渗透压对大鼠心室肌细胞L型Ca2+电流的影响

目的 :观察细胞胞外渗透压的改变对大鼠心室肌 L型 Ca2 +（ICa,L）电流的影响。方法 :采用全细胞膜片钳技术记录大鼠心室肌细胞 ICa,L。结果 :细胞外的渗透压由 3 10 m Osm / kg H2 O降低至 2 2 0 m Osm/ kg H2 O可使 ICa,L的 rundown明显变慢 ,电流大小无统计学意义上的差异 ;而当其中细胞外的渗透压由 3 10 m Osm/ kg H2 O升高至 410m Osm/ kg H2 O时可使 ICa,L减小 （5 1.4± 7.9） % （n=4,P<0 .0 1）。结论 :细胞外渗透压变化对大鼠心室肌基础 ICa,L有明显影响     

U69 593对家兔心室肌细胞L型Ca2+电流的影响

目的 :研究 U695 93对家兔心室肌细胞 L 型 Ca2 +电流 （ ICa· L）的影响。方法 :采用全细胞膜片钳技术记录家兔心室肌细胞 IC a· L。结果 :在 -2 0～ +4 0 m V测试电压范围内 ,10 0 nmol/ L U695 93显著增加 IC a· L,以 +10 m V为最大激活电压 ,其峰值 ICa· L由加药前 -7.1± 0 .4p A/ p F增至 -8.3± 0 .5 p A/ p F （ P<0 .0 1,n=8）。 10 0 nmol/ LU 695 93不影响 IC a· L电压依赖性激活与失活特性。结论 :U695 93可增加家兔心室肌细胞 ICa· L。     

血管紧张素Ⅱ对大鼠心室肌细胞L型钙电流的影响

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对大鼠单个心室肌细胞L-型钙电流(ICa-L)的影响。方法通过全心灌流酶解法分离大鼠心室肌细胞,利用全细胞膜片钳技术,记录干预前及20 ng/L,200 ng/L AngⅡ干预后心室肌细胞的ICa-L及对失活曲线的影响。结果①AngⅡ可激活ICa-L,20 ng/L及200 ng/L AngⅡ能使心肌细胞ICa-L电流-电压关系曲线明显下移,峰电流密度增加(-7.05±1.35 pA/pF,-9.74±1.52 pA/pF vs-5.49±0.82 pA/pF,n=10,P均<0.05),但激活电位、峰电位和翻转电位无明显改变。②AngⅡ能使ICa-L失活曲线明显右移。结论AngⅡ对ICa-L具有激活作用。这可能是其对心血管作用的重要机制之一。     

17β-雌二醇对豚鼠心室肌细胞动作电位及L型钙通道电流的影响

探讨雌激素对心血管保护作用的机制,采用标准玻璃微电极技术及全细胞膜片钳技术观察17β-雌二醇（ES）对豚鼠心室乳头肌细胞动作电价的影响及其对分离的豚鼠心室肌细胞的L型钙通道电流的作用。结果：30μmol／LES灌流心肌30min可明显缩短动作电位时程;复极20％动作电位时程及复极50％动作电位时程分别由146±22ms,213±21ms缩短至87±6ms,107±11ms（P均＜0．01）。1,10,20,30μmol／LES是浓度依赖性抑制L型钙通道电流（P均＜0．01）,抑制率分别为8％,18％,33％,43％。结论：ES是一种内源性的钙离子通道拮抗剂,这可能是其心血管保护作用的重要机制之一．     

丹酚酸B对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流和L型钙电流的阻滞作用

目的研究从丹参中分离提取的药物单体——丹酚酸B对大鼠心肌细胞上的瞬时外向钾电流(Ito)、内向整流钾电流(IK1)和L型钙电流(ICa,L)的电生理学作用。方法用酶解法分离大鼠心室肌细胞,全细胞膜片钳技术记录Ito、IK1和ICa,L。每个细胞采用加药前后自身对照,用含100μmol/L丹酚酸B的细胞外液灌流心室肌细胞,记录加药前、后的电流,所有数据均在细胞破膜后20min内完成。结果 100μmol/L的丹酚酸B对Ito和ICa,L具有抑制作用,使Ito和ICa,L最大激活峰值电流密度下降,电流密度-电压曲线下移;且丹酚酸B主要抑制Ito的快速电流成分Itof,而对Ito的缓慢电流成分Itos无明显作用。在60mV测试电压下,Itof的最大激活峰值电流密度从23.51±3.29pA/pF降为16.85±2.36pA/pF,抑制率为28.31%±10.6%(n=8,P0.05)。在-10mV测试电压下,100μmol/L丹酚酸B作用后ICa,L的最大激活峰值电流密度从-8.66±-2.40pA/pF降为-5.91±-2.14pA/pF,抑制率为31.84%±10.23%(n=11,P0.05)。丹酚酸B使Ito通道失活后的恢复减慢,但不改变ICa,L的通道动力学。丹酚酸B对IK1无显著作用。结论丹酚酸B对Ito和ICa,L具有阻滞作用,而对IK1无显著作用。     

Ghrelin对大鼠心室肌细胞L型钙电流的影响

目的：研究一种具有生长激素释放活性的脑肠肽（Ghrelin）对大鼠心室肌细胞L型钙电流的影响。方法：采用酶解消化法获得大鼠单个心室肌细胞,通过全细胞膜片钳技术研究不同浓度（10 nmol/L、100 nmol/L及1μmol/L） Ghrelin对L型钙电流的影响。结果：10 nmol/L、100 nmol/L及1μmol/L Ghrelin依次抑制大鼠心室肌细胞L型钙电流峰电位,抑制率分别为：8.95%±2.13%、31.18%±4.78%及64.63%±8.57%,（P<0.05）;I-V曲线上移,通道半数失活电压从（-1.34±1.9） mV分别降至（-8.04±1.32）mV、（9.76±1.17）mV及（-11.81±0.73）mV（P<0.05）,并延长失活后恢复时间由给药前τ值63.23±9.32,分别增至98.95±10.74、109.56±13.42和127.39±16.13,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：Ghrelin通过加快L型钙电流的失活及延长失活后恢复时间,具有浓度依赖性地抑制L型钙电流。     

卡维地洛对大鼠心室肌细胞L型钙电流的影响

目的研究卡维地洛对大鼠心室肌细胞L型钙电流(ICa,L)的影响,探讨卡维地洛在离子通道水平的药理机制。方法用急性酶解法获得大鼠单个心室肌细胞,用标准全细胞膜片钳技术记录ICa,L,观察不同浓度卡维地洛对ICa,L的影响。结果①卡维地洛呈浓度依赖性抑制ICa,L,1μmol/L卡维地洛能使心肌细胞ICa,L电流-电压关系曲线明显上移,峰电流密度减少(7.80±0.65pA/pFvs4.89±0.52pA/pF,n=10,P<0.05),但激活电位、峰电位和翻转电位无明显改变。②卡维地洛能使ICa,L失活曲线明显左移,但对ICa,L激活和复活曲线无明显影响。③0.1μmol/L卡维地洛对钙电流无明显影响,但可以明显阻断异丙肾上腺素增加钙电流效应。同时,卡维地洛对钙电流的抑制效应不能被哌唑嗪和普奈洛尔阻断。结论卡维地洛呈浓度依赖性地抑制心室肌细胞L型钙通道。     

Nav1.1抗体对豚鼠心室肌细胞钠电流的影响

目的探讨Nav1.1抗体对豚鼠心室肌细胞钠电流(INa)的影响。方法采用全细胞膜片钳技术,观察急性分离的豚鼠心室肌细胞在应用Nav1.1抗体后心肌INa的变化。结果在Nav1.1抗体作用下,钠离子通道电流密度呈浓度依赖性减小。用药前与三个浓度抗体组(1∶100,1∶50,1∶25)的电流密度分别为34.22±6.22,32.13±3.45,25.49±7.4,19.23±1.69pA/pF。其中1∶25Nav1.1抗体明显降低钠电流密度(P<0.05),并且,1∶25Nav1.1抗体使INa电流-电压曲线明显向正电位方向移动,但是其稳态失活曲线和恢复曲线没有显著性改变。结论Nav1.1可能对INa有影响。     

伊贝沙坦对兔心室肌细胞L-型钙通道电流的影响

目的 研究伊贝沙坦(irbesartan)对正常家兔心室肌细胞L-型钙电流(ICa-L)、内向整流性钾电流(IK1)、快钠流(INa)以及跨膜动作电位的影响。方法 应用膜片钳全细胞记录方法记录各项离子流和跨膜动作电位。结果 (1)伊贝沙坦呈浓度依赖性阻断ICa-L；(2)伊贝沙坦可使ICa-L I—V曲线上移，但不改变其激活电位、峰值电位和反转电位；(3)伊贝沙坦呈使用依赖性阻滞ICa-L；(4)伊贝沙坦对ICa-L激活曲线无明显影响，但ICa-L失活后再激活的恢复时间常数(τ)明显延长；(6)伊贝沙坦对IKl和INa无明显影响；(7)伊贝沙坦(100nM)可使单个心室肌细胞动作电位时限缩短，对静息电位(RP)、动作电位幅度(APA)无影响。结论 伊贝沙坦作用于L-型钙通道的失活态从而阻断ICa-L。     

右美托咪定对心室肌细胞L型钙通道电流的影响

目的观察右美托咪定(DEX)对大鼠心室肌细胞L型钙离子通道电流(ICa-L)的影响,探讨其对心脏电活动影响的机制。方法取SD大鼠,用酶解法分离获得单个心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录ICa-L,观察不同浓度的DEX(0.6,1.8,5.4,10,200 ng/ml)以及1μmol/L育亨宾(α2肾上腺素受体拮抗剂)单独使用及与10 ng/ml DEX联合使用对ICa-L的影响。结果 0.6,1.8,5.4,10,200 ng/ml的DEX对峰电流的抑制率分别为8.8%±2.4%、14.6%±3.6%、21.4%±8.4%、25.2%±6.4%和32.1%±6.6%,使I-V曲线上移。小剂量(0.6,1.8,5.4 ng/ml)的DEX对ICa-L激活曲线无明显影响(n=6,P>0.05);大剂量(10和200 ng/ml)的DEX可使ICa-L激活曲线右移。0.6,1.8,5.4,10,200 ng/ml的DEX可使ICa-L失活后恢复时间延长。10 ng/ml的DEX可使ICa-L的峰值抑制约25.2%±6.4%,再向电极外液中加入育亨宾后ICa-L平均增加约15%(n=6,P<0.05)。1μmol/L育亨宾灌流前后ICa-L的峰值无差异(n=6,P>0.05)。结论 DEX对心室肌细胞ICa-L具有浓度依赖性地抑制作用,可能是通过细胞膜上的α2肾上腺素受体介导的。     

外源性磷酸肌酸对缺血豚鼠心室肌细胞L型钙通道电流的影响

目的:观察不同浓度外源性磷酸肌酸(exogenous phosphocreatine,PCr)对豚鼠缺血心室肌细胞L型钙通道(ICa.L)电流的影响,探讨其治疗缺血性心力衰竭的电生理学机制。方法:单个心室肌细胞经酶解从豚鼠左心室获得,采用膜片钳全细胞模式记录ICa.L电流,通过灌注模拟缺血液并充以95%N2+5%CO2的混合气体建立缺血模型,将PCr加入模拟缺血液中分别配成5,10,20,30 mmol/L浓度。将细胞分成6组,分别予模拟缺血液,含有5,10,20,30mmol/L浓度PCr的模拟缺血液,台氏液灌流,后者充以95%O2+5%CO2的混合气体。10 min后记录各组的峰电流及电流密度。结果:与台氏液组相比,模拟缺血液组ICa.L峰电流密度降低(80.6±5.2)%(P0.05),含有5,10,20,30 mmol/L浓度PCr的模拟缺血液组ICa.L峰电流密度分别降低(53.8±6.7)%(P0.05);(41.8±8.2)%(P0.05);(38.1±7.4)%(P0.05);(36.6±9.7)%(P0.05)。10,20,30 mmol/L 3种浓度对ICa.L峰电流密度的影响无统计学差别。结论:PCr能明显增加缺血时受抑制的ICa.L峰电流及电流密度,这可能是其治疗缺血性心力衰竭的电生理学机制。PCr在低浓度(0～10 mmol/L)对ICa.L电流及电流密度的影响呈现明显的量效关系,浓度大于10mmol/L量效关系不明显。     

不同旋体氨氯地平对大鼠心室肌细胞L型钙离子流和细胞内钙离子浓度的影响

目的探讨不同旋体氨氯地平(Aml)对大鼠心室肌细胞L型钙离子流(ICa-L)及细胞内钙离子浓度的影响。方法采用酶消化法分离大鼠心室肌细胞,以全细胞膜片钳技术分别记录加入0.1,0.5,1,5和10μmol/L左旋、右旋和混旋Aml后大鼠心室肌细胞ICa-L及通道动力学参数的变化;采用荧光探针Fura-2/AM测定细胞内钙离子浓度,观察加入1,5,10,50和100μmol/L左旋、右旋和混旋Aml后细胞内钙离子浓度的变化。结果加入不同浓度左旋和混旋Aml后,随着浓度增加,ICa-L及峰值电流呈浓度依赖性阻滞、I-V曲线上移、稳态激活曲线和稳态失活曲线左移、失活后恢复时间延长(P<0.05);细胞内钙离子浓度逐渐降低,左旋和混旋Aml对细胞内钙离子浓度影响的半效抑制浓度分别为8.13和16.19μmol/L(P<0.05),但不同浓度右旋Aml对ICa-L、通道动力学参数和细胞内钙离子浓度均无影响(P>0.05)。结论左旋和混旋Aml对ICa-L有阻滞作用,而右旋Aml对ICa-L无阻滞作用。     

乙酰胆碱对犬右室三层心肌细胞L型钙电流不均一性的影响

目的测定犬右室三层心肌细胞上的L型钙电流(ICa,L),并研究其对自主神经递质乙酰胆碱的反应。方法经酶解法分离获得犬右室三层心肌细胞,应用全细胞膜片钳技术,记录并比较三层心肌细胞的ICa,L,以及应用2μmol/L乙酰胆碱前后电流-电压曲线的差异。结果ICa,L的峰值电流密度外膜下大于M细胞,而M细胞又大于内膜下心肌细胞,分别为-4.896±1.907pA/pF(n=31),-3.406±0.904pA/pF(n=37),-2.788±0.756pA/pF(n=33)(P<0.05)。使用乙酰胆碱后,右室外膜下及M细胞的峰值电流密度减小[-4.921±1.023pA/pF vs -3.462±0.997pA/pF(n=12);-3.803±1.115pA/pF vs -2.959±0.883pA/pF(n=13),P均<0.05]。心内膜下心肌细胞用药前后无差异(P>0.05)。结论ICa,L在犬右室三层心肌细胞存在不均一性,乙酰胆碱可以减小心外膜下、M细胞的ICa,L,对内膜下心肌细胞的ICa,L无影响。     

阿魏酸钠与胺碘酮对家兔心室肌细胞L型钙通道电流的影响

目的探讨阿魏酸钠对家兔心室肌细胞膜L型钙通道电流(ICa-L)的影响。方法酶解法急性分离兔单个心室肌细胞,以经典的Ⅲ类抗心律失常药物胺碘酮为对照,应用膜片钳全细胞记录技术观察3,10,30,100μmol/L的阿魏酸钠对心室肌细胞膜ICa-L的作用。结果阿魏酸钠及胺碘酮均呈浓度依赖性抑制L型钙电流。3,10,30,100μmol/L的阿魏酸钠对ICa-L的抑制率分别为11.1%±2.4%,26.9%±6.2%,40.5%±5.0%,61.9%±5.5%(P<0.05);1,3,10,30μmol/L的胺碘酮对ICa-L的抑制率分别为21.1%±3.8%,32.6%±2.6%,52.6%±4.6%,71.4%±7%(P<0.05);半数抑制浓度分别为32.6及9.5μmol/L,阿魏酸钠的抑制作用弱于胺碘酮(P<0.05)。阿魏酸钠及胺碘酮均能使ICa-L电流-电压曲线上移,稳态激活曲线右移,失活曲线左移,并可减慢钙通道灭活后的恢复过程。结论阿魏酸钠对ICa-L具有浓度依赖性阻滞作用,使ICa-L的激活减慢,失活加快,并且失活后的恢复时间延长,可能是其抗心律失常作用的电生理机制之一。     

Canine Ventricular Myocyte β2-Adrenoceptors Are Not Functionally Coupled to L-Type Calcium Current

INTRODUCTION: To establish the functional coupling of beta adrenoceptor (betaAR) subtypes beta1AR and beta2AR to L-type calcium current (I(CaL)), we investigated the nonselective agonist isoproterenol (ISO) and the relatively selective beta2AR agonists zinterol (ZIN) and salbutamol (SAL) on I(CaL) in isolated canine ventricular myocytes in the presence and absence of CGP 20712A (CGP) and atenolol (AT), selective beta1AR antagonists, and ICI 118,551 (ICI) a selective beta2AR antagonist. METHODS AND RESULTS: Peak I(CaL) was determined using "patch type" microelectrodes and whole cell voltage clamp. ISO (0.5 microM) increased I(CaL) maximally 3.5 +/- 0.67 fold. ZIN (10.0 microM) and SAL (10.0 microM) increased I(CaL) maximally 1.5 +/- 0.2 fold (n = 5) and 1.4 +/- 0.1 fold (n = 5), respectively. These effects were fully inhibited by CGP (0.3 microM) and AT (1.0 microM), which are inhibitors of beta1AR, but not by ICI (0.1 microM), which is a beta2AR inhibitor. ZIN at relatively lower concentrations (< or = 0.1 microM) did not increase I(CaL). CGP (0.3 microM) but not AT and ICI inhibited I(CaL) in the absence of betaAR agonists. CGP inhibition of I(CaL) was absent in the presence of forskolin (1.0 microM), which increases cAMP levels and I(CaL) by directly stimulating the adenylate cyclase. These data indicate that none of the antagonists affect I(CaL) through an action downstream of betaAR. CONCLUSION: Beta-adrenergic agonists increase I(CaL) via beta1AR but not beta2AR in canine ventricular myocytes.