恶性乳腺癌组织中PTEN的表达及其与增殖细胞核抗原的相关性研究

目的 探讨PTEN在恶性乳腺肿瘤组织中的表达及其与PCNA的相关性。方法应用免疫组化SP法检测92例乳腺癌组织中和18例癌旁正常组织中PTEN、PCNA表达。结果乳腺癌组织中PTEN高表达率为54．3％（50／92），明显低于癌旁正常组织。PTEN表达与淋巴结转移、临床分期、组织学分级及雌激素受体相关（P〈0．05）。乳腺癌组织中PTEN的表达与PCNALI呈负相关（r=-0．425，P〈0．05）。PTEN高表达的乳腺癌患者术后5年无病生存率（DFS）明显高于PTEN低表达者（P〈0．05）。结论PTEN表达与乳腺癌发生、发展及预后密切相关，表达缺失可促进肿瘤细胞增殖，提示检测抑癌基因PTEN表达可作为判定乳腺癌恶性程度和预后的有效生物学指标。     

乳腺癌组织中survivin及其剪接体与VEGF的表达及临床意义

目的 研讨抗凋亡蛋白survivin及其剪接体survivin—△Ex3、survivin-2B与血管内皮生长因子（VEGF）在乳腺癌组织中表达情况及其与临床病理学指标的关系。方法以RT—PCR法检测100例乳腺癌及癌旁5cm正常乳腺组织标本中survivin及其剪接体survivin—△Ex3、survivin-2B与VEGF基因的mRNA表达,半定量分析电泳结果。以免疫组化法检测乳腺癌石蜡标本中的雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和HER-2基因状态。结果Survivin及其剪接体survivin—△Ex3、survivin-2BmRNA在乳腺癌组织中均有较高表达,在癌旁5cm正常乳腺组织中均低表达,差异有统计学意义（P〈0．05）;VEGFmRNA在乳腺癌组织中均有较高表达,在正常乳腺组织中均低表达,差异有统计学意义（P〈0．05）;淋巴结转移与survivin-△Ex3、survivin-2B的表达相关（P〈0．05）。结论Survivin及其剪接体survivin—△Ex3、sur-vivin-2B与VEGF的表达与乳腺癌发生、发展有关,与其他预后指标ER、PR、HER-2等的联合检测可望对患者的预后作出更准确的预测。     

CCL5及其受体在乳腺癌组织中的表达及其意义

目的检测趋化因子CCL5及其受体在浸润性乳腺癌组织中的表达并探讨其临床意义。方法应用SYBR Green Ⅰ real time-PCR定量检测33例浸润性乳腺癌患者癌组织及其癌旁组织的CCL5及其受体CCR1、CCR3、CCR5 mRNA的表达。结果各期癌组织CCR1及CCR3 mRNA的相对表达量与癌旁正常组织差异无统计学意义（P〉0．05），CCR5及CCL5 mRNA的相对表达量均高于癌旁正常组织（P〈0．05），Ⅰ期和Ⅱ期乳腺癌组织CCL5 mRNA的表达量差异无统计学意义（P〉0．05），Ⅲ期乳腺癌组织CCL5 mRNA的相对表达量为2．477，Ⅳ期乳腺癌组织CCL5 mRNA的相对表达量最高（3．710）。CCR5及CCL5 mRNA的表达高度相关（Pearson相关系数为0．971）。结论趋化因子CCL5及其受体CCR5 mRNA在Ⅳ期乳腺癌组织中的表达水平最高，CCL5可能以自分泌方式与受体CCR5结合促进乳腺癌生长和转移。     

瘦素及瘦素受体在乳腺癌中的表达及临床意义

目的 探讨瘦素及其受体mRNA及蛋白的表达在乳腺癌发生、发展中的意义。方法 采用巢式逆转录-聚合酶链反应〈RT-PCR）和免疫组织化学方法检测39例乳腺癌及其周围正常乳腺组织瘦素及其受体的mRNA及蛋白表达，分析乳腺癌组织瘦素与瘦素受体表达的相关性及其与临床病理之间的关系。结果 瘦素mRNA及蛋白在正常乳腺及乳腺癌组织阳性表达率均为100．00％；瘦素受体mRNA和蛋白在乳腺癌组织阳性表达率为74．40％。正常乳腺组织mRNA阳性表达率7．69％；瘦素及其受体在乳腺癌组织的表达量高于正常组织。差异具有统计学意义（P〈0．01）；瘦素受体的表达与瘦素表达明显相关（P〈0．01）。瘦素及瘦素受体高表达与乳腺癌的转移及浸润明显相关（P〈0．01）。结论 瘦素在乳腺癌的发生发展中可能起着促进作用，瘦素及其受体表达情况可以作为乳腺癌诊断或预后的指标。     

新基因BC047440在多种肿瘤组织中的表达及其意义

目的 探讨新基因BC047440在多种恶性肿瘤及对应癌旁组织中的表达，对该基因的癌表达谱进行初步研究。方法 采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）半定量检测肝癌、胆管癌、胃癌、大肠癌、神经胶质瘤、乳腺癌及其相对应的癌旁组织中BC047440 mRNA的表达。结果在48例肿瘤中，BC047440基因的mRNA表达在肝癌、胃癌、胆管癌、大肠癌中较其对应癌旁组织高，差异有统计学意义（P〈0．05或0．01）；在神经胶质瘤及瘤旁脑组织中均呈高表达，表达量差异无统计学意义（P〉0．05）；在乳腺癌及其对应癌旁组织中不表达或低表达（P〉0．05）。临床病理学分析提示，BC047440基因的表达水平与肝癌及胃肠道肿瘤的生长、侵袭和转移能力有关。结论 BC047440基因在肝癌、胃癌、胆管癌、大肠癌及神经胶质瘤中广泛高表达，在这些肿瘤发病过程中可能是一个通过表达升高而发挥功能的结构基因。     

乳腺癌端粒酶逆转录酶mRNA和BRCA1蛋白表达及其相互关系

目的探讨人乳腺癌组织中端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA和BRCA1蛋白的表达及其二者间的关系。方法采用RT—PCR和免疫组化方法分别检测43例乳腺癌组织和40例乳腺癌癌旁组织中的hTERT mRNA和BRCA1蛋白的表达。结果乳腺癌组织中hTERT mRNA和BRCA1蛋白表达阳性率分别为72．1％（31／43）和34．9％（15／43），hTERT mRNA和BRCA1蛋白在乳腺癌组织及其癌旁组织中表达[5．0％（2／40），77．5％（31／40）]的差异有统计学意义（P〈0．05）；在乳腺癌组织中，hTERT mRNA和BRCA1蛋白的表达呈负相关（r=-0．995，P〈0．01）。结论BRCA1蛋白弱表达与乳腺癌hTERT转录密切相关，可能参与了乳腺癌发生机理。     

乳腺癌组织中PSAmRNA的表达及其与ER亚型表达的关系

目的 探讨前列腺特异抗原（PSA）mRNA和雌激素受体（ER）β亚型在乳腺癌组织中的表达及其与不同雌激素受体亚型表达之间的关系.方法 检测35例乳腺癌和12例癌旁乳腺组织及10例乳腺纤维腺瘤组织中的PSA mRNA和ERβ mRNA表达;35例乳腺癌组织ERα和PR蛋白的表达,并分析乳腺癌组织PSA mRNA表达与雌激素受体亚型和PR表达之间的关系.结果 PSA mRNA在乳腺癌组织中的表达水平明显低于癌旁乳腺组织和乳腺纤维瘤组织（P均=0.00）.ERβ mRNA在乳腺癌中的表达水平明显低于癌旁乳腺组织和乳腺纤维腺瘤组织（P均=0.00）.PSA mRNA表达阳性者ERβ mRNA表达水平明显低于PSA mRNA表达阴性者,差异有显著性（P=0.038）.ERα和PR阳性表达的乳腺癌组织中PSA mRNA表达高于ER和PR阴性者,差异有显著性（P=0.001,0.004）.结论 PSA和ERβ基因在乳腺癌中的表达下调.PSA可能是反映乳腺癌组织中功能性甾体类激素受体的一个重要指标.     

乳腺癌中生存蛋白基因的表达及其意义

目的研究观察乳腺癌中生存蛋白（survivin）基因的表达以及其与乳腺癌的病理学特征之间的关系。方法应用免疫组织化学SP法回顾性分析和检测66例乳腺癌survivin基因的表达并与乳腺纤维腺瘤和乳腺癌旁正常乳腺组织相比较。结果survivin在乳腺癌组织中的阳性表达率明显高于乳腺纤维腺瘤组织和正常乳腺组织（P〈0．025）。survivin在乳腺癌有局部淋巴结转移组的阳性率明显高于无淋巴结转移组（P〈0．01），survivin在不同病理类型和TNM分期间的阳性率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论survivin基因在乳腺癌的转移过程中发挥重要作用。其对判定乳腺癌病灶的潜在转移能力和患者病情发展及预后有一定的参考价值。     

大肠癌中脆性组氨酸三联体基因和Survivin基因的表达及临床意义

目的检测脆性组氨酸三联体（FHIT）基因和Survivin基因在大肠癌、正常大肠黏膜上皮组织中的表达，探讨FHIT基因和Survivin基因与大肠癌．发生发展及转移的关系，探讨其与大肠癌临床病理特征的关系。方法利用免疫组织化学法对56例大肠癌和33例正常大肠黏膜组织检测FHIT、Survivin基因的表达。结果FHIT蛋白在33例癌旁正常大肠黏膜上皮和56例发癌中的阳性表达率分别为93．9％、48．2％，原发癌中FHIT蛋白的阳性表达率明显低于癌症正常大的黏膜上皮（P〈0，01）。Survivin在56例大肠癌的表达率为48．2％，显著高于33例癌症正常大肠黏膜上皮（P〈0．01）。结论FHIT基因表达的下调与Survivin基因表达的上调可能促进了大肠癌的发生。这样临床上通过检测FHIT、Survivin的基因的表达率对患者的预后有重要的指导意义。     

转移抑制基因Kiss-1和KAI-1在胃癌组织中表达的原位杂交研究

目的研究胃癌及其癌旁组织Kiss-1和KAI-1转移抑制基因信使核糖核酸（Kiss-1mRNA和KAI-1 mRNA）的表达水平及其临床意义。方法将49例胃癌组织和20例癌旁组织常规制作石蜡包埋切片．用Kiss-1 mRNA和KAI-1 mRNA染色方法作为原位杂交染色法。结果胃癌组织中Kiss-1 mRNA和KAI-1 mRNA表达阳性率明显低于癌旁组织（P〈0．01）；正常至轻度不典型增生癌旁组织两者Kiss-1 mRNA和KAI-1 mRNA表达阳性率及其评分明显高于中至重度不典型增生病例（P〈0．05，P〈0．01）。侵袭深度T1～T2、区域淋巴结无转移、第1站淋巴结转移及无远处转移的胃癌Kiss-1 mRNA和KAI-1 mRNA表达阳性率及其评分明显高于侵袭深度T3～T4、区域淋巴结有转移、第2站或第3站淋巴结转移及有远处转移的病例（P〈0．05，P〈0．01）；但两者的表达与胃癌其他临床病理特征无明显关系。胃癌组织中Kiss-1 mRNA表达评分与KAI-1 mRNA表达评分呈密切正相关（r=0．53，P〈0．01）。结论Kiss-1 mRNA和KAI-1 mRNA表达可能是反映胃癌侵袭和转移潜力及预后的重要生物学标记物，对胃良性病变者检测Kiss-1 mRNA和／或KAI-1 mRNA可能对早期发现及预防胃癌发生有重要临床意义。     

胰腺癌中VEGF mRNA，bFGF mRNA和PDGF mRNA及相应受体的表达与意义

目的 探讨血管内皮生长因子（VEGF）mRNA,碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)mRNA和血小板衍生生长因子（PDGF）mRNA及相应受体（flt-1,bFGFR1,PDGFR)与肿瘤微血管（microressel,MV)生成在胰腺癌生成、侵袭、转移中的作用及它们的相互关系。方法 应用原位分子杂交技术检测51例胰腺癌及32例急、慢性胰腺炎病人病变组织中VEGF mRNA,bFGF mRNA,PDGF mRNA的表达,应用免疫组化方法检测相应病例中flt-1,bFGFR,PDGFR的表达和肿瘤微血管计数（MVC）。分析其表达与胰腺癌病理参数及预后的关系。结果 胰腺癌中3种血管生长因子mRNA及受体阳性率明显高于包慢性胰腺炎（P＜0．05或P＜0．01）,它们的高表达与胰腺癌的分化程度呈负相关（P＜0．05）;与肿瘤的浸润、淋巴及血道转移（肿瘤的进展阶段）呈正相关（P＜0．05或P＜0．01）,而与肿瘤大小无关;癌组织中MVC明显高于急慢性胰腺炎（P＜0．01）;3种血管因子及受体与胰腺癌MVC呈正相关（P＜0．05或P＜0．01）;癌组织中3种血管因子mRNA及bFGFR与术后生存率呈显著负相关（P＜0．01）。结论 VEGF mRNA,bFGF mRNA,PDGF mRNA及受体的表达及MVC的测定可作为判定胰腺癌生长、转移及预后的重要指标,阻断3种生长因子及受体有助于胰腺癌的治疗。     

hTERT mRNA和MDR mRNA在人肝癌中的表达及其意义

目的　探讨hTRTmRNA及MDRmRNA在人肝细胞肝癌 (HCC )组织中的表达及其意义。方法　检测 5 8例HCC患者癌组织及癌旁组织中hTERTmRNA和MDRmRNA的表达情况。结果　在 5 8例肝癌患者癌组织及其癌旁组织中 ,hTERTmRNA阳性率分别为 44 .83 % ( 2 6/5 8)和 5 .17% ( 3 /5 8) ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;MDRmRNA阳性率分别为 60 .3 4% ( 3 5 /5 8)和 3 2 .76% ( 19/5 8) ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。hTRTmRNA ,MDRmRNA在人肝癌组织中的检出率与临床分期、肝外转移、术后复发、肿瘤大小等明显相关 (均P <0 .0 5 ) ,而与肿瘤数目、血清AFP水平等无明显相关 (P >0 .0 5 )。MDRmRNA检出率与术前化疗明显相关 (P <0 .0 1) ,但与门静脉癌栓无关 (P >0 .0 5 ) ;而hTERTmRNA与术前化疗无相关 (P >0 .0 5 ) ,但与门静脉癌栓有关 (P <0 .0 5 )。结论　hTERTmRNA和MDRmRNA可能与肝细胞的恶性转化及术后复发有关 ,故可望作为预测肝癌复发、转移的参考指标和肝癌治疗的靶基因     

CD24mRNA和PDGF-D mRNA在结直肠癌组织中的表达及意义

目的检测CD24mRNA和PDGF-D mRNA在结直肠癌组织及切缘正常组织的表达情况,探讨两者与结直肠癌发生发展的关系。方法收集54例结直肠癌组织及其相应的切缘正常组织,用RT-PCR方法分别检测两种组织中CD24mR-NA和PDGF-D mRNA的表达水平,应用SPSS17.0统计学软件分析它们与临床病理之间的关系。结果 CD24mRNA和PDGF-D mRNA在结直肠癌组织中的表达水平高于切缘正常组织(0.8322±0.0856:0.2065±0.0871,0.8482±0.0692:0.2533±0.0716)。CD24mRNA的表达与结直肠癌的浸润程度有关(P0.05),与年龄、肿瘤的分化程度、Duke's分期、肿瘤大小等因素无关(P0.05)。PDGF-D mRNA的表达与年龄、肿瘤的分化程度、Dukes分期有关(P0.05),与结直肠癌的浸润程度、肿瘤大小因素无关(P0.05)。相关分析表明CD24mRNA和PDGF-D mRNA在结直肠癌组织中表达呈正相关(rs=0.383,P=0.004)。结论 CD24和PDGF-D在结直肠癌组织中均呈高表达,且与结直肠癌的发生发展密切相关,提示两者可能成为结直肠癌早期诊断和评价预后的新指标,并为结直肠癌的靶向治疗提供新思路。     

钠碘转运体和甲状腺过氧化物酶mRNA在甲状腺病变中的表达及意义

目的 探讨甲状腺滤泡源性肿瘤及病变中钠碘转运体（NIS）和甲状腺过氧化物酶（TPO）mRNA的表达及意义。方法 应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术，对55例甲状腺肿块的NIS mRNA和TPO mRNA丰度进行了检查。结果NIS mRNA在5种不同病理类型以及4种不同状态间的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。而TPO mRNA的比较，差异均有统计学意义（P〈0．05），良性病变组TPO mRNA表达率明显高于恶性病变组而接近于正常对照组。表达TPO mRNA病例的半定量观察结果，良、恶性病变组间TPO mRNA的光密度积分值（mRNA丰度）差异具有统计学意义（P〈0．01），良性病变组明显高于恶性病变组。结论良恶性甲状腺滤泡源性肿瘤及病变中均存在着NIS的缺陷；TPO作为甲状腺良性肿瘤和病变的标志物有一定的应用价值；临床甲状腺结节性病变如同位素扫描为冷结节，细针穿刺活检（FNAB）检查TPO阴性者应视为手术适应证。     

Survivin mRNA和VEGF mRNA在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨Survivin mRNA和VEGF mRNA在膀胱癌不同病理分级、临床分期、初发和复发的膀胱移行细胞癌组织中的表达和临床意义.方法 采用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量逆转录聚合酶链反应试验方法检测51例膀胱癌组织及12例膀胱正常组织中Survivin mRNA和VEGF mRNA的表达,将所得数据进行统计学分析.结果 Survivin mRNA和VEGF mRNA在正常膀胱组织、低级别、表浅型和初发膀胱癌组织中的表达明显低于其分别在膀胱癌组织、高级别、浸润型和复发中的表达,两两比较差异有统计学意义(P＜0.05);Survivin mRNA和VEGFmRNA两者之间呈正相关(r=0.889,P＜0.05).结论 Survivin mRNA和VEGF mRNA的高表达可能在膀胱癌的发生发展中起重要作用,两者可作为判断膀胱癌生物学行为的重要指标,联合检测Survivin mRNA和VEGF mRNA的表达水平有助于膀胱癌患者病情判断和预后评估.     

NORE1B、RASSF1A mRNA在肝细胞癌中的表达及其相关性

目的 探讨肝细胞癌(HCC)组织中NORE1B、RASSF1A的转录表达及其临床意义.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析41例HCC及对应癌旁组织中NORE1B、RASSF1AmRNA的表达情况,以及与临床病理特征的关系,并探讨两者表达的相关性.结果 NORE1B mR-NA在HCC中的缺失率为63.4%,癌旁组织中为34.1%(P<0.01).RASSF1A mRNA在HCC中的缺失率为75.6%,癌旁组织中为39.0%(P<0.05).两者的差异表达与乙肝、肝硬化以及Edmondson分级均存在相关性(P<0.05),而与年龄、性别、肿瘤大小、术前肝功能Child-Push分级和血清AFP检测值均无显著相关.NORE1B与RASSF1A mRNA在HCC中的表达呈正相关性(P<0.05).结论 NOBE1B与RASSF1A在HCC的发生发展中可能存在协同作用.     

Probe-independent and direct quantification of insulin mRNA and growth hormone mRNA in enriched cell preparations

Task division in multicellular organisms ensures that differentiated cell types produce cell-specific proteins that fulfill tasks for the whole organism. In some cases, the encoded mRNA species is so abundant that it represents a sizeable fraction of total mRNA in the cell. In this study, we have used a probe- and primer-free technique to quantify such abundant mRNA species in order to assess regulatory effects of in vitro and in vivo conditions. As a first example, we were able to quantify the regulation of proinsulin mRNA abundance in beta-cells by food intake or by the glucose concentration in tissue culture. The second example of application of this technique is the effect of corticosteroids on growth hormone mRNA in enriched somatrotrophs. It is anticipated that other examples exist in which measurement of very abundant mRNAs in dedicated cells will help to understand biological processes, monitor disease states, or assist biotechnological manufacturing procedures.     

miR-196b mRNA和HoxB8 mRNA在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的研究miR-196b和HoxB8在结直肠癌组织中的表达及与其临床病理特征的关系,并探讨在结直肠癌组织中miR-196b与靶基因HoxB8表达的关系。方法用实时荧光定量PCR技术检测30例结直肠癌组织及对应的正常黏膜组织中miR-196b mRNA和HoxB8 mRNA的表达量,用Western blot法检测HoxB8蛋白的表达。结果 miR-196b mRNA和HoxB8 mRNA在结直肠癌组织中的表达量均高于其在对应的正常黏膜组织中的表达量（P〈0.05）。miR-196b mRNA的表达与结直肠癌的淋巴结转移、肿瘤分期（Ⅰ＋Ⅱ与Ⅲ＋Ⅳ）及远处转移均有关（P〈0.05）,而与肿瘤部位、大小、大体类型、浸润深度、组织分化程度、患者的年龄及性别均无关（P〉0.05）;HoxB8mRNA的表达与结直肠癌的上述临床病理特征均无关（P〉0.05）。miR-196b mRNA与HoxB8 mRNA的表达存在负相关（r=-0.458,P〈0.05）,而与HoxB8蛋白的表达无明显相关性（r=-0.236,P〉0.05）。结论 miR-196bmRNA及HoxB8 mRNA在结直肠癌组织中均呈高表达,miR-196b mRNA的高表达与结直肠癌的发生、发展及预后有关。miR-196b可能通过与靶基因HoxB8 mRNA的3′非编码区结合抑制HoxB8 mRNA的表达。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3、7mRNA表达的调控机制

目的研究转化生长因子-β1影响瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)Smad3、7mRNA表达的调控机制。方法用放线菌酮(CHX)和放线菌素D预处理KFB,以分别阻断KFB内源性蛋白质的合成及mRNA合成。采用逆转录PCR法检测瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3、7mRNA表达水平。结果经CHX预处理后,KFB的Smad3mRNA表达轻度上调,并完全抑制了TGF-β1对KFBSmad3mRNA的下调作用(P<0.01);而CHX预处理对KFB的Smad7mRNA表达及TGF-β1上调Smad7mRNA的作用并无明显影响。经放线菌素D预处理后,随TGF-β1作用时间延长,KFB的Smad3mRNA表达水平无明显下降。结论TGF-β1对KFBSmad3mRNA表达的调控过程可能还需要细胞合成其他蛋白的参与;但对Smad7mRNA表达的调控则不需要细胞合成其他蛋白参与,KFB细胞中的Smad7可能也是活化的SMADs的直接靶基因。     

尿穿孔素和粒酶B mRNA检测在诊断移植肾急性排斥反应中的意义

目的　探讨尿穿孔素、粒酶BmRNA检测在诊断移植肾急性排斥反应中的作用价值。　方法　应用竞争PCR方法对 34例肾移植患者 4 5份尿样中的穿孔素和粒酶BmRNA进行定量检测。　结果　急性排斥反应组 (n =10 )尿中穿孔素mRNA值 (1.2± 0 .4 )fg/μg总RNA ,粒酶BmR NA值 (1.1± 0 .5 )fg/μg总RNA ,显著高于非排斥组 [n =2 4 ,分别为 (- 0 .6± 0 .3)fg/μg总RNA和(- 0 .8± 0 .2 )fg/μg总RNA],P <0 .0 0 1。尿中细胞毒性分子mRNA水平与急性排斥反应发生时间和严重程度 (Banff分类级别 )无显著相关。当穿孔素mRNA值为 0 .9fg/μg总RNA时 ,诊断急性排斥反应的灵敏度和特异度分别为 85 %和 83% ,粒酶BmRNA值为 0 .4fg/μg总RNA时 ,诊断急性排斥反应的灵敏度和特异度分别为 81%和 78%。　结论　尿中穿孔素及粒酶BmRNA水平检测可以监测和诊断急性排斥反应的发生。