高转移胃癌细胞株的建立及其肿瘤干细胞的生物学特征

目的:建立高转移胃癌细胞株并研究其肿瘤干细胞生物学特征.方法:将胃癌细胞株SNU-5接种至裸鼠皮下成瘤后,取肺部转移灶,通过机械分离法并反复接种裸鼠,获取细胞株SNU-5-V12,采用无血清悬浮培养及PKH26染色确定SNU-5-V12细胞中存在肿瘤干细胞.流式细胞术分析SNU-5和SNU-5-V12细胞中CD44肿瘤干细胞标志物表达情况,分选SNU-5和SNU-5-V12细胞中CD44+细胞并进行体外生物学特征研究及裸鼠致瘤实验.结果:建立高转移SNU-5-V12细胞株,SNU-5-V12细胞无血清悬浮培养11d后形成的细胞球体中存在单个PKH26阳性细胞.流式分析显示高转移SNU-5-V12细胞中干细胞标志物CD44比例显著高于SNU-5细胞[(72.9±1.5)％ vs (8.96±1.2)％],且SNU-5-V12的CD44+细胞比SNU-5的CD44+细胞具有更强的自我更新能力[成球率(27.8±1.7)％ vs (20.4±1.0)％,P＜0.01],转移细胞数增加1.64倍[(329.5±7.5) vs (200±2.0)个,P＜0.01],耐药能力也显著增强[IC50:(0.286 vs 0.196)μ∥ml,P＜0.01],裸鼠皮下接种2×102个CD44+ SNU-5-V12细胞2个月2/6裸鼠可致瘤,而CD44+ SNU-5细胞需要接种2×104个细胞2个月时仅1/6裸鼠致瘤.结论:获得高转移胃癌细胞株SNU-5-V12,其CD44+细胞体内外功能显著增强,为胃癌干细胞的靶向治疗提供有价值的细胞模型.     

CD44V6和E-cadherin表达与胃癌转移及预后的关系

目的探讨胃癌中CD44V6和E-cadherin(E-cad)蛋白表达的意义.方法应用免疫组化Envision法检测80例胃癌中CD44V6和E-cad蛋白的表达,并分析其与临床病理参数的关系.结果80例胃癌中,CD44V6蛋白阳性率77.5%,显著高于正常胃黏膜组织的阳性率(P＜0.001);E-cad蛋白在胃癌中阳性率为46.3%,显著低于正常胃黏膜组织的阳性率(P＜0.001);CD44V6高表达和E-cad低表达与胃癌TNM分期、浆膜浸润、淋巴结转移呈显著正相关(P＜0.05),而与年龄和组织学类型无关;CD44V6和E-cad表达呈负相关(P＜0.001).结论CD44V6阳性和E-cad阴性表达与胃癌浸润转移密切相关,CD44V6阳性和E-cad阴性者更具有侵袭性和转移性.联合检测CD44V6和E-cad有助于判断胃癌的预后.     

CD90和CD44分子在人肝癌组织中的表达

目的 探讨肝癌干细胞标志物CD90和CD44分子在人肝癌组织中的表达.方法 采用实时荧光定量PCR和免疫组化法检测40例人肝癌组织及其40例相应远端癌旁组织中CD90和CD44基因mRNA和蛋白的表达.结果 CD90和CD44基因mRNA在肝癌组织中的表达高于远端癌旁组织,差异有统计学意义(P＜0.05);CD90和CD44阳性分子定位于癌细胞膜与细胞浆,CD90和CD44细胞在肝癌组织中的阳性表达率分别为82.5％(33/40)和77.5％(31/40),在远端癌旁组织中分别为17.5％(7/40)和12.5％(5/40),两者差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 CD90和CD44分子在人肝癌组织中高表达,但低表达于相应远端癌旁组织,CD90和CD44分子可能与肝癌的发生有关.     

原代胃癌干细胞CD44表达意义探讨

目的 肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)在恶性肿瘤的发生发展中起着重要作用,且是肿瘤耐药及复发的根源.本研究探讨CSCs表面标记蛋白CD44在分离及鉴定胃癌干细胞中的重要作用.方法 收集2015-11-06-2015-12 01华中科技大学同济医学院附属同济医院3例胃癌患者手术标本.首先采用胶原酶消化法获取胃癌细胞,部分细胞分别贴壁及悬浮培养,并采用免疫荧光及流式分析的方法检测胃癌球形体中CD44的表达情况.部分细胞采用流式细胞仪分选得到CD44+及CD44胃癌细胞,并通过无血清悬浮培养法比较两群细胞的球形体形成能力.结果 免疫荧光显示,CD44蛋白在球形体中高表达;流式分析发现,贴壁的原代胃癌细胞中CD44+细胞的比例为(30.73±7.6)％,而球形体中CD44+细胞的比例高达(56.4±5.58)％,差异有统计学意义,P=0.009.球形体形成实验结果表明,与CD44-细胞相比,CD44+胃癌细胞具有更强的球形体形成能力,1 000个CD44+及CD44-胃癌细胞分别形成(14.33±2.52)和(1.67±0.58)个球形体,差异有统计学意义,P=0.001.通过比较发现,球形体培养对胃癌干细胞的富集效率为0.3％,而CD44对胃癌干细胞的富集效率为1.4％.结论 CD44是胃癌干细胞的表面标记蛋白,其可能成为胃癌靶向治疗的可靠靶标.     

CD44在胃癌中的表达及其临床意义

肿瘤的浸润转移是肿瘤细胞与宿主间复杂、多步骤相互作用的结果。Ｌｉｏｔｔａ［１］首先提出浸润转移的三步学说：即粘附、降解和移动。其中粘附是指肿瘤细胞通过自身细胞膜表面的粘附受体与细胞外基质成分间的相互作用。ＣＤ４４是近年来研究较多的一类粘附因子,为分布极为广泛的一组细胞表面跨膜糖蛋白,参与细胞与细胞,细胞与基质之间的特异性粘连。其转录子根据所含外显子可分为两种类型：标准型ＣＤ４４（ｓｔａｎｄａｒｄｆｏｒｍＣＤ４４,ＣＤ４４ｓ）和变异型ＣＤ４４（ｖａｒｉａｎｃｅｆｏｒｍＣＤ４４,ＣＤ４４ｖ）。ＣＤ４…     

胃癌组织及区域淋巴结MUC1、CD44v6、nm23表达与胃癌侵袭转移及预后的关系

背景与目的:研究证实胃癌浸润深度和淋巴结转移是多基因及其蛋白表达产物协调作用的结果,寻找与胃癌转移相关的分子生物学标志物有助于胃癌的研究。本实验旨在探讨胃癌组织及区域淋巴结中MUC1、CD44v6、nm23表达与胃癌侵袭转移及预后的关系。方法:采用SP免疫组织化学方法对110例胃癌组织及613枚区域淋巴结中的MUC1、CD44v6、nm23基因蛋白的表达进行检测。结果:①胃癌组织中的MUC1蛋白阳性表达在低分化癌组、浸润型组、T3+T4组、淋巴结转移组、Ⅲ～Ⅳ期组、生存期<5年组分别为84.6%、88.1%、87.3%、91.7%、94.4%、95.5%,CD44v6分别为79.5%、74.6%、79.4%、81.7%、87.0%、87.9%,nm23分别为38.5%、32.2%、30.2%、25.0%、25.9%、18.2%。MUC1和CD44v6表达低分化癌组显著高于高、中分化癌组(78.9%vs57.7%),浸润型组高于局限型组(72.6%vs54.9%),T3+T4组高于T2组(72.3%vs46.8%),淋巴结转移组高于无淋巴结转移组(68.0%vs46.0%),TNMⅢ～Ⅳ期组高于Ⅰ～Ⅱ期组(67.9%vs44.6%),生存期<5年组高于≥5年组(59.1%vs31.8%),各组间差异均具有显著性(P<0.01或P<0.05)。而nm23除分化程度、Borrmann分型不同的两组之间差异无显著性外,T3+T4组低于T2组(51.1%),有淋巴结转移组低于无淋巴结转移组(56.0%),TNMⅢ～Ⅳ期组低于Ⅰ～Ⅱ     

一株胃癌干细胞功能性单克隆抗体的鉴定及功能研究

[目的]从抗人胃癌干细胞单克隆抗体杂交瘤库中筛选鉴定识别胃癌干细胞的单克隆抗体,并证明其具有抑制胃癌干细胞自我更新能力和侵袭功能的功能性单抗,为靶向人胃癌干细胞治疗胃癌提供有治疗潜能的单抗候选药物。[方法]采用无血清培养、PKH26染色及流式细胞术等方法确定人胃癌细胞系SNU-5中存在肿瘤干细胞,可作为研究抗人胃癌干细胞单抗的细胞模型。应用双色免疫荧光、流式细胞分选等技术分析鉴定单克隆抗体25G5是识别胃癌干细胞的单克隆抗体。用肿瘤干细胞的成球生长实验、Transwell侵袭实验及耐药性实验研究分析25G5单抗对胃癌干细胞功能的影响。[结果]SNU-5细胞在无血清培养基中存活并增殖成球形生长,SNU-5球体细胞中表达胃癌干细胞标志物CD44~+和CD90~+的细胞比例分别为72.4%和8.55%,较亲本细胞分别提高了21.3倍和2.4倍,表明SNU-5中存在有CD44~+、CD90~+的胃癌干细胞。细胞免疫荧光结果显示25G5单抗识别的抗原分子与CD44、CD90胃癌干细胞标志物共染表达于胃癌干细胞膜上。流式细胞术分选的25G5~+细胞的成球率为(21.4±0.3)%,显著高于25G5-细胞(12.3±0.7)%和亲本细胞(16.1±1.0)%。Transwell侵袭实验、细胞耐药性实验和动物体内致瘤实验结果显示25G5~+细胞的侵袭能力和耐药能力也显著高于25G5-细胞和亲本细胞,表明25G5单抗识别的细胞是具有自我更新、高侵袭、高耐药性特征的肿瘤干细胞。体外功能研究发现,单抗25G5能显著抑制SNU-5胃癌细胞在无血清培养液中的成球生长,抑制率可达46.4%,也能显著地抑制SNU-5成球细胞(Sphere细胞)的侵袭,抑制率达58.4%。单抗25G5是一株能显著抑制SNU-5中肿瘤干细胞自我更新和侵袭能力的功能性抗人胃癌干细胞单抗。[结论]单克隆抗体25G5是一株抗胃癌干细胞的功能性单抗,为胃癌干细胞靶向治疗的候选抗体药物。     

干细胞标志物CD44与胃癌临床病理特征的相关性研究

目的:探讨干细胞标志物CD44在胃癌组织中的表达状态及其与胃癌临床病理特征之间的关系.方法:选取经病理证实胃癌患者共40例,采用石蜡包埋连续切片、免疫组化SP法检测胃癌组织中CD44的表达,并分析其与临床病理特征间的相关性.结果:胃癌组织中CD44的表达与肿瘤分化程度、浸润程度、淋巴结转移情况、TNM分期相关(P＜0.05),而与肿瘤部位、组织类型无显著相关性(P＞0.05).结论:胃癌组织中CD44的表达与肿瘤TNM分期、分化程度、浸润程度、淋巴结转移情况密切相关,可能为胃癌干细胞与临床相关性研究提供依据,也可能有助于胃癌预后的判断并对治疗提供参考.     

胃癌淋巴结转移与预后的关系

目的：探讨胃癌淋巴结转移与预后的关系,为胃癌的手术治疗提供依据。方法：回顾性分析2000年-2004年间住院并行手术治疗的胃癌患者361例,建立数据库用SPSS13．0统计软件分析。结果：Logistic多因素回归分析显示胃癌肿瘤大小、浸润深度与淋巴结转移有关（P〈0．01）;Kaplan—Meier生存分析显示淋巴结转移与胃癌预后相关（P〈0．05）;而在相同浸润深度时,淋巴结转移与胃癌预后无关（P〉0．05）。结论：对于浸润深度相同,而淋巴结转移程度不同的胃癌,积极手术治疗能取得同样的治疗效果。     

胃癌细胞中CD44阳性细胞具有肿瘤干细胞特征

目的:在原位移植瘤模型上验证CD44+胃癌细胞的肿瘤干细胞特性.方法:选取MKN-45胃癌细胞株,通过流式细胞仪分选为CD44+和CD44-两组,以未分选的MKN-45胃癌细胞为对照.体外部分,通过MTT法和克隆形成实验验证CD44+胃癌细胞体外增殖能力,通过Transwell实验验证其侵袭力.体内部分,将上述细胞通过原位移植法接种至裸鼠,同等条件下饲养8周后处死裸鼠,检验其成瘤率;分离肝脏,检测肝转移瘤数目;H-E染色观察胃肿瘤和肝转移瘤形态;通过免疫荧光法检测两处肿瘤CD44+细胞数量.结果:CD44+胃癌细胞相比CD44‘胃癌细胞具有明显增强的细胞增殖力(P＜0.01)和侵袭力(P＜0.01),更容易成瘤且更容易发生转移(P＜0.05),但和MKN-45未分选组相比差异无统计学意义(P＞0.05).不论是在原发肿瘤还是转移瘤中,CD44+胃癌细胞均能产生CD44‘细胞,但后者不能产生CD44+细胞.结论:CD44+ MKN-45胃癌细胞相比CD44-胃癌细胞具备更强的增殖力和侵袭力、更容易成瘤和发生转移,符合肿瘤干细胞部分特征,值得进一步研究.     

Expression of CD44v6 in advanced gastric cancer and its relationship to hematogenous metastasis and long-term prognosis

BACKGROUND AND OBJECTIVES: Variants of CD44 have been proposed to be important in promoting tumor progression and metastasis. We attempted to determine the expression of CD44v6 product in advanced gastric cancer and to evaluate its prognostic value. METHODS: The expression of CD44v6 was analyzed immunohistochemically in advanced gastric cancers using monoclonal antibody, 44-2V. We investigated the relationship between CD44v6 expression and prognosis in 201 gastric cancer patients. RESULTS: Ninety-five (47.3%) of 201 cancer tissues expressed CD44v6. The expression of CD44v6 protein was significantly higher in differentiated, adenocarcinoma than in diffuse type carcinoma. The CD44v6-positive cancers were more frequently associated with hematogenous metastasis. There was no significant correlation between CD44v6 immunoreactivity, and prognosis among the combined cases. Among patients with differentiated adenocarcinoma, however, the prognosis was significantly poorer in patients with CD44v6-positive tumors than in those with CD44v6-negative tumors. CONCLUSIONS: CD44v6 protein may have an important role in hematogenous metastasis, and may be a biologic marker of prognostic significance in differentiated type gastric cancers.     

CD34+ CD90+ cells and late hematopoietic reconstitution after autologous peripheral blood stem cell transplantation

Autologous peripheral blood stem cell transplantation (PBSCT) has been demonstrated to result in rapid, stable long-term engraftment. However, there has been considerable debate concerning the cells responsible for early and late hematopoietic reconstitution after PBSCT. Recently, CD34⁺ hematopoietic stem and progenitor cells have been clearly divided into two subpopulations by flow cytometry; namely undifferentiated pluripotent stem cells and differentiated committed progenitor cells. However, only a few studies have defined which subset contained in graft products might be the most predictive for late hematopoietic reconstitution after PBSCT. In this review, we present updated information regarding the relationships between the number of infused CD34⁺ cells or their immature subsets such as CD34⁺CD90⁺ cells and the late hematopoietic reconstitution after PBSCT, and discuss the threshold dose of CD34⁺CD90⁺ cells required for sustained long-term engraftment.     

抗HSP90抗体通过内化eHSP90抑制人胃癌干细胞并提高顺铂的抗癌效果

目的：探索抗HSP90单克隆抗体28C10通过靶向肿瘤干细胞促进顺铂(cisplatin,DDP)对人胃癌细胞PAMC82恶性生物学行为的抑制效果及其可能的作用机制。方法:28C10单独或与DDP联合处理人胃癌细胞PAMC82,采用不同实验方法检测该细胞的无血清成球能力、迁移和侵袭能力与克隆形成能力,CCK-8法检测28C10对PAMC82细胞恶性生物学行为和协同DDP抗癌能力的影响。采用细胞免疫荧光及流式细胞术检测PAMC82细胞中HSP90及eHSP90(extracellular HSP90)的表达、定位、eHSP90⁺亚群比例,以及28C10处理后对ALDH⁺、CD44⁺、eHSP90⁺细胞亚群的影响。采用WB实验检测28C10作用后PAMC82细胞中HSP90、干性相关蛋白以及PI3K/AKT/mTOR信号通路蛋白表达的变化。结果：胃癌细胞PAMC82膜表面表达eHSP90,具有2%～3%的eHSP90⁺细胞亚群,且eHSP90⁺细胞多为与ALD...     

CD10-positive stromal cells in gastric carcinoma: correlation with invasion and metastasis

BACKGROUND: CD10 is a cell surface metalloproteinase expressed by a variety of normal cell types, including lymphoid precursor cells, germinal center B lymphocytes and some epithelial cells. Although accumulating data indicate that CD10 expression by stromal cells is involved in colorectal carcinogenesis and it is a novel prognostic factor in breast carcinoma, CD10-positive stromal cells and their correlation with invasion and metastasis have not been studied in gastric carcinoma. The aim of this study was to immunohistochemically investigate the rate of CD10 production in the stromal cells in our gastric carcinoma collection and clarify its correlation with invasion and metastasis. METHODS: One hundred and sixteen cases of gastric carcinoma were analyzed immunohistochemically using a monoclonal CD10 antibody (clone 56C6). RESULTS: The expression of CD10 by stromal cells was significantly higher in the primary gastric carcinomas than in normal and dysplasia mucosas (P = 0.014). More frequent expression of CD10 by stromal cells was detected in differentiated carcinoma than in undifferentiated carcinoma (P < 0.001). CD10 expression by the stromal cells was associated with depth of invasion and lymph node metastasis (P < 0.05). Stromal CD10 expression was lower in gastric carcinoma without vessel invasion than in those with vessel invasion (P = 0.001). However, no association was observed between stromal CD10 expression and TNM stage. In differentiated carcinoma, stromal CD10 expression was associated with the depth of invasion, lymph node metastasis, vessel invasion and TNM stage (P < 0.01). CONCLUSION: These results indicate that stromal cells expressing CD10 may play an important role in gastric carcinogenesis. CD10 expression by stromal cells seems to promote invasion and metastasis of differentiated gastric carcinoma.     

肿瘤干细胞标志物与胃癌关系的研究进展

肿瘤干细胞（cancer stem cell,CSCs）是理论认为肿瘤中存在一小部分细胞具有自我更新和多向分化的潜能,具有特异性表面标志的细胞.目前已经从乳腺癌、结直肠癌、皮肤癌等多种恶性肿瘤中鉴定分离出了各自的肿瘤干细胞标志物.本文就与胃癌相关的干细胞标志物进行综述.