重组人促红素对老年慢性肾衰病人氧自由基及抗氧化酶活性的 …

目的 探讨重组人促红素（ｒＨ－ＥＰＯ）对慢性肾衰患者体内氧自由基及抗氧化酶活性的影响。方法 测定１９例老年慢性肾衰尿毒症期患者ｒＨ－ＥＰＯ治疗前后血浆ＭＤＡ、ＳＯＤ及红细胞ＧＳＨ－Ｐｘ含量。结果 ｒＨ－ＥＰＯ治疗后慢性肾衰病人ＭＤＡ含量降低，ＳＯＤ、ＧＳＨ－Ｐｘ活性升高。结论 ｒＨ－ＥＰＯ纠正肾性贫血同时，可清除体内氧自由基，提高抗氧化酶活性。     

重组人促红素对老年肾衰患者免疫功能及营养状况的影响

老年慢性肾衰竭(CRF)患者常有多系统、多器官疾病的并存,治疗上更为棘手.重组人促红素( r-HuEPO)作为促进红细胞生成的药物已广泛应用于临床肾性贫血等疾病的治疗[1,2],近来,笔者应用r-HuEPO治疗老年CRF患者,观察其对免疫功能和营养状况的影响.1 资料与方法1.1 一般资料 2009年3月至2011年3月我科收治的48例老年CRF患者,诊断参照慢性肾衰竭的诊断标准.其中男31例,女17例,年龄61～85岁;原发病中慢性肾小球肾炎18例,高血压12例,糖尿病11例,慢性肾盂肾炎4例,原因不明3例;CRF临床分期:肾功能不全失代偿期35例(血肌酐178～445 μmol/L),尿毒症期13例(＞445 μmol/L).     

重组人促红素对老年慢性肾衰病人氧自由基及抗氧化酶活性的影响

目的　探讨重组人促红素（ｒ Ｈ  Ｅ Ｐ Ｏ ）对慢性肾衰患者体内氧自由基及抗氧化酶活性的影响。方法　测定 １９ 例老年慢性肾衰尿毒症期患者 ｒ Ｈ  Ｅ Ｐ Ｏ 治疗前后血浆 Ｍ Ｄ Ａ 、 Ｓ Ｏ Ｄ 及红细胞 Ｇ Ｓ Ｈ  Ｐｘ 含量。结果　ｒ Ｈ  Ｅ Ｐ Ｏ 治疗后慢性肾衰病人 Ｍ Ｄ Ａ 含量降低, Ｓ Ｏ Ｄ 、 Ｇ Ｓ Ｈ  Ｐｘ 活性升高。结论　ｒ Ｈ  Ｅ Ｐ Ｏ 纠正肾性贫血同时,可清除体内氧自由基,提高抗氧化酶活性。     

环孢素A对人脐静脉内皮细胞的损伤作用

本实验取人脐静脉内皮细胞进行培养，加不同浓度的环孢是A孵育后，在光镜和透射电镜下观察到CSA对培养的血管内皮细胞具有损伤作用，有明显的形态学变化．监测细胞培养上清液获中乳酶脱氢酶（LDH）、血栓调节蛋白（TM）的变化．TM浓度随CsA浓度和作用时间呈依赖性的变化，TM作为血管内皮细胞损伤的指标比LDH敏感．在高浓度组中（CsA：1600μg／L、3200μg／L）TM值与对照组间差异显著（P＜0．05）．     

红花黄色素A通过调控SIRT1基因表达对ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的 研究红花黄色素A对人脐静脉内皮细胞增殖、凋亡及炎性因子分泌的影响及其机制.方法 通过ox-LDL诱导人脐静脉血管内皮细胞EAhy926损伤模型标记为ox-LDL组;红花黄色素A(50、100 mg/L)治疗损伤的EAhy926细胞标记为红花黄色素A-低组、红花黄色素A-高组;将ox-LDL+红花黄色素A+si-c...     

补肾活血颗粒联合重组人促红素治疗慢性肾脏病肾性贫血的疗效

目的 探究补肾活血颗粒联合重组人促红素治疗慢性肾脏病(CKD)肾性贫血疗效及对血清铁参数和炎症因子水平的影响。方法 104例CKD肾性贫血患者按随机信封法分为治疗组和对照组各52例,对照组予以重组人促红素皮下注射,治疗组予以补肾活血颗粒剂冲服联合重组人促红素皮下注射,均治疗8 w。比较两组治疗前后中医症状积分、贫血指标[血红蛋白(Hb)、红细胞计数(RBC)、红细胞比容(Hct)]、血清铁参数[血清铁(Fe)、转铁蛋白(TRF)、转铁蛋白饱和度(TSAT)、铁调素(Hepc)]及炎症因子[白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、低氧诱导因子(HIF)-1α],评价疗效及安全性。结果 治疗后2、4、8 w,治疗组中医症状积分显著低于对照组(P<0.05)。治疗后8 w,两组Hb、RBC、Hct显著高于治疗前,且治疗组显著高于对照组(P<0.05)。治疗后8 w,两组血清Fe、TSAT显著高于治疗前,Hepc显著低于治疗前,且治疗组TSAT显著高于对照组,Hepc显著低于对照组(P<0.05)。治疗后8 w,两组血清IL-6、TNF-α、HIF-1α显著低于治...     

祛风生脉颗粒对实验性心肌缺血大鼠心脏促血管生成作用的研究

目的探讨祛风生脉颗粒对心肌梗死模型大鼠心脏的促血管生成作用及其机制.方法选择结扎法制作心肌梗死模型大鼠,运用冠状动脉造影、免疫组化技术等,观察大鼠缺血心肌侧支血管的新生情况,检测内皮细胞数(EC)、毛细血管密度(CD)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的变化.结果祛风生脉颗粒高、低剂量组大鼠心脏造影剂聚集明显,结扎后的前降支显影度与模型组比较有统计学意义;祛风生脉颗粒治疗后Ⅷ因子免疫组化标记的毛细血管管腔增粗、密度增加,与重组bFGF蛋白心肌内注射诱导的血管新生数目相当;同时,祛风生脉颗粒高剂量组缺血心肌中VEGF表达上调,高于模型组和低剂量组(P<0.01).结论祛风生脉颗粒能够促进缺血心肌侧支循环的建立和毛细血管的新生,发挥"自身血管搭桥"的作用.其机制可能与缺血心肌中VEGF表达上调有关.     

ANGPTL4对LPS诱导的人肺微血管内皮细胞损伤的保护作用

目的探讨ANGPTL4对脂多糖(LPS)诱导的人肺微血管内皮细胞(HPMVECs)损伤的保护作用。方法以体外培养的HPMVECs作为实验对象,将细胞随机分为四组:正常对照组(C组)、LPS诱导组(L组)、ANGPTL4表达组(A组)和ANGPTL4表达+LPS诱导组(A+L组)。各处理组细胞分别培养12、24、48、72 h后采用CCK-8法观察细胞增殖;细胞孵育12 h后,采用荧光定量PCR和Wester-blot检测ANGPTL4表达水平,ELISA法检测细胞培养液中TNF-α、IL-1β和MCP-1的蛋白含量。结果与C组相比,L组和A组细胞的ANGPTL4表达明显增高(P0.01);与L组相比,A+L组细胞的ANGPTL4表达明显增高(P0.01),LPS刺激可以抑制细胞增殖,而经过pc DNA3.1-ANGPTL4重组质粒转染后这种抑制作用又被削弱了;高表达ANGPTL4抑制炎症因子TNF-α、IL-1β和MCP-1的生成。结论 ANGPTL4可以减弱LPS抑制HPMVECs细胞增殖的作用,降低细胞中TNF-α,IL-1β和MCP-1等炎症因子的生成,这些效应可能是ANGPTL4保护肺微血管内皮细胞的作用机制之一。     

促肝细胞生长素对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用及其机制探讨

目的探讨促肝细胞生长素(PHGF)对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法将80只健康雄性SD大鼠随机分为实验组(PHGF组)和对照组(NS组),每组各40只。通过阻断肝中叶及肝左叶血流造成70%肝脏缺血建立大鼠肝缺血再灌注损伤模型,缺血时间为21 min。PHGF组术前予PHGF腹腔注射干预,NS组术前给予等量生理盐水。术前及术后1、3、5、7 d取大鼠血清及肝组织,检测ALT、AST、TBil水平; HE染色观察病理改变; real-time PCR检测肝组织线粒体转录因子A(TFAM) mRNA水平。计量资料两组间比较采用独立样本t检验。结果 HE染色结果显示,光镜下PHGF组肝细胞水肿、炎细胞浸润程度及肝细胞坏死程度较NS组明显减轻。肝功能生化检测结果显示,PHGF组大鼠术后1、3、5、7 d血清ALT、AST、TBil水平低于同时相NS组,差异均有统计学意义(t值分别为11. 879、16. 019、22. 168、10. 235、9. 041、12. 936、18. 759、8. 142、10. 108、11. 014、13. 245、9. 968,P值均0. 001)。real-time PCR结果显示,PHGF组大鼠术后1、3、5 d肝组织TFAM mRNA水平较NS组明显升高(t值分别为7. 998、14. 764、13. 861,P值均0. 001)。结论 PHGF预处理对大鼠肝缺血再灌注损伤具有保护作用,其作用机制可能是通过上调TFAM表达减轻肝缺血再灌注损伤。     

生大黄对急性胰腺炎TLR4受体表达的影响及临床意义

目的 探讨生大黄对急性胰腺炎(AP)患者TLR4受体表达的影响及临床意义.方法 纳入2010年1月-2011年12月在我院诊治的64例AP患者,其中48例为轻型急性胰腺炎(MAP),16例为重症急性胰腺炎(SAP).随机分成2组:常规治疗组和生大黄治疗组.收集其临床资料并留取治疗前后外周血各4 ml,提取单个核细胞,半定量PCR检测其TLR4的表达.收集20例健康体检者外周血作为对照.结果 (1)对照组外周血TLR4仅少量表达,AP患者治疗前外周血TLR4的表达量较对照组明显增高,SAP的TLR4表达明显高于MAP(P ＜0.05).(2)生大黄治疗组MAP/SAP的平均症状改善时间(9.2±3.8)/(18.6±5.2)d,明显短于相应常规治疗组(13.6±4.6)/(24.8±6.5)d(P＜0.05).(3)MAP/SAP患者经治疗有效后TLR4表达明显下降,生大黄组MAP/SAP的TLR4的下降程度明显高于相应的常规治疗组(P＜0.05).结论 TLR4受体的表达程度可用于评估AP的严重程度,生大黄治疗AP的机制可能与下调TLR4的表达有关.     

胞二磷胆碱联合重组人促红素治疗新生儿缺氧缺血性脑病的临床疗效及其对患儿神经功能的影响

背景 新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)具有较高的病死率、致残率,临床主要采用胞二磷胆碱治疗新生儿HIE并取得了一定疗效,但该药物不良反应较多,一定程度上影响了临床疗效,因此探寻新的治疗方式对提高新生儿HIE的治疗效果具有重要的临床意义.目的 探讨胞二磷胆碱联合重组人促红素治疗新生儿HIE的临床疗效及其对患儿神经功能的影响...     

人突变型CDK4真核荧光表达质粒的构建及对人肝细胞SMMC-7702中POLD1基因表达的调控

目的:构建包含突变型CDK4基因的真核绿色荧光表达载体,作为POLD1基因依赖的细胞周期复制调控的模型,研究POLD1基因相关的癌性增殖的机制,为干预细胞恶性增殖提供新的思路.方法:设计人突变型CDK4基因全长特异性引物进行P C R扩增人肝癌细胞系SMMC-7721总cDNA,以pEGFP-C1质粒为模板连接,得到重组质粒GFP-CDK4后进行测序和生物信息学比对分析;转染细胞分3组:实验组(转染突变型CDK4重组真核表达质粒GFP-CDK4),阴性对照组(转染空载体pEGFP-C1组)和空白对照组(SMMC-7702).通过MTT试验分析细胞增殖变化;实时荧光定量PCR技术检测CDK4、POLD1及细胞周期相关因子的表达量,Western blot检测蛋白表达的差异.结果:成功构建了人突变型CDK4基因真核表达质粒GFP-CDK4,转染到肝细胞SMMC-7702后使细胞表达融合绿色荧光的C D K4蛋白;S M M C-7721细胞中突变型的C D K4存在5个碱基突变,4个碱基插入,2个碱基缺失,这使得5个氨基酸序列发生了改变;与空白对照组及阴性对照组相比,实验组细胞增殖明显升高(0.826±0.08vs0.596±0.06,0.609±0.10,F=7.033,均P<0.05);实验组CDK4mRNA表达水平差异明显(1.94±0.11vs1.01±0.00,1.05±0.12,F=54.046,P<0.01),POLD1mRNA相应地升高(2.47±0.25vs1.16±0.00,1.26±0.23,F=135.496,P<0.01);稳定转染细胞的蛋白水平变化趋势与基因相同,其中实验组CDK4(0.65±0.03vs0.41±0.03,0.39±0.05,F=14.665,均P<0.05),P125(0.54±0.04vs0.30±0.07,0.25±0.06,F=11.788,均P<0.05).结论:人突变型CDK4基因的真核表达载体GFP-CDK4显著促进肝细胞的增殖能力,这与POLD1基因及P125蛋白的高表达相关.     

丹酚酸A对过氧化损伤肝细胞作用的研究

目的:观察丹酚酸A对过氧化损伤肝细胞的作用。方法:建立CCl_4蒸汽熏蒸肝细胞体外损伤模型,以Trolox C为阳性对照药,观察丹酚酸A(SA-A)对该模型的影响。结果:SA-A呈浓度依赖性地降低损伤肝细胞显著升高的ALT、AST、LDH和SOD活性,改善异常的AST/ALT比值。其在浓度为10~(-3)mol/L时,作用强度最大,明显高于Trolox C。结论:SA-A具有显著的抗肝细胞氧化损伤作用。     

异烟肼和利福平联合用药对健康成人原代肝细胞CYP450同工酶1A2和3A4活性的影响

目的明确异烟肼和利福平联合用药对健康成人原代肝细胞CYP450同工酶1A2和3A4活性的影响。方法从健康成人肝脏或肝叶中分离出肝细胞,分为CYP450同工酶1A2和3A4两部分,各分为阴性对照组及药物处理组共15组,放入24孔细胞培养板内,每组6个复孔,原代培养3 d,阴性对照组加入等量的细胞培养液,各药物处理组对应加入临床血药峰浓度范围内的异烟肼(25μmol/L,50μmol/L)、利福平(12.5μmol/L,25μmol/L)或两药联用(CYP1A2:利福平12.5μmol/L加异烟肼50μmol/L,利福平25μmol/L加异烟肼50μmol/L;CYP3A4:利福平12.5μmol/L加异烟肼25μmol/L,利福平25μmol/L加异烟肼25μmol/L,利福平25μmol/L加异烟肼50μmol/L),孵育2 d,再加入CYP450同工酶1A2和3A4的相应底物(非那西丁和睾酮),反应终止后用高效液相仪测量代谢产物(对乙酰氨基酚与6β-羟基睾酮)的峰面积(单位:mAU.m in)代表1A2和3A4的活性。结果(1)单用25μmol/L和50μmol/L浓度异烟肼肝细胞CYP450同工酶1A2的活性分别是(3.33±0.65)、(3.03±0.38)mAU.m in,与阴性对照组的(5.23±0.31)mAU.m in比较差异均有统计学意义(P均<0.01);单用12.5μmol/L浓度利福平肝细胞CYP450同工酶1A2的活性为(6.07±0.55)mAU.m in,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),单用25μmol/L浓度利福平肝细胞CYP450同工酶1A2的活性为(4.93±0.57)mAU.m in,与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);异烟肼和利福平2种浓度联合配伍,肝细胞CYP450同工酶3A4的活性分别是(3.27±0.96)、(3.97±0.25)mAU.m in,与阴性对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。(2)单用25μmol/L和50μmol/L浓度异烟肼肝细胞CYP450同工酶1A2的活性分别是(5.40±1.35)、(2.63±0.06)mAU.m in,与阴性对照组的(12.53±0.51)mAU.m in比较差异均有统计学意义(P均<0.01);单用12.5和25μmol/L浓度利福平肝细胞CYP450同工酶3A4的活性分别为(165.17±11.47)、(120.20±15.73)mAU.m in,与阴性对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.01);异烟肼和利福平3种浓度联合配伍,肝细胞CYP450同工酶3A4的活性分别是(118.37±8.90)、(77.53±6.91)、(68.73±4.72)mAU.m in,与阴性对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.01),但低于相应浓度单用利福平组(P<0.05或0.01)。结论临床血药峰浓度范围的异烟肼与利福平单用或联用对CYP450同工酶1A2活性影响未达到抑制或诱导水平。临床血药峰浓度范围的异烟肼抑制CYP450同工酶3A4的活性,利福平诱导CYP450同工酶3A4的活性,两药联合仍呈诱导作用。     

腺苷对人脐静脉内皮细胞中肝细胞生长因子合成表达的影响

将人脐静脉内皮细胞(HUEVC)按加入腺苷浓度的不同分为A组(10-4mmol/L)、B组(10-8mmol/L)和空白对照组,48 h后检测各组肝细胞生长因子(HGF)合成,RT-PCR方法检测HGF mRNA表达。结果对照组HGF染色阳性细胞少,染色程度轻;A组HGF染色阳性细胞多,染色深,平均吸光度与对照组比较有显著差异(P<0.05),B组平均吸光度与对照组比较无显著差异(P>0.05);RT-PCR分析A组中HGF mRNA表达含量与对照组比较有显著差异(P<0.05),B组与对照组比较无显著差异(P>0.05)。表明HUEVC中存在HGF表达,腺苷可部分通过促进内皮细胞中HGF合成表达而实现其促进内皮细胞生长和血管新生的作用。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4A肝细胞结合蛋白基因的筛选与克隆

目的筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与丙型肝炎病毒（HCV）非结构蛋白4A（NS4A）相互作用蛋白的基因，明确其具体作用机制。方法应用酵母双杂交系统3，将聚合酶链反应法扩增的HCV NS4A基因连接入酵母表达载体PGBKT7中构建诱饵质粒，转化酵母细胞AH109并在其内表达，然后与转化了人肝cDNA文库质粒PACT2的酵母细胞Y187进行配合，在营养缺陷型培养基和X—α-半乳糖上进行双重筛选阳性菌落，提取阳性酵母菌落的质粒转化大肠杆菌，接种在氨苄青霉素-LB平板上，选择生长菌落，提取质粒酶切鉴定，测序并在GenBank中进行生物信息学分析。结果成功克隆出HCV NS4A基因，构建表达载体并在酵母细胞中表达，与肝文库配合后选出既能在四缺培养基又能在铺有X—α-半乳糖的四缺培养基上生长，并变成蓝色的真阳性菌落22个，序列分析显示，筛选到的肝细胞蛋白编码基因参与细胞能量代谢、蛋白翻译合成等多种生物学过程。结论成功克隆出HCV NS4A蛋白在肝细胞内的结合蛋白，为进一步研究NS4A蛋白的功能、阐明HCV致病的分子生物学机制提供了新线索。     

枸杞多糖对人脐静脉血管内皮细胞的增殖、迁移及血管形成的影响

目的观察枸杞多糖(LBP)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移能力及血管形成的影响。方法在HUVECs分别加入不同浓度的LBP后,应用噻唑蓝(MTT)和划痕实验方法检测对HUVECS增殖与迁移的影响。利用基质胶实验检测实验浓度LBP对血管形成作用的影响。结果 1MTT实验结果表明:随LBP浓度增加,抑制HUVECs增殖能力增强,同时应用甩片实验可推断LBP通过促进HUVECs凋亡而达到抑制细胞增长的作用;2划痕实验显示实验浓度LBP作用下HUVECs迁移距离较空白对照组具有统计学差异;3实验浓度LBP可明显抑制血管形成。结论 LBP对HUVECs增殖迁移及血管生成能力具有明显抑制作用。     

促肝细胞生长素对肾缺血再灌注大鼠肺组织细胞凋亡的作用

目的 探讨大鼠肾缺血再灌注后肺损伤及细胞凋亡的变化,并观察促肝细胞生长素(hepatocyte growth-promoting factor,pHGF)对其影响.方法 雄性Sprague-Dawley大鼠32只,随机分为假手术对照组(Ⅰ组)、缺血再灌注组(Ⅱ组)、缺血再灌注前pHGF干预组(Ⅲ组)和缺血再灌注后pHGF干预组(Ⅳ组).用无损伤动脉夹钳夹大鼠双侧肾蒂45 min制成肾缺血再灌注损伤模型.Ⅰ组只暴露双肾,不钳夹肾蒂.Ⅲ组和Ⅳ组分别在术前和术后腹腔注射pHGF 50 mg/kg.检测术后12 h血清白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和血肌酐(serum creatinine,Scr)的浓度及肺组织干/湿重比变化,病理切片观察肺组织病理学及细胞凋亡的改变.结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组血清IL-1β、Scr水平及肺组织细胞凋亡阳性细胞数均显著升高(P值均＜0.01),Ⅲ组和Ⅳ组各项数值均较Ⅱ组降低(P值均＜0.01).1I组肺组织干/湿重比较Ⅰ组明显降低(P＜0.01),Ⅲ组和Ⅳ组均较Ⅱ组上升(P值均＜0.01).缺血再灌注12 h肺组织病理改变严重,有明显肺泡内和肺间质水肿及炎症细胞的浸润;pHGF干预后,肺组织形态学改变明显减轻.各项指标在Ⅲ组和Ⅳ组之间的差异无统计学意义.结论 肾缺血再灌注后释放的细胞因子IL-1β可致肺组织细胞凋亡及损伤,pHGF对其既有保护作用又有治疗作用.     

新型核苷类似物beta-L-D4A对人DNA聚合酶β和δ的作用及其机制

目的: 对人DNA聚合酶δ进行纯化和鉴定, 通过检测β-L-D4A对人DNA聚合酶β和δ的作用, 观察β-L-D4A的毒副作用. 方法: 运用多次离子交换层析的方法提取、纯化人Hela细胞的DNA聚合酶δ; 检测β-L-D4A对人DNA聚合酶β和δ的酶动力学作用. 结果: 提纯并鉴定了DNA聚合酶δ, 收得率是15%, 比活力是1911 Ukat/mg. beta-L-D4A为抑制剂时, 对人DNA聚合酶β和δ的酶动力学参数分别是Km = 1.86 mumol/L, 2.45 mumol/L, IC50 = 25.21 mumol/L和150.1 mumol/L, Ki = 24.03 mumol/L和132.7 mumol/L, 结果均提示β-L-D4A对DNA聚合酶β和δ的抑制作用远小于拉米夫定. 结论: beta-L-D4A是人DNA聚合酶β和δ的竞争性抑制剂, 他对这两种酶的毒副作用远小于拉米夫定, 可望成为更高效低毒的抗HBV类药物.     

5-HT4受体对人消化间期小肠运动调控及其机制研究

目的通过观察5-羟色胺(5-HT4)受体激动剂对人消化间期移行性复合运动(MMC)及血浆胃肠激素的影响,探讨5-HT4受体激动剂对MMC的调控作用及其可能的介导因素。方法选取健康志愿者18人并观察给予选择性5-HT4受体激动剂后MMC的变化。并且在给药前后检测MMC不同时期血浆胃动素(MOT)、生长抑素(SS)、NO的浓度。结果健康人给药后MMC周期显著缩短[(87.5+24.2)min vs(60.5±18.4)min,P0.001],MMCⅢ期波幅、动力指数、传播速度均比给药前显著升高(P0.05)。MMC不同时期血浆MOT含量无显著变化(P0.05),SS水平显著升高(P0.01),而NO含量显著降低(P0.05)。结论 5-HT4受体激活对人MMC有兴奋性作用,该兴奋作用可能通过SS、NO等胃肠激素起作用。