p75NTR对小鼠面神经损伤轴突再生影响的实验研究

目的:探讨p75神经营养蛋白受体(p75 neurotrophin receptor,p75NTR)在面神经损伤再生修复中的作用。方法:p75NTR基因敲除小鼠和野生型小鼠的面神经总干损伤后第4天,在损伤的近中侧注射霍乱毒素B(choleratoxin B,CTB)进行示踪,对再生神经纤维进行免疫组化染色,然后计数进行统计分析。结果:p75NTR基因敲除小鼠再生的神经纤维,明显较野生型小鼠的短,差异有显著性(P<0.01)。结论:p75NTR可以增强面神经的再生。     

p75神经营养蛋白受体基因敲除对小鼠面神经损伤后神经再生的影响

目的探讨p75神经营养蛋白受体（p75NTR）在面神经损伤后神经再生中的作用。方法对p75NTR基因敲除小鼠和野生型129sv小鼠的一侧面神经总干在神经出颅2 mm处进行损伤,损伤后第2天,一部分小鼠在神经干损伤的近中侧注射霍乱毒素B（CTB）进行顺行示踪标记,损伤后3、7 d,应用免疫组织化学方法对神经纤维再生轴突进行长度测定及记数分析。另一部分小鼠在面神经总干损伤后第4天切断神经,将切断的面神经断端置入含有FastBlue的聚氯乙烯单端小管中进行逆行示踪标记,荧光显微镜下对面神经核运动神经元进行计数分析。结果p75NTR基因敲除小鼠与野生型129sv小鼠相比较,再生的神经纤维轴突长度明显不足,二者间面神经核再生运动神经元数量差异有统计学意义（P＜0.05）。再生轴突的免疫组织化学染色表明,p75NTR基因敲除小鼠再生的神经纤维轴突数量也明显降低（P＜0.01）。结论p75NTR基因可以增强面神经的再生。     

甲状腺激素对小鼠面神经损伤轴突再生及神经电生理功能的影响

目的:探讨甲状腺激素对小鼠面神经损伤轴突再生及神经电生理功能的影响.方法:将64只小鼠随机分为4组,即假手术组、模型组、甲状腺素组、甲状腺素+LY组,每组16只.除假手术组外,其余组均建立面神经损伤模型.术后苏醒开始干预,甲状腺素组于损伤处皮下注射50μg/kg中性甲状腺素溶液,甲状腺素+LY组在甲状腺素组基础上腹腔注...     

p75神经营养蛋白受体阳性舌鳞状细胞癌细胞的生物学特性研究

目的 对流式细胞仪分选获得的p75神经营养蛋白受体（p75NTR）阳性舌鳞状细胞癌细胞进行生物学特性研究。方法 通过流式细胞术检测舌鳞状细胞癌细胞系Tca-8113和Cal-27中p75NTR阳性细胞的表达。对流式细胞仪分选获取的 p75NTR阳性细胞进行单克隆培养、四甲基偶氮唑盐比色法及划痕实验检测,以未分选细胞为对照,分析 p75NTR阳性细胞的生物学特性。结果 舌鳞状细胞癌细胞株Tca-8113、Cal-27中,p75NTR阳性细胞的比例分别为3.1％和1.9％。与未分选的细胞相比,p75NTR阳性细胞的单克隆形成能力更高（ Tca-8113细胞, P=0.024;Cal-27细胞,P=0.009）;单克隆 p75NTR阳性细胞再培养 2周后, p75NTR阳性细胞率分别降为14.5%（Tca-8113）和5.8%（Cal-27）;p75NTR阳性细胞体外增殖能力显著增强,且具有明显的侵袭迁移能力。结论 p75NTR阳性舌鳞状细胞癌细胞具有肿瘤干细胞的特性。     

p75NTR对舌鳞癌Tca8113细胞凋亡的影响

目的:探讨p75NTR基因对舌鳞癌Tca8113细胞凋亡的影响。方法:流式细胞技术分选Tca8113细胞系中p75NTR阳性细胞及阴性细胞,对阳性细胞用脂质体瞬时转染荧光标记的p75NTR siRAN,实时定量RT-PCR检测p75NTR基因,western blot检测p75NTR蛋白表达;流式细胞仪Annexin V/PI双染色标记法进行凋亡检侧;MTT检测细胞增殖的影响。结果:p75NTR表达阳性的Tca8113细胞经p75NTR siRNA转染后p75TNR的表达被抑制;细胞凋亡率明显增加(P<0.05),细胞增殖率明显降低。结论:p75NTR在Tca8113细胞凋亡中具有调控作用。     

长期低剂量牙龈卟啉单胞菌感染对脂蛋白基因敲除小鼠动脉粥样硬化形成的影响

目的 评价牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)口腔内低剂量、长期、多次接种是否可影响载脂蛋白基因敲除小鼠(apolipoprotein E-knocked out,ApoE-/-)的动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)形成进程和病变程度.方法 20只C57BL/6背景小鼠,将其中13只种属为C57BL/6背景的ApoE-/-小鼠按随机数字表随机分成两组,实验组7只使用1013个/L的牙周致病菌Pg进行口腔内涂菌接种,持续15周共75次,对照组6只同法口腔内涂擦无菌肉汤培养基,比较两组小鼠体质量、血总胆固醇、三酰甘油及主动脉AS病损面积及病理组织变化的情况.另7只野生型C57BL/6小鼠取其主动脉组织作为正常对照.结果 实验组ApoE-/-小鼠主动脉AS病损平均面积为(98 363.68±12 043.00)μm2,显著大于未接种的小鼠对照组[平均病损面积(62 985.06±7419.64)μm2],P=0.035;两组体质量、血总胆固醇和三酰甘油差异均无统计学意义;与野生型C57BL/6小鼠正常主动脉相比,ApoE-/-小鼠主动脉内壁均有凸向管腔内的AS病损,且动脉壁变平,实验组较对照组AS斑块更明显,动脉管腔更狭窄.结论 Pg口腔内低剂量长期多次接种可以加速ApoE-/-小鼠AS的进展.

Abstract：

Objective To assess the effect of longterm and lower oral inoculation with Porphyromonas gingivalis (Pg) on the progression of atherosclerosis in apolipoprotein E-knocked out (ApoE -/-) mice. Methods Six-week-old male ApoE -/- mice were inoculated orally with 0. 1 ml live Pg(1013/L) or bouillon culture-medium quintic per week for 15 consecutive weeks, altogether 75 times of inoculations. The lesion area of atherosclerosis in the aortic tree was measured by en face quantification by red oil O staining method. The atherosclerotic lesion was examined by histopathology. The levels of total cholesterol and triglycerides were compared. Results At 22 weeks after inoculation, the mean atherosclerotic lesion area in inoculated mice was (98 363.68 ± 12 043.00) μm2 ,which was significantly greater than that in noninoculated mice, which was (62 985.06 ± 7419. 64) μm2 (P = 0. 035).Conclusions Longterm lower oral inoculation of Pg can accelerate the progression of atherosclerosis in apolipoprotein E-knocked out mice.     

胶质细胞源性的神经营养因子促进面神经损伤后再生的实验研究

目的：研究胶质细胞源性的神经营养因子（ＧＤＮＦ）对面神经损伤后的促再生作用。方法：家兔面神经双侧造成５ｍｍ神经缺损,以硅胶管套接后将硅胶管与神经外膜缝合固定。一侧硅胶管内淳入纯化ＧＤＮＦ,另一侧注入等量生理盐水对照。于不同时间段取材,切片行甲苯胺兰、ＨＥ、Ｂｉｅｌｓｃｈｏｗｓｋｙ银染改良法染色观察面神经元细胞体及再生神经结构。图像分析测量再生神经轴突直径及单位面积轴突数量、再生轴突恢复率。６０ｄ及     

p53 基因敲除 PLAG1 转基因小鼠模型构建的研究

目的：建立p53基因敲除plagl转基因小鼠模型。方法：依托plagl转基因多形性腺瘤小鼠。取两只plagl＋母鼠与一只p53＋／-雄鼠杂交,分别取F1代中基因型为plagl＋p53＋／-的雌雄小鼠交配,得到基因型分别为plagl＋p53-／-,plagl＋p53＋／-及plagl＋p53＋／＋的三种多形性腺瘤小鼠,分别测量比较三种基因型多形性腺瘤的生长速度。结果：plagl＋p53-／-基因型小鼠生长迟缓,寿命短,未能长出肿瘤便已死去。plagl＋p53＋／-肿瘤生长速度较同龄plagl＋p53＋／＋小鼠相比较快,且有明显的差异（P〈O．05）。结论：构建了p53基因敲除plagl转基因小鼠模型,且结果显示p53基因与PLAGl基因的相互作用和多形性腺瘤的生长速度增快有关。     

p75神经营养受体阳性外胚间充质干细胞的体外获取与生物学特性研究

目的 研究鼠胚胎颌面组织中外胚间充质干细胞(ectomesenchymal stem cells,EMSC)的生物学特性,探讨p75+EMSC的体外分化及影响因素,为揭示牙齿发生、发育机制提供实验依据.方法 通过提取12.5 d SD鼠胚胎颌面组织,用免疫荧光染色方法显示EMSC的迁移位置;用p75神经营养因子受体标记EMSC,通过流式细胞技术分选出p75+EMSC,并检测细胞周期和干细胞相关细胞表面抗原.结果 免疫荧光染色结果说明颅神经嵴源性干细胞在鼠胚胎12.5 d迁移到颌突中.p75+EMSC的阳性分选率为6.1％,细胞呈均匀成纤维细胞形态,生长曲线呈“S”型,在传代过程中S期的比例稳定.细胞特异性标志物CD29、CD146、Stro-1标记p75+EMSC,其在p75+EMSC中的表达均较高(＞90％).结论 SD鼠受孕12.5 d时,胚胎的牙齿启动尚未发生;分选后的p75+EMSC在传代过程中具有稳定的增殖能力和干细胞特征,尚未开始分化.     

长链非编码RNA-EPS对小鼠牙釉质发育的影响

目的:利用基因间长链非编码RNA-EPS(long intergenic non-coding RNA-EPS,lincRNA-EPS)基因敲除小鼠模型研究lincRNA-EPS对牙釉质发育的影响.方法:应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)分析方法鉴定lincRNA-EPS基因敲除小鼠的基因型;微型CT(micro-CT)检测8周龄lincRNA-EPS基因敲除小鼠和野生型小鼠下颌磨牙区的形态;扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)观察下颌磨牙区釉质的微观结构;X线及X射线能谱分析(energy dispersive X-ray spectroscopy,EDX)检测釉质矿化程度的改变;体视显微镜下分离PN0.5小鼠下颌第一磨牙牙胚;实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)技术检测其釉质发育相关基因AMELX、ENAM、AMBN、AMTN的mRNA表达量.结果:与野生型小鼠相比,micro-CT图像显示lincRNA-EPS基因敲除小鼠下颌磨牙舌侧出现大面积釉质缺损,舌侧牙尖磨耗成凹坑状;SEM结果显示,lincRNA-EPS基因敲除小鼠釉质结构紊乱,釉柱内羟基磷灰石晶体间存在间隙;lincRNA-EPS基因敲除小鼠下颌磨牙牙胚中,AMELX、ENAM、AMBN、AMTN的mRNA表达量较野生型小鼠显著降低,差异存在统计学意义(P<0.05).结论:LincRNA-EPS的缺失导致釉质发育相关基因表达下调,并引起牙釉质结构的紊乱,最终导致了釉质结构的缺损,证明lincRNA-EPS在牙釉质发育过程中具有重要作用.     

P75神经营养因子受体在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

目的:研究口腔鳞状细胞癌中p75神经营养因子受体(p75NTR)的表达,探讨p75NTR作为预测口腔鳞状细胞癌预后指标及将其作为肿瘤干细胞标志物的可能性。方法:采用SP免疫化学方法,对舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113及43例手术切除口腔鳞状细胞癌标本进行p75NTR表达的检测,另外选取5例癌旁组织及8例正常组织作为对照。应用SPSS16.0软件包,采用行×列表资料的χ2检验进行统计学分析。结果:p75NTR在Tca8113细胞膜中阳性表达。43例口腔鳞状细胞癌组织中,p75NTR阳性表达33例,在癌旁组织及正常对照组中没有表达。p75NTR均定位于细胞膜上,于癌巢中分散分布,且常有聚集性分布趋势。p75NTR表达与临床分期(P<0.05)及有无淋巴结转移(P<0.05)相关。结论:p75NTR的表达可以作为预测口腔鳞状细胞癌预后的指标,但还不能将其单独作为肿瘤干细胞的标志物,其在肿瘤发生、发展中的作用及机制仍需进一步研究。     

大鼠面神经损伤后神经元型一氧化氮合酶的表达变化

目的:通过观察面神经损伤后神经元型一氧化氮合酶(neuronal NOS,nNOS)在面神经核团中的表达,探讨NO在面神经损伤后的作用。方法:健康成年SD大白鼠20只,其中5只作为正常对照。其余15只为面神经损伤组,在双侧面神经下颊支制作挤压伤。术后1、2、3、4、5周各取3只损伤组大鼠作面神经核团nNOS表达的免疫组化观察。结果:正常情况下面神经元不表达nNOS。面神经损伤后,出现运动神经元变性,其神经元细胞nNOS免疫染色为阳性,并持续至损伤后第5周。结论:面神经损伤后其运动神经元的核团中会出现nNOS的表达。     

NTN/PGLA导管修复面神经缺损对兔面运动神经元的保护作用

目的：研究面神经低位切断伤后,应用重组NTN（Neurtuin）神经营养因子/PGLA导管修复,对兔面运动神经元的保护作用。方法：手术制作新西兰兔左侧面神经低位切断伤＋自体神经修复模型,右侧低位切断伤＋NTN/PGLA修复模型,运用辣根过氧化物酶逆行追踪标记,甲苯胺蓝染色对面运动神经元的分布、数量和形态进行定性、定量观察。结果：术后早期,NTN/PGLA的修复有效改善细胞形态,伤后5周存活神经元细记数明显比自体神经移植多（P〈0.05）;伤后10、14周,NTN/PGLA的保护作用减弱,NTN/PGLA侧与自体神经移植侧存活神经元记数无显著性差异,HRP逆行追踪NTN/PGLA侧于术后10周成功标记到FMN,且两侧标记的细胞数无明显差异。术后14周自体神经移植侧标记细胞出现神经元的分布异位,而NTN/PGLA侧仅1例出现。结论：成年动物（兔）面神经低位切断伤后引起面运动神经元死亡其形式以凋亡为主,兼有坏死;应用NTN/PGLA导管的修复早期对FMNs有明显保护作用,长期则可达到与自体神经移植修复相当的效果;且神经元分布异位明显少于自体神经移植修复。     

睫状神经营养因子在面神经再生中的表达变化及TGF-β、rhBMP-2的调控

目的　探讨睫状神经营养因子(CNTF)在面神经切断后的免疫定位及转化生长因子β(TGF-β)及人重组骨形成蛋白2(rhBMP-2)对其的调控作用。方法　选取面神经切断后不同时期的面神经核组织切片,通过免疫组化染色和图像分析对比不同时期面神经核中CNTF的浓度变化。结果　面神经切断后,术后1 d CNTF就开始表达并逐渐增加,分别于术后1周和1月面神经核运动元中CNTF的含量达到最大。此后逐渐下降。rhBMP-2对CNTF的表达无明显作用,而TGF-β能促进神经再生过程中CNTF的表达。结论　内源性CNTF在神经再生过程中对神经轴突的延伸也具有一定的促进作用。TGF-β可通过促进CNTF的表达而对面神经运动神经元起着重要的保护作用。     

脑溢安对大鼠舌下神经压榨伤后神经营养因子受体P75表达的影响

目的:观察大鼠舌下神经压榨损伤后舌下神经核内P75的表达及中药脑溢安对其表达的影响.方法:建立大鼠舌下神经压榨损伤模型,脑溢安治疗组用脑溢安颗粒剂以灭菌生理盐水调成药液灌胃,正常对照组和实验对照组用灭菌生理盐水灌胃.动物分别存活1、4、7、14 d后灌注固定并取脑切片,采用免疫组织化学方法观察舌下神经核内运动神经元胞体P75的表达变化.结果: 正常组大鼠两侧舌下神经核内均无P75免疫反应阳性物表达,生理盐水对照组和脑溢安治疗组损伤侧(右侧)舌下神经核内神经元胞体开始表达P75.2 组均术后1 d低量表达P75,7 d P75表达量达高峰;生理盐水对照组14 d P75表达量仍维持高水平,略有下降;脑溢安治疗组14 d P75表达量开始下降,7 d和14 d P75表达有显著性差异(P<0.05).与生理盐水对照组相比,脑溢安治疗组损伤后4、7 d和14 d损伤侧舌下神经核内P75免疫阳性细胞平均灰度值显著降低,阳性细胞数减少,有统计学差异(P<0.05).结论:脑溢安下调大鼠舌下神经压榨损伤后神经元胞体P75的表达.     

爆炸伤对犬面神经影响的实验研究

目的 建立面神经爆炸伤动物模型，并研究面神经爆炸伤特点及相关的全身反应。方法 麻醉下分别在距犬面部7、10、15cm处放置雷管，模拟爆轰波致伤效应，在雷管爆炸同时，用滑膛枪发射钢珠弹致伤犬同侧咬肌或颈部以模拟破片致伤。观察动物伤情，并取材检测面神经病理和传导速度改变。分析不同距离条件下全身和局部的创伤效应。结果 7cm致伤时动物伤情较重，不能存活较长时间；10cm致伤时动物经过抢救仍可存活，受伤的面神经干肿胀，外膜不光滑，神经干内弥漫性出血。镜下表现为广泛的神经纤维断裂、坏死，并由大量炎细胞弥散浸润；单纯爆炸、15cm处爆炸复合面部破片或10cm处爆炸复合颈部破片致伤时，局部伤情均较轻。随着创伤的恢复，面神经传导速度也逐渐恢复。结论 采用距爆源10cm，咬肌切线伤的致伤条件能最好地模拟爆炸条件对面神经的致伤作用，这种致伤条件接近实战情况，并利于伤后长期观察面神经创伤的预后和转归。