5-氟胞嘧啶对表达胞嘧啶脱氨酶的人肾母细胞瘤裸鼠异种移植瘤的疗效

目的　以人肾母细胞瘤裸鼠异种移植瘤模型 ,研究 5 氟胞嘧啶 (5 FC)作为原药对表达胞嘧啶脱氨酶 (CD)的肾母细胞瘤治疗 (以下简称CD/ 5 FC)的作用。方法　 1例低分化肾母细胞瘤组织 ,移植于无胸腺BALB/c裸鼠 ,经连续传代 ,建立了人肾母细胞瘤异种移植瘤模型。以腺病毒为载体 ,分别建立CD基因 (Ad/CMV CD)和lac基因 (Ad/CMV lac)的表达载体。瘤内注射基因表达载体 ,使基因转导入肿瘤细胞。用RT PCR检测转导基因在瘤细胞内的表达。腹腔注射 5 FC ,5 0 0mg·kg-1·d-1,连续 10d ,观察移植瘤生长情况。结果　经 5 FC治疗的小鼠 ,表达lac基因的移植瘤生长情况与未转导基因的移植瘤并无两样 ;表达CD基因的移植瘤生长则受到显著抑制。根据接种肿瘤后 8周的肿瘤重量 ,5 FC治疗对CD基因转导的移植瘤生长抑制率为 6 5 %。病理检查可见瘤细胞坏死 ,细胞器出现空泡。结论　在瘤内转导CD基因的基础上施以 5 FC治疗 ,对人肾母细胞瘤裸鼠移植瘤有明显疗效。     

胞嘧啶脱氨酶基因突变体D314A对人结肠癌细胞的抑制作用

目的：构建大肠埃希菌胞嘧啶脱氨酶（E. coli cytosine deaminase, ECCD）基因突变体:D314A: （即ECCD基因开放阅读框第314位氨基酸由天冬氨酸突变为丙氨酸）并研究其抗肿瘤作用。方法：构建含ECCD基因的真核表达质粒pcDNA3.1CDwt,应用点突变技术将pcDNA3.1CD中ECCD基因开放阅读框第314位氨基酸的碱基由A突变为C,即构成pcDNA3.1CDD314A。用LipofectamineTM2000将ECCD基因或:D314A: 基因转入人结肠癌细胞系LoVo细胞,以G418筛选出稳定表达的阳性克隆LoVoCDwt及LoVoCDD314A。应用MTT法检测ECCD基因及:D314A: 基因对LoVo细胞的直接杀伤作用及旁观者效应。结果：成功构建ECCD基因突变体:D314A: 并经测序确认。LoVo细胞转染ECCD基因及:D314A: 基因后均能表达相应的mRNA,LovoCDD314A细胞对5FC的IC50为(85.13±0.60) mmol/L,显著低于LoVoCDwt细胞的（689.76±0.45）μmol/L,(P=0.000);在旁观者试验中,当LoVoCDwt细胞和LoVoCDD314A细胞比例均为30%时,细胞存活率分别为(48.5±0.49)%与(17.3±0.40)%（P=0.000）。结论：ECCD基因突变体:D314A: 的抗LoVo细胞作用显著强于野生型ECCD基因,有望成为新的肿瘤基因治疗候选基因。     

5—氟胞嘧啶对表达胞嘧啶脱氨酶的人肾母细胞瘤裸鼠异种移植瘤 …

OBJECTIVE: To study the effect of 5-fluorocytosine (5-FC) as prodrug in the treatment of Wilms' tumor xenografts transduced with cytosine deaminase (CD) gene. METHODS: An in vivo model of a poorly differentiated Wilms' tumor transplanted in nude mice was established. Expression adenoviral-vector of CD gene (Ad/CMV-CD) or lac gene (Ad/CMV-lac) was transduced to the tumor xenografts by intratumoral injections. Expression of the transduced genes were confirmed by RT-PCR. Mice with Wilms' tumor xenograft were treated with 5-FC (500 mg.kg-1.d-1 x 10 d). Tumor growth was monitored. RESULTS: The growth of tumor xenografts transduced with lac gene grew as quick as the untransduced ones. In contrast, the growth of the tumor xenografts transduced with CD gene was significantly inhibited as compared to untransduced and lac gene transduced xenografts. The average rate of inhibition was 65% according to the tumor weight at 8 wk. Cell necrosis was observed in the CD gene transduced tumors. CONCLUSION: Intratumoral cytosine deaminase gene transduction followed by systemic 5-fluorocytosine is effective in the treatment of Wilms' tumor.     

体内复制缺陷型腺病毒载体介导的胞嘧啶脱氨酶基因转染胶质瘤细胞对5-氟胞嘧啶敏感

病毒介导的化学敏感基因的转染,为肿瘤的治疗提供了一条有希望的新途径,目前脑肿瘤的基因治疗集中在将包装携带TK基因的逆转录病毒的细胞系植入肿瘤,其主要局限性是逆转录病毒在体内的转染几乎无效,即只有和包装细胞非常接近的胶质瘤细胞才易被转染,且TK基因疗法所产生的旁观者效应需依赖细胞间的直接接触。本文介绍通过复制缺陷的腺病毒载体介导将细菌胞嘧啶脱氨酶(cd)基因转染至大鼠9L胶质瘤细胞,使其对在正常细胞没有毒性的核苷-5-氟胞嘧啶(5-Fc)敏感。     

生长抑素受体亚型在人鼻咽癌细胞株CNE2中表达

背景与目的：生长抑素受体（somatostatin receptor SSTR）在许多肿瘤组织均有表达，为生长抑素类似物如奥曲肽用于这些肿瘤的治疗提供了生物学基础，但对生长抑素受体在鼻咽癌中表达情况的研究甚少。本研究旨在了解生长抑素受体基因在鼻咽癌细胞中的表达情况，为生长抑素类似物用于鼻咽癌治疗的进一步研究提供试验基础。方法：采用RT—PCR法和SP免疫组化法联合检测体外培养的人鼻咽癌细胞株CNE2的SSTRs表达，并对PCR mRNA产物测序以鉴定结果。结果：RT—PCR提示人鼻咽癌细胞株CNE2分别表达生长抑素受体亚型SSTR1、SSTR2、SSTR4；免疫组化结果：人鼻咽癌细胞株CNE2表达SSTR1、SSTR2A为强阳性（〉60％），表达SSTR4为弱阳性、SSTR2介于两者之间、SSTR3和SSTR5则无表达。结论：我们的研究证实人鼻咽癌细胞株CNE2有多种生长抑素受体亚型基因表达，且以表达SSTR1、SSTR2较多。     

胞嘧啶脱氨酶基因联合放射对食管癌细胞株的杀伤作用

目的：观察大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶／5-氟胞嘧啶（CD／5-FC）自杀基因系统对食管癌细胞株（EC109细胞）的杀伤效应以及与放射联合应用时对食管癌肿瘤细胞协同杀伤效应。方法：采用PCR方法,从大肠杆菌基因组DNA中扩增出CD基因;构建重组真核载体pcDNA3．1-CD;用脂质体转染法转染食管癌ECl09细胞,观察CD／5-FC体系对EC109细胞的杀伤效应和杀伤时的旁观者效应以及对放射的增敏效应。结果：RTP—CR分析结果表明CD基因已转入ECl09细胞并开始转录。体外实验证实,5-FC对转CD基因后的食管癌细胞株有明显的细胞毒作用,CD／5-FC体系对肿瘤细胞对放射增敏效果明显,加5-FC及放射治疗组细胞存活曲线低于单纯加前药5-FC对照组或单纯放射对照组。结论：CD／5-FC体系对肿瘤细胞的自杀效应具有旁观者效应和放射增敏效果。     

mdr1启动子调控CD::UPP基因对紫杉醇耐药卵巢癌细胞的杀伤作用

目的探讨腺病毒介导的mdr1启动子调控胞嘧啶脱氨酶尿嘧啶磷酸核糖转移酶(CDUPP)融合基因联合5-氟胞嘧啶(5-FC)对紫杉醇耐药卵巢癌细胞的特异性杀伤作用.方法扩增、纯化含有mdr1-CDUPP基因的重组腺病毒,转染人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol和亲本细胞株A2780,RT-PCR检测mdr1和CDUPP基因的表达水平;之后加入5-FC,MTT法检测细胞抑制情况及旁观者效应,并观察腺病毒转染后裸鼠移植瘤的生长情况.结果mdr1和CDUPP基因在A2780/Taxol细胞中可稳定表达,转染后A2780/Taxol组的细胞生长明显低于A2780组;转基因的A2780/Taxol细胞联合5-FC后可通过旁观者效应杀伤周围未转基因的耐药细胞;耐药组移植瘤生长明显受到抑制,肿瘤体积为(569.10±187.93)mm3,对照组肿瘤体积为(2 111.98±230.82)mm3,差异有统计学意义(P＜0.01).结论mdr1启动子可调控CDUPP基因特异性表达并特异性杀伤紫杉醇耐药卵巢癌细胞.     

食管癌细胞系CSEC的建立及其生物学特性

目的建立人食管癌细胞系为潮汕沿海地区食管癌研究提供实验模型。方法采用胶原酶消化法建立人食管癌细胞系CSEC。研究培养细胞的形态特点、生长特征、对Scid小鼠的致瘤性、细胞遗传学特点及肿瘤相关标志物（AE3、p53）的表达。结果细胞系CSEC在体外持续稳定生长超过13个月，已传至80代以上，群体倍增时间为39．6小时。CSEC细胞具有鳞状细胞的形态和结构特点，胞浆富含张力原纤维束，细胞间可见桥粒。Sdd小鼠移植瘤的组织学形态与患者的原发肿瘤一致。细胞系CSEC呈近四倍体核型，染色体结构改变常见而且复杂。肿瘤相关标志物（AE3、p53）呈强阳性表达。结论人食管癌细胞系CSEC是一分化较高且生物学特性稳定的鳞状细胞癌细胞系，可为食管癌的发病机制和治疗研究提供有价值的实验模型。     

双自杀基因系统对胰腺癌细胞Capan-2的特异性杀伤作用

目的:研究腺病毒介导的VEGF启动子驱动CD/TK融合基因系统(Ad-VEGFP-CDTK)对胰腺癌细胞Capan-2的特异性杀伤作用。方法:重组腺病毒载体体外感染表达VEGF的Capan-2细胞株,观察其感染效率,并以RT-PCR方法检测转基因细胞内CDTK的表达;然后给予不同浓度的前药更昔洛韦(ganciclovir,GCV)和5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC),MTT法观察该体系对Capan-2细胞增殖的影响及其旁观者效应;电镜观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞周期和DNA含量的变化;建立小鼠Capan-2细胞动物模型,计算抑瘤率。结果:两种腺病毒对Capan-2的感染率相似,其感染率随腺病毒效价的增高而递增。RT-PCR方法检测发现转染Ad-VEGFP-CDTK的细胞有目的基因表达。MTT法检测显示前药呈剂量依赖性抑制Capan-2细胞生长,且观察到该体系明显的旁观者效应。电镜下可见Capan-2细胞有凋亡改变;流式细胞仪测定用药组出现典型的凋亡峰,细胞周期分析显示治疗后细胞G0/G1期比率增多,G2/M及S期细胞减少。体内裸鼠移植瘤模型的建立成功,实验组肿瘤体积缩小。结论:VEGF启动子可调控双自杀基因体系选择性杀伤胰腺癌细胞Capan-2,并诱导细胞凋亡,可显著抑制人胰腺癌裸鼠移植瘤的生长。     

人类乳腺良恶性病变的SSTR2mRNA表达及其与类固醇受体相关性研究

目的了解人类良、恶性乳腺病变组织中生长抑素受体亚型2(SSTR2)mRNA的表达情况,并探讨其与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)的相关性.方法收集23例乳腺癌、16例乳腺增生病和9例乳腺纤维腺瘤手术标本,采用多相寡核苷酸探针原位杂交法检测SSTR2mRNA表达,免疫组化法检测ER、PR状况,并用图像分析仪进行SSTR2mRNA相对含量测定.结果SSTR2mRNA在乳腺癌表达的阳性率(87%)和相对含量(0.47)均明显高于乳腺良性病变(64%,0.26)(P＜0.05).乳腺良性病变中SSTR2mRNA表达与ER呈正相关(P＜0.05);在乳腺癌中SSTR2mRNA表达与ER、PR均呈正相关(P＜0.05).结论SSTR2mRNA在乳腺良、恶性病变组织中普遍表达,恶性高于良性;SSTR2mRNA表达与ER、PR具有相关性,提示对ER阳性乳腺癌采用抗雌激素与SST类似物联合治疗的可行性.     

具有高转移潜能的人肝癌细胞系的建立及其生物学特性

目的利用裸鼠人肝癌高转移模型（ＬＣＩ－Ｄ２０）的皮下移植瘤组织在体外建立一株具有高转移潜能的人肝癌细胞系（ＭＨＣＣ９７）,并对其一般生物学特性进行观察。方法将分离的瘤细胞制成细胞悬液,用１０％人ＡＢ型血清的高糖ＤＭＥＭ培养液建成该细胞系,采用流式细胞术和染色体Ｇ－显带方法,进行细胞遗传学分析;用ＡＢＣ免疫组化法,观察其肺转移灶中癌细胞甲胎蛋白（ＡＦＰ）表达情况。结果ＭＨＣＣ９７细胞为典型的上皮样细胞,符合一般上皮性恶性肿瘤细胞的病理学特征。该细胞经皮下和肝内接种均可使裸鼠致瘤,并发生肺部转移。肝内接种者,肺转移达１００％（１２／１２）。ＭＨＣＣ９７细胞为异倍体细胞,染色体均为超二倍体,ｉ（１）（ｑ）和ｄｅｒ（４）（ｐｔｅｒ→ｑ３５：：？）等为其标志染色体,未显示有完整Ｙ染色体存在。肺转移灶的癌细胞ＡＦＰ阳性。结论ＭＨＣＣ９７细胞具有与原移植瘤相似的生物学特性。染色体的畸变可能与其发生发展有关     

两位点短发卡状RNA诱导AKT2基因沉默在卵巢癌细胞紫杉醇敏感性中的应用研究

目的：探讨AKT2基因在肿瘤细胞对紫杉醇敏感性中的作用。方法：分别构建2个针对同一AKT2基因不同位点的短发卡状RNA（shRNA）载体，转染人卵巢癌细胞A2780、SKOV3，荧光显微镜观察细胞内荧光蛋白的表达及转染效率，运用RT—PCR、蛋白质免疫印迹（western blotting）方法比较单独转染的抑制瘤和共转染对AKT2表达的沉默效率；抑制AKT2表达后，流式细胞仪（FACS）检测肿瘤细胞对紫杉醇的敏感性。结果：构建的2种shRNA表达载体均可抑制AKT2mRNA和蛋白的表达，共转染的抑制率明显高于分别单独转染的抑制率（P〈0．05）；FACS结果显示，共转染沉默AKT2基因后，细胞凋亡率明显增加（P〈0．05）。结论：共转染针对AKT2基因不同位点的2个shRNA真核表达载体，对AKT2基因的抑制效率高于单独转染1个载体；抑制卵巢癌细胞中AKT2基因表达，能增强其对紫杉醇的敏感性。     

蛋白质精氨酸甲基转移酶2在乳腺癌细胞中的表达及其对SKBR-3细胞生长特性的影响

目的:探讨蛋白质精氨酸甲基转移酶2(protein arginine methyltransferase 2,PRMT2)基因在多种乳腺癌细胞株中的表达情况,以及外源性PRMT2基因过表达对乳腺癌SKBR-3细胞生长特性的影响.方法:采用real-time RT-PCR法检测PRMT2基因在不同乳腺癌细胞株中的表达,并建立稳定表达pcDNA3.1/NT-GFP-PRMT2的SKBR-3细胞株;激光共聚焦显微镜下观察外源性PRMT2蛋白在细胞中的定位,检测在雌激素和雌激素受体(estrogen receptor,ER)拮抗剂4-OHT作用下过表达PRMT2基因对SKBR-3细胞增殖的影响.结果:PRMT2基因在ERα阳性乳腺癌细胞株中表达水平明显高于ERα阴性乳腺癌细胞株;在转染PRMT2基因的SKBR-3细胞株中,雌激素反应元件-荧光素酶报告基因(estrogen response elements-luciferase reporter,ERE-luc)的转录活性明显升高.在无处理因子情况下,外源基因PRMT2在SKBR-3细胞中的表达对细胞的形态及生长速度无明显影响.与未转染及转染GFP空载体的SKBR-3细胞相比,稳定转染PRMT2基因的SKBR-3细胞对雌激素的敏感性明显下降,但其对4-OHT处理的敏感性降低无明显差异.结论:PRMT2基因表达的多少及部位与乳腺癌细胞中ERα的表达密切相关.外源性PRMT2基因在乳腺癌SKBR-3细胞中稳定表达使细胞对雌激素的敏感性降低,但不增加细胞对ER拮抗剂4-OHT的耐药性.     

食管癌患者自然杀伤细胞活化性受体NKG2D及其分泌性配体sMICA的检测

目的 探讨宿主自然杀伤(NK)细胞受体NKG2D在抗食管癌中的作用及其与肿瘤免疫逃逸的关系.方法 用流式细胞术检测50例食管癌、26名健康对照外周血NK细胞NKG2D的表达状况,用酶联免疫吸附(ELISA)法检测外周血中可溶性MHC-1类链相关分子A(sMICA)的含量表达.结果 食管癌患者手术前后及健康对照外周血NK细胞NKG2D的表达水平分别为(87.25±3.06)%、(88.38±4.24)%、(92.46±1.46)%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05).相应配体sMICA在食管癌患者血清中的表达较健康人中增高,但差异无统计学意义(P0.05);在食管癌患者中不同肿瘤大小、分化程度、手术分期及是否有淋巴结转移等中表达差异无统计学意义(P0.05);但在晚期患者(Ⅲ、Ⅳ期)和有淋巴结转移者中较健康对照明显增高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 食管癌患者外周血NK细胞活性降低,其活化性受体NKG2D表达的下降是NK细胞活性下降的原因之一.食管癌患者免疫逃逸可能与NKG2D表达下凋及其配体sMICA的表达升高有关.     

人肺腺癌A549细胞系干细胞相关亚群的分离与鉴定

目的 分离人肺腺癌A549细胞系中的侧群(SP)细胞亚群并探讨其细胞特性.方法 采用免疫组化法检测人肺腺癌A549细胞系中ABCG2蛋白的表达.采用流式细胞术分选A549细胞系中的SP和非SP细胞亚群,并检测两亚群细胞的分化功能.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测两亚群细胞的ABCG2蛋白表达,通过两亚群细胞的生长曲线、细胞分裂指数、细胞周期各时相分布、平板克隆形成实验、体外侵袭和迁移实验、化疗药敏试验、细胞内药物浓度测定以及裸鼠移植瘤实验,比较两亚群细胞的生物学行为,并用RT-PCR和免疫组化方法检测移植瘤组织中ABCG2的表达.结果 A549细胞系中ABCG2蛋白的阳性表达率为2.13%.通过流式细胞术能成功分选得到SP细胞和非SP细胞,SP细胞亚群可产生SP及非SP两种细胞,而非SP细胞只能产生非SP细胞.SP细胞表达ABCG2,非SP细胞则不表达.两细胞亚群的增殖、迁移能力相似,吸光度、分裂指数、细胞周期时相分布和细胞体外迁移实验穿过滤膜的细胞数差异均无统计学意义(均P＞0.05),但SP细胞的侵袭能力和成瘤能力强于非SP细胞,细胞体外侵袭实验穿过滤膜的细胞数、体外细胞克隆形成数和移植瘤成瘤率均高于非SP细胞(P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05).SP细胞和非SP细胞对顺铂(DDP)的敏感性和细胞内药物浓度相似,非SP细胞对5-氟尿嘧啶(5-Fu)、依托泊苷(VP-16)、长春瑞滨(NVB)和吉西他滨(GEM)的敏感性及细胞内药物浓度则高于SP细胞(均P＜0.01).结论 人肺腺癌A549细胞系SP细胞亚群富集了肺癌干细胞,通过流式细胞仪分选肺腺癌SP细胞亚群是分离肺腺癌干细胞的有效方法.

Abstract：

Objective To isolate and characterize the side population cells(SP cells) in the lung adenocarcinomas cell line A549. Methods The protein expression of ABCG2 in human lung adenocarcinoma cell line A549 was detected by immunohistochemistry.SP and NSP cells in the cell line A549 were isolated by FACS,and their differentiation was analysed.ABCG2 expression in the two cell subsets was detected by RT-PCR.The cell growth curves,cell division indexes,cell cycles,plate clone formation tests,migration and invasion assays,chemotherapeutic susceptibility tests,tests of the intracellular drug levels,and the tumor cell implantation experiments on nude mice were applied to study the biological properties of the two cell subsets.The expression of ABCG2 in the transplanted tumor in nude mice was detected by immunohistochemistry and RT-PCR. Results The positive rate of ABCG2 expression in the A549 cells by immunohistochemistry was 2.13%.SP and NSP cells were isolated by FACS.The SP cells could produce both SP and NSP cells,while NSP cells only produced NSP cells.SP cells expressed ABCG2,but NSP cells did not.The proliferation and migration abilities of the two cell subsets were similar,but the invasion and tumorigenic ability of SP cells was significantly higher than that of NSP cells.The susceptibilities to DDP and its intracellular levels of the two cell subsets were similar,but the susceptibilities to 5-FU,VP16,NVB and GEM and their intracellular levels of NSP cells were significantly higher than those of the SP cells. Conclusions SP cells in the human lung adenocarcinomas cell line A549 is enriched with tumor stem cells.An effective way to get lung adenocarcinomas stem cells is to isolate SP cells by FACS.     

构建人类肾上腺皮质腺癌细胞系并用其验证过继免疫细胞治疗效果

 目的　建立人类肾上腺皮质腺癌（ACC）细胞系ACC-LWL,研究其表型及肿瘤相关抗原表达,并以此模型初步探讨过继免疫细胞治疗ACC的可行性。方法　手术获得的ACC的新鲜肿瘤组织经体外原代和传代培养至稳定生长,分析其生物学特征,包括癌细胞集落形成、染色体及成瘤性,经流式细胞术分析细胞系细胞表型,RT-PCR检测MN／CA9和HLA-A2基因表达。体外用IL-2（200 U／ml）和ACC-LWL冻融抗原（20 μg／ml）共同刺激异体人单个核细胞（PBMC）产生细胞毒性T淋巴细胞（CTL）,通过流式细胞术分析异体人CTL的CD3、CD4、CD8表达水平,检测CTL对ACC-LWL肿瘤细胞的杀伤作用。结果　ACC-LWL表现恶性肿瘤细胞的生物特性,能于裸鼠体内成瘤,细胞高表达MHC-I,低表达Her-2／neu和MHC-Ⅱ,不表达CD80和CD86。ACC-LWL表达MN／CA9和HLA-A2基因。从HLA-A2+和HLA-A3+供体获得的CTL均显示杀伤ACC-LWL,未见HLA限制性杀伤。结论　成功建立ACC细胞系ACC-LWL,可提供用于研究人类ACC的细胞及动物模型,为过继免疫细胞治疗在ACC中的应用提供初步的实验依据。     

Drug resistance to 5-aza-2′-deoxycytidine, 2′,2′-difluorodeoxycytidine, and cytosine arabinoside conferred by retroviral-mediated transfer of human cytidine deaminase cDNA into murine cells

Purpose: The hematopoietic toxicity produced by the cytosine nucleoside analogs is a critical problem that limits their effectiveness in cancer therapy. One strategy to prevent this dose-limiting toxicity would be to insert a gene for drug resistance to these analogs into normal bone marrow cells. Cytidine (CR) deaminase can deaminate and thus inactivate 5-aza-2^′-deoxycytidine (5-AZA-CdR), 2^′,2^′-difluorodeoxycytidine (dFdC) and cytosine arabinoside (ARA-C). The aim of this study was to determine if gene transfer of CR deaminase into murine fibroblast cells confers drug resistance to these cytosine nucleoside analogs and if this resistance can be prevented by the CR deaminase inhibitor, 3,4,5,6-tetrahydrouridine (THU). Methods: NIH 3T3 murine fibroblast cells were transduced with retroviral particles containing the human CR deaminase cDNA. Assays measuring CR deaminase activity as well as the inhibitory action of 5-AZA-CdR, dFdC and ARA-C on colony formation, were performed in the presence of different concentrations of THU. Results: Retroviral-mediated transfer of the CR deaminase gene into 3T3 fibroblasts produced a considerable increase in CR deaminase activity. The transduced cells also showed significant drug resistance to 5-AZA-CdR, dFdC and ARA-C, as demonstrated by a clonogenic assay. This drug resistance phenotype and elevated CR deaminase activity were reversed by THU. Conclusions: These findings indicate that the CR deaminase gene can potentially be used in cancer gene therapy for protecting normal cells against the cytotoxic actions of different cytosine nucleoside analogs. In addition, the CR deaminase-transduced cells can be used as a model for screening different CR deaminase inhibitors in an intact cellular system. Received: 30 September 1997 / Accepted: 16 January 1998