乡镇医院乙型肝炎病毒血清标志物室间质评分析

目的了解乡镇医院乙型肝炎病毒血清标志物检测结果准确度。方法制备乙型肝炎病毒标志物血清质控品，每批均含低浓度样本，乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）约0．5～1ng／mL，乙型肝炎病毒表面抗体（抗-HBs）约20-30mIU／mL，乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）约2NCU／mL，乙型肝炎病毒e抗体（抗-HBe）约4NCU／mL，乙型肝炎病毒核心抗体（抗-HBc）约2NCU／mL。每批5个样本，共分3批，发放各实验室检测。结果与预期结果比较，参加实验室第1批次正确率为78％，第2批次和第3批次正确率皆为84％。结论乡镇医院乙型肝炎病毒血清标志物检测结果准确度偏低，急需改进和提高。     

酶联免疫吸附试验0.5倍临界值阴性质控物的自制与评价

目的 配制酶联免疫吸附试验(ELISA)测定的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、人类免疫缺陷病毒抗体(抗HIV)、梅毒螺旋体抗体(抗TP)、丙型肝炎病毒抗体(抗H CV)0.5倍临界值左右的阴性质控物,并对其均一性和稳定性进行评价.方法 对弱阳性质控物进行倍比稀释,取吸光度值/临界值(S/CO值)在0.5倍临界值左右的稀释水平作为阴性质控物的目标水平,以此制作阴性质控物.阴性质控物均一性评价:每批次抽检20个质控物,均分为两组,对其S/CO值进行单因子方差分析.稳定性评价:将分装的自制质控物置于-70℃以下冰箱冻存1、3、6个月,按期随机取出10份进行检测,将其S/CO值与均一性评价结果进行比较.结果 阴性质控物的目标水平分别为HbsAg 0.06 IU/mL、HbsAb 5 mIU/mL、HBeAg 0.3 NCU/mL、抗HCV 0.1 NCU/mL、抗HIV 0.05 NCU/mL、抗TP 0.7 mIU/mL.均一性评价:两组6项阴性质控物检测数据比较,差异无统计学意义(P>0.05),均一性评价通过.稳定性评价:6项阴性质控物第1、3、6个月的S/CO值与均一性评价结果比较,第1、6个月的差异无统计学意义(P>0.05),第3个月的差异有统计学意义(P<0.05),稳定性符合要求.结论 自制的HbsAg、HbsAb、HBeAg、抗HCV、抗HIV、抗TP阴性质控物的均一性和稳定性均符合ISO15189:2012质量管理体系CNAS-CL02-A004《医学实验室质量和能力认可准则在临床免疫学定性检验领域的应用说明》要求,可用于临床实验室的质量控制.     

操作时差对半自动中和抑制法时间分辨荧光免疫分析检测乙型肝炎病毒e抗体的影响

目的研究使用中和抑制法时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)检测乙型肝炎病毒e抗体(抗-HBe)过程中加入中和抗原的快、慢对检测结果的影响。方法随机选择血清样本与中和抗原一起加入(时间间隔为0)时测定结果<1.5 NCU/mL(阴性)的样本按浓度范围分成7组,即0～0.2 NCU/mL为A组、0.201～0.4 NCU/mL为B组、0.401～0.6 NCU/mL为C组、0.601～0.8 NCU/mL为D组、0.801～1.0 NCU/mL为E组、1.001～1.2 NCU/mL为F组、1.201～1.4 NCU/mL为G组,每组20例,按加入中和抗原的间隔时间5、10、15、20、30 min分别进行操作,检测的最终结果采用多个样本比较的秩和检验及多个样本间两两比较的秩和检验进行分析。结果加入中和抗原的间隔时间超过10 min对不同浓度组的测定结果均有显著影响(P<0.05、P<0.01),并随着间隔时间的增加而增高,且有假阳性结果增多的趋势。结论在用中和抑制法TRFLA手工定量检测抗-HBe时,操作时差>10 min可造成测定结果的假性增高和假阳性,建议在加入血清样本后的10 min内加入中和抗原,以降低错...     

HBsAg、抗-HCV及抗-HIV试剂质控结果分析

全国血液质量管理委员会在血站评审时明确要求 ,试剂使用前必须由质控部门对试剂进行抽样检查 ,合格后方可使用 ,笔者将 2 0 0 1年HBsAg、抗 HCV及抗 HIV试剂质控情况分析报告如下。材料与方法1　检测参比品　HBsAg血清盘 :阴性参考品 2 0份 ,阳性参考品 3份 ,灵敏度参考品 4份 ,(1ng/ml,2ng/ml,5ng/ml,高浓度 ) ,精密性参考品 1份 ;抗 HCV血清盘 :阴性、阳性参考品各 4 0份 ,抗 HIV血清盘 :阴阳参考品各 2 0份 ,精密性参考品为阳性 18号。以上产品均由中国药品生物制品检定所提供。表 1　 2 0 0 1年 1～ 12月HBsAg试剂质控结果厂…     

酶联免疫吸附试验定性检测乙肝表面抗原测量不确定度评定的探讨

目的探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙肝表面抗原(HBsAg)测量不确定度的评定。方法用4种市售手工法ELISA试剂检测HBsAg定值标准品(1、2 IU/mL)和室内质控品,分析测量过程的不确定度分量,合成各试剂盒检测系统的扩展不确定度。结果4种试剂检测1、2 IU/mL标准品的批内测量的扩展不确定度为24.4%、27.4%、17.4%、14.4%和18.8%、24.0%、19.4%、23.8%[包含因子(K)=2]。检测质控品的总扩展不确定分别是24.8%、29.8%、30.2%、32.8%(K=2)。结论含有测量不确定度的结果基本能反映测量的真实水平,有助于了解目前国产ELISA试剂手工法检测低水平HBsAg的实际情况。     

珠海丽珠乙型肝炎酶联免疫吸附试验试剂盒性能评价

目的对珠海丽珠公司生产的乙型病毒性肝炎(简称乙肝)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(以下简称"珠海丽珠试剂盒")进行性能验证,为实验室选用合适的方法和试剂提供依据。方法参考美国临床实验室标准化研究所EP15-A2标准,采用重复性代替精密度,以乙肝标志物的阳性、阴性符合率和一致率分别作为批内重复性精密度和批间重现性精密度评价指标;选取2015-2016年卫生部临检中心感染性血清学标志物A室间质评物进行准确性验证;将已知浓度的高值质控品用阴性患者新鲜血清作梯度稀释后进行检出限验证;以罗氏电化学发光免疫分析法(ECLIA)检测结果为标准,对灵敏度、特异度及总符合率进行验证,同时,对ELISA、胶体金免疫层析法(GICT)和ECLIA检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的灵敏度、特异度等进行比较。结果珠海丽珠试剂盒的批内重现性精密度符合率、批间重现性精密度一致率、准确度符合率均为100%。HBsAg、乙型肝炎表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎e抗体(HBeAb)、乙型肝炎核心抗体(HBcAb)的检出限分别为1.33IU/mL、30.00mIU/mL、2.00NCU/mL、4.00NCU/mL、0.44NCU/mL。珠海丽珠试剂盒检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb的灵敏度、特异度、总符合率及约登指数均达到较高的水平。ELISA检测HBsAg的灵敏度优于GICT。结论珠海丽珠试剂盒具有较高的精密度、灵敏度及特异度,能够满足临床检测的质量要求。     

全自动加样仪混匀参数对质控品检测结果的影响

目的 探讨在酶联免疫吸附试验(ELISA)加样过程中，全自动加样仪对室内质控品进行混匀处理的实验意义。方法 质控品在加样前均进行漩涡震荡混匀，后在相同的检测条件下经STAR全自动加样仪加至同1块酶免板中进行检测，比较质控品在加样针混匀与不混匀情况下S/CO值的差异以及2种情况下质控品检测值的频数分布，受混匀参数影响较大的质控品用同厂家不同批号试剂进行同样的试验并分析结果是否一致。结果 全自动加样仪不对质控品进行混匀处理时，抗-HCV质控品S/CO值明显低于混匀质控品的检测值(P<0.000 1)。部分检测系统所测不混匀抗-TP质控品以及抗-HIV质控品的S/CO值与该项目混匀质控品检测值也有差异(P<0.05)。未经加样针混匀的抗-HCV质控品有部分S/CO值分布在<2的区间。同厂家不同批号试剂分别检测抗-HCV质控品，混匀与不混匀处理的质控品检测值之间均存在差异(部分P<0.05)。结论 尽管加样前质控品均进行漩涡震荡混匀，如果STAR全自动加样仪不设置质控品混匀参数，部分质控品的检测结果依然会受到影响。     

操作时差对半自动中和抑制法时间分辨荧光免疫分析检测乙型肝炎病毒e抗体的影响

目的研究使用中和抑制法时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）检测乙型肝炎病毒e抗体（抗-HBe）过程中加入中和抗原的快、慢对检测结果的影响。方法随机选择血清样本与中和抗原一起加入（时间间隔为0）时测定结果〈1.5 NCU/mL（阴性）的样本按浓度范围分成7组,即0～0.2 NCU/mL为A组、0.201～0.4 NCU/mL为B组、0.401～0.6 NCU/mL为C组、0.601～0.8 NCU/mL为D组、0.801～1.0 NCU/mL为E组、1.001～1.2 NCU/mL为F组、1.201～1.4 NCU/mL为G组,每组20例,按加入中和抗原的间隔时间5、10、15、20、30 min分别进行操作,检测的最终结果采用多个样本比较的秩和检验及多个样本间两两比较的秩和检验进行分析。结果加入中和抗原的间隔时间超过10 min对不同浓度组的测定结果均有显著影响（P〈0.05、P〈0.01）,并随着间隔时间的增加而增高,且有假阳性结果增多的趋势。结论在用中和抑制法TRFLA手工定量检测抗-HBe时,操作时差〉10 min可造成测定结果的假性增高和假阳性,建议在加入血清样本后的10 min内加入中和抗原,以降低错误结果的发生率。     

ELISA检测抗-HIV灰带区样品的质量控制

尽管ELISA检测试剂使用前其试剂盒均要进行“批批”抽检(数量有限),然而在试剂盒使用的过程中检测结果失败、重复性不好、结果难以判定等现象仍时有发生。其中原因之一就是试剂盒中出现的各反应板之间和同一板各孔之间孔间差变异造成的质量均一性不好,进而导致检测结果不稳定。对试剂盒孔间变异的质量控制,笔者采用在一块板上每孔加同一份弱阳性质控血清和在另一块板上加同一份阴性高值血清进行分别检测的方法,获取各孔的OD值,以了解孔间变异,估算出检测样本测定值的可能变动范围,对于判定阈值附近样品的结果是十分有用的,以此减少假阳性或假阴性结果的出现。 1 材料与方法 1.1 材料①抗-HIV1/2型阴性高值血清(本室自制,经省防疫站艾滋病确认实验室确认为阴性）;②抗-HIV1/2型(2NCU/ml)质控血清(卫生部临检中心,批号200002）;③抗-HIV 1/2型ELISA诊断试剂盒(北京金豪公司);④CF-5000板式酶标仪(北京航天);⑤ BEM-Ⅱ型自动酶标洗板机(北京拓普)。 1.2 方法取两块反应板,分别按试剂盒说明书操作,在A板上加90孔弱阳性质控血清;在B板上加90孔阴性高值血清,进行检测。结果判定按说明书所给方法计算。     

乙型肝炎病毒表面抗原和表面抗体同时阳性样本的体外中和反应特性分析

目的 研究同时阳性样本的乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎病毒表面抗体(抗-HBs)的体外中和反应特性.方法 运用化学发光定量检测技术在HBsAg阳性样本中收集抗-HBs同时阳性的样本血清作为研究对象;选择单纯HBsAg阳性的样本和单纯抗-HBs阳性的样本分别与同时阳性的研究组样本中的抗-HBs和HBsAg进行体外血清学中和反应,测定中和物中的HBsAg和抗-HBs含量;测定HBsAg单阳性样本的基因型和HBsAg亚型,记录各测定结果.结果 获取1例HBsAg(130.21 ng/mL)和抗-HBs(50.6 U/L)双阳性样本,HBV基因型为B型,HBsAg亚型为adw;20例HBsAg单阳性样本中有6例能中和研究组样本中的抗-HBs(中和物抗- HBs≤6.5 U/L);20例抗-HBs单阳性样本均能中和研究组样本中的HBsAg(中和物HBsAg≤0.06ng/mL).结论 同时阳性样本中的抗-HBs不是与其共存的HBsAg的特异性抗体.     

乙肝表面抗原定量检测的室内质控建立

目的 建立乙肝表面抗原(HBsAg)定量检测的室内质控。方法 分别留取单-乙肝模式的混合血清样本，同时与Abbott公司提供HBsAg质控品比较，选取合适的乙肝模式及HBsAg滴度作为室内质控品。结果 HBsAg在高、中、低滴度时的CV值分别为3.96％、3．31％、2．87％，Abbott公司提供的HBsAg室内质控品的CV值为3．01％。结论 临床实验室可以用单-乙肝模式的混合血清建立HBsAg的室内质控。     

全自动酶免分析系统的应用分析

目的评价全自动酶免检测与手工检测的效果，探索全自动酶免检测中所遇问题的解决办法。方法利用HBsAg质控血清0．5、1ng／ml和抗-HCV质控血清1NCU／ml进行两种检测方法的孔间、板间精密度分析；采用HBsAg血清盘进行两种检测方法的特异性、灵敏度分析；采用加样间只用水冲针2次和加样间洗液冲针后再用水冲洗针内外壁的办法，探索消除携带污染问题的解决方法。结果全自动酶免检测的孔间、板间精密度均高于手工检测，二者检测的特异性、灵敏度均佳；但使用永久性加样针的样本处理器存在携带污染，可通过洗液冲洗后加水冲洗针内外壁或进一步调整冲洗液量、强度、次数来解决，同时对样本的稀释效应不应忽视。结论ELISA全自动酶免检测分析提高了血液检测的精密度水平，可确保血液检测质量和安全。     

探讨改变酶联免疫吸附试验条件对HBsAg室内质控的影响

目的探讨不同温度平衡和作用时间对室内质控品的影响。方法用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)试剂盒,在设定的温度和不同作用时间下,观察室内质控品吸光度(OD)值。结果与常规实验条件下相比,部分实验条件改变时其吸光度值差异有统计学意义(P0.05)。结论室内质控品在复温时间短、显色时间过长或使用前未充分混匀,均易造成失控;而室内质控品复温时间适度延长对S/CO值影响不大。     

光激化学发光法在检测抗-HCV、抗-HIV、抗-TP检测性能分析

目的评价光激化学发光法在抗-HCV、抗-HIV、抗-TP检测中的性能。方法参照CNAS-GL038:2019《临床免疫学定性检验程序性能验证指南》和CNAS-GL037:2019《临床化学定量检验程序性能验证指南》对全自动光激化学发光检测系统LICA500检测抗-HCV、抗-HIV、抗-TP的符合率、检出限、精密度、临界值进行验证。结果 LICA500与酶联免疫吸附试验在抗-HCV、抗-HIV检测方面的符合率为100%。在抗-TP检测方面,与TPPA结果的符合率为95%。检出限实验显示LICA500对抗-HCV、抗-HIV和抗-TP的检出限分别达到了0.04 NCU/mL、0.5 NCU/mL、0.25 NCU/mL,均超过厂家声明的检出限0.2 NCU/mL、1 NCU/mL、0.5 NCU/mL。LICA500检测抗-HCV、抗-HIV、抗-TP的批内CV和总CV均10%。临界值实验显示,临界浓度抗-HCV、抗-HIV和抗-TP的阳性结果占比分别为45%、45%、48%,C_(50)验证通过;(临界浓度-20%)的阴性结果占比为98%,(临界浓度+20%)的阳性结果占比为100%,说明(临界值-20%)至(临界值+20%)的浓度范围位于这种方法的95%区间。结论 LICA500对抗-HCV、抗-HIV、抗-TP的检测与目前常用的检测方法有较高的符合率,适合于患者手术及输血前的快速筛查和批量检查。     

化学发光法定量检测乙型肝炎病毒标志物临床应用评价

目的对化学发光法定量检测乙型肝炎病毒标志物的临床应用进行评价。方法用标准参考血清和定值质控血清,对化学发光法定量检测乙型肝炎病毒标志物进行评价,评价内容为符合率、分析灵敏度、分析特异性、批内和批间精密度、最低检出限等指标。结果HBsAg符合率为97．5％,其他四项符合率大于92％;HBsAg分析灵敏度100％、分析特异性96．15％;五项的批内和批间精密度均小于15％;最低检出限分别为HBsAg0．06IU／mL、HBsAb0．5mIU／mL、HBeAg0．05NCU／mL、HBeAb0．5NCU／mL、HBcAb0．5NCU／mL。结论化学发光法定量检测乙型肝炎病毒标志物各项性能指标能满足临床要求,但操作需注意标本质量。     

加酶时间对ELISA定性测定HBsAg的影响

目的探讨加酶时间对酶联免疫吸附试验(ELISA)一步法定性测定HBsAg的影响程度,及加酶前后反应的差异。方法1加酶时间分别设为加样后0,5,10,15,20min,温育时间为30min,检测阴性血清和HBsAg为0.2,0.5,1,2,50,1000ng/ml的定值质控血清,观察这些条件下标本测定S/CO比值的差异;2同时作"一步法"与"二步法"对照检测,比较两种测定方法S/CO比值的差异。结果1随着加样后加酶时间的延长,弱阳性标本结果越明显;2弱阳性标本检测结果"一步法"S/CO比值明显低于"二步法"。结论1加酶时间对ELISA一步法定性测定HBsAg弱阳性标本结果有较大影响;2弱阳性标本的检测"二步法"优于"一步法"。     

ELISA一步法和二步法检测HBsAg结果的对比分析

目的 验证酶联免疫吸附试验(ELISA)乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)二步法诊断试剂灵敏度及评价HBsAg二步法诊断试剂的质量.方法 分别采用ELISA一步法及二步法两种方法检测体检人群2 154例和不同浓度质控血清,结果 不一致样本进行化学发光法定量检测.结果 一步法检测HBsAg阴性1 978例,阳性176例,阳性率为8.17%;二步法检测HBsAg阴性1 953例,阳性201例,阳性率为9.33%.ELISA一步法检测的1 978例HBsAg阴性样本中,有25例二步法检测为阳性.一步法检出率较低,仅为二步法的87.56%,而漏检率为1.16%.一步法最低检测浓度为1 IU/mL,二步法为(0.1～0.2) IU/mL.结论 一步法与二步法HBsAg试剂灵敏度差异有统计学意义(P<0.01),二者检出率具有统计学意义(P<0.05).     

第三代和第四代HIV抗体ELISA试剂检测结果分析

目的探讨第三代和第四代酶免试剂检测人类免疫缺陷病毒(HIV)结果的差异性,为血液检测安全提供保证。方法用第三代和第四代试剂平行检测无偿献血者样本、室内质控血清和HIV初筛实验室能力考核样,比较其特异性和敏感性。结果从无偿献血者血样59 045例样本中检出有反应性样本48例,其中第三代试剂检出24例,第四代试剂检出37例,共同检出样本13例,最终确认为阳性10例。检测0.5NCU/mL室内质控品,S/CO值无明显差异,变异系数(CV%)值在11%~15%;HIV初筛实验室能力验证样本检测中,对临界值弱阳性样本的判定只有第四代HIV试剂准确无误。结论第三代试剂特异性较好、第四代敏感性高,第三、四代试剂联合应用,有利于实现早诊断、避免漏检、降低HIV输血传播的风险。     

雅培i4000化学发光分析仪肝炎标志物分析性能评价

目的 评价美国雅培i4000化学发光微粒子免疫分析仪(CMIA分析仪,简称i4000分析仪)对肝炎血清标志物的分析性能.方法 使用i4000分析仪进行HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb及抗HCV检测,根据美国临床和实验室标准化协会颁布的EP系列文件对仪器分析性能进行评价.结果 i4000分析仪模块一及模块二检测上述6个项目的批内及批间不精密度(CV％)均符合厂商要求;模块一检测HBsAg的线性范围为0.04～286.18 IU/mL(r2=0.966 2),模块二线性范围为0.04～259.3 IU/mL(r2=0.976 8);模块一检测HBsAb线性范围为0.18～1 016.39 mIU/mL(r2 =0.985 7),模块二线性范围为0.28～1 055.67 mIU/mL(r2 =0.987 0).HBeAb检测临界值标本稀释度为1:59.65,(临界值±20％)标本阳性、阴性结果出现频率均大于0.95.雅培i2000分析仪与i4000分析仪模块一、二HBsAg检测结果r2值分别为0.991 0、0.996 1,HBsAb检测结果r2值分别为0.983 5、0.989 1.ELISA与CMIA检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb及抗HCV结果符合率为100％.HBeAg、HBeAb、HBcAb及抗HCV检测下限分别为0.33、3.6、0.95、0.7 NCU/mL.结论 i4000分析仪检测肝炎血清标志物的精密度、线性范围、临界值重复性、比对结果、检测下限均达到要求,能满足临床需求.     

自制HBsAg定量检测低值室内质控品应用

近几年乙肝表面抗原（HBsAg）定量检测的室内质控品种少，稳定性不好，特别是生物制品的价格昂贵，限制了中小实验室室内质控的开展。用低滴度混合血清样本自制室内质控品开展室内质控，对实验室乙肝准确定量检测方便有效 。考虑到HBsAg和HBsAb结合而形成复合物会使混合血清中HBsAg定量不稳定，作者选取HBsAb=0mIU／ML的血清样本作单一模式混合，并与雅培公司提供的HBsAg室内质控品比较，自制一套适合实验室HBsAg定量检测的室内质控品，应用效果满意。报告如下。