缺血预处理对大鼠胰腺移植缺血/再灌注损伤的保护机制

目的探讨缺血预处理对大鼠胰腺移植缺血/再灌注损伤的保护机制。方法建立SD大鼠糖尿病模型。取糖尿病大鼠24只,随机分为缺血/再灌注组(I/R组,n=6)和缺血预处理组(IPC组,n=18),IPC组又平均分为3个亚组:IPC1组(阻断脾血管5min,再灌注5min)、IPC2组[(阻断脾血管5min,再灌注5min)×2次]和IPC3组[(阻断脾血管5min,再灌注5min)×3次]。另取健康SD大鼠6只作为对照组,仅打开腹腔,不做胰腺移植;I/R组和IPC组大鼠均行同种胰腺移植。检测各组胰腺移植再灌注后2h后移植胰组织中超氧化物歧化酶(SOD)和髓过氧化物酶(MPO)的活性;用原位末端脱氧核糖核酸转移标记(TUNEL)法观察移植胰组织的细胞凋亡情况;WesternBlot法检测移植胰组织Bcl-2和Bax基因表达情况。结果IPC各组与I/R组相比较,前者移植胰组织中SOD活性明显升高,MPO活性明显降低,细胞凋亡指数明显降低,Bcl-2表达明显升高,Bax表达明显降低,各项检测指标比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。IPC各组中又以IPC2组的各项检测指标差异更为显著(P<0.05)。结论缺血预处理可以减少移植胰缺血/再灌注后的细胞凋亡,IPC2组的效果更为突出。其机制可能与缺血预处理减轻嗜中性粒细胞(PMNs)粘附与聚集、减少氧自由基、上调Bcl-2基因和下调Bax基因的表达有关。     

缺血预处理对大鼠移植胰腺缺血再灌注损伤的保护作用及其机制的研究

目的：探讨缺血预处理对大鼠移植胰腺冷缺血再灌注损伤和细胞凋亡的保护作用及其机制。方法：24只糖尿病SD大鼠随机分为缺血再灌注组（I/R组,n=6）和缺血预处理组（IPO组,n=18）,IPO组又根据不同方法分为3个亚组：IPO1组（再灌注30s,缺血30s1次,n=6）、IPO2组（再灌注30s,缺血30s3次,n=6）和IPO3组（再灌注30s,缺血30s6次,n=6）。24只SD大鼠为供体,I/R组和IPO组均行同种胰腺移植。另取6只SD大鼠为对照组。检测各组再灌注前、后血糖及再灌注后2h移植胰腺组织中SOD和MDA含量;TUNEL法观察移植胰腺组织细胞凋亡情况,WesternBlot检测移植胰腺组织Bax和Bcl-2蛋白表达情况。结果：1）再灌注后IPO各组相对于I/R组血糖低（P〈0.05,P〈0.01,P〈0.05）;IPO2组较IPO1组和IPO3组血糖低（P均〈0.05）;2）再灌注后IPO组较I/R组移植胰腺组织中SOD含量高（P均〈0.01）,MDA含量低（P均〈0.01）,IPO2组相对于IPO1组和IPO3组SOD含量高（P均〈0.05）、MDA含量低（P均〈0.05）。3）再灌注后IPO组较I/R组移植胰组织中AI值低（P均〈0.01）,IPO2组相对于IPO1组和IPO3组AI值低（P均〈0.05）;4）I/R组胰组织Bax蛋白高表达,Bcl-2蛋白低表达,IPO各组再灌注后移植胰组织Bax蛋白低表达,Bcl-2蛋白高表达,而IPO2组Bcl-2蛋白表达最高,Bax蛋白表达最低。结论：缺血预处理对大鼠移植胰腺的缺血再灌注损伤具有保护作用,并可以减少移植胰腺缺血再灌注后的细胞凋亡,机制与减少氧自由基、上调Bcl-2蛋白和下调Bax蛋白有关。再灌注30s缺血30s重复3次是最佳的大鼠移植胰缺血预处理诱导办法。     

奥曲肽对大鼠胰腺移植缺血再灌注损伤的保护机制

目的 探讨奥曲肽在胰腺移植缺血再灌注损伤中的作用以及可能机制。方法 应用大鼠全胰十二指肠同种异体移植动物模型,监测再灌注3、6 h血清中一氧化氮(NO)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化,同时对移植胰进行组织学观察和诱导性一氧化氮合酶(iNOS)的免疫组织化学分析,以及应用奥曲肽和硝酸甘油(NTG)后上述指标的变化。结果 再灌注3、6 h血清NO水平、SOD活性分别为(77.13±5.29)、(103.92±11.17)μmol/L和(64.46±7.03)、(56.54±7.82)Nu/ml,与同时点假移植组差异有显著性(P均<0.01),且两指标变化呈显著负相关。应用奥曲肽后能显著降低NO水平,提高SOD活性接近至假移植组水平,与移植组相比差异有显著性(P均<0.01),并明显改善移植组织病变和降低iNOS表达强度。加用NTG后,又能在奥曲肽组基础上部分扭转上述变化,但这种现象仅在再灌注3 h时见到。结论 奥曲肽能显著下调移植胰iNOS的表达,降低血清NO水平并提高SOD活力,从而干扰NO/cGMP途径,减轻组织炎症反应,对再灌注组织起到保护作用。     

L-精氨酸对大鼠胰腺移植缺血再灌注损伤的保护作用及其机制

目的探讨L-精氨酸（L-Arginine，L-Arg）对大鼠胰腺移植缺血再灌注（I／R）损伤的影响及其机制。方法SD大鼠作为供、受体行胰腺移植术，给予不同方式处理：假手术组（Sham）：只行开腹术；对照组（Control）：只行胰腺移植术，不行预处理；缺血预处理组（IPC）：在供胰切取前阻断血供10min，然后再灌注10min；L-精氨酸组（L-Arg）：行胰腺移植术，再灌注前先经下腔静脉注射L-Arg 10mg／kg体重；L-硝基精氨酸甲酯组（L-NAME）：供胰切取时阻断血供10min，再灌注10min；然后行移植术，在再灌注前，先经下腔静脉缓慢注射L-NAME 10mg／kg体重。各组手术完成后，于再灌注6h检测血清淀粉酶、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和一氧化氮（NO）水平，胰腺细胞凋亡指数、胰腺细胞bcl-2蛋白表达情况和胰腺组织病理改变。结果L-Arg和IPC都降低TNF-α水平（P〈0．01）和细胞凋亡水平（P〈0．01），NO水平升高（P〈0．01）。而L-NAME可阻断该保护效应。IPC和L-Arg均能激活bcl-2蛋白的表达。结论L-Arg可以模拟IPC对大鼠胰腺移植I／R损伤的保护作用，其机制与合成NO，激活bcl-2基因的表达有关。     

腺苷对大鼠胰腺缺血再灌注损伤的保护作用

随着胰肾联合移植在临床的广泛应用和重症胰腺炎治疗的进展,胰腺的再灌注损伤(L/R)逐渐受到重视。现在认为I/R是一个多因素互相影响的网络化的病理生理过程。腺苷(ADO)在组织的I/R中起着重要的作用。本实验研究外源性腺苷在大鼠胰腺L/R的作用和机制。     

大鼠胰十二指肠移植缺血-再灌注损伤模型的建立

目的 探索胰腺移植缺血．再灌注损伤(I-RI)的发生机制及防治措施。方法 采用双套管 移植物腹主动脉三通管外接法完成大鼠全胰十二指肠同种异体移植动物模型。实验分为A、B组。每组15只，分别于术后6、24h处死。处死时检测非空腹血糖，并行移植物组织学观察。结果 30次实验中，总手术时间仅为2h左右，移植手术成功率100％。排除因套管内血栓形成引起移植物失功的3例外，其余受试大鼠血糖水平均在术后6或24h降至正常，移植胰功能存活率为90％(27／30)。A、B两组组织学改变符合I-RI病生特点。结论 本模型操作简便、稳定，不需阻断体循环，具有术后移植物功能恢复早的优点，适用于临床胰腺移植有关的理论研究。     

大鼠移植胰腺冷缺血再灌注后细胞凋亡的变化

目的　探讨移植胰腺冷缺血再灌注后胰腺细胞凋亡的变化过程。方法　 6 5只SD大鼠随机分成 7组 :假手术组 ,冷缺血 2h组 ,冷缺血 2h再灌注 1、3、6、9、12h组。通过HE染色后光镜及电镜观察各组的胰腺组织的病理变化 ;采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞的分布及计数。结果　胰腺移植后早期即可观察到细胞凋亡的典型改变 ,胰腺冷缺血再灌注后发生凋亡的高峰期为再灌注后 3h[AI为 (9.4 6± 2 .91) % ,P <0 .0 1) ,再灌注 6h较 3小时细胞凋亡有所减少 [AI为 (5 .74± 1.6 6 ) % ,P <0 .0 1],再灌注 9h及 12h细胞凋亡进一步减少 [AI分别为 (3.6 0± 1.6 4 ) %及 (3.2 6± 1.35 ) % ,P <0 .0 5 ]。结论　细胞凋亡是胰腺移植后的早期事件 ,移植胰腺冷缺血再灌注后早期主要的死亡方式是凋亡 ;移植胰腺冷缺血再灌注后的凋亡高峰发生在再灌注后 3h。     

大鼠坐骨神经缺血再灌注损伤机制的探讨及丹参保护作用的实验研究

目的：研究不同缺血再灌注时间周围神经中血栓素A2（TXA2）和前列环素（PGI2）的变化及丹参对其变化的影响,探讨周围神经缺血再灌注时花生四烯酸代谢变化的损伤机制。方法：采用无损伤动脉夹暂时阻断大鼠右侧骼总动脉的大鼠周围神经缺血实验模型,放射免疫方法检测不同缺血再灌注时间及应用丹参后周围神经中血栓素B2（TXB2）含量和6-酮-前列腺素Flα（6-keto-PGF1α）含草,同时行坐骨神经病理学检查及肢体功能评估。结果：随着缺血时间的延长,鼠坐骨神经中TXA2、PGI2、T／P比值增高,再灌注后,TXA2、PGI2、T／P比值明显增高,但随后PGI2则维持在一定水平。向中药丹参能使TXA2、T／P比值明显下降,减轻缺血性神经纤维变性（IFD）,改善肢体功能。结论：周围神经缺血再灌注存在花生四烯酸代谢失衡。丹参具有防止TXA2/PGI2、平衡紊乱的作用,对周围神经缺血再灌注损伤起一定保护作用。     

参附注射液对大鼠移植胰缺血再灌注损伤的保护作用和机制

目的：探讨参附注射液对大鼠移植胰缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法：正常SD大鼠为阴性对照组（NC组，n=6），糖尿病SD大鼠24只随机分为阳性对照组（PC组，n=6）、参附预处理组（SF组，n=6）、红参预处理组（HS组，n=6）和附子预处理组（FZ组，n=6）。除对照组外各组均行胰腺移植，24只SD大鼠为供体。SF、HS和FZ组在移植前1日及术前30min经静脉分别予受体注射参附注射液（10mg／kg）、红参注射液（9mg／kg）、附子注射液（1mg／kg），NC组和PC组在移植前1日及术前30min经静脉予受体注射同等容积生理盐水。检测各组再灌注前、后血糖；再灌注后2h血清中TNF-α和一氧化氮（NO）的含量、移植胰组织中超氧化物歧化酶（SOD）、髓过氧化物酶（MPO）和丙二醛（MDA）含量；用TUNEL法观察移植胰组织细胞凋亡情况，Western Blot法检测移植胰组织Bax和Bcl-2蛋白表达情况。结果：再灌注后SF组、HS组和FZ组较PC组血糖低，血清中TNF-α含量低，NO含量高：再灌注后SF组、HS组和FZ组较PC组移植胰组织中SOD活性高，MDA含量低，MPO活性低，凋亡指数低，Bcl-2表达高．Bax表达低，Bcl-2／Bax比值高。结论：参附注射液对大鼠移植胰的缺血再灌注损伤具有保护作用，机制可能是提高SOD的活性，增加内源性NO的合成，减少TNF-α分泌，减轻嗜中性粒细胞（PMNs）黏附与聚集，上调Bcl-2和下调Bax基因表达。     

肝移植术后肝缺血再灌注损伤保护作用的研究进展

肝缺血再灌注损伤是肝移植术后最常见的并发症。活性氧生成过多导致的氧化应激、自噬、炎症反应是造成肝缺血再灌注损伤的重要步骤。其中,核转录因子红系2相关因子2被认为是抗氧化反应的主要调节因子,PI3K-Akt-mTOR通路被认为是自噬的重要通路,HMGB1-TLR4-NF-κB通路被认为是导致炎症的关键信号通路,本文将从上述通路及调节分子出发,分别从基因、分子、药物等方面研究对肝缺血再灌注细胞的抗氧化、抗炎、调节自噬作用,探究对肝缺血再灌注细胞的保护作用。     

鼻咽腔降温对大鼠全脑缺血-再灌注损伤的保护作用

目的 探讨鼻咽腔降温对大鼠全脑缺血-再灌注损伤的保护作用.方法 健康雄性Wistar大鼠18只,随机均分为三组:全身降温组(A组)、鼻咽腔降温组(B组)、常温组(C组).采用Pulsinelli四血管阻断法建立大鼠伞脑缺血-再灌注损伤模璎.A、B组海马温度降至靶温度33℃.阻断双侧颈总动脉20 min再灌注,低温维持1 h后复温.C组保持大鼠直肠和海马温度均为(37±0.5)℃,阻断双侧颈总动脉20 min再灌注.利用微透析技术收集大鼠海马CA1区微透析液并测其谷氨酸(Glu)含量.再灌注8 h后断头取脑,用免疫组化法观察海马CA1区Bcl-2和Bax的表达.结果 A组海马温度从37℃降到33℃所需时间为B组的4.8倍;缺血10、20 min、再灌注后10、20、30 min时A、B组Glu含量明显低于C组(P＜0.05);A、B、C组海马CA1区Glu含量恢复至缺血前水平所需时间分别为(19.92±1.30)、(20.17±1.34)、(39.67±1.49)min.与C组比较,A、B组的Bax免疫阳性细胞数显著减少(P±0.05);A、B组的Bcl-2免疫阳性细胞数显著增多(P＜0.05).结论 鼻咽腔降温对大鼠全脑缺血-再灌注损伤具有保护作用,且鼻咽腔降温法降低海马温度的速度明显快于全身降温法.     

缺血后处理对鼠肝缺血再灌注损伤细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响

目的观察缺血后处理对肝脏缺血再灌注损伤后早期肝组织细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响,并探讨其肝保护的机制。方法建立大鼠肝脏缺血再灌注模型,54只雄性SD大鼠随机分为假手术组（SO组）、缺血再灌注组（IR组）和缺血后处理组（IPC组）。以缺血再灌注前反复多次的短暂预再灌注及停灌注作为后处理。分别于再灌注后1、3、6h测定血清肝酶,SP免疫组化法测定肝脏Bcl-2和Bax表达水平,TUNEL法检测肝组织中凋亡细胞。结果与SO组相比,IR组肝酶活性升高,Bcl-2表达降低,Bax表达升高并可见明显的细胞凋亡;而IPC组同IR组相比,肝酶活性降低,Bcl-2表达升高,Bax表达降低,凋亡指数（AI）下降,差异均有统计学意义。结论缺血后处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤有明显的保护作用,可通过促进Bcl-2表达及抑制Bax表达而拮抗肝细胞凋亡,从而减轻肝脏缺血再灌注损伤。     

蛋白酶体抑制剂MG132减轻大鼠移植胰腺缺血再灌注损伤的作用

目的 研究蛋白酶体抑制剂MG132减轻大鼠移植胰腺缺血再灌注(IR)损伤的作用及其机制.方法 采用随机数字表法将SD大鼠分为假手术组、IR组和MG132组,IR组和MG132组建立同系大鼠胰腺十二指肠移植模型.分别于再灌注后1、3、6h,检测受鼠血清淀粉酶含量,光镜下观察胰腺组织病理变化,采用蛋白质印迹法测定胰腺组织中核因子-κB(NF-κB) P65蛋白的水平,采用免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应法分别检测胰腺组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和细胞间黏附因子-1(ICAM-1)的表达情况.结果 与假手术组比较,IR组再灌注后相同时点的组织病理损伤明显较重,血清淀粉酶含量、胰腺组织中P65蛋白水平以及TNF-α和ICAM-1水平均明显上升;与IR组比较,MG132组相同时点的组织损伤减轻,血清淀粉酶含量、胰腺组织中P65蛋白水平及TNF-α和ICAM-1水平均明显降低.结论 MG132能够减轻大鼠移植胰腺的IR损伤,其机制可能是通过抑制NF-κB的活化,从而下调TNF-α和ICAM-1的表达.     

外源性腺苷三磷酸对移植胰腺再灌注损伤保护作用的实验研究

目的　探讨外源性三磷酸腺苷 (ATP)对大鼠移植胰腺再灌注损伤的作用及其机制。方法　应用同系大鼠异位全胰十二指肠移植模型 ,供体胰腺分别用EuroCollin液 (EC)或EC液添加ATP约 12～ 2 0ml(2～ 4℃ )进行低温灌注保存 6 0min ,光镜观察胰腺组织结构变化 ,放射自显影鉴定外源性ATP是否进入胰腺细胞内 ,高压液相色谱法 (HPLC)检测保存后移植物ATP和总腺苷核苷酸(TAN)。移植 2 4h后 ,检测血糖、血清中脂肪酶、淀粉酶 ,测定移植胰腺组织中髓过氧化酶 (MPO)活性 ,并进行组织学观察。结果　实验组保存的胰腺组织结构损伤明显轻于对照组。保存后实验组胰腺组织ATP和TAN水平 [(5 6 6± 0 37) μmol/ g ,(8 6 2± 0 88) μmol/g]明显高于对照组 [(2 82±0 2 4 ) μmol/ g ,(4 34± 0 4 1) μmol/ g],差异具有显著性 (P <0 0 5 )。放射自显影显示外源性 [α 3 2 P]ATP进入胰腺细胞内。移植胰腺早期功能指标检测 ,实验组血糖值 [(9 3± 2 2 )mmol/L]明显低于对照组 [(14 1± 2 9)mmol/L],实验组血清脂肪酶 [(139± 13)U/L]明显低于对照组 [(2 96± 2 5 )U/L],实验组胰腺组织MPO[(1 19± 0 16 )U/ g ]明显低于对照组 [(2 2 5± 0 2 8)U/ g],差异均具有显著意义 (P <0 0 5 )。结论　外源性ATP用于胰腺     

姜黄素对大鼠单肺移植缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察大鼠单肺移植缺血再灌注肺损伤肺功能改变及姜黄素（CUR）干预作用。方法建立大鼠原位异体左单肺移植模型。纯种雄性SD大鼠120只，随机分两组，每组又分三个亚组（n=12）：假手术组、载体组、CUR组，分别在缺血4h、再灌注2h和24h处死大鼠，测量移植肺损伤病理评分、氧合指数、肺湿干重比（W／D）、伊文思篮染料（EBD）含量。结果移植肺组织病理学主要表现为肺水肿，炎症细胞浸润，出血。与假手术组比较，再灌注2h，移植肺氧合指数从358．3下降到153．7，W／D从3．7增加到5．6，EBD含量从381．0μg／g干重增加到1172．3μg／g干重；再灌注24h后，氧合指数从394．2下降到102．3，移植肺W／D从3．8增加到6．6；EBD含量从387．5μg/g干重增加到927．5μg/g干重。供体和受体大鼠经CUR预处理后，明显减少缺血4h，再灌注2和24h的移植肺组织学病理评分，肺泡毛细血管通透性，湿干重比，改善气体交换。结论大鼠单肺移植后缺血再灌注损伤（IRI）肺功能学改变主要表现为肺泡毛细血管内皮损伤导致的通透性肺水肿及由此导致的氧合功能下降。CUR对大鼠单肺移植缺血再灌注肺损伤具有保护作用。     

腺苷对移植胰腺再灌注损伤保护作用的实验研究

目的探讨腺苷(ADO)对大鼠移植胰腺再灌注损伤的保护作用.方法制备同系大鼠异位全胰十二指肠移植模型.大鼠移植术前和术后5min 分别静脉注射药物ADO,8-PT(1,3二甲基-8-苯基黄嘌呤)和ADO+8-PT,然后将实验分为6组(1)空白对照组(C组);(2)移植对照组;(3)移植+ADO组(ADO);(4)移植+8-PT组(8-PT);(5)移植+ADO+8-PT组(ADO+8-PT ); (6)移植+[α-32P]ADO(放射自显影组).移植24h后检测胰腺组织中三磷酸腺苷(ATP)和总腺苷核苷酸(TAN)水平,检测血糖、血清脂肪酶、淀粉酶,测定移植胰腺组织中髓过氧化酶(MPO)活性,并进行组织学观察;放射自显影组鉴定胰腺细胞内ADO含量.结果胰腺组织ATP和TAN水平ADO组>移植对照组>ADO+8-PT组>8-PT组(均为P<0.05);移植后24h血糖、血清脂肪酶和胰腺组织中MPO水平ADO组<移植对照组<ADO+8-PT组<8-PT组(均为P<0.05);ADO组保存的胰腺组织结构损伤明显轻于其他移植组;放射自显影显示外源性[α-32P]ADO进入胰腺细胞内.结论外源性应用ADO或8-PT能分别增加或减少移植后胰腺组织ATP和TAN含量;腺苷对移植胰腺再灌注损伤有保护作用.     

Erythropoietin reduces ischemia-reperfusion injury after liver transplantation in rats

Human recombinant Erythropoietin (rHuEpo) has recently been shown to be a potent protector of ischemia- reperfusion injury in warm-liver ischemia. Significant enhancement of hepatic regeneration and survival after large volume partial hepatic resection has also been demonstrated. It was the aim of this study to evaluate the capacities of rHuEpo in the setting of rat liver transplantation. One-hundred-and-twenty Wistar rats were used: 60 recipients received liver transplantation following donor organ treatment (60 donors) with either 1000 IU rHuEpo or saline injection (controls) into portal veins (cold ischemia 18 h, University of Wisconsin (UW) solution). Recipients were allocated to two groups, which either received 1000 IU rHuEpo at reperfusion or an equal amount of saline (control). Animals were sacrificed at defined time-points (2, 4.5, 24, 48 h and 7 days postoperatively) for analysis of liver enzymes, histology [hematoxylin-eosin (HE) staining, periodic acid Schiff staining (PAS)], immunostaining [terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling (TUNEL), Hypoxyprobe] and real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) of cytokine mRNA (IL-1, IL-6). Lactate dehydrogenase (LDH) and alanine aminotransferase (ALT) values were significantly reduced among the epo-treated animals 24 and 48 h after liver transplantation (LT). The TUNEL and Hypoxyprobe analyses as well as necrotic index evaluation displayed significant reduction of apoptosis and necrosis in rHuEpo-treated graft livers. Erythropoietin reduces ischemia-reperfusion injury after orthotopic liver transplantation in rats.