氯甲烷萃取等方法处理后,用RP-HPLC分析大黄单煎和配伍合煎液中5个蒽醌成分的溶出。结果: 黄连-大黄5个配伍比例(1∶2~2∶1之间)中芦荟大黄素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等4个蒽醌类成分有不同程度溶出增加,大黄酸有较大幅度的溶出降低。结论: 在特定配伍比例范围内,配伍黄连对大黄中主要蒽醌成分有助溶作用。     

洪雅黄连生物量动态变化及有效成分积累的研究

目的:研究四川洪雅地区黄连(味连)根茎生物量和有效成分积累的动态变化规律,为确定最佳采收期,实现洪雅地区黄连的GAP种植和质量控制提供理论依据.方法:定期定点采集三至五年生黄连样品,分析黄连根茎生物量变化,采用高效液相色谱法(HPLC)测定根茎药根碱、非洲防己碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的含量.结果:随着黄连生长年限的增长,根茎生物量在不断增加,以四年生黄连根茎生物量增长较快,在10月份达到最高.黄连根茎中有效成分的积累有一定规律.四年生黄连的6种生物碱和总碱要高于三年和五年生黄连.不同月份间,四年生黄连根茎中非洲防己碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱和总碱的含量无显著差异.结论:根据黄连根茎生物量变化及有效成分的积累动态规律,洪雅地区黄连的最佳采收期为10月份的四年生黄连根茎.     

苦参、藜芦合用对大鼠肝P450酶活性及mRNA表达的调控作用

目的:研究中药十八反中苦参与藜芦合用对P450同工酶在酶活性及mRNA水平的调控作用。方法:采用紫外分光光度法测定大鼠肝微粒体细胞色素P450与细胞色素b5含量及氨基比林N-脱甲基酶(APND)、对硝基苯酚羟化酶(pNPH)活性。采用RT-PCR检测大鼠肝脏中5种P450同工酶CYP1A1,CYP2B1/2,CYP2C11,CYP2E1,CYP3A1 mRNA的表达。结果:苦参及其与藜芦合用可明显降低P450蛋白含量及b5的含量,并能使APND活性下降。在mRNA水平上,藜芦可诱导CYP2C11的基因表达,与苦参合用后却使得CYP2C11的表达下降。各单药及配伍组对CYP1A1基本无表达。苦参可诱导CYP2B1/2的基因表达,而苦参-藜芦配伍组却显示了微弱的抑制作用。苦参与藜芦合用及各单药对CYP3A1的表达有一定的抑制作用。结论:苦参与藜芦配伍前后存在对CYP及其亚型的调控作用,可能存在基于药物代谢酶机制的相反作用,需进一步结合代谢研究加以综合分析,阐明相反作用的机制。