人参总皂甙诱导人骨髓基质细胞表达GM-CSF的实验研究

目的：研究人参总皂甙(TSPG)对人骨髓基质细胞表达GM—CSF的影响及其与人粒单系血细胞发生的关系。方法：采用造血祖细胞与骨髓基质细胞体外培养、造血生长因子生物学活性检测、免疫细胞化学和核酸分子原位杂交等技术。结果：TSPG能显著刺激粒单系造血祖细胞(CFU—GM)增殖；经TSPG诱导制备的骨髓基质细胞条件培养液富含GM—CSF样活性；TSPG能显著促进骨髓基质细胞的GM—CSF蛋白和mRNA表达。结论：TSPG可能通过直接和/或间接途径促进造血诱导微环境中的骨髓基质细胞合成和分泌GM—CSF，进而促进CFU—GM的增殖分化。     

人参皂甙对K562细胞表面分化抗原及造血生长因子受体表达的影响

目的：进一步探讨人参皂甙(TSPG)诱导K562细胞分化的作用机制及了解K562细胞的生物学特点，为开发TSPG临床应用提供理论与实验依据。方法：采用形态学观察和流式细胞术等方法，研究TSPG在诱导K562细胞向较为成熟细胞分化过程中，对其表面分化抗原及造血生长因子受体表达的影响。结果：TSPG可诱导K562细胞向较成熟的红系、粒系细胞分化，作用后细胞表CDl5、HIR2、EPO-R和GM—CSF—R的阳性细胞率均有所升高。结论：K562细胞为分化受阻滞的异常造血祖细胞，其生物学特点与正常人多向造血祖细胞(CFU—Mix)相似；TSPG诱导K562细胞成熟分化的作用机理可能与TSPG促进K562细胞EPO-R、GM—CSF—R表达升高有关。     

5种造血生长因子对造血祖细胞集落形成的影响

目的 探讨IL－3、IL－6、GM－CSF、G2、PIXY321对骨髓造血祖细胞集落形成的影响。方法 5种造血生长因子分别采用100、250、500、750、1000u/ml浓度,进行骨髓造血祖细胞集落培养,从中找出峰值浓度,然后在峰值浓度下进行集落培养,计数不同造血生长因子条件下所形成的集落。结果 IL－3、IL－6、GM－CSF、G2、PIXY321对造血祖细胞集落形成的峰值浓度分别为100、100、250、750、250u/ml。峰值浓度下,对CFU－E、BFU－Em、BFU－Eim、CFU－GM形成的作用强度不同,PIXY321条件下所形成的集落数最多。结论 这五种造血生长因子对骨髓造血祖细胞的集落形成均有促进作用,PIXY321效果显著。     

人参总皂甙诱导IL-3基因表达的实验研究

目的:研究人参总皂甙(TSPG)对人早期造血生长因子IL-3基因表达的影响.方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、核酸分子原位杂交方法.结果:未经诱导的人T淋巴瘤细胞株-Jurkat细胞RNA提取物的RT-PCR扩增产物中未见IL-3条带,而经TSG诱导后Jurkat细胞RNA提取物的RT PCR扩增产物中出现IL-3条带.核酸分子原位杂交显示经TSPG诱导的胎儿胸腺细胞、脾细胞IL-3mRNA表达的阳性率及阳性强度较对照组均有显著提高.结论:人参总皂甙能诱导人淋巴细胞表达IL 3mRNA,从而促进人早期血细胞发生.     

人参总皂苷对人慢性粒细胞性白血病K562细胞Fas、sFas和FasL的影响

人参Panax ginseng C.A.Meyer是祖国医学“补气”要药，人参总皂苷（total saponins of Panax ginseng ,TSPG）是其主要有效部位。既往研究已经证明TSPG既能促进造血干／祖细胞增殖分化及其信号转导，诱导造血生长因子基因表达，又能诱导白血病细胞凋亡和向较成熟细胞分化。诱导细胞凋亡的信号和转导途径多种多样，其中Fas—FasL途径属于死亡因子及其受体介导的信号转导途径。本实验就TSPG诱导人慢性粒细胞性白血病K562细胞凋亡的信号转导机制进行探讨，旨在为研究TSPG治疗白血病等肿瘤的机制提供实验依据。     

多潜能造血祖细胞向红系分化中GM-CSF受体和红细胞生成素受体的表达

目的：了解多潜能造血祖细胞向红系分化过程中造血因子受体的改变。方法；应用受体结合实验和Northern杂交技术分别测定了依赖Epo和GM－CSF增殖的造血相细胞株UT－7在Epo存在下向红系分化过程中Epo受体（EpoR）和GM－CSF受体（GM－CSF－R）及其mRNA的表达水平。结果；UT－7分化至红系阶段Epo－R表达明显上调，而高亲合力和中亲和力GM－CSF－R明显下调。结论：UT－7分化至红系阶段丧失对GM－CSF反应性是由于Epo促使GM－CSF－R-α和β亚单位表达下调所致。提示增加Epo－R和减少GM－CSF－R表达是Epo诱导髓系相细胞向红系分化的重要原因。     

内皮细胞对小鼠粒系、红系和巨核系造血的调控作用

目的　了解内皮细胞对小鼠粒系、红系和巨核系造血功能的影响 ,为进一步研究血发生及其调控提供理论依据。方法　取剖腹产术后 12小时以内的人脐静脉内皮细胞 ,按 Jaffe法进行培养 ,建立内皮细胞体外培养模型。而后收集原代培养的内皮细胞上清液 ,应用造血祖细胞体外培养方法进行体外粒 -单系祖细胞克隆形成单位 ( CFU - GM)、早期红系祖细胞克隆形成单位 ( BFU - E)、晚期红系祖细胞克隆形成单位 ( CFU - E)和巨核系祖细胞克隆形成单位 ( CFU - MK)半固体培养。结果　在有内皮细胞上清液存在的各培养体系中 ,集落形成良好。而在同样培养条件下 ,在无内皮细胞上清液存在的体系中 ,需加入外源性的 GM- CSF、EPO和 IL - 3才能表现出对粒系、红系和巨核系造血的刺激作用。结论　 1内皮细胞能够通过分泌造血生长因子 ,支持各系祖细胞的增殖与分化 ;2内皮细胞上清液可作为标准的生长因子来源 ,用于体外干细胞的扩增和某些血液病的治疗 ;3内皮细胞和造血干细胞 /祖细胞的相互作用在体内的造血调控中也可能起了重要作用 ;4在内皮细胞上清液中可能含有尚未能证明的其他造血生长因子。这些因子单独或协同地发挥作用 ,支持了各系祖细胞的增殖     

人参总皂苷体外定向诱导CD34+细胞分化为粒系血细胞的研究

目的研究人参总皂苷(TSPG)协同造血生长因子对CD34 细胞体外定向诱导分化为粒系血细胞的影响。方法应用阴性磁性分选策略,以StemsepTM系统从正常人骨髓细胞中分离CD34 造血干/祖细胞(HSC/HPC),通过甲基纤维素半固体培养法检测TSPG诱导CD34 HSC/HPC向粒系祖细胞集落(CFU-GM)增殖与分化的能力;在SCF IL-3 GM-CSF G-CSF(SIGG)液体培养体系中加入不同剂量的TSPG,检测对CD34 HSC/HPC增殖形成CFU-GM的影响以及CD33 细胞比例的变化。结果TSPG(10～50μg/mL)均能提高CD34 细胞形成CFU-GM的集落产率,以TSPG20μg/mL效果最为明显;不同质量浓度的TSPG协同造血生长因子在液体培养体系中诱导CD34 细胞2周,观察粒系血细胞的分化,TSPG10～70μg/mL均可不同程度地提高细胞总数、CFU-GM扩增倍数及CD33 细胞比例,TSPG20μg/mL是液体培养诱导CD34 细胞向粒系分化的最佳质量浓度。结论TSPG协同造血生长因子能促进CD34 细胞定向诱导分化为粒系血细胞。     

苦参促粒系造血机制及对白血病HL—60细胞的诱导凋亡作用

目的：进一步探讨苦参促粒系造血机制及新的抗白血病作用机理。方法：建立实验性环磷酰胺（Cy:0.08g/kg)低白细胞血症小鼠模型,观察苦参对粒系造血的影响和对白血病HL－60细胞的诱导凋亡作用。结果：苦参对Cy所致外周血白细胞和中性粒细胞数下降具有对抗和促恢复作用（P＜0．01）,能增加骨髓有核细胞、粒－巨噬系祖细胞（CFU－GM）数（P＜0．01）促进CFU－GM增殖并诱导其向粒系、巨噬系分化,且其促粒系造血作用与鲨肝醇一致。此外,苦参与明显诱导白血病HL－60细胞凋亡,呈药物浓度－粒应关系。结论：苦参有望用于防治化疗所致的白细胞减少及通过诱导细胞凋亡发挥其抗肿瘤作用。     

粒—巨噬细胞集落刺激因子和人类急性髓细胞白血病

GM－CSF与AML的生长急性髓细胞白血病（AML）属克隆性疾病，这意味着白血病起源于单一的病态变异的祖细胞，象正常造血祖细胞一样，白血病前体细胞是受多种造血生长因子刺激的，例如AML相细胞需要白细胞介素3（IL3）、粒－巨噬细胞集落刺激因子（GM－CSF）或粒细胞集落刺激因子（G－CSF）才能继续生存和增殖。现已明确认识到GM－CSF是对人类AML细胞最有活性的造血生长因子之一，人类AML细胞在其表面表达有特殊的GM－CSF受体，平均每个细胞拥有150－200个高亲合力受体。另外，大约有2000个低亲合力受体。高亲合力受体最有可…     

当归注射液对环磷酰胺损伤小鼠骨髓细胞组织形态及超微结构的保护作用

目的探讨当归注射液对环磷酰胺损伤小鼠骨髓细胞组织形态及超微结构的保护作用。方法将30只Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组和治疗组。于第7天断颈处死小鼠,取出尺骨和股骨,计数骨髓单个核细胞,并行尺骨组织学切片和超微结构观察。结果与正常组比较,模型组骨髓单个核细胞明显减少(P<0.01);而治疗组与模型组比较,骨髓单个核细胞明显增多(P<0.01)。骨髓超微结构观察显示模型组线粒体和内质网数量减少且明显受损,血窦减少、窦壁断裂。治疗组线粒体、内质网和血窦数量增加,形态基本正常。结论当归注射液能通过促进骨髓造血细胞增生,改善骨髓微环境而对受环磷酰胺损伤的小鼠进行保护。     

Exonuclease-1缺失延缓端粒酶缺失小鼠造血微环境的衰老

目的 研究Exo-1对端粒酶缺失小鼠造血微环境衰老的影响.方法 以端粒酶基因敲除小鼠( Terc-/-)和Exo-1基因敲除小鼠(Exo -1-/-)杂交,并进一步互交产生第三代端粒酶基因敲除小鼠(G3Terc -/-)以及第三代Terc和Exo-1双基因敲除小鼠(G3Terc-/- Exo-1-/-).以CD45.1野生型小鼠的骨髓细胞为供体,以2月龄G3Terc-/-或G3Terc-/- Exo-1-/-小鼠为受体,进行骨髓移植.在受体小鼠9月龄时,取骨髓、脾脏、胸腺、外周血等组织器官的细胞进行流式分析,研究G3 Terc-/-和G3Terc-/-Exo -1-/-受体小鼠中的野生型供体来源的造血干细胞的发育分化.结果 同G3Terc-/-小鼠相比,G3Terc-/- Exo-1-/-双基因敲除受体小鼠骨髓中野生型供体来源的B220+细胞比例升高,前体B细胞的比例也明显升高;脾脏B220+细胞的比例明显升高;胸腺发育正常;外周血中B220+细胞比例升高.结论 Exo-1缺失延缓了端粒酶基因敲除小鼠造血系统微环境的衰老,从而逆转了端粒功能障碍引起的骨髓造血干细胞发育分化异常.     

氟康唑治疗血液病患者真菌感染的临床观察

目的 分析血液病患者真菌感染的临床特点及抗真菌药物氟康唑的临床疗效.方法 收集血液病合并真菌感染应用氟康唑治疗的32例患者的临床资料,观察氟康唑在浅部真菌感染、深部真菌感染中的治疗疗效, 并进行统计学分析.结果 氟康唑治疗浅部真菌感染有效率达100%(12/12),与深部真菌感染有效率55%(11/20)比较,差异有统计学意义(P<0.01);浅部真菌感染组真菌清除率为100%(6/6)、深部真菌感染组为42.9%(3/7),两组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 在浅部真菌感染中,用氟康唑治疗经济有效;在深部真菌感染中,应根据病情及病原学特点选用药物. Abstract： Objective To analyze the clinical features of fungal infection in patients with hematopoietic diseases and observe the therapeutic effect of fluconazole. Methods The clinical datas of 32 cases of hematopoietic diseases with fungal infection treated by fluconazole were collected. The patients were divided into two groups:one was shallow fungal infection (group A),the other was deep fungal infection (group B),and the clinical effect of fluconazole in the two groups was observed. Results The effective rate of fluconazol in group A and group B was 100%, 55% respectively, and the difference between the two groups was statistically significant. Similarly, there was statistical difference between group A(100%) and group B(42.9%) in the eradication rate of fungi by fluconazole.Conclusions Fluconazole was effective and economical in treating shallow fungal infection. However, different antifungal agent should be choosen according to the condition and etiologic features of the disease in deep fungal infection.     

小鼠脾脏内粒-巨噬系祖细胞含量及其反应的某些特性

本实验报道脾脏的大小与脾脏内 CFU-GM 含量的关系;脾与股骨骨髓中造血干细胞数量的比较;不同剂量钴60照射以及饥饿对脾脏与骨髓中 CFU-GM 产率的影响。     

人参多糖动员的造血干/祖细胞移植重建造血衰竭小鼠造血功能的研究

目的:探讨经人参多糖动员的外周血造血干/祖细胞移植对造血衰竭小鼠造血重建的作用。方法:建立小鼠造血衰竭模型,移植经人参多糖动员的外周血单个核细胞,检测受体小鼠生存时间,外周血WBC,脾湿重及脾集落数,进行染色体嵌合实验。结果:经人参多糖动员的雄性小鼠外周血MNC1×105个输注给致死剂量照射的雌性小鼠,可明显延长小鼠存活时间;提高受体小鼠外周血WBC数;亦能增加脾湿重,提高脾集落(CFU-S)数;经Y染色体检测(PCR法)受体小鼠外周血单个核细胞可检出581bpY染色体序列。结论:经人参多糖动员小鼠的外周血中存在数量较多的造血干/祖细胞,回输给造血衰竭小鼠能重建小鼠造血功能。     

当归多糖诱导胎儿胸腺细胞、脾细胞表达GM-CSF、IL-3的实验研究

目的：研究“补血活血”要药当归的主要有效成分-当归多糖（APS）对胎儿胸腺细胞、脾细胞表达造血生长因子GM-CSF、IL-3的影响。方法：采用造血祖细胞体外培养、造血生长因子生物学活性检测、免疫细胞化学、核酸探针原位杂交等实验技术。结果：APS诱导的胸腺细胞、脾细胞培养上清液可促进早期造血祖细胞CFU-Mix增殖分化；APS诱导可促进胸腺细胞、脾细胞表达GM-CSF、IL-3蛋白及mRNA。结论：APS可促进淋巴细胞表达造血生长因子GM-CSF、IL-3，进而促进人早期造血细胞发生。     

造血干细胞低温保存与临床应用

目的观察低温保存造血于细胞（hematopoietic stem cell,HSC）的效率及冻存HSC的临床应用情况。方法25例骨髓造血干细胞（bone marrow stem cell,BMSC）以10％二甲基亚砜加10％自体血浆为冷冻保护剂,采用程控降温液氮保存。21例外周血于细胞（peripheral blood stem cell,PBSC）采用CP1（cryopreservativesl）加4％人血白蛋白为冷冻保护剂,非程控降温后液氮保存或低温冰箱保存。检测复温后单个核细胞（MNC）回收率、粒-单细胞集落形成单位（CFU—GM）回收率、台盼蓝拒染率（TBR）,并行细菌学培养,移植后观察输注反应及植入情况。结果BMSC冻存时间为1～3个月,中位时间1个月。复温后MNC回收率为（97．74±0．85）％,TBR为（96．74±0．91）％,CFU—GM回收率为（72．04±1．87）％。PBSC冻存时间为1～20个月,中位时间2个月。复温后MNC回收率为（97．75±1．34）％,TBR为（96．28±2．16）％。复温后46份标本细菌学培养均为阴性。实施自体骨髓造血干细胞移植（ABMSCT）25例,中性粒细胞绝对值（ANC）〉0．5×10^9／L的时间为（10．79±0．93）d,血小板计数（PLT）〉20×10^9／L的时间为（12．88±0．95）d。实施自体外周血造血干细胞移植（APBSCT）21例,ANC〉0．5×10^9／L的时间为（10±1．14）d,PLT〉20×10^9／L的时间为（12．04±2．13）d。两组间MNC回收率和TBR比较均无显著性差异,移植后APBSCT组ANC〉0．5×10^9／L的时间早于ABMSCT组,有显著性差异（P〈0．05）,但PLT〉20×10^9／L的时间两组无显著差异。出院前所有患者复查骨髓均示增生活跃或明显活跃。BMSC输注出现的不良反应明显多于PBSC输注。结论采用联合冷冻保护剂、非程控降温后液氮保存或低温冰箱保存来冻存HSC是切实可靠的,这种方法操作简便、价格低廉、安全有效;建议今后冻存BMSC前应去除红细胞。     

脐血细胞成份及造血干/祖细胞的定量研究

目的:探讨脐全血细胞组成特点,对脐血造血干／祖细胞进行定量测定。方法:采用自动血细胞分析仪检测血细胞成份,以流式细胞术为基础.应用双荧光标记单克隆抗体方法,测定造血于／祖细胞的含量。结果:脐血组成细胞的大多数检测指标高于成人外用血。CD34＋细胞占1.14±1.12％;CD34＋CD38-细胞占CD34＋细胞的16％。结论:脐血具有丰富的血细胞及造血于／祖细胞,有造血重建的临床应用潜能。     

双基因导入人脐血CD34^＋细胞共表达的调控

目的 观察携带双基因的逆转录病毒载体转导人脐血ＣＤ３４＾＋细胞后,猴病毒４０（ＳＶ４０）早启动子和内部核糖体进入位点（ＩＲＥＳ）对载体上,下游双基因共表达的影响。方法 分别构建含ＳＶ４０早启动子和ＩＲＥＳ的双基因逆转录病毒载体ｐＬＥＳＮ和ｐＬＥＩＮ,两者均携带增强型绿色荧光蛋白和新霉素抗性ｎｅｏ基因。重组载体经包装以其病毒上清感染经磁性细胞分离仪富集的人脐血ＣＤ３４＾＋细胞,而后进行集落形成细胞测     

异基因外周血干细胞移植治疗高危白血病

目的　探讨异基因外周血干细胞移植(allo-PBSCT)治疗高危白血病的疗效。方法　25例高危白血病患者,中位年龄34（5.5～52）岁,接受了HLA配型相合同胞供者外周血干细胞移植,其中急性白血病（AL）15例,（第一次完全缓解1例,为Ph染色体阳性,第二次及以上完全缓解期7例,复发7例,包括2例异基因骨髓移植(BMT)后复发;慢性粒细胞性白血病（CML）4例;（第2次慢性期、加速期、急变期、BMT后复发各1例）;骨髓增生异常综合征(MDS)6例,移植物抗宿主病（GVHD）预防方案采用经典环孢霉素（CsA）加氨甲蝶呤（MTX）。结果　所有患者均植活,中性粒细胞数恢复至≥0.5×109/L和血小板数≥20×109/L的中位时间分别为移植后14(10～18) d和11（7～45） d。发生II度及以上急性GVHD13例,包括1例III度GVHD,未发生IV度急性GVHD。23例可评估患者中16例(70%)诊断慢性GVHD。移植相关死亡率为16%,复发6例,4例经回输供者淋巴细胞获得再次缓解。19例患者无病存活,中位随访时间为304（94～1 963） d。2年总生存率、无病生存率及复发率分别为64%、58%及25%。结论　allo-PBSCT可治疗高危白血病患者,降低移植后复发率,延长无病生存。对有高危因素的血液系统恶性肿瘤患者,选择PBSCT替代骨髓移植更有优势。