基质细胞衍生因子-1对神经干细胞的趋化作用

目的 观察基质细胞衍生因子-1(SDF-1)对神经干细胞(NSCs)迁移的影响.方法 由GFP转基因SD大鼠胚胎脑组织获取NSCs并进行传代培养,免疫细胞化学染色法检测SDF-1特异性受体CXCR4的表达,利用Blind-Well小室体外迁移体系观察不同浓度的SDF-1(0、1、10、50、100、500、1000μg/L)对NSCs定向迁移数量的影响,随后分别使用CXCR4激动剂和阻断剂处理NSCs,再次利用上述方法观察最适浓度SDF-1时NSCs的迁移.结果 成功分离培养得到能够稳定表达GFP的NSCs,且CXCR4在该种NSCs上有表达.体外趋化实验结果表明,SDF-1对NSCs有较强的趋化作用,随着SDF-1浓度的升高,发生迁移的细胞数量也随之增加,并于SDF-1浓度为500μg/L时达到最高峰;CXCR4特异性激动剂和阻断剂分别能够增强和减弱SDF-1对NSCs定向迁移的趋化作用.结论 SDF-1与其特异性受体CXCR4相互作用,能够对NSCs的定向迁移产生靶向性作用.     

大鼠异种腹主动脉移植形态学重构

目的：研究免疫排斥反应诱导移植血管损伤与重构的形态变化特征以及与腹主动脉瘤的关系。方法：选取豚鼠SD大鼠腹主动脉瘤模型．采用血管特殊染色及计算机图像半定量分析技术，分别于术后1、2、3、4周动态观测和比较移植腹主动脉平滑肌、弹力蛋白和胶原蛋白相对含量、内外径以及腔面积的变化。结果：术后移植腹主动脉各形态学指标均呈渐进性变化，其中术后1周平滑肌及胶原蛋白已明显减少，外径也明显增大；弹力蛋白于术后1周出现减少，至第2周已达最高峰；而内径以及腔面积于术后1周反而减少，3周后才明显增大。并且，弹力蛋白、平滑肌减少与腹主动脉扩张呈现显负相关。结论：异种腹主动脉移植结构重构以平滑肌反应最敏感，弹力蛋白和外径变化最显。可导致腹主动脉呈瘤样扩张。     

基质细胞衍生因子-1对神经干细胞的趋化作用

Objective To investigate the effect of stromal cell derived factor-1 ( SDF-1) on the regulation of neural stem cells (NSCs) migration. Methods NSCs were obtained from the cerebral cortex of embryonic GFP transgenic rats. After cell cultured in vitro, CXCR4, specific receptor of SDF-1, was detected by fluorescence immunocytochemistry. Using Blind-Well chambers, the chemotactic effects of SDF-1 was investigated by counting the cells which had crossed 8μm pore membrane and adhered to the superficies inferia of the membrane when confronted with varying concentrations of SDF-1α (0, 1, 10, 50, 100, 500 and 1000 μg/L) and the agonist or antagonist of CXCR4. Results Neurospheres were formed, which expressed GFP and were capable of differentiating into neurons (β-tubulin + ) and astrocytes (GFAP + ) in media without mitogens. Fluorescence immunocytochemistry showed that CXCR4 and Nestin were co-expressed in NSCs. SDF-1 showed great chemotaxis to NSCs, and the amount of cells migrating through the membrane in 500 μg/L SDF-1 group was more than that in other groups (P < 0. 05). The number of cells crossing the membrane could be augmented and diminished by the agonist and antagonist of CXCR4 respectively. Conclusion SDF-1 binding to its specific receptor CXCR4 was capable of inducing NSCs migrating directionally to the source of SDF-1.     

基质细胞衍生因子-1对神经干细胞的趋化作用

Objective To investigate the effect of stromal cell derived factor-1 ( SDF-1) on the regulation of neural stem cells (NSCs) migration. Methods NSCs were obtained from the cerebral cortex of embryonic GFP transgenic rats. After cell cultured in vitro, CXCR4, specific receptor of SDF-1, was detected by fluorescence immunocytochemistry. Using Blind-Well chambers, the chemotactic effects of SDF-1 was investigated by counting the cells which had crossed 8μm pore membrane and adhered to the superficies inferia of the membrane when confronted with varying concentrations of SDF-1α (0, 1, 10, 50, 100, 500 and 1000 μg/L) and the agonist or antagonist of CXCR4. Results Neurospheres were formed, which expressed GFP and were capable of differentiating into neurons (β-tubulin + ) and astrocytes (GFAP + ) in media without mitogens. Fluorescence immunocytochemistry showed that CXCR4 and Nestin were co-expressed in NSCs. SDF-1 showed great chemotaxis to NSCs, and the amount of cells migrating through the membrane in 500 μg/L SDF-1 group was more than that in other groups (P < 0. 05). The number of cells crossing the membrane could be augmented and diminished by the agonist and antagonist of CXCR4 respectively. Conclusion SDF-1 binding to its specific receptor CXCR4 was capable of inducing NSCs migrating directionally to the source of SDF-1.     

基质细胞衍生因子-1在人肝细胞癌中的表达及临床意义

目的 观察基质细胞衍生因子-1(SDF-1)在肝细胞肝癌(HCC)中的表达,探讨SDF-1和HCC的临床、病理特点及术后复发的关系.方法 应用免疫组织化学技术检测SDF-1在41例HCC癌组织、癌旁组织和11例正常肝组织中的表达;分析临床、病理资料,并对上述患者进行随访,根据HCC患者术后复发时间进行生存分析.结果 SDF-1在HCC癌组织、癌旁组织及正常肝组织中的表达阳性率分别为68.29%、46.34%、和18.18%(P<0.01).SDF-1表达强度与肿瘤病理分级呈正相关(低分化为66.67%,高分化为43.48%;转移组为52%,未转移组31.25%),差异有统计学意义(P<0.05).SDF-1表达阳性、阴性患者12月内的复发率分别为48.1%和14.3%(P<0.01).结论 SDF-1在HCC中表达上调,SDF-1的高表达在肝癌发生过程中发挥重要作用.SDF-1可作为一种新的判断HCC患者术后复发和预后的指标.     

大鼠脊髓损伤后脊髓组织中基质细胞衍生因子1α的时空分布

目的:观察Wistar大鼠脊髓损伤后脊髓组织中基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)的表达及分布变化,探讨SDF-1α在脊髓损伤后脊髓中的时空分布特点.方法:取成年雌性Wistar大鼠90只,随机分成3组:正常组(n=10),假手术组(单纯椎板切除,n=10)和损伤组(n=70).损伤组根据损伤后取材时间点不同分为1、2、3、4、7、14、28d组.损伤组按改良的Impactor modelⅡ法,暴露T10脊髓节段,将10g条形重物从2.5cm高度垂直打击该段脊髓,制作脊髓损伤模型.按设定的时间点将大鼠在多聚甲醛灌注下取以T10为中心的2cm脊髓组织,取离损伤中心2mm和7mm处脊髓组织横断切片,使用HE及免疫组织化学法进行染色,观察并分析脊髓形态学变化和SDF-1α表达的时空分布特点.结果:正常组和假手术组的脊髓形态结构完整,损伤组中灰质神经元数量减少,白质纤维结构紊乱.免疫组化染色正常组和假手术组的脊髓中均匀分布少量SDF-1α,损伤组脊髓损伤中心近端(2mm)和远端(7mm)SDF-1α表达量都明显上升,损伤近端的SDF-1α阳性细胞数量增幅远多于远端;脊髓灰质中阳性细胞明显多于白质(P＜0.05).在大鼠脊髓损伤后1d脊髓组织中的SDF-1α阳性细胞数量开始上升,到损伤后2d时脊髓灰质中SDF-1α阳性细胞达到高峰,之后逐渐下降,损伤后7d时损伤近端SDF-1 α阳性细胞数量高于正常组和假手术组(P＜0.05),远端与正常组和假手术组无统计学差异(P＞0.05);到损伤后14d和28d时近端和远端与正常组和假手术组均无统计学差异(P＞0.05).结论:SDF-1α在Wistar大鼠脊髓损伤后脊髓组织中表达活跃,呈现出明显的时空分布特点.     

基质细胞衍生因子-1α及其受体在肝干细胞归巢机制中的作用

目前,原位肝移植是治疗终末期肝病最有效的措施。但是,它存在的三大缺陷阻碍着其更广泛应用：（1）供肝缺乏;（2）供体肝与受体存在免疫排斥反应,肝移植术后需长期应用免疫抑制剂,使患者免疫力下降,易患各种疾病;（3）器官移植费用昂贵,对国家、社会、个人都是沉重的经济负担。干细胞是一类具有自我复制功能和多分化潜能的早期未分化细胞,通过控制条件可以使其分化为肝细胞。     

基质金属蛋白酶-2在实验性大鼠腹主动脉瘤模型中的动态表达

目的:检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在大鼠正常动脉及动脉瘤模型组织中的动态表达,以探讨其在腹主动脉瘤发病机制中的作用。方法:Wistar大鼠54只,随机分为9组,每组6只。1组为正常对照组;4组生理盐水对照组;4组实验组。实验组经腹主动脉灌注弹力蛋白酶(25U/ml)2ml,持续2h;对照组经腹主动脉灌注生理盐水2ml;分别于术前、术后即刻、第2天、第7天、第14天测量腹主动脉直径,并采用免疫组织化学和分子原位杂交技术动态检测腹主动脉组织中MMP-2的表达。结果:正常腹主动脉组织中仅含微量MMP-2,弹力蛋白酶灌注后第2～14天MMP-2均有不同程度升高,且与纤维反应相关。结论:MMP-2的分泌与纤维反应有关,并对腹主动脉瘤的形成起重要作用。     

升主动脉-腹主动脉旁路移植术治疗、型大动脉炎

目的　为了有效治疗累及胸腹主动脉的 、 型大动脉炎 ,探讨升主动脉 -腹主动脉旁路移植术的手术疗效。　方法　自 1976年至 2 0 0 1年采用升主动脉 -腹主动脉旁路移植术治疗 、 型大动脉炎 4 7例 ,同期行人工血管与肾动脉旁路移植术 10例 ,冠状动脉旁路移植术和自体肾移植术各 2例 ,三尖瓣成形术和髂动脉旁路移植术各 1例。　结果　术后 1例死于凝血障碍出血 ,死亡率为 2 .13% ;术后因肠梗阻再手术 1例 ;存活患者血压和血运均明显改善 ,上肢血压较术前明显下降 ,平均为 118/ 77mm Hg (1k Pa=7.5 mm Hg) vs 177/ 83m m Hg;术后上、下肢血压差别无显著性意义。平均随访 8.2年 ,远期死亡 2例 (4.35 % ) ,再手术 1例 ,远期效果优良率为 81.82 %。　结论　升主动脉 -腹主动脉旁路移植术是治疗 、 型大动脉炎的简单、安全、远期疗效好的方法。     

基质细胞衍生因子-1对小鼠关节软骨细胞自噬水平的影响

目的：通过研究基质细胞衍生因子-1（stromal derived factor?1, SDF?1）对小鼠关节软骨细胞自噬的影响,探讨SDF?1在骨性关节炎中的作用及机制。方法分离并体外培养小鼠关节软骨细胞,分别予以0、1、10、100、1000μg/L浓度的五组重组SDF?1蛋白干预24 h。运用RT?PCR检测各组细胞的微管相关蛋白1轻链3（microtubule associated protein 1 light chain 3, LC3）和UNC?51样激酶复合物1（uncoordinated?51 like kinase 1, ULK1）mRNA表达情况,运用Western Blot方法检测LC3?Ⅱ、LC3?Ⅰ、ULK1及泛素连接蛋白62（ubiquitin?binding protein p62, p62）蛋白表达水平,通过透射电镜观察自噬溶酶体。结果 RT?PCR结果显示10、100、1000μg/L浓度条件下LC3、ULK1的mRNA水平明显高于对照组,且差异具有统计学意义（P＜0.05）。Western Blot结果显示1、10、100、1000μg/L的各组细胞的LC3?Ⅱ/LC3?Ⅰ比值、ULK?1表达水平较对照组升高,p62蛋白表达水平较对照组明显降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）。透射电镜结果显示经SDF?1干预后,自噬溶酶体较对照组增多,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 SDF?1可诱导小鼠关节软骨细胞自噬的发生,SDF?1可能通过调节软骨细胞自噬水平参与了骨性关节炎的进展。     

小鼠全层皮肤创伤愈合过程中基质细胞衍生因子-1及其受体CXCR4基因表达的研究

目的：研究小鼠全层皮肤创伤愈合过程中创面基质细胞衍生因子-1（stroma-cell derived factor-1,SDF-1）及其受体CXCR4的基因表达情况。方法：建立小鼠背部皮肤正中近颈侧1.5cm×1.5cm的正方形皮肤全层缺损模型,分别于伤后1、2、3、4、5、7、10和14d获取创缘组织,应用半定量逆转录-聚合酶链反应检测损伤后各时间点创面SDF-1及CXCR4的mRNA表达,并观察组织病理学变化。结果：伤后1～3d创面有大量炎症细胞浸润,4d时有肉芽组织形成,5d可见上皮细胞覆盖创面,7d时创面周围明显上皮化,14d创面基本完全愈合。SDF-1及CXCR4在创面愈合过程均呈双峰表达,SDF-1基因表达于伤后1d明显增高（P〈0.01）,随后下降,于伤后3d达最低,随后再次升高,于伤后5d达峰值（P〈0.01）,然后下降,14d时接近伤前值。CXCR4基因表达于伤后1d升高,然后继续升高,至伤后5d达峰值,随后下降,于伤后10d表达最少（P〈0.01）,伤后14d表达再次增加（P〈0.01）。结论：SDF-1/CXCR4轴参与了创伤愈合的炎症反应期和增殖期的愈合过程,在皮肤组织创伤愈合过程中起着重要作用。     

糖尿病肾病患者血清视黄醇结合蛋白和基质细胞衍生因子-1与肾功能的关系

目的探讨糖尿病肾病(DKD)患者血清视黄醇结合蛋白(RBP),基质细胞衍生因子-1(SDF-1)与肾功能的关系。方法前瞻性选取2017年10月—2020年10月滨州医学院烟台附属医院收治的2型糖尿病(T2DM)患者438例,根据有无合并DKD分为单纯T2DM组(n=276)和DKD组(n=162),根据尿白蛋白/肌酐比值(UACR)分为正常(n=25),微量(n=75)以及大量白蛋白尿组(n=62),根据估算肾小球滤过率(eCFR)分为C1期(n=28),G2期(n=27),G3a+G3b期(n=35),C4期(n=39)以及G5期(n=33),分析RBP,SDF-1与肾功能指标UACR,血尿酸(UA)、血清尿素氮(BUN)、β2-微球蛋白(β2-MG),血肌酐(Scr)的关系。正态分布的计量资料以均数±标准差(Mean±SD)表示,两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析;计数资料组间比较采用χ^2检验。受试者操作特征曲线(ROC)用于分析RBP,SDF-1对DKD的判别价值;Pearson用于指标间的相关性分析;多元线性回归分析用于RBP的影响因素分析。结果DKD组患者的糖尿病病程长,RBP、UACR、UA、BUN、β2-MG、Ser水平高,SDF-1,eGFR低,与单纯T2DM组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。RBP,SDF-1判别DKD的曲线下面积为0.903,0.868,最佳截断值为70.71 mg/L,5.69 ng/mL。随着尿白蛋白和临床分期的增加,RBP、UACR、UA、BUN、β2-MG、Ser水平逐渐升高,SDF-1、eGFR逐渐降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。DKD患者RBP与UACR、UA、BUN、β2-MG、Ser均具有显著正相关关系(r=0.764,0.787,0.693,0.577,0.801,P<0.0001),与eGFR具有显著负相关关系(r=-0.782,P<0.0001)。SDF-1与UACR、UA、BUN、β2-MG,Ser均具有显著负相关关系(r=-0.744、-0.794、-0.666、-0.605、-0.820,P<0.0001),与eGFR具有显著正相关关系(r=0.767,P<0.0001)。多元线性回归方程为:RBP=29.852+0.007UACR+0.101UA+0.497BUN+0.034Ser-0.083eGFR(P<0.001)。结论RBP和SDF-1对T2DM人群中的DKD患者具有一定的判别价值,且DKD肾功能损伤程度与RBP呈正相关,与SDF-1呈负相关,UACR、UA、BUN、Ser升高以及eGFR下降是RBP升高的危险因素。     

AMD3100体外阻断基质细胞衍生因子1/趋化因子受体4信号通路对人关节软骨细胞分泌基质金属蛋白酶3、9、13水平的影响

目的探讨趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)特异性拮抗剂AMD3100体外阻断基质细胞衍生因子1(stromal cell derived factor 1,SDF-1)/CXCR4信号通路对人关节软骨细胞分泌基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMP)3、9、13水平的影响,明确AMD3100的作用机制。方法取12例骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者144块软骨组织(OA软骨组)和12例创伤性截肢患者144块正常软骨组织(正常软骨组)(Mankin评分均为0或1),根据添加培养液不同,每组再分为A、B、C 3个亚组。A亚组含1 000 nmol/L AMD3100及100 ng/mL SDF-1的DMEM液,B亚组含1 000 nmol/L MAB310及100 ng/mL SDF-1的DMEM液,C亚组含100 ng/mL SDF-1的DMEM液。体外培养2、4 d后,ELISA法测定培养液内MMP-3、9、13含量,RT-PCR检测软骨组织中MMP-3、9、13 mRNA表达。结果 ELISA法及RT-PCR检测示:同组相同时间点A亚组MMP-3、9、13含量及mRNA表达均显著低于B、C亚组(P<0.05)。同一时间点相同亚组OA软骨组MMP-3、9、13含量及mRNA表达均显著高于正常软骨组(P<0.05)。结论 SDF-1通过SDF-1/CXCR4信号通路可诱导人关节软骨中MMP-3、9、13的表达和释放;AMD3100可阻断SDF-1/CXCR4信号通路,使软骨细胞MMP-3、9、13 mRNA表达水平及分泌量降低,但AMD3100不能使退变的OA软骨分泌MMP-3、9、13恢复至正常软骨水平。     

分化生长因子-8对大鼠移植腹主动脉肌纤维化的作用及其机制

目的探讨分化生长因子(GDF)-8对移植大鼠腹主动脉肌纤维化的抑制作用。方法建立雄性Wistar大鼠至雄性SD大鼠腹主动脉原位移植模型,实验动物随机分为两组:延长冷缺血组(PCI)和对照组,测定术后7、14、21、28 d血管内膜厚度,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测移植血管GDF-8的表达,免疫组织化学(IHC)检测Smad4的表达。结果 PCI组内膜14 d开始增厚,28 d至(381．952±44．334)μm,对照组为(56．898±17．543)μm,差异有统计学意义(P<0．05), 术后PCI组GDF-8 mRNA为对照组的3．6％-33.8％,Smad4蛋白表达高于对照组。结论 GDF-8 在移植动脉肌纤维化过程中发挥重要作用,延长冷缺血时间可下调GDF-8的表达而加速肌纤维化进程。     

The myofibrosis mechanism of differentiation growth factor-8 on rat abdominal aorta grafts

OBJECTIVE: The objective of this study was to investigate the role of differentiation growth factor-8 (GDF-8) in inhibiting myofibrosis of abdominal aorta grafts. METHODS: Male Spague-Dawley (SD) rats that received abdominal aorta grafts from male Wistar rats were randomly divided into 2 groups: prolonged cold ischemia (PCI) and control groups. Hematoxylin-eosin (HE) staining was performed to examine aortic graft morphology and to measure neointimal thickness. RT-PCR demonstrated the expression of GDF-8. Immunohistochemical staining (IHC) was performed to detect the expression of Smad4, a pivotal molecule of the transforming, growth factor-beta (TGF-beta)/Smad signal pathway. RESULTS: The intimal thickness increased by 14 days following transplantation in the PCI group (P<.05), reaching 381.952+/-44.334 microm at 28 days, which was higher than that of the control group (56.898+/-17.543 microm; P<.05). The GDF-8 expression in the PCI group was only 3.6%-33.8% of that among the control group. There was a much higher expression of Smad4 on the endothelium of the PCI than the control group at the same time. CONCLUSIONS: Prolonged cold ischemia accelerated grafts myofibrosis by down-regulating the expression of GDF-8, which plays a key role in the myofibrosis process of rat abdominal aortic grafts.     

SDF-1/CXCR4信号轴调控骨髓间充质干细胞向哮喘小鼠肺组织的迁移

目的：探讨基质细胞衍生因子-1（SDF-1）/CXCR4轴在外源性骨髓间充质干细胞（MSC）向哮喘模型小鼠肺组织迁移的作用.方法：无菌条件下取GFP转基因小鼠骨髓MSC,体外扩增,鉴定.采用Transwell培养系统,观察0、50、100、150和200 ng/ml SDF-1和CXCR4阻断剂AMD3100对MSC体外定向迁移的影响.取60只雌性BALB/c小鼠,随机分为6组（n=10）：PBS非哮喘组、MSC非哮喘组、PBS哮喘组、MSC哮喘组、SDF-1处理哮喘组、AMD3100处理哮喘组.哮喘组采用哮喘致敏液0.2 ml（含100 μg卵白蛋白）致敏,并使用卵白蛋白雾化吸入激发哮喘.非哮喘组在致敏和激发时均予以PBS处理.MSC处理组于哮喘激发前移植外源性MSC.SDF-1处理哮喘组在MSC移植前气管内注入SDF-1,AMD3100处理哮喘组注入AMD3100预先孵育的MSC.PBS哮喘组注射等量的PBS液.采用Westernablot和RT-PCR方法检测肺组织中SDF-1的表达水平,通过荧光显微镜观察表达GFP的外源性MSC在哮喘小鼠肺组织中的分布情况,比较SDF-1和CXCR4阻断剂AMD3100干预对MSC向肺组织迁移的影响.结果：Transwell实验显示MSC的迁移水平与SDF-1（0~150军ng/ml）成浓度依赖性.与正常小鼠比较,哮喘小鼠肺组织SDF-1表达增强.与MSC非哮喘组比较,MSC哮喘组小鼠肺部有更多MSC聚集.在哮喘肺组织中增加外源性SDF-1能够促进MSC向肺组织迁移.通过AMD3100阻断MSC的CXCR4可以明显减少MSC向肺组织的迁移水平.结论：SDF-1/CXCR4轴参与了MSC迁移到哮喘小鼠肺组织的过程.