慢病毒转染的β3-AR基因对心肌肥厚的影响

目的:探讨β3肾上腺素能受体(β3-AR)对SD大鼠乳鼠心肌肥大的影响及其机制。方法:体外培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,用携带β3-AR基因的慢病毒转染细胞后,用去甲肾上腺素(NE)诱导细胞48h,建立心肌细胞肥大模型。实验分4组:空白对照组(Control组)、心肌肥厚组(NE组)、β3-AR基因转染+NE组(β3-AR组)、空病毒转染+NE组(空病毒组)。用免疫荧光法鉴定心肌细胞,倒置荧光显微镜观察病毒转染组绿色荧光蛋白(GFP)表达,免疫印迹法(Western Blot)检测β3-AR、丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)、细胞外信号调控激酶(ERK1/2)、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)和ERK(p-ERK1/2)及原癌基因c-myc、c-fos蛋白水平的表达。结果:(1)慢病毒介导β3-AR基因转染心肌细胞,β3-AR表达较空白对照组明显升高。(2)用Western Blot检测各实验组细胞原癌基因c-myc、c-fos表达,其中NE组、β3-AR组、空病毒组表达均高于空白对照组,其中β3-AR组cmyc、c-fos表达明显高于NE组。(3)NE组、β3-AR组、空病毒组p38MAPK及ERK1/2的磷酸化水平较空白对照组明显上调,其中β3-AR组表达最高。结论:慢病毒介导的β3-AR基因转染使心肌细胞有效高表达β3-AR,β3-AR可能通过MAPK通路促进心肌肥厚。     

分泌抗弓形虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用弓形虫速殖子可溶性抗原对BALB/c小鼠免疫所得脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合,获分泌抗弓形虫抗体阳性杂交瘤11个,阳性率为5.1％。选择强阳性杂交瘤1个进行克隆化培养,获得1株稳定分泌特异单克隆抗体杂交瘤细胞株。ELISA测试该株杂交瘤细胞接种BALB/c小鼠诱生腹水抗体效价为1:51,200。此株分泌抗弓形虫单克隆抗体鉴定属IgG_(2a)亚型。     

心力衰竭患者抗β3 肾上腺素能受体自身抗体的分布及特性

目的探讨心力衰竭(心衰)患者血清中的抗β3肾上腺素能受体(β3-AR)自身抗体的生物学效应,为临床治疗心衰提供新的思路和线索.方法 (1)以人β3-AR细胞外第二环的合成肽段作为抗原,采用ELISA筛选正常人和心衰患者血清中抗β3-AR自身抗体.(2)提纯该抗体阳性的患者血清中的IgG.(3)设立各组对照观察该抗体对成年大鼠心肌细胞收缩效应的影响.(4)设立各组对照观察该抗体对乳鼠心肌细胞跳动频率的影响.结果 (1)正常人抗β3-AR自身抗体的阳性率为11.0%,平均滴度为1∶ 14.59±1.61;心衰患者抗β3-AR自身抗体的阳性率为26.7%,平均滴度为1∶ 43.27±2.71;与正常人相比,P＜0.05.(2)与空白对照组相比,该抗体可降低成年大鼠心肌细胞收缩幅度/初长度(3.84%±0.33%)、收缩速率(-0.47 μm/s±0.07 μm/s)和舒张速率(0.17 μm/s±0.02 μm/s),P＜0.05.该作用不能被纳多洛尔(nadolol,β1-AR和β2-AR受体拮抗剂)阻断,但可被布拉洛尔(bupranolol,非特异性β受体拮抗剂)或β3抗原阻断.(3)与空白对照组(94.3次/min±10.7次/min)相比,该抗体可降低乳鼠心肌细胞跳动频率(47.1次/min±8.11次/min),P＜0.05.同样该作用不能被纳多洛尔阻断,但可被布拉洛尔或β3抗原阻断.此外,该抗体的负性变时效应在观察时间内(6 h)无衰减.结论心衰患者血清中含有较高滴度的抗β3-AR自身抗体并具有负性变力和变时效应,提示该抗体可能参与心衰的病理生理机制.     

人胸苷激酶单克隆抗体的制备

目的 制备人胸苷激酶单克隆抗体。方法 用大肠杆菌表达和纯化的人胸苷激酶免疫Balb／C小鼠，免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，HAT选择培养和ELISA筛选阳性克隆，阳性克隆杂交瘤注入小鼠腹腔制备腹水，用ELISA和免疫组化鉴定胸苷激酶单克隆抗体。结果 经细胞融合和筛选得到37个阳性单克隆杂交瘤，其中有二株杂交瘤可以稳定地产生人胸苷激酶的特异性抗体，制备的腹水中有高效价的抗体活性。结论 用原核表达的人胸苷激酶免疫小鼠可以制备出人胸苷激酶特异性单克隆抗体。     

心力衰竭大鼠肾脏α_1及β肾上腺素受体各亚型表达的改变

目的探讨大鼠心力衰竭时肾脏α_1肾上腺素受体(α_1-AR)和β肾上腺素受体(β-AR)各亚型表达水平的变化。方法选择雄性Wistar大鼠35只,随机分为对照组10只、假手术组10只,其余大鼠制作心肌梗死后心力衰竭模型,成功9只为模型组。取大鼠肾脏皮质,采用Western blot法分别测定各组大鼠α_1-AR亚型(α_(1)-AR、α_(1B)-AR、α_(1D)-AR)和β-AR亚型(β_1-AR、β_2-AR)表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠α_(1A)-AR、β_1-AR表达明显下调,差异有统计学意义(P<0.01);各组大鼠α_(1B)-AR、α_(1D)-AR、β_2-AR比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论心力衰竭时肾脏α_(1A)-AR和β_1-AR明显下调,可能与交感神经系统激活有关;而β_2-AR表达水平无明显变化,可能为代偿β_1-AR下调带来的不利影响,以维持肾脏有效灌注,保护肾脏功能。     

类艾滋病病毒单克隆抗体的研究

本文采用类艾滋病病毒(SAIDV)D型抗原免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0在40％PEG作用下进行细胞融合,杂交瘤细胞经HAT筛选,用ELISA法检测阳性抗体,经3次克隆和3个月的传代及液氮保存试验,获得一株能分泌抗SAIDV的单克隆抗体的淋巴细胞杂交瘤,编号为WA-B_1,其腹水滴度为1:1×10~(-6),经蛋白亚类测定为IgG2a,能被特异性抗SAIDV血清所阻断,证明该单克隆抗体具有抗SAID病毒的特异性,为此作为第一个建立抗SAIDV(D)型单克隆抗体杂交瘤细胞株而闻世。     

多价单克隆抗体Dot—ELISA对人和家兔血吸虫病治疗前后的追踪观察

采用自制的多价单抗酶结合物和Dot-ELISA法检测血吸虫病人和感染家兔治疗前后血清循环抗原。报告如下: 1 材料和方法 1.1 单克隆抗体的制备感染血吸虫尾蚴或SEA免疫的BALB/c小鼠脾细胞分别与SP2/O骨髓瘤细胞融合,经克隆化后,用IFA筛选出2株分泌抗血吸虫成虫肠相关阳极抗原(CAA)单克隆抗体杂交瘤细胞株3B_(11)E_3、3B_(10)G_8和1株抗血吸虫卵糖蛋白抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株3G_4A_4。将细胞株分别注入小鼠腹腔,诱生的腹水置低温保存。 1.2 多价单克隆抗体酶结合物的制备三种单抗腹水经PEG法提纯后,按相同比例混合成多价单抗,用戊二醛二步法交联辣根过氧化物酶。Dot-ELISA测定酶结合物最适工作浓度为1:1000用于     

单克隆抗体检测班氏丝虫病循环抗原

本文报道以抗盘尾丝虫Onchocerca gibsoni的单克隆抗体Gib 13株,双面免疫放射计量试验(IRMA)检测斯里兰卡和巴布亚-新几内亚的班氏丝虫病人血清循环抗原。取BALB/c小鼠,按10~4/鼠接种O.gibsoni胚卵及等量的微丝蚴,16天后再用同样数量的上述抗原静注强化免疫,然后以BALB/c小鼠脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合。间接免疫荧光抗体法(IFAT)筛选分泌抗牛丝虫微丝蚴表面抗原的杂交瘤株。经两次克隆后,注入BALB/c小鼠,收集腹水。5%硫酸铵沉淀腹水中的单克隆抗体并透析,IFAT测定所获的各单克隆抗体对班氏丝虫微丝蚴表     

比索洛尔对慢性心力衰竭大鼠心肌β_1肾上腺素能受体及心功能的调节作用

目的研究比索洛尔对腹主动脉结扎所致慢性心力衰竭大鼠β_1肾上腺素能受体(β_1-AR)心功能的调节作用。方法 SD 大鼠40只,随机分为4组,即腹主动脉缩窄(COA)组;COA+比索洛尔组;假手术组;假手术+比索洛尔组。采用超声心动图和心室插管法评估心功能,ELISA_法检测各组大鼠血浆去甲肾上腺素(NE)水平,RIA 法检测心肌腺苷酸环化酶(AC)活性,通过 RT-PCR 检测心肌β_1-AR、β肾上腺素能受体激酶1(β-ARK1)和 Gi 蛋白 mRNA 的表达变化,Western blot 检测β_1-AR 蛋白水平的表达变化。结果 COA 组大鼠心功能恶化,血浆 NE 水平明显升高,β_1-AR mRNA 表达减少、β-ARK1和 Gi 蛋白 mRNA 表达增加,β_1-AR 的蛋白水平表达减少,AC 活性明显下降;比索洛尔明显改善大鼠心功能[射血分数:COA+比索洛尔组:(66.7±8.4)%比 COA 组:(43.3±7.7)%,P<0.05],降低血浆 NE 水平[COA+比索洛尔组:(570.2±41.2)pg/mL 比 COA 组:(908.24±75.10)pg/mL,P<0.05],增高...     

β-肾上腺素受体介导运动训练对老年大鼠心脏缺血预处理效应的影响

目的探讨运动训练能否恢复老年大鼠心脏缺血预处理(IP)效应及β-肾上腺素受体(β-AR)的可能作用机制。方法健康雄性SD成年或老年大鼠,实验分组:成年对照组、老年对照组和老年运动组,每组20只。老年运动组大鼠每天负重5%游泳,5次/w,持续90 d。离体心脏灌流行IP和(或)缺血再灌注(I/R),使用不同β-肾上腺素受体激动剂或阻滞剂,分离单个心肌细胞,测心肌细胞收缩幅度、存活率等。结果长期运动训练使老年鼠左心室重量增加显著,左心室/体重比显著增加(P<0.05)。IP显著改善I/R损伤的成年大鼠和长期运动训练老年鼠的心功能,左心室收缩压(LVSP)、±dp/dtmax升高,左心室舒张末压(LVEDP)显著降低;提高了成年鼠和运动训练老年鼠的心肌细胞收缩幅度,但不能提高老年对照鼠心肌细胞收缩幅度;提高了成年鼠和运动训练老年鼠的心肌细胞存活率,但不能提高老年对照鼠心肌细胞存活率。IP时阻断β1-AR,IP不能恢复三组大鼠的心肌细胞收缩幅度;阻断β2-AR,IP能够恢复成年鼠,却不是老年对照鼠和运动训练老年鼠的心肌细胞收缩幅度。结论 IP可部分恢复运动训练老年大鼠的I/R损伤的心功能,其可能机制不仅涉及β1-AR的作用,β2-AR发挥着更为特别的作用。