糖尿病大鼠脑组织环磷酸腺苷反应元件结合蛋白及β-淀粉样蛋白的表达及意义

目的:分析糖尿病大鼠认知行为学改变与脑组织β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)及磷酸化CREB(phosphorylated CREB,pCREB)表达变化的相关性,为探讨糖尿病糖代谢异常在阿尔茨海默病发病中的作用机制奠定基础。方法:腹腔注射链脲佐菌素(streptozocin,STZ)诱发糖尿病大鼠动物模型,随机分为4周模型组(M4组)、6周模型组(M6组)、8周模型组(M8组),以同批未制模大鼠作为正常对照(N组)。穿梭箱实验、Morris水迷宫实验检测认知行为学改变,刚果红染色检测大鼠脑内淀粉样物质沉着,Western印迹法、酶联免疫吸附法和RT-PCR检测大鼠脑组织CREB与pCREB的表达,酶联免疫吸附法检测脑组织Aβ表达。结果:行为学检测显示模型组大鼠有显著的认知功能障碍,模型组与正常对照组比较有明显差异(P<0.01);模型组Aβ表达明显增高(P<0.01),模型组CREB与pCREB表达明显降低(P<0.01),而3个模型组比较无统计学差异;Aβ表达水平与CREB、pCREB表达水平负相关,Aβ与学习、记忆损伤正相关,CREB、pCREB与学习、记忆损伤负相关。结论:糖尿病糖代谢异常可能通过下调脑组织CREB、pCREB表达及增强Aβ表达诱发脑损伤,导致认知行为改变。     

多巴胺D4受体对酒精依赖大鼠海马区cAMP/PKA通路的影响

目的探讨多巴胺D4受体（DRD4）对酒精依赖大鼠海马区cAMP/PKA通路的调控作用。方法34只雄性SD大鼠,双瓶连续饮用10%乙醇制备酒精依赖模型,将建模成功大鼠根据DRD4 siRNA体内转染情况按随机数字表法分为4组,包括模型对照组、空白对照组（SD-No siRNA）、阴性对照组（SD-Ctr siRNA）和DRD4 siRNA低表达组（SD-DRD4 siRNA）,采用qPCR和Western blotting检测DRD4、腺苷酸环化酶（AC）、cAMP依赖性蛋白激酶A（PKA）、cAMP反应元件结合蛋白（CREB）等指标的mRNA和蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型对照组DRD4 mRNA及蛋白均明显升高（P < 0.01）,AC、PKA、CREB mRNA及蛋白均明显下降（P < 0.01）。在体内转染24 h后,SD-DRD4 siRNA组DRD4、CREB mRNA及蛋白表达水平均低于SD-No siRNA组和SD-Ctr siRNA组（P < 0.01）,AC、PKA mRNA及蛋白表达水平均高于siRNA组和SD-Ctr siRNA组（P < 0.01）。结论DRD4可能通过介导cAMP/PKA通路在酒精依赖的神经生物学机制中发挥重要作用。     

诺卡酮对抑郁样行为和海马中PKA/CREB/BDNF信号通路的影响

目的 观察诺卡酮(nootkatone)对慢性不可预知应激(CUS)模型小鼠抑郁样行为、海马脑区神经再生及蛋白激酶A(PKA)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)/脑源性神经营养因子(BDNF)信号通路的影响,以探讨诺卡酮的抗抑郁作用及其分子机制。方法 将雄性C57BL/6小鼠随机分为3组：对照组(0.9%氯化钠溶液),CUS组(CUS+0.9%氯化钠溶液),CUS+诺卡酮组(CUS+诺卡酮)。用糖水偏好和强迫游泳试验来评价小鼠的抑郁行为表型;用RT-PCR检测海马BDNF的mRNA表达,用Western blot法检测海马BDNF、PKA及磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(p-CREB)的表达;用免疫荧光检测海马齿状回脑区神经元的再生情况。结果 与对照组相比,CUS组小鼠糖水偏好降低(P<0.05),强迫游泳潜伏期减少和不动时间增加(P<0.05),海马BDNF mRNA和蛋白表达量、PKA和p-CREB蛋白表达量降低(P<0.05);与CUS组小鼠相比,CUS+诺卡酮组小鼠糖水偏好增加(P<0.05),强迫游泳潜伏期增加和不动时间减少(P<0.05...     

氯胺酮对新生大鼠认知能力及海马Ca MKII/CREB信号通路的影响

目的探讨氯胺酮对新生大鼠认知能力及Ca MKII/CREB信号通路的影响。方法将40只新生SD大鼠随机分为四组,分别为空白组(生理盐水)、氯胺酮高(60 mg/kg)、中(30 mg/kg)和低浓度组(15 mg/kg),连续14 d腹腔注射生理盐水或不同浓度氯胺酮。末次注射24 h后,行大鼠神经功能缺陷评分; 28日龄时进行Morris水迷宫实验,检测各组大鼠学习记忆能力变化。结束后采集各组大鼠海马组织,用HE染色法观察大鼠海马神经元病理形态学变化;用TUNEL法观察神经元凋亡情况;用qRT-PCR检测各组大鼠海马组织Caspase-3、Bcl-2、Bax、Ca MKII和CREB mRNA表达变化;用western blot法检测各组大鼠海马组织Caspase-3、Bcl-2、Bax、Ca MKII、CREB和p-CREB蛋白表达变化。结果氯胺酮高浓度和中浓度组大鼠神经功能缺陷评分均显著性高于空白组,差异有统计学意义(P<0. 01); Morris水迷宫实验结果显示氯胺酮高浓度组和中浓度组大鼠逃避潜伏期和穿环次数与空白组比较,差异有统计学意义(P<0. 05); HE染色结果发现氯胺酮能导致大鼠海马神经元排列松散和数目减少,并导致神经元固缩和深染; TUNEL结果显示氯胺酮能导致海马神经元凋亡; qRT-PCR和western blot结果表明,高、中浓度氯胺酮可以明显增加海马神经元caspase-3、Bax mRNA和蛋白表达,并降低Bcl-2、Ca MKII、CREB、p-CREB mRNA或蛋白表达(P<0. 05)。结论高剂量氯胺酮长期应用能影响大鼠的学习记忆能力,并导致神经元凋亡,Ca MKII/CREB信号通路可能参与了氯胺酮诱导的神经元凋亡过程。     

三七总皂甙对吗啡戒断大鼠海马磷酸化CREB蛋白表达及CREB/DNA结合活性的影响

目的:研究三七总皂甙(PNS)对吗啡依赖及纳络酮催促戒断大鼠海马组织CREB,pCREB蛋白表达及CREB/DNA结合活性的影响,探讨PNS抑制吗啡戒断症状的作用机制. 方法:应用剂量递增法皮下注射盐酸吗啡建立吗啡躯体依赖模型,采用腹腔注射纳络酮建立催促戒断模型,大鼠在给予吗啡的同时,采用4种不同剂量PNS进行灌胃. 采用Western blot和电泳迁移率改变分析法(EMSA)分别观察PNS对吗啡依赖及戒断大鼠海马组织总CREB,pCREB蛋白表达及CREB/DNA结合活性的影响. 结果:①不同剂量PNS组、吗啡成瘾(MOR)组及纳络酮催促戒断(NAL)组大鼠海马组织总CREB蛋白表达与对照组相比无显著性差异(P>0.05);②MOR组pCREB蛋白表达及CREB/DNA结合活性数值略高于对照组(P>0.05),NAL组pCREB蛋白表达及CREB/DNA结合活性数值明显高于对照组和MOR组(P<0.01);③PNS可以剂量依赖性的抑制纳络酮催促戒断所引起的pCREB蛋白表达增高和CREB/DNA结合活性的增强. 结论:PNS可以剂量依赖的抑制吗啡成瘾及纳络酮催促戒断诱导的大鼠海马组织CREB磷酸化和CREB/DNA结合活性的增强.     

急性高原低氧对小鼠学习记忆及海马CA1区PKA、CREB表达的影响

目的 初步探讨急性高原低氧对小鼠学习记忆能力以及海马CA1区PKA、CREB表达的影响.方法 将小鼠随机分为两组：高海拔对照组（青海省西宁地区,海拔2361米）、急性高原组（青海省果洛州花石峡地区,海拔4300米）.两组小鼠在不同海拔均喂养5天后,应用跳台实验观察小鼠训练时的潜伏期及错误次数,评估急性高原低氧对小鼠学习记忆能力的影响;两组小鼠在不同海拔均喂养8天后断头取脑,通过免疫组织化学法半定量观察海马区环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（cAMP response element—binding protein,CREB）、蛋白激酶A（PKA）的表达.结果 急性高原组跳台实验潜伏期显著短于高海拔对照组（P＜0.05）,且错误次数显著增多（P＜0.05）;CREB及PKA主要在海马CA1区表达,且急性高原组表达量明显低于高海拔对照组（P＜0.05）.结论 急性高原低氧可能使小鼠学习记忆能力下降,其作用机制可能与CREB、PKA表达降低导致cAMP-PKA-CREB通路障碍有关.     

益气聪明汤及其加减方对D-半乳糖致衰老模型大鼠cAMP/PKA/CREB信号转导通路的影响

目的:观察补肾益气方药益气聪明汤、加减益气聪明汤对D-半乳糖致衰老模型大鼠脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及海马PKA、CREB、c-fos蛋白表达的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为青年对照组、D-半乳糖致衰老组(简称衰老组)、益气聪明汤组及加减益气聪明汤组。除青年对照组大鼠外,其余各组大鼠以大剂量D-半乳糖腹腔注射制造衰老模型。Morris水迷宫法观察大鼠空间学习记忆能力;分光光度法检测大鼠脑组织SOD活性以及MDA含量;Western-blot法检测大鼠海马PKA、CREB、c-fos蛋白表达的变化;同时观察补肾益气方药对衰老模型大鼠上述指标的影响。结果:与青年对照组相比,衰老组大鼠脑SOD活力明显降低(P0.05),MDA含量显著升高(P0.05),PKA、CREB、c-fos的蛋白表达水平明显降低(P0.05)。与衰老组大鼠相比,益气聪明汤组和加减益气聪明汤组可改善衰老模型大鼠退化的空间学习记忆能力(P0.05);提高大脑SOD活力,降低MDA含量(P0.05);显著上调衰老模型大鼠海马组织PKA、CREB、c-fos的蛋白表达水平(P0.05)。结论:补肾益气方药益气聪明汤、加减益气聪明汤可能是通过调节与学习记忆相关的cAMP/PKA/CREB信号转导通路关键分子(PKA、CREB、c-fos)的表达,从而改善衰老大鼠空间学习记忆能力,延缓衰老。     

丙泊酚或依托咪酯对大鼠海马胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的观察丙泊酚或依托咪酯对出生28 d大鼠海马胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic pro-tein,GFAP)、蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)和环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cyclic AMP response elementbinding protein,CREB)表达的影响。方法选取雄性SD大鼠60只,随机分为对照组、丙泊酚组和依托咪酯组,每组20只。丙泊酚组腹腔注射丙泊酚总量为200 mg/kg,依托咪酯组腹腔注射依托咪酯总量为60 mg/kg,对照组不注射任何药物。血气分析仪检测大鼠动脉血呼吸和代谢指标的变化,免疫组织化学染色法检测大鼠海马组织中GFAP的表达,并应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测大鼠海马组织中PKA和CREB mRNA的表达。结果各组大鼠动脉血pH值、氧分压、二氧化碳分压、HCO3-、BE、氧饱和度之间比较差异无统计学意义(P>0.05);丙泊酚组与依托咪酯组GFAP的平均积分光密度值均高于对照组(P<0.05),而丙泊酚组与依托咪酯组比较差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,丙泊酚组与依托咪酯组PKA和CREB mRNA的表达均降低(P<0.05),丙泊酚组与依托咪酯组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论丙泊酚或依托咪酯可能通过抑制PKA-CREB信号通路而损害大鼠海马神经元,使星形胶质细胞反应性增生、GFAP表达增加。     

右美托咪定预防大鼠全麻后认知功能障碍机制的探讨

目的:研究右美托咪定对大鼠全麻后认知功能障碍的预防作用,并探讨其可能的作用机制。方法:将60只SPF级大鼠随机分为空白对照组、认知功能障碍模型组、右美托咪定预防1组(25μg/kg)、右美托咪定预防2组(50μg/kg),每组各15只。其中模型组和两预防组采用异氟醚诱导构建大鼠认知功能障碍模型。采用Morris水迷宫定向航行测试和空间探索测试评价大鼠的学习和记忆功能;采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法测定大鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)的水平变化;通过RT-PCR法检测海马组织TNF-α、IL-6基因水平的表达;应用免疫印迹Western blot检测CREB、pCREB蛋白表达水平变化。结果:水迷宫测试表明右美托咪定可缩短大鼠逃避潜伏期时间及游泳距离,提高穿越平台次数;SOD及MDA检测结果表明,右美托咪定对提高脑组织中SOD水平、降低MDA水平有促进作用;RT-PCR及Western Blot分析表明,模型建立后,TNF-α、IL-6表达升高,CREB、pCREB表达降低;右美托咪定提前给药预防后,可下调TNF-α、IL-6水平及上调CREB、pCREB水平,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:右美托咪定可通过缓解氧化应激、抑制炎症因子的表达和上调记忆蛋白水平等多个途径,达到预防异氟醚诱导的大鼠认知功能障碍的目的。     

学习记忆过程中磷酸化的CREB在大鼠脑纹状体内的表达

目的探讨大鼠在学习记忆过程中磷酸化的转录因子环磷酸腺苷反应单元结合蛋白(cAMP responsive element binding protein,CREB)在脑纹状体内的表达.方法将动物首先在Y迷宫中进行学习记忆训练,然后应用免疫组织化学方法检测磷酸化的CREB(phosphorylated CREB,pCREB)在脑纹状体内的表达.结果大鼠经电Y迷宫训练后,脑纹状体内侧的边缘区内即有明显的pCREB阳性表达,而假训练组或对照组的边缘区内均无明显的pCREB阳性表达.此外,在海马、前额叶皮质和扣带回等处也有较多的pCREB阳性表达.结论大鼠进行电Y迷宫厌暗学习时,脑纹状体边缘区内磷酸化的转录因子pCREB参与学习记忆的信号转导过程.     

腹水草对人胃上皮细胞GES-1的保护作用及其对PKA、CREB、AQP1的调控研究

[目的]研究腹水草(Veronicastrum axillare,V.axillare)含药血清对乙醇损伤的人胃上皮细胞(gastric epithelial cells-1,GES-1)的保护作用及其对环腺苷酸依赖性激酶(protein kinase A,PKA)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(c AMP-response element binding protein,CREB)、水通道蛋白1(aquaporin 1,AQP1)表达水平的调控作用。[方法]20只雄性SD大鼠随机分为5组(n=4),连续灌胃给药14d,制备正常组(生理盐水20 m L·kg-1)、雷尼替丁组(0.027g·kg-1)以及V.axillare低、中、高剂量组(0.7、1.4、2.8 g·kg-1)含药血清。MTT法检测体外培养的GES-1细胞的活性,研究V.axillare含药血清及PKA抑制剂H-89(25μmol·m L-1)预处理对5%乙醇诱导GES-1细胞活力的影响。荧光定量RT-PCR检测PKA、CREB及AQP1 m RNA的表达水平,Western blot检测AQP1蛋白表达水平。[结果]模型组和H-89组GES-1细胞活性低于正常组,差异有统计学意义(P0.01);乙醇造模处理显著上调PKA、CREB及下调AQP1的表达水平,差异有统计学意义(P0.01);H-89处理显著抑制PKA和CREB m RNA表达水平(P0.01);加入各剂量V.axillare含药血清不能显著改善H-89对PKA、CREB和AQP1 m RNA表达水平的抑制作用。V.axillare中、高剂量含药血清细胞活性高于模型组,PKA、CREB m RNA表达水平低于模型组,差异有统计学意义(P0.01),而V.axillare中、低剂量含药血清AQP1表达水平高于模型组,差异有统计学意义(P0.01)。[结论]V.axillare含药血清显著减轻乙醇对GES-1细胞的损伤,对GES-1细胞具有保护作用,其保护机制与下调PKA、CREB及上调AQP1的表达有关。     

氯胺酮对幼年小鼠空间学习记忆功能及海马脑区 TSPO 蛋白的影响

目的观察幼年小鼠连续多次接受氯胺酮麻醉后学习记忆认知功能及海马脑区内TSPO蛋白的表达情况。方法出生21 d的幼年小鼠24只随机分为对照组(n=12)和氯胺酮组(n=12),每天1次分别经腹腔注射生理盐水和氯胺酮,连续7 d。然后进行Morris水迷宫实验,包括4 d的适应性训练和1 d的空间探索实验,观察小鼠的学习记忆功能的改变。水迷宫行为学测试后处死小鼠,取双侧的海马脑区,采用Western blotting技术和免疫荧光双标技术检测小鼠海马内小胶质细胞的变化和TSPO表达水平。结果训练期3~4 d,氯胺酮组小鼠潜伏期明显长于对照组(P<0.05)。探索实验显示,与对照组比较,氯胺酮组小鼠在平台所在象限滞留时间和经过次数明显减少(P<0.05);Western blotting分析结果表明,氯胺酮组幼年小鼠海马小胶质细胞标记物Iba-1和TSPO蛋白表达明显增多;免疫荧光双重标记技术显示,氯胺酮组小鼠海马小胶质细胞发生了形态学的改变,TSPO蛋白的表达增强。结论氯胺酮组小鼠海马脑区内小胶质细胞被激活,与之共同表达的TSPO蛋白的表达增高,学习记忆等认知功能减退。     

α7 神经型尼古丁受体对突触功能和钙信号通路的影响及在阿尔茨海默氏病中的神经保护作用机制研究

目的：研究β- 淀粉样蛋白（ β-amyloid protein,Aβ） 的聚集是否会引起突触形态及相关蛋白表达水平的变化以及与Aβ、胆碱能受体及突触功能密切相关的钙离子通路是否发生变化,进一步探讨这些改变之间是否具有一定的相关性;研究特异性激动原代海马神经元中的 α7nAChR 对突触形态及其相关蛋白、钙信号通路相关蛋白、Ca2+ 浓度以及 α7nAChR 对抗 Aβ 毒性作用的神经保护作用机制,为进一步阐明AD 发病机制提供一定的理论依据。方法：原代培养大鼠海马神经元细胞;实验细胞分为A 组：对照组;B 组：α7nAChRs 特异性激动剂 PNU-282987 处理组;C 组：Aβ1-42 寡聚体处理组;D 组：PNU-282987+ Aβ1-42 寡聚体处理组;采用Real-time PCR 法和蛋白免疫印迹（ Western Blot） 法分别测定各组细胞中突触相关蛋白Syn、PSD95、SNAP25、DYN1、AP180,钙信号通路相关蛋白CaM、CaMKⅡ、pCaMKⅡ、CREB、PCREB mRNA 和蛋白表达水平的变化,流式细胞仪检测神经细胞钙离子水平。结果：Aβ1-42 寡聚体可引起神经元细胞内钙超载,Aβ1-42 寡聚体可减少各组细胞中突触相关蛋白Syn、PSD95、SNAP25、DYN1、AP180 和钙信号通路相关蛋白CaMKⅡ、pCaMKⅡ、CREB、pCREB mRNA 及蛋白表达水平,增加CaM mRNA 及蛋白的表达水平;特异性激动海马神经元细胞α7nAChR 后神经细胞内钙离子水平相对减少,神经元细胞中的突触相关蛋白Syn、PSD95、SNAP25、DYN1、AP180 和钙信号通路相关蛋白CaMKⅡ、pCaMKⅡ、CREB、pCREB mRNA 及蛋白表达水平升高,且能对抗Aβ对突触蛋白及钙通路相关蛋白的影响。结论：Aβ1-42 寡聚体对细胞的神经毒性能够损伤突触功能以及钙信号通路;α7nAChR 可增加突触相关蛋白的表达以及可能通过激活钙信号通路来抵抗Aβ的神经毒性发挥神经保护作用。     

PKA信号通路调控体外培养大鼠脑片的CRH mRNA表达的研究

目的探讨大鼠下丘脑神经元表达促肾上腺皮质激素释放激素(CRH) mRNA的蛋白激酶A (PKA)信号调控机制.方法通过大鼠下丘脑脑片实验模型,运用Western blot及逆转录多聚合酶链反应(RT-PCR)技术,观察CRH激活下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素Ⅰ型受体(CRH1R)后PKA信号通路的活性变化,及其与CRH mRNA表达的关系.结果 CRH可引起下丘脑脑片磷酸化PKA、磷酸化环腺苷一磷酸反应元件结合蛋白(CREB)及CRH mRNA含量明显增加,而CP-154526、H89可显著抑制磷酸化PKA、磷酸化CREB及CRH mRNA含量的增加.结论在下丘脑离体脑片培养条件下,CRH可通过PKA途径实现对下丘脑神经元CRH mRNA的表达的超短正反馈调节.     

助阳开郁方对抑郁症大鼠海马BDNF表达及其胞内信号转导通路的影响

目的:基于海马内环磷酸腺苷(cAMP)-cAMP反应元件结合蛋白(CREB)-脑源性神经营养因子(BDNF)信号转导通路探讨助阳开郁方治疗抑郁症的作用机制。方法:36只雄性大鼠随机分为正常组、模型组、助阳开郁方高、中、低剂量组和氟西汀组,每组6只。除正常组外,其余各组接受慢性不可预知温和应激刺激并孤养28 d。在造模同时正常组和模型组给予生理盐水灌胃,助阳开郁方高、中、低剂量组分别给予助阳开郁方浓缩煎剂(11.7 g/kg、23.4 g/kg、46.8 g/kg)灌胃,氟西汀组灌胃盐酸氟西汀(3.33 mg/kg),造模及药物干预结束后取大鼠海马组织,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定cAMP含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测BDNF、CREB mRNA的表达水平。结果:模型组大鼠海马组织cAMP水平和BDNF、CREB mRNA的表达量明显低于正常组大鼠(P0.05,P0.01);与模型组比较,助阳开郁方高剂量组、氟西汀组大鼠海马cAMP含量明显增高,同时助阳开郁方高剂量组大鼠海马CREB、BDNF mRNA表达水平显著上调(P0.01,P0.05)。结论:抑郁症大鼠海马cAMP-CREB-BDNF通路中信号分子的表达异常,助阳开郁方抗抑郁作用可能与调节海马组织BDNF的表达及其信号转导通路的关键分子的表达与功能有关。     

黄精皂苷对慢性应激抑郁大鼠海马5-HT1AR/cAMP/PKA信号通路的影响

目的探讨黄精皂苷(SRP)对慢性应激抑郁模型大鼠行为学的影响及部分机制。方法 SD大鼠60只随机分为6组:正常组、模型组、SRP(100、200、400 mg/kg)组和氟西汀(2 mg/kg)组。采用不同应激方法建立大鼠慢性应激抑郁模型,观察大鼠行为学指标变化,放射免疫法测定海马环腺苷酸(cAMP)含量,免疫组化法测定海马5-羟色胺受体(5-HT1AR)、蛋白激酶A(PKA)、反应元件结合蛋白(CREB)蛋白表达水平。结果应激刺激后,与正常组相比,模型组大鼠自主活动次数减少,体重降低,糖水消耗减少,处于抑郁状态。免疫组化结果显示,与正常组比较,模型组海马5-HT1AR、cAMP、PKA、CREB表达显著降低,SRP组5-HT1AR、cAMP、PKA、CREB表达显著上调(P<0.01)。结论 SRP对慢性应激抑郁大鼠的行为学有改善作用,可能是通过调节5-HT1AR/cAMP/PKA/CREB信号通路发挥抗抑郁作用。     

母源毒死蜱暴露对子代小鼠海马 COX2、 CREB 和 BDNF mRNA 及蛋白表达的影响

目的： 研究母源毒死蜱（chlorpyrifos，CPF）暴露对子代小鼠环氧化酶 -2（cyclooxygenase-2，CO 腺苷效应元件结合蛋白（cyclic adenosine monophosphate response element-binding protein，CREB）和脑源性神经营 养因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）mRNA 及蛋白表达的影响。 将母鼠随机分成对照组（control）、 方法： 溶剂组（cpf ）和给药组，给药组根据给药剂量不同又分为三个亚组，即 cpf 0.3 组、cpf 0.6 组和 cpf 1.2 组。母鼠染毒交配 产仔后，应用高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）方法检测母代和子代小鼠血浆中 CPF 浓度，荧光定量 PCR 方法和 Western blot 方法检测子代小鼠海马 COX2、CREB 和 BDNF mRNA 及蛋白的表达量。 结果： 与对照组和溶剂组相比，母鼠进行 CPF 染毒后，母代和子代小鼠血浆中均能检测到 CPF，并且给药组间存在 剂量关系（P<0.01）；子代小鼠海马 COX2 mRNA 与蛋白的表达量升高，CREB 与 BDNF mRNA 及蛋白的表达量降 低（P<0.01， P<0.05） 。 CPF可由母代小鼠进入子代体内，通过影响COX2-CREB-BDNF通路产生神经毒性作用。     

cAMP/PKA-pCREB信号通路介导康复训练促进脑缺血大鼠运动功能恢复的探讨

目的 探讨cAMP/PKA-pCREB信号通路是否在康复训练促进的缺血性脑卒中大鼠运动功能的恢复方面发挥作用。 方法 采用Longa改良线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型（Middle cerebral artery ischemia-reperfusion model，MACO），造模成功的大鼠随机分为自然恢复组(n= 24)、自然恢复+Rp-cAMP组(n= 24)、康复训练组(n= 18) 和康复训练+Rp-cAMP组(n=18）。同时设立假手术组(n=12)。于侧脑室注射Rp-cAMP 后立即进行MACO模型的制备。训练组大鼠于术后48 h开始每天给予平衡木、转棒及滚筒训练。采用平衡木试验评定大鼠的运动功能。酶联免疫法（ELISA）检测缺血灶周围的脑组织内PKA表达，蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测pCREB蛋白表达。结果 (1)运动功能评分结果自然恢复+Rp-cAMP组高于自然恢复组，提示Rp-cAMP可抑制脑缺血大鼠运动神经功能的恢复；康复训练组明显低于自然恢复组，也低于康复训练+Rp-cAMP组，提示Rp-cAMP明显减弱康复训练促进脑缺血大鼠运动神经功能的恢复；(2) 于术后2d、7 d、14 d、21 d检测缺血灶周围的脑组织PKA、pCREB的蛋白表达结果显示：康复训练组明显高于自然恢复组，同时高于康复训练+Rp-cAMP组，提示康复训练促进脑缺血大鼠的PKA、pCREB蛋白的表达，且Rp-cAMP明显抑制了康复训练促进脑缺血大鼠的PKA、pCREB蛋白的表达。 结论 cAMP/PKA-pCREB信号通路可能介导康复训练促进的脑缺血大鼠运动功能的恢复。     

越鞠甘麦大枣汤调节小鼠海马PKA-CREB-BDNF信号通路的抗抑郁作用（英文）

目的探讨越鞠甘麦大枣汤(YG)的抗抑郁功效及其与PKA-CREB-BDNF信号通路的关联。方法强迫游泳(FST)检测越鞠甘麦大枣汤单次给药后抗抑郁的时效性。慢性不可预测模型(CMS)进一步检测越鞠甘麦大枣汤在抑郁模型上的抗抑郁作用。蛋白印迹表达法检测越鞠甘麦大枣汤单次给药30min和24h后海马中PKA、CREB、BDNF的蛋白表达。结果YG在FST中显示出持久的抗抑郁潜力,并且快速逆转了慢性应激小鼠的抑郁样行为。在慢性小鼠模型中,海马中PKA,CREB和BDNF的表达显著上调。结论越鞠甘麦大枣汤(YG)显示出快速和持久的抗抑郁样作用,其抗抑郁功能与PKACREB-BNDF通路有关。     

培养大鼠海马脑片模拟痫性发作后pCREB在细胞凋亡中的作用的初步研究

目的:观察痫性发作对体外培养海马脑片的损伤作用,研究细胞磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(Phosphorylated cAMP response element-binding protein,pCREB)对损伤海马神经元的作用。方法:以培养11 d的海马脑片为研究对象,随机分为3组:(1)正常对照组:正常海马脑片培养液培养至14 d。(2)痫性发作模型组:正常海马脑片培养液培养至14 d,更换为含匹罗卡品(0.5 mmol/L)的完全培养液作用1 h后终止培养。(3)抗pCREB抗体干预组:用含pCREB抗体的海马脑片培养液(pCREB抗体终浓度为5μg/ml)预培养3 d,换为含匹罗卡品(0.5 mmol/L)的完全培养液作用1 h后终止培养。采用TUNEL原位末端标记法检测各组培养海马脑片凋亡细胞;免疫组化染色观察海马脑片神经元内pCREB蛋白的表达变化。结果:(1)痫性发作模型组:海马脑片CA1区发生凋亡的细胞(95.44±14.30)显著多于对照组(41.30±9.30)(P<0.05);pCREB表达(201.36±19.31)较对照组(75.12±13.71)显著升高(P<0.05)。(2)抗pCREB抗体干预组:海马脑片CA1区发生凋亡的细胞(140.88±18.32)较痫性发作模型组显著增多(P<0.05);pCREB表达(172.60±17.68)较对照组显著升高、较模型组显著降低(P<0.05)。结论:(1)痫性发作可以增加体外培养海马脑片神经细胞凋亡发生,加重神经元损伤。(2)痫性发作后海马脑片神经细胞CREB的磷酸化增强,阻断CREB的磷酸化可导致神经细胞凋亡加重。