邻苯二甲酸二(2-乙己基)酯导致隐睾症发生跨代遗传的机制研究

目的 探讨增塑剂邻苯二甲酸二(2-乙己基)酯(DEHP)于性腺发育的关键时期作用于孕鼠(0),研究F1-F3代隐睾跨代遗传的演变情况及各代睾丸基因组DNA甲基化转移酶水平的改变情况.方法 妊娠SD大鼠随机分为两组:正常对照组和DEHP实验组,实验组自妊娠第七天(GD7)到第十九天(GD19)持续经口予以DEHP 750 mg·kg-1 ·d-1灌胃,观察子代隐睾发生情况,雌鼠受孕率;记录大鼠体重和睾丸、附睾重量以及AGD值,观察精子数量和质量;观察连续三代大鼠睾丸组织形态的演变情况,检测DNA甲基化转移酶变化情况.结果 孕鼠在孕期(GD7-GD19)暴露于DEHP,第一代(F1)隐睾发生率为30％,第二代(F2)隐睾发生率为12.5％,第三代(F3)未见隐睾发生;交配实验F1代受孕率50％,F2代75％,F3代100％;HE染色发现F1代睾丸生精上皮明显萎缩,生精细胞少,F2代有所改善,F3代形态趋于正常.Real Time-PCR、免疫组化和Western Blot表明DNA甲基化转移酶的表达随着遗传代数的增加而上调,差异有统计学意义.结论 DEHP损伤大鼠雄性生殖功能,通过改变DNA甲基化转移酶的表达,继而导致基因组印记甲基化修饰模式改变并遗传给下一代,从而使子代雄性生殖系统发育的关键性印记基因作用失衡,并最终导致子代产生隐睾,可能是导致生殖系统损害的重要毒理机制之一.     

DEHP诱导的隐睾鼠胰岛素样因子3基因CpG岛甲基化状态研究

目的 研究胰岛素样因子3(insulin-like factor 3,INSL3)基因在邻苯二甲酸二已酯(DEHP)致小鼠隐睾中DNA甲基化的状态.方法 运用"MethPrimer"软件对INSL3基因进行分析.预测CpG岛,通过甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MS-PCR)检测INSL3基因CpG岛的甲基化状况,并应用RT-PCR检测INSL3基因在正常组与实验组睾丸组织中的表达情况.结果实验组INSL3基凶第一外显子区存在CpG岛甲基化;实验组INSL3基因mRNA表达显著下降.结论 INSL3基因第一外显子区CpG岛的异常甲基化导致INSL3在隐睾鼠睾丸中表达降低,可能与隐睾的发生密切相关.     

儿童免疫性血小板减少症DNA甲基转移酶mRNA的表达

目的通过检测免疫性血小板减少症(ITP)患儿外周血淋巴细胞中DNA甲基转移酶1(Dnmt1)、DNA甲基转移酶3a(Dnmt3a)m RNA的表达,探讨DNA甲基化与儿童ITP发病机制之间的联系。方法采用RT-PCR方法检测36例新诊断ITP患儿与26例健康体检儿童外周血淋巴细胞中Dnmt1、Dnmt3a m RNA的表达水平;并进行分析比较。结果新诊断ITP患儿外周血淋巴细胞中Dnmt1的m RNA表达为(3.02±0.49),较对照组(4.58±0.52)明显降低,差异有统计学意义(t=11.95,P0.01);ITP患儿Dnmt3a m RNA的表达为(1.49±0.44),较对照组(2.41±0.32)明显降低,差异有统计学意义(t=9.12,P0.01)。结论新诊断ITP患儿可能存在DNA低甲基化,这种DNA低甲基化与儿童ITP发病机制关系密切。     

青春期精索静脉曲张对大鼠睾丸的影响与表皮生长因子的变化

目的观察青春期精索静脉曲张对大鼠睾丸的影响和表皮生长因子（EGF）的变化，探讨精索静脉曲张不育的机制。方法雄性wistar大鼠24只建立左侧精索静脉曲张模型作为实验组，18只为假手术组。术后4周、8周和12周采血并取双侧睾丸。光镜观察睾丸组织学变化并对生精功能评分；ELISA法测血清EGF浓度；RT-PCR法检测睾丸EGFmRNA表达。结果实验组睾丸重量减轻，生精功能受损，呈双侧性并进行性加重。术后8周实验组血清EGF水平显著低于假手术组（P〈0．01），4周和12周时差异无显著性意义（P〉0．05）。RT-PCR显示实验组左侧睾丸EGFmR—NA表达量术后4周（P〈0．05）、8周和12周（P〈0．01）均低于假手术组；右侧睾丸表达量术后8周（P〈0．01）和12周（P〈0．05）低于假手术组。结论青春期精索静脉曲张可使睾丸EGFmRNA表达量持续降低，引起睾丸发育障碍。     

HoxA13基因在尿道下裂胎鼠阴茎中的表达及意义

目的研究尿道下裂胎鼠阴茎中HoxA13核酸及其蛋白的表达,探讨其与尿道下裂发生的相关性。方法选用清洁级C57BL／6小鼠,用邻苯二甲酸二（2-乙基）己脂（DEHP）诱导并建立先天性尿道下裂模型;交配怀孕后,孕鼠随机分为玉米油对照组、实验组（DEHP500mg·kg^-1·d^-1）;各组持续灌胃;于怀孕第19天取出仔鼠,测量各组雄鼠体重、AGD;统计各组胎鼠尿道下裂的发生率,并观测阴茎的组织病理学变化;应用常规RT-PCR及免疫组织化学方法检测诱导出的尿道下裂胎鼠及正常对照胎鼠阴茎组织中HoxA13的mRNA及蛋白表达水平。结果对照组、实验组的AGD值分别为（0．208±0．01）cm、（0．181±0．12）cm,P〈0．01;尿道下裂发生率分别为0％、75．7％,P〈0．01。实验组胎鼠尿道板及包皮于阴茎腹侧隆起融合落后,该组尿道与腹侧皮肤间的皮下组织明显减少。DEHP500mg·kg^-1·d^-1诱导的尿道下裂胎鼠阴茎组织中HoxA13mRNA及蛋白表达较对照组明显降低。结论DEHP能影响胎鼠的生长发育及体重,并导致雄鼠外生殖器发育异常;HoxA13mRNA及蛋白的表达在DEHP诱导的尿道下裂胎鼠阴茎中均较正常对照组降低,提示HoxAl3基因异常表达可能是尿道下裂的发生机制之一。     

邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯诱导小鼠胚胎Leydig细胞凋亡的体外实验研究

目的研究邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯EDi（2-ethylhexyl）phthalate，DEHP]对小鼠胚胎睾丸Leydig细胞凋亡诱导作用。方法DEHP50、100、200ug／ml分别作用于体外培养、纯化的胎龄16d（GD16）小鼠胚胎睾丸Leydig细胞。光镜、电镜观察Leydig细胞形态和超微结构变化，DNA末端原位标记染色法（TUNEL法）和Annexin-V／PI双染法流式细胞仪分别检测kydig细胞凋亡指数、凋亡细胞比例。结果DEHP处理组透射电镜可见凋亡典型的形态学变化，凋亡指数及凋亡细胞比例与对照组比较有显著或非常显著性差异（P〈0．05或P〈0．01）。结论DEHP能诱导小鼠胚胎睾丸Leydig细胞凋亡。     

人绒毛膜促性腺激素对单侧隐睾大鼠睾丸生殖细胞凋亡的影响

目的探讨人绒毛膜促性腺激素（HCG）对单侧隐睾大鼠睾丸生殖细胞凋亡的影响。方法将sD雄性大鼠40只随机分为单侧隐睾组和假手术组，各20只，于日龄21d制备单侧隐睾模型。单侧隐睾组和假手术组各又分为HCG治疗组和未治疗组。日龄22d时HCG治疗组开始肌肉注射HCG20U，隔日1次，共7次。日龄35、60d时处死大鼠，取其睾丸，采用生物素-dUTP／酶标亲和素法（TUNEL法）检测其生殖细胞凋亡水平。结果单侧隐睾组隐睾睾丸生殖细胞凋亡指数（AI）高于假手术组，但无统计学差异（P〈0．05）；单侧隐睾各组对侧睾丸生殖细胞AI高于假手术未治疗组（P〉0．05）。假手术和单侧隐睾模型HCG治疗组阴囊内睾丸生殖细胞AI高于相应未治疗组，且35d假手术组治疗组与未治疗组间差异有统计学意义（P〈0．05）。60d单侧隐睾HCG治疗组大鼠隐睾侧睾丸生殖细胞AI高于相应未治疗组，但无统计学差异（P〉0．05）。结论单侧隐睾时不仅患侧睾丸生殖细胞凋亡增加，而且隐睾对侧阴囊内睾丸生殖细胞凋亡也增加；HCG的应用可加重睾丸生殖细胞凋亡，且停用后仍存在着一些不可逆的病理损害，故临床应用HCG要慎再，应尽早手术治疗。     

叶酸缺乏孕鼠子代脑组织DNA甲基化水平的变化

目的 :探讨叶酸缺乏对胎鼠宫内脑发育的影响 ,研究叶酸缺乏孕鼠子代脑组织基因组DNA甲基化水平的改变 ,为叶酸缺乏造成脑发育障碍提供分子和细胞水平的依据。方法 :雌性SD大鼠实验组 30只、对照组 2 0只 ,分别饲以不含叶酸和含 2mg叶酸 kg的纯合饲料 ,两周后与雄鼠交配 ,于怀孕第 2 0天对孕鼠剖腹取胎。对模型进行评价并观察叶酸缺乏对胎鼠发育的影响 ,高效液相色谱法检测胎鼠脑组织基因组DNA甲基化水平。对孕鼠妊娠晚期末血清叶酸、胎鼠血清叶酸及胎鼠脑组织DNA甲基化水平作相关分析。结果 :1 实验组孕鼠交配前及妊娠晚期末血清叶酸均明显低于对照组 ,外周血出现多分叶核粒细胞。实验组胎鼠血清叶酸也明显低于对照组 ,出现巨幼红细胞 ,RBC和Hb均低于对照组 ,且伴有宫内生长限制。 2 实验组胎鼠脑组织基因组DNA甲基化水平低于对照组 ,这种改变与孕鼠及胎鼠本身的血清叶酸浓度呈正相关。结论 :1 交配前两周开始限食叶酸直至妊娠期结束 ,所建立的叶酸缺乏孕鼠动物模型处于叶酸缺乏第三阶段 ,其胎鼠宫内生长受限制 ,红细胞出现巨幼变 ,但没有产生神经管闭合的异常。这是较理想的妊娠中晚期叶酸缺乏的大鼠动物模型。 2 母体叶酸缺乏时胎鼠的脑组织基因组DNA甲基化水平降低 ,这种改变与孕鼠及胎鼠本身的     

叶酸缺乏孕鼠子代脑组织DNA甲基化水平的变化

目的：探讨叶酸缺乏对胎鼠宫内脑发育的影响，研究叶酸缺乏孕鼠子代脑组织基因组DNA甲基化水平的改变，为叶酸缺乏造成脑发育障碍提供分子和细胞水平的依据。方法：雄性SD大鼠实验组30只、对照组20只，分别饲以不含叶酸和含2mg叶酸/kg的纯合饲料，两周后与雄鼠交配，于怀孕第20天对孕鼠剖腹取胎。对模型进行评价并观察叶酸缺乏对胎鼠发育的影响，高效液相色谱法检测胎鼠脑组织基因组DNA甲基化水平。对孕鼠妊娠晚期末血清叶酸、胎鼠血清叶酸及胎鼠脑组织DNA甲基化水平作相关分析。结果：1．实验组孕鼠交配前及妊娠晚期末血清叶酸均明显低于对照组，外周血出现多分叶核粗细胞。实验组胎鼠血清叶酸也明显低于对照组，出现巨幼红细胞，RBC和Hb均低于对照组，且伴有宫内生长限制。2．实验组胎鼠脑组织基因组DNA甲基化水平低于对照组，这种改变与孕鼠及胎鼠本身的血清叶酸浓度呈正相关。结论：1．交配前两周开始限食叶酸直至妊娠期结束，所建立的叶酸缺乏孕鼠动物模型处于叶酸缺乏第三阶段，其胎鼠宫内生长受限制，红细胞出现巨幼变，但没有产生神经管闭合的异常。这是较理想的妊娠中晚期叶酸缺乏的大鼠动物模型。2．母体叶酸缺乏时胎鼠的脑组织基因组DNA甲基化水平降低，这种改变与孕鼠及胎鼠本身的血清叶酸浓度呈正相关，可能是母体叶酸缺乏时胎鼠脑发育障碍的机制之一。3．受孕前后增补叶酸宜延长至妊娠结束，以减少不良妊娠结局的危险。     

DNA甲基化与儿童白血病的临床研究进展

<正>DNA甲基化是研究最广泛的哺乳动物表观遗传学修饰,它提供了一种稳定的可遗传的基因沉默机制,与组蛋白修饰和其他的染色质相关蛋白一起,在调节基因表达和染色体结构方面起重要作用。DNA甲基化是指在DNA甲基转移酶(DNA methyl-     

宫内发育迟缓大鼠肾脏Wilms瘤1基因DNA甲基化与蛋白尿关系

目的:观察宫内环境对肾脏Wilms瘤1（WT1）基因甲基化状态的影响及其与肾脏功能的关系,探讨宫内环境引发肾脏疾病的可能分子机制。方法:采用孕期全程低蛋白饮食法建立宫内发育迟缓（IUGR）大鼠模型,至自然分娩。对照组以孕期常规饲料饲养至自然分娩。12周龄时,比色法测定24 h尿蛋白定量,光镜下计数肾小球数目,实时PCR方法检测肾脏WT1基因mRNA水平及甲基转移酶DNMT1、DNMT3a和DNMT3b mRNA水平,MassARRAY定量分析检测WT1基因启动子区DNA甲基化状态。结果:①IUGR组新生鼠出生体重显著低于对照组（P<0.000 1）,直至12周龄时体重仍低于对照组（P=0.043）。②与对照组相比,12周龄时IUGR组大鼠24 h尿蛋白定量显著升高（P=0.016）;血清胱抑素C水平显著升高（P =0.036）,肾小球数目显著下降（P=0.001）。③与对照组相比,12周龄时IUGR组大鼠肾组织WT1基因mRNA的表达显著增高（P=0.047）,WT1基因启动子区甲基化水平显著降低（P=0.029）,并且其M1段甲基化水平与WT1基因mRNA的表达呈负相关（r=-0.939,P=0.000 1）,DNMT1和DNMT3b mRNA表达水平也显著下降（P值分别为0.003和0.010）。结论:不良的宫内环境可以影响大鼠肾脏WT1基因的甲基化状态,继而导致其异常表达,可能参与了IUGR大鼠成年期蛋白尿的发生。     

槲皮素预防先天性肾积水的实验研究

目的研究槲皮素对先天性肾积水的预防作用。方法在第12个妊娠日（gestational day,GD）,将C57BL／6J孕鼠随机分为四组：对照组以玉米油灌胃,TCDD组以2,3,7,8-四氯二苯并二噁英（2,3,7,8-tetrachlorodibenzodioxin,TCDD,25μg/kg）灌胃,槲皮素组以槲皮素（100mg／kg）灌胃,TCDD＋槲皮素组以槲皮素（100mg／kg）及TCDD（25μg/kg）灌胃。于GD18,检查胎鼠畸形发生情况,并留取胎鼠泌尿系统做组织学观察及免疫组化检测。结果对照组及槲皮素组胎鼠元畸形发生。TCDD组胎鼠双侧肾盂及输尿管上段积水的发生率为100％（肾积水3级占84．1％,4级占15．9％）,TCDD＋槲皮素组肾积水的发生率为13．4％（均为3级）,差异有统计学意义（P〈0．05）。免疫组织化学检测结果显示,对照组与槲皮素组胎鼠输尿管黏膜上皮Prx1蛋白均呈阴性表达;TCDD组及TCDD＋槲皮素组存在肾积水的胎鼠输尿管黏膜上皮呈阳性表达。TCDD组胎鼠输尿管黏膜上皮Prx1蛋白阳性表达率（100％）高于TCDD＋槲皮素组（13．4％）,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论槲皮素能有效降低TCDD所致胎鼠。肾积水的发生率,其对TCDD所致胎鼠肾积水的预防作用与抑制胎鼠输尿管黏膜上皮Prx1蛋白的表达有关。     

血管瘤血管内皮生长因子受体KDR基因异常甲基化的研究

目的通过建立甲基化敏感性高分辨率溶解曲线法（MS-HRM）,检测血管内皮生长因子VEGF受体KDR基因启动子区域在不同时期血管瘤、血管畸形及正常皮肤组织中的甲基化状态,初步探讨基因甲基化在血管瘤形成、增生、退化过程中的作用。方法选取不同时期血管瘤石蜡标本48例、血管畸形石蜡标本15例、正常包皮皮肤组织标本8例,分别提取DNA,经亚硫酸氢盐甲基化修饰、纯化、回收DNA,然后用甲基化敏感性高分辨率溶解曲线法（MS-HRM）,定量检测不同标本中血管内皮生长因子受体KDR甲基化水平。结果48例血管瘤标本共检出32例不同程度KDR基因启动子区域甲基化（66．67％）,其中24例增殖期血管瘤标本中检出21例（87．50％）不同程度甲基化,24例消退期血管瘤标本中检出11例（45．83％）不同程度甲基化,增殖期血管瘤与消退期血管瘤标本中KDR的甲基化程度比较,差异有统计学意义（X^2=9．375,P〈0．05）;15例血管畸形标本中仅检出甲基化程度为0-25％者2例（13．33％）,8例正常包皮皮肤组织中检测到1例甲基化0-5％（12．50％）。与血管瘤相比,差异均有统计学意义（P〈0．05,Fisher’确切概率法）。结论血管瘤中血管内皮生长因子受体KDR基因启动子序列CpG岛存在异常甲基化,血管内皮生长因子受体KDR基因异常甲基化可能与血管瘤增生、退化等有关。     

DNA总体低甲基化、错配修复基因启动子甲基化异常与神经管畸形的相关性

目的：研究神经管畸形（NTDs）胚胎脑组织和皮肤组织DNA总体甲基化以及错配修复基因启动子区甲基化水平。方法：在山西省吕梁地区以医院为基础进行病例-对照研究。从县级医院及妇幼保健院收集经B超诊断为NTDs的胎儿标本,同时收集非病理性引产、无畸形和发育迟缓的胎儿作为正常对照组。运用甲基化定量试剂盒测定脑组织和皮肤组织的DNA总体甲基化水平,甲基化特异性多连接依赖性探针扩增试剂盒检测7个错配修复基因（MLH1,MSH2,MSH6,MSH3,MLH3,PMS2和MGMT）启动子区甲基化水平。结果:共有65例NTDs胚胎,48例对照胚胎进入研究。①NTDs组的脑组织DNA总体甲基化水平显著低于对照组（5.3% vs 6.5%,P<0.001）,DNA总体低甲基化显著增加了NTDs发生风险（OR=4.98, 95%CI：1.42~17.53）。皮肤组织DNA总体甲基化水平在两组间差异无统计学意义(13.3% vs 13.1%,P>0.05);②NTDs和对照组的MSH6启动子（MSH6-301:2.5% vs 3.7%,P<0.05）和PMS2启动子（PMS2-328：5.7% vs 6.7%;PMS2-142：2.0% vs 2.7%,P<0.05）的甲基化水平存在显著差异。结论：DNA总体低甲基化、错配修复基因启动子区的异常甲基化修饰与NTDs发生有关。     

维生素E拮抗邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯尿道发育毒性的实验研究

目的 探寻维生素E(Vitamin E,VitE)对邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[Di(2-ethylhexy1)phthlate,DEHP]所致大鼠尿道发育毒性的拮抗作用及其可能机制.方法 GD12(gestation day12)SD孕鼠随机分为4组,每组20只:玉米油对照组、DEHP组(500 mg·kg-1·d-1)、DEHP(500mg·kg-1·d-1)+VitE(200mg·kg-1·d-1)组和VitE组(200mg·kg-1·d-1).各组分别于母鼠孕期12～19d(GD12～19)持续经口灌注给药.各组分别留取10只孕鼠让其正常分娩,出生第一天,即对新生大鼠计数,并在解剖显微镜下测量雄性新生鼠的肛门生殖器距离(anal genital distance,AGD)并称体重;雄性仔鼠70日龄时逐个检查尿道下裂的发生情况.余孕鼠在GD19d行破宫产取仔代鼠,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测胎鼠阴茎TGF-β1,TGF-βR3 mRNA的表达水平.DNA末端原位标记染色法(TUNEL法)检测胎鼠阴茎尿道上皮细胞凋亡情况.结果 各组TGF-β1mRNA表达水平分别为:正常组为0.63±0.07、DEHP组为0.96±0.12、DEHP+VitE组为0.65±0.07、VitE组为0.62±0.06,DEHP组表达明显较其他各组增高(P＜0.05).各组TGF-βR3mRNA表达水平分别为:正常组为0.47±0.10、DEHP组为0.75±0.10、DEHP+VitE组为0.49±0.09、VitE组为0.46±0.09,DEHP组表达明显较其他各组增高(P＜0.05).各组胎鼠阴茎凋亡指数分别为:正常组为(30±2.0)%、DEHP组为(8.8土1.1)%、DEHP+VitE组为(28.9±1.6)%、VitE组为(29.6±2.0)%,DEHP组凋亡细胞数较其他各组相比明显减少,差异有统计学意义(P＜0.01).导致大鼠尿道下裂的发生.VitE可降低DEHP上调的胎鼠阴茎TGF-β1,TGF-βR3 mRNA表达水平,恢复胎鼠阴茎尿道上皮细胞的凋亡水平.结论 VitE对DEHP所致尿道发育毒性具有拮抗作用,其机制可能与调控TGF-βs及胎鼠阴茎尿道上皮细胞的凋亡有关.

Abstract：

Objective To study the therapeutic effects of Vitamin E (VitE) on urethral development toxicity induced by di(2-ethylhexyl) phthalate (DEHP). Methods From gestational day 12 to gestational day 19 (GD 12-19) , the timed-pregnant Sprague-Dawley (SD) rats were fed with the eiwith 20 in each group: DEHP group, DEHP + VitE group, and VitE group. The control rats were fed with corn oil. Ten pregnant rats of each group delivered full-term infant rats. The male infant rats were counted, and the anal genital distance (AGD) and body weight were measured. Hypospadias morbidity was also counted on male rats after 17 postnatal days. In the rest 10 pregnant rats of each group, fetuses were harvested on GD19. Semi-quantitive RT-PCR was used to measure mRNA expression of TGF-β1 and TGF-βR3. TUNEL staining was used to measure cell apoptosis in the fetus' genital tubercles. Results Hypospsdias was observed in male rat after 17 postnatal days. The TGF-β1 mRNA of the control group, DEHP group, DEHP + VitE group, and VitE group is 0. 63 ± 0. 07,0. 96±0. 12, 0. 65 ±0. 07, and 0. 62± 0. 06, respectively. The TGF-βR3 mRNA of the control group,DEHP group, DEHP + VitE group, and VitE group was 0. 47 ± 0. 10, 0. 75 ± 0. 10, 0. 49 ± 0. 09,and 0. 46 ± 0. 09, respectively. The TGF-β1 mRNA and TGF-βR3 mRNA was up-regulated in the fetus of DEHP group (P＜0. 05). Cell apoptosis rate in fetus' genital tubercles on GD19 of the control group, DEHP group, DEHP + VitE, and VitE group was 30% ± 2. 0%, 8. 8% ± 1.1%, 28. 9% ±1.6%, and 29. 6% ± 2. 0%, respectively. Cell apoptosis rate was significantly reduced in the fetus of DEHP group (P＜0. 01). In the GD19 fetus treated with VitE, hypospadias morbidity, the TGF-β1 and TGF-βR3 mRNA expressions were significantly decreased. And cell apoptosis rate was significantly increased. Conclusions Vitamin E ameliorates the urethral development toxicity induced by DEHP via regulating TGFβs expression and cell apoptosis in rat fetus.     

妊娠期糖尿病胎鼠心脏T-同源盒转录因子表达研究

目的 探讨T-同源盒转录因子5（TBX-5）在母鼠妊娠糖尿病（GDM）胎鼠心脏中的分布、表达规律及其在胎鼠心脏发育异常中的作用。方法 将成年SD雌鼠随机分成GDM组和对照组,通过阴道涂片确定怀孕后分别注射链脲佐菌素（STZ）及柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（PBS）制备GDM模型,于孕0、3、6、9、12、15、19天对母鼠进行尾静脉采血测血糖,并分别于孕后第12、15、19天进行胎鼠心脏取材,HE染色观察心脏组织病理变化,免疫组化检测TBX-5的表达并进行半定量检测。结果 与对照组相比,GDM组胎鼠出现液化吸收胎、死胎、畸心胎的例数增多（P〈0.01）。在大体观及高倍镜下,GDM组12、15、19天胎鼠心脏发育异常比例多于对照组（P〈0.01）。在正常对照组及GDM组各亚组中,TBX-5均在第12天时表达最强,明显高于15、19天（P〈0.01）。TBX-5在15天及19天时的表达无明显差别（P〉0.05）。孕12、15、19天GDM组TBX-5在心肌细胞表达显著增强,与相应时间点的对照组相比均明显增高（P〈0.01）。结论 TBX-5蛋白在妊娠糖尿病母鼠孕12、15、19天三个观察点胎鼠心脏的表达水平明显增高,提示其过度表达可能与妊娠期糖尿病致胎鼠心脏畸形的发生存在关联。     

重症儿童高血糖与胰腺β细胞功能障碍的研究

目的 分析重症儿童高血糠发生与胰岛素抵抗和胰腺β细胞功能障碍之间的关系,探讨胰腺β细胞功能障碍与胰腺损伤的关系.方法 分析2012年6月至2013年3月湖南省儿童医院PICU收治的736例危重症患儿,以入住PICU 24 h内选择空腹时间点采集血标本,静脉血糖≥11.1mol/L为重度升高组（n=67）;6.1～ 11.1 mmol/L为轻度升高组（n=361）;≤6.1 mmol/L为血糖正常组（n =308）,比较血清胰岛素、C肽、血清淀粉酶、脂肪酶、尿淀粉酶、HOMA-β指数、HOMA-IR指数、按脓毒症严重程度分非脓毒症组（n =414）、脓毒症组（n=237）、严重脓毒症组（n=64）、脓毒性休克组（n=21）,比较血糖、血清胰岛索、C肽、HOMA-β指数、HOMA-IR指数差异.结果 （1）胰岛素、C肽、血淀粉酶、脂肪酶、尿淀粉酶的总体趋势随血糖升高而逐渐升高（rs值分别为0.235、0.142、0.142、0.119、0.093,P＜0.05）,三组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）,血糖重度升高组血清淀粉酶（IU/L）[102.81（10.48-191.69）]、脂肪酶（U/L）[69.75（10.67-121.85）]高于正常值上限.重度升高组HOMA-β指数下降至18.75％,HOMA-β指数随血糖水平升高而下降（rs=-0.108,P ＜0.05）,HOMA-IR指数随血糖升高而逐渐升高（rs=0.455,P ＜0.05）.（2）非脓毒症组、脓毒症组、严重脓毒症组、脓毒性休克组患儿的血糖、胰岛素、C肽水平和HOMA-β指数差异有统计学意义（P＜0.05）,HOMA-IR指数比较差异无统计学意义（P＞0.05）.脓毒性休克组血糖为9.21 （6.21-19.60） mmol/L,HOMA-β指数降低至10.52％,血糖、胰岛素、C肽、HOMA-β指数与其他三组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 重症儿童高血糖与胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能障碍有关,危重症继发胰腺损伤是导致胰岛β细胞功能障碍的原因;在脓毒症儿童,胰腺β细胞功能障碍使血糖升高的作用比胰岛素抵抗更加显著.     

邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯诱导小鼠尿道下裂及对阴茎TGF-β1表达的影响

目的 用邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)诱导建立先天性尿道下裂小鼠模型,研究DEHP对胎鼠阴茎内转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响.探讨尿道下裂发生机制.方法 C57BL/6孕鼠随机分为4组:玉米油对照组、DEHP低、中、高剂量组(i00、200、500 nag·kg-1·d-1).各组分别于母鼠孕期12d至17d(GD12～17)持续经口灌注给药.测量GD19雄性胎鼠体重、肛门至尿道口距离(AGD),通过尿道管型(UC)检测尿道解剖组织结构,比较尿道发育情况.应用免疫印迹(Western blot)检测胎鼠阴茎内TGF-β1蛋白量的表达水平.结果 DEHP成功诱导出尿道下裂小鼠动物模型,中、高剂量组AGD及前尿道较对照组明显缩短(P<0.001).实验组阴茎内TGF-β1蛋白表达水平随DEHP剂量增加而逐渐上升.结论 DEHP成功诱导建立先天性尿道下裂小鼠模型,胎鼠阴茎内TGF-β1蛋白异常表达可能是尿道下裂的发生机制之一.     

联合疫苗接种对反复呼吸道感染患儿健康相关生活质量的影响

目的 观察肺炎球菌疫苗与流感疫苗联合接种对反复呼吸道感染（recurrent respiratory tract infection,RRTI）患儿健康相关生活质量的影响.方法 454例RRTI患儿分为4组,对照组（n=135）仪使用安慰剂,联合接种组（n=143）联合接种肺炎球菌疫苗与流感疫苗,肺炎球菌疫苗组（n=95）、流感疫苗组（n=81）.观察4组患儿相关临床指标以及接种前、接种后14个月时的PedsQLTM4.0评分.结果 4组患儿在例数、性别、年龄、病程及社会经济地位评分等方面比较差异无统计学意义（P＞0.05）;治疗后肺炎球菌疫苗组、流感疫苗组和联合接种组患儿上、下呼吸道感染次数,呼吸道疾病所致发热次数,抗生素使用天数及总治疗费用均明显少于对照组（P＜0.01）,并且联合接种组明显优于单纯肺炎球菌疫苗组、流感疫苗组（P＜0.01）;接种前PedsQLTM4.0评分比较差异无统计学意义（P＞0.05）,接种后各组各维度生活质量均明显提高（P＜0.05）,而对照组差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 肺炎球菌疫苗与流感疫苗联合接种可有效改善RRTI患儿的健康相关生活质量,明显提高PedsQLTM 4.0评分,值得临床推广应用.