miR-155靶向JAK/STAT3通路促进LPS诱导的THP-1巨噬细胞炎性反应

目的 探讨miR-155在THP-1巨噬细胞炎性反应中的作用及调控机制.方法 使用脂多糖(LPS)处理THP-1来源的巨噬细胞构建体外巨噬细胞炎性模型,分为control组、LPS组、miR-155 mimics+LPS组和mimics NC+LPS组;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测上述各组中miR-15...     

miR-21a-5p靶向MATN2抑制LPS诱导的巨噬细胞损伤的实验研究

目的 miR-21a-5p对脂多糖( LPS)处理的 RAW264. 7 巨噬细胞的调控作用及分子机制研究.方法 实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)检测不同浓度 LPS处理的巨噬细胞中 miR-21a-5p水平;应用 miR -21a-5p模拟物( mimics)和阴性对照( miRNA-NC)分别转染 LPS处理...     

miR-33调控单核细胞系炎症因子TNF-α及IL-6表达的研究

目的研究microRNA-33（miR-33）靶向人核受体相互作用蛋白1（NRIP1）负性调控脂多糖（LPS）诱导的人单核细胞（THP-1）巨噬细胞炎症反应。方法体外培养THP-1,设立:1)空白对照组（等量磷酸盐缓冲液）;2)miR-33 mimics转染对照组（转染模拟miR-33 mimics）;3)miR-33 mimics转染组（转染miR-33 mimics）;4)miR-33 inhibitor转染对照组（转染模拟miR-33 inhibitor）;5)miR-33 inhibitor转染组（转染miR-33 inhibitor）。采用10.0 ng·mL-1 LPS刺激各组细胞24 h;实时荧光定量PCR法检测细胞miR-33表达;Western印迹法检测细胞NRIP1蛋白表达;ELISA法检测细胞TNF-α、IL-6含量。结果 miR-33 mimics转染组细胞NRIP1蛋白表达显著减少,TNF-α、IL-6分泌也显著降低（P<0.05）;miR-33 inhibitor转染组细胞NRIP1蛋白表达显著增加,TNF-α、IL-6含量也显著增加（P<0.05）。结论 miR-33可能通过下调NRIP1而抑制单核细胞TNF-α、IL-6产生负性调节炎症反应。     

miR-324-5p通过抑制Syk/Ras/c-fos通路降低脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖

目的 探讨miR-324-5p调控Syk/Ras/c-fos信号通路对大鼠肾小球系膜（HBZY-1）细胞增殖能力的影响。方法 体外培养HBZY-1 细胞;设计并合成 miR-324-5p mimics,miR-324-5p mimics-NC 片段;采用 Lipo3000 试剂盒瞬时转染 miR-324-5pmimics,miR-324-5p mimics-NC片段至脂多糖（LPS）诱导的HBZY-1细胞内,RT-qPCR验证转染效率;将HBZY-1细胞分为对照组（生理盐水）,LPS 组（LPS 0.5 μg/mL）,LPS+mimics 组（LPS 0.5 μg/mL+miR-324-mimics）,LPS+mimics-NC 组（LPS 0.5 μg/mL+miR-324-mimics-NC）;MTT法检测各组HBZY-1细胞增殖活性;RT-qPCR法检测各组细胞miR-324-5p及Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2、c-fos mRNA的表达;Western blot和免疫荧光法检测各组细胞p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-fos蛋白的表达。结果 MTT结果显示,LPS组细胞增殖水平较正常组显著升高,与LPS组及LPS+mimics-NC组相比,LPS+mimics组细胞增殖能力降低;RT-qPCR结果显示,LPS+mimics组中miR-324-5p表达明显高于LPS组及LPS+mimics-NC组,且LPS+mimics组中Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2、c-fos mRNA的表达显著低于LPS组及LPS+mimics-NC组,差异具有统计学意义（P<0.05）;Western Blot结果显示,与LPS组及LPS+mimics-NC组相比LPS+mimics组中p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-fos蛋白表达显著降低,差异具有统计学意义（P<0.05）;免疫荧光结果显示,与LPS组及LPS+mimics-NC组相比,LPS+mimics组p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-fos蛋白标记细胞数目明显减少。结论 miR-324-5p可通过抑制Syk/Ras/c-fos信号通路降低LPS诱导的慢性肾小球肾炎细胞的增殖活性,miR-324-5p有望成为慢性肾小球肾炎诊断和治疗的潜在靶标。     

七氟醚对结直肠癌细胞侵袭迁移的影响及对microRNA-203的调控作用机制研究

目的 观察七氟醚对结直肠癌细胞侵袭迁移的影响及对microRNA-203（miR-203）的调控作用,探讨其可能作用机制。方法 将HCT116细胞分为对照组（5%CO₂培养+未转染）、七氟醚组（4%七氟醚+5%CO₂培养+未转染）,miR-203组（5%CO₂培养+转染miR-203 mimics）、miR-203+七氟醚组（4%七氟醚+5%CO₂培养+转染miR-203 mimics）,miR-203-NC+七氟醚组（4%七氟醚+5% CO₂培养+转染miR-203 mimics-NC）。CCK-8实验检测细胞增殖能力;qRT-PCR法检测细胞的miR-203表达;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western blotting法检测细胞外信号调节激酶（ERK）、p-ERK、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）蛋白水平。结果 miR-203+七氟醚可抑制细胞增殖,降低细胞迁移能力,减少穿膜细胞数,降低细胞中p-ERK、MMP-9蛋白表达。结论 七氟醚可抑制HCT116细胞侵袭、迁移,可能是通过上调miR-203表达、阻断ERK/MMP-9信号通路发挥作用。     

MiR-34b-5p通过靶向PGRN减轻LPS诱导的急性呼吸窘迫综合征大鼠的肺部细胞凋亡

目的 探讨miR-34b-5p对脂多糖(LPS)诱导的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠的肺部炎症、细胞凋亡的影响及可能机制.方法 60只SD大鼠分为对照组、ARDS、ARDS+miR-34b-5p mimics mock及ARDS+miR-34b-5p mimics组,每组15只.除对照组外,其余组大鼠腹腔注射LPS...     

miR-548a-3p调控TLR4抑制脂多糖诱导结肠上皮细胞的凋亡

目的 探究微小RNA(miRNA)-548a-3p对脂多糖(LPS)诱导的结肠上皮细胞的凋亡和炎症反应影响及其机制。方法 收集2019年1月至2020年5月于南方医科大学深圳医院就诊,经肠镜及病理学检查确诊为活动期溃疡性结肠炎35例患者的肠黏膜组织及正常肠道黏膜组织。取正常结肠上皮细胞分为6组：对照组不做任何处理;LPS组给予50μg/mL LPS处理;miR-NC组、miR-548-3p mimics组、miR-548-3p inhibitor组、miR-574-3p mimics+pcDNA3.1-toll样受体4(TLR4)组分别转染相应序列,随后使用等量LPS处理。实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-548a-3p表达,CCK-8法检测细胞增殖,酶联免疫吸附剂测定(ELISA)检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素8(IL-8)含量,双荧光素酶报告基因实验验证miR-548a-3p与TLR4的结合关系;Western blot实验检测TLR4、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因-相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达。结果 miR-...     

miR-93-5p靶向下调ROCK2表达对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨miR-93-5p对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLSs)增殖、迁移和侵袭的影响,并阐明其可能的机制。方法:选择类风湿性关节炎(RA)患者(RA组,n=37)和接受关节置换手术的关节创伤患者(对照组,n=30)作为研究对象,从RA患者滑膜组织分离出RA-FLSs,采用免疫荧光法和流式细胞术鉴定细胞。将RA-FLSs分为空白组、mimics NC组(转染miR-93-5p mimics NC)、mimics组(转染miR-93-5p mimics)、OE-NC组(转染ROCK2过表达空载质粒)、OE-Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(ROCK) 2组(转染ROCK2过表达质粒)、mimics+OE-NC组(共转染miR-93-5p mimics和ROCK2过表达空载质粒)和mimics+OE-ROCK2组(共转染miR-93-5p mimics和ROCK2过表达质粒)。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组患者滑膜组织和各组细胞中miR-93-5p和ROCK2 mRNA表达水平,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,EdU染色检测各组细胞中EdU阳性细胞率,Tra...     

MicroRNA-31-3p靶向调控Sema4C表达对宫颈癌顺铂耐药性的作用及其机制研究

目的 探讨人宫颈癌细胞microRNA-31-3p(miR-31-3p)的表达及其靶向调控Sema4C表达对顺铂耐药性的作用机制研究。方法 取对数生长期Hela细胞,分别转染miR-31-3p mimics (miR-31-3p mimics组)、空白质粒（对照组）,以及在转染miR-31-3p mimics的基础上过表达Sema4C (miR-31-3p mimics+Sema4C组)。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-31-3p的表达,Western blotting检测转染mimics后Hela细胞Sema4C蛋白的表达,CCK-8法检测不同浓度顺铂作用下Hela细胞的耐药性变化。结果 miR-31-3p在宫颈癌细胞Hela中低表达（P <0.05）。miR-31-3p mimics组、miR-31-3p mimics+Sema4C组miR-31-3p相对表达量高于对照组（P <0.05）,且miR-31-3p mimics组与miR-31-3p mimics+Sema4C组miR-31-3p相对表达量比较,差异无统计学意义（P>0.05...     

乌梅总黄酮调控miR-145-3p表达对MPP+诱导SH-SY5Y细胞损伤的作用及其机制

目的：探讨乌梅总黄酮(FMF)调控微小RNA (miR)-145-3p对多巴胺能毒素1-甲基-4-苯基吡啶(MPP⁺)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用,并阐明其作用机制。方法：构建MPP⁺诱导帕金森病(PD) SH-SY5Y细胞模型,CCK-8法筛选MPP⁺和FMF最佳干预浓度和作用时间。将细胞分为对照组(未经处理)、模型组(500μmol·L^-1 MPP⁺作用24 h)、MPP⁺+mimics组(转染miR-145-3p mimics)、MPP⁺+NC组(转染miR-145-3p NC)、MPP⁺+FMF组(0.25 g·L^-1 FMF作用24h)、 MPP⁺+mimics+FMF组(转染miR-145-3pmimics后0.25g·L^-1FMF作用24h)和MPP⁺+NC+FMF组(转染miR-145-3p NC后0...     

miR-153-3p靶向调控CHI3L1对LPS所致人牙周膜干细胞炎症反应的影响

目的:探索miR-153-3p是否能通过靶向调控几丁质酶3样蛋白1(CHI3L1)改善脂多糖(LPS)所致人牙周膜干细胞(hPDLSCs)炎症反应。方法:分离培养hPDLSCs,采用LPS处理建立炎症细胞模型，并进行miR-NC、miR-153-3p mimics、si-NC、si-CHI3L1以及miR-153-3p mimics+pc-NC、miR-153-3p mimics+pcDNA-CHI3L1转染。转染48h后qRT-PCR法检测各组细胞中miR-153-3p、CHI3L1 mRNA表达，ELISA法检测细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α水平，流式细胞术检测细胞凋亡情况，Western Blot法检测细胞中CHI3L1蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验检测miR-153-3p与CHI3L1的靶向关系。结果:LPS处理后hPDLSCs中miR-153-3p表达下调(P<0.05),CHI3L1 mRNA与蛋白表达均显著上调(P<0.05);过表达miR-153-3p或抑制CHI3L1表达可降低LPS诱导的hPDLSCs中IL-6、IL-1β、TNF-α水平...     

MicroRNA-124对喉鳞状细胞癌细胞自噬、侵袭和迁移的影响

目的探讨microRNA-124(miR-124)在人喉鳞状细胞癌(LSCC)组织中的表达及其对LSCC细胞自噬、侵袭和迁移的影响。方法选取2016年1月至2018年9月新乡医学院第一附属医院手术切除的LSCC组织及癌旁组织(距离肿瘤边缘1～2 cm)标本各12例,采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LSCC组织和癌旁组织中miR-124表达;体外培养人Hep-2细胞,将其分为miR-124类似物(miR-124 mimics)组、miR-124抑制剂(miR-124inhibitor)组、类似物阴性对照(mimics NC)组、抑制剂阴性对照(inhibitor NC)组、mimics+西罗莫司组和inhibitor+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组,进行细胞转染;采用qRT-PCR检测miR-124 mimics组、miR-124 inhibitor组、mimics NC组、inhibitor NC组细胞中miR-124的表达水平,Western blot法检测LSCC组织、癌旁组织和mimics NC组、miR-124 mimics组、inhibitor NC组、miR-124 inhibitor组细胞中自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ的表达,Transwell小室法检测miR-124 mimics组、miR-124 inhibitor组、mimics NC组、inhibitor NC组、mimics+西罗莫司组和inhibitor+3-MA组细胞的侵袭能力,细胞划痕实验检测miR-124 mimics组、miR-124 inhibitor组、mimics NC组、inhibitor NC组、mimics+西罗莫司组和inhibitor+3-MA组细胞的迁移能力。结果 LSCC组织中miR-124相对表达量显著低于癌旁组织(P <0. 05)。LSCC组织中LC3B-Ⅱ蛋白表达显著高于癌旁组织(P <0. 05)。miR-124 mimics组细胞中miR-124相对表达量显著高于mimics NC组(P <0. 05),miR-124 inhibitor组细胞中miR-124相对表达量显著低于inhibitor NC组(P <0. 05)。miR-124 mimics组细胞LC3B-Ⅱ蛋白相对表达量显著低于mimics NC组(P <0. 05),miR-124 inhibitor组细胞LC3B-Ⅱ蛋白相对表达量显著高于inhibitor NC组(P <0. 05)。miR-124 mimics组侵袭细胞数显著少于mimics NC组和mimics+西罗莫司组(P <0. 05),miR-124 inhibitor组侵袭细胞数显著多于inhibitor NC组和inhibitor+3-MA组(P <0. 05)。划痕培养72 h后,inhibitor NC组和inhibitor+3-MA组细胞的划痕愈合率低于miR-124 inhibitor组(P <0. 05);培养96 h后,mimics NC组和mimics+西罗莫司组细胞的划痕愈合率高于miR-124 mimics组(P <0. 05)。结论人LSCC组织中miR-124表达显著下调,人LSCC组织和miR-124过表达细胞中自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ表达显著上调,miR-124可能通过抑制自噬而抑制LSCC细胞的侵袭和迁移能力。     

miR-584对人胶质母细胞瘤侵袭和迁移能力的影响

目的探讨miR-584对人胶质母细胞瘤U251细胞侵袭和迁移能力的影响。方法将化学合成的miR-584-3p在脂质体Lipofectamine 2000的介导下,瞬时转染人胶质母细胞瘤U251,细胞分为空白对照组(无转染,其他条件相同)、mimics NC组(转染miR-584-3p mimics阴性对照序列)、miR-584-3p mimics组(转染miR-584-3p mimics)、inhibitor NC组(转染miR-584-3p inhibitor阴性对照序列)和miR-584-3p inhibitor组(转染miR-584-3p inhibitor)。Real-time PCR法检测细胞中miR-584-3p的表达水平;CCK-8法检测细胞增殖能力;划痕实验和Transw ell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果与空白对照组和mimics NC组相比,miR-584-3p mimics组的miR-584-3p表达上调约100倍(P<0.05),细胞增殖能力无明显差异(P>0.05),细胞侵袭和迁移能力明显下降(P<0.05);与空白对照组和inhibitor NC组相比,miR-584-3p inhibitor组的miR-584-3p表达下调至空白对照组的5%(P<0.05),细胞增殖能力无明显差异(P>0.05),细胞侵袭和迁移能力显著增强(P<0.05)。结论 miR-584-3p mimics转染抑制了U251细胞的侵袭和迁移能力;miR-584-3p inhibitor转染能增强U251细胞的侵袭和迁移能力。     

芦荟大黄素调控miR-30b促进子宫内膜癌细胞自噬的研究

目的探讨芦荟大黄素(AE)调控子宫内膜癌细胞HEC-1-B中miR-30b表达促进细胞自噬的作用机制。方法实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)检测miR-30b在正常子宫内膜细胞和不同子宫内膜癌细胞株HEC-1-A、HEC-1-B、RL95-2中的表达水平。取miR-30b表达水平最高的HEC-1-B癌细胞分为HEC-1-B癌细胞组、miR-30b inhibitor NC组(转染miR-30b inhibitor NC)、miR-30b inhibitor组(转染miR-30b inhibitor)以及AE组(30μmol/L AE,未转染)和AE+转染组:AE+miR-30b mimics NC组(30μmol/L AE,转染miR-30b mimics NC)、AE+miR-30b mimics组(30μmol/L AE,转染miR-30b mimics)。q RT-PCR法检测各组细胞miR-30b表达水平;CCK-8法检测各组细胞增殖活性;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;单丹磺酰尸胺(MDC)荧光染色法检测各组细胞自噬率;蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测各组细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3-I、LC3-II和p62表达水平。结果与人正常子宫内膜上皮细胞相比,HEC-1-A、HEC-1-B和RL95-2癌细胞中miR-30b表达水平显著升高(P0.05)。其中HEC-1-B癌细胞中miR-30b表达水平最高,所以后续将选择HEC-1-B癌细胞进行转染实验。与HEC-1-B癌细胞组和miR-30b inhibitor NC组相比,miR-30b inhibitor组癌细胞miR-30b表达水平、细胞增殖率以及p62蛋白表达水平显著降低(P0.05),细胞凋亡率、自噬率以及Beclin1蛋白表达水平和LC3-II/I比值显著升高(P0.05)。与HEC-1-B癌细胞组相比,AE组和AE+miR-30b mimics NC组癌细胞miR-30b表达水平、细胞增殖率以及p62蛋白表达水平显著降低(P0.05),细胞凋亡率、自噬率以及Beclin1蛋白表达水平和LC3-II/I比值显著升高(P0.05)。与AE+miR-30b mimics NC组相比,AE+miR-30b mimics组癌细胞miR-30b表达水平、细胞增殖率以及p62蛋白表达水平显著升高(P0.05),细胞凋亡率、自噬率以及Beclin1蛋白表达水平和LC3-II/I比值显著降低(P0.05)。结论子宫内膜癌细胞中miR-30b表达较高,AE可能通过抑制miR-30b表达,促进癌细胞自噬和凋亡,抑制癌细胞增殖,而过表达miR-30b可逆转AE发挥的作用。     

circ0006152/miR-557/Wnt3a信号轴在非小细胞肺癌A549细胞发生发展中的机制

目的 环状RNA(circRNA)与非小细胞肺癌发生发展有关,本研究旨在探讨circ0006152/miR-557/Wnt3a信号轴在非小细胞肺癌A549细胞发生发展中的机制。方法 取对数生长期A549细胞进行分组和转染,采用随机数字法分为对照组(常规培育)、si-NC组(转染si-NC)、si-circ0006152组(转染si-circ0006152)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-557 mimics组(转染miR-557 mimics)和si-circ0006152+miR-557 inhibitors组(转染miR-557 inhibitors的同时进行si-circ0006152转染),检测A549细胞增殖抑制率、凋亡、侵袭和Wnt3a、β-catenin蛋白表达。结果 与si-NC组比较,si-circ0006152组的A549细胞增殖抑制率和凋亡率明显升高,侵袭数量显著降低(P<0.001);与miR-NC组比较,miR-557 mimics组的A549细胞增殖抑制率[(48.42±5.73)%vs.(4.27±0.19)%]、凋亡率[(45.38±...     

基于TLR4信号通路研究调控miR-217对脓毒症所致肺损伤模型大鼠的干预作用

目的:探究基于Toll样受体4(TLR4)信号通路调控微小RNA-217(miR-217)对脓毒症所致肺损伤模型大鼠的作用。方法:选择75只SD健康雄性大鼠(SPF级),随机分为正常组、假手术组、模型组、miR-217 mimics control组、miR-217 mimics组各15只,模型组、miR-217 mimics control组、miR-217 mimics组大鼠采用公认的盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症肺损伤模型,miR-217 mimics control组、miR-217 mimics组尾部静脉注射10μL miR-217 mimics control、10μL miR-217 mimics,正常组、假手术组、模型组尾静脉注射等体积生理盐水。评价各组大鼠病理组织变化、肺湿重/干重(W/D)、动脉血气、TNF-α、IL-6、IL-1β、MPO、PMN细胞计数、miR-217、TLR4信号通路蛋白表达量。结果:miR-217 mimics组病理学评分、W/D、pH、BE均低于miR-217 mimics control组,PaO_2高于miR-217 mimics control组,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-217 mimics组血清、肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6、IL-1β、MPO水平低于miR-217 mimics control组,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-217 mimics组肺泡灌洗液中蛋白含量、PMN细胞计数低于miR-217 mimics control组,差异有统计学差异(P<0.05)。miR-217 mimics组肺组织中miR-217表达量高于miR-217 mimics control组,肺组织中TLR4信号通路蛋白表达量低于miR-217 mimics control组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-217过表达通过抑制TLR4信号转导通路,阻断炎症反应,改善脓毒症所致的肺损伤,保护肺组织。     

miR-499与miR-1对心肌细胞增殖与凋亡调控作用及机制研究

目的:探究心肌细胞增殖与凋亡过程中,miR-499与miR-1所发挥的调控作用及其机制。方法:采用Lipofectamine^TM2000将miR-499 mimics和miR-1 inhibitor转染至H9C2心肌细胞,并采用RT-PCR检测转染情况。实验分组:空白对照组、H₂O₂组(未转染的H9C2心肌细胞)、干预组A(miR-499 mimics转染的H9C2心肌细胞)、干预组B(miR-1 inhibitor转染的H9C2心肌细胞)、干预组C(miR-499 mimics+miR-1 inhibitor转染的H₉C₂心肌细胞)。通过H₂O₂建立心肌细胞氧化应激模型。采用CCK8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western Blot检测Bcl-xl、Bax蛋白表达水平。结果:H₂O₂组细胞增殖较空白对照组减少(P<0.05),细胞凋亡率较空白对照组增加(P<...     

miR-105-5p调控CDC5L表达对胶质瘤细胞增殖迁移的影响

目的:分析微小RNA-105-5p(miR-105-5p)通过调控细胞分裂周期蛋白5样蛋白抗体(CDC5L)对胶质瘤细胞增殖、迁移的影响。方法:收集本院35例经手术治疗的人脑胶质瘤组织及因脑外伤行减压术的正常脑组织样本。取对数生长期U251细胞,分为对照(control)组、转染miR-105-5p阴性对照(miR-NC)组、转染miR-105-5p模拟物(miR-105-5p mimics)组、转染沉默CDC5L阴性对照(si-NC)组、转染沉默CDC5L(si-CDC5L)组、共转染miR-105-5p mimics及pcDNA(pcDNA)组以及共转染miR-105-5p mimics及pcDNA-CDC5L(miR-105-5p mimics+pcDNA-CDC5L)组。qRT-PCR检测胶质瘤组织、正常脑组织及各组U251细胞中miR-105-5p及CDC5L mRNA的表达情况;CCK-8法检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移;Western blot法检测CDC5L、细胞周期蛋白(CyclinDl)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9及细胞周期蛋白依赖性激...     

miR-30a对脂多糖诱导人脐静脉血管内皮细胞自噬的影响

目的探究miR-30a对脂多糖（LPS）诱导人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）自噬的影响及其可能机制。方法以HUVEC为研究对象,分为空白对照组（Control组）、模型组（LPS组）、阴性对照组（转染miR-30a-NC,NC组）和过表达组（转染miR-30a-mimics,mimics组）,采用LPS诱导HUVEC建立炎症模型;采用CCK-8法检测细胞存活率;qRT-PCR法检测miR-30a相对表达量;Westernblot法检测自噬相关蛋白自噬相关基因（Atg3）、p62、自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）-II和LC3-I表达水平;激光共聚焦显微镜法观察自噬小体形成变化。结果LPS组细胞存活率明显低于Control组,miR-30a相对表达量明显低于Control组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与Control组比较,LPS组细胞p62蛋白表达水平降低,Atg3蛋白表达水平升高,LC3-II/LC3-I比值升高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。转染miR-30a后,与LPS组比较,mimics组细胞存活率明显升高,miR-30a相对表达量明显上升,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与LPS组比较,mimics组细胞p62表达水平升高,LC3-II/LC3-I比值和Atg3表达水平降低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与LPS组比较,mimics组细胞胞质内自噬小体显著减少。结论miR-30a能通过抑制自噬减轻LPS诱导HUVEC损伤。     

LPS/CD14结合位点模拟肽对内毒素性大鼠急性肺损伤的治疗作用

目的 观测LPS/CD14结合位点模拟肽(mimic peptides 12,MP12)对内毒素性急性肺损伤大鼠模型的治疗作用.方法 将30只Wistar大鼠按随机数字表法分为生理盐水对照组、LPS组和LPS+ MP12组(n=10).另将40只Wistar大鼠分为两组,分别接受与LPS组和LPS+ MP12组相同的处理方法,用于观测死亡率.采用LPS静脉注射法复制内毒素性急性肺损伤大鼠模型.LPS+ MP12组在接受LPS注射后立即予MP12静脉注射.2h后抽取静脉血用于检测血浆内毒素浓度.于12 h抽取动脉血,检测动脉血氧分压(PaO2).24h后处死各组大鼠,留取右下肺用于病理检查,右上肺匀浆检测TNF-α,留取左肺行支气管肺泡灌洗并分离肺泡巨噬细胞.采用荧光显微镜检测MP12对肺泡巨噬细胞与LPS结合的抑制作用.结果 LPS组及LPS+ MP12组的血浆内毒素浓度明显高于生理盐水对照组(P＜0.01),而LPS组与LPS+ MP12组间血浆内毒素浓度无显著差异(P＞0.05).LPS组及LPS+ MP12组PaO2显著低于生理盐水对照组(P＜0.01),但LPS+ MP12组PaO2显著高于LPS组(P＜0.01).LPS+ MP12组肺组织TNF-α浓度及病理学评分显著低于LPS组(P＜0.01).LPS+ MP12组肺泡巨噬细胞与LPS的结合率显著低于LPS组(P＜0.01).LPS+ MP12组的72 h死亡率显著低于LPS组(40％ vs 75％,P＜0.01).结论 LPS/CD14结合位点模拟肽(MP12)能通过阻断内毒素与肺泡巨噬细胞的结合,减轻内毒素导致的肺部炎症及病理损害,显著提高内毒素性急性肺损伤大鼠的动脉血氧分压、减少死亡率.