载脂蛋白E基因多态性与星形胶质细胞损伤后兴奋性氨基酸变化的关系

目的探讨载脂蛋白E(apolipoprotein E,蛋白:ApoE,基因:APOE)基因多态性与星形胶质细胞损伤后兴奋性氨基酸(excitatory amino acids,EAAs)变化的关系。方法提取APOE敲除鼠新生2 d内乳鼠大脑皮层星形胶质细胞,并以GFAP-FITC免疫荧光法对所获细胞进行鉴定。脂质体介导重组体pEGFP-N1-APOEε2、pEGFP-N1-APOEε3、pEGFP-N1-APOEε4分别转染入星形胶质细胞中,RT-PCR鉴定该基因在转染后的细胞中的表达,荧光显微镜观察该基因的亚细胞定位及转染效率。制备3种基因型星形胶质细胞划伤模型,采用氨基酸分析仪分别测其中氨基酸的含量,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果星形胶质细胞划伤后谷氨酸(Glu)和天冬氨酸(Asp)的释放较早,在划伤后30 min即达到高峰,在伤后30、60 min APOEε4型显著高于APOEε2、APOEε3型(P<0.05)。细胞早期凋亡率在24 h达到高峰,在伤后12、24 hAPOEε4型显著高于APOEε2、APOEε3型(P<0.05)。结论 APOE以亚型特异性的方式影响星形胶质细胞创伤后EAAs的释放,APOEε4携带体可能通过EAAs毒性作用导致创伤性脑损伤急性期伤情加重及不良预后。     

PI3K/Akt通路介导LPS调节星形胶质细胞HSPA12B表达的研究

目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白kinaseB(PI3K/Akt)通路对内毒素脂多糖（LPS）诱导的星形胶质细胞热休克蛋白A12B（HSPA12B）表达的影响。方法将处于对数生长期的新生SD大鼠星形胶质细胞分为3组：con组（空白对照）、LPS组（1滋g·ml-1LPS刺激4h）、LPS+LY组（20滋mol·L-1LY294002预处理1h+1滋g·ml-1LPS刺激4h）。采用Westernblot法检测3组细胞HSPA12B、磷酸化Akt（p-Akt）蛋白表达水平,采用细胞免疫荧光染色法检测细胞HSPA12B免疫荧光强度,并进行比较。结果3组星形胶质细胞HSPA12B、p-Akt蛋白表达水平比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）;与con组比较,LPS组星形胶质细胞HSPA12B、p-Akt蛋白表达水平均上调（均P＜0.05）;而与LPS组比较,LPS+LY组星形胶质细胞HSPA12B、p-Akt蛋白表达水平均下调（均P＜0.05）。LPS组星形胶质细胞HSPA12B荧光强度强于con组,而LPS+LY组星形胶质细胞HSPA12B荧光强度较LPS组减弱。结论LPS或是通过PI3K/Akt通路介导调节星形胶质细胞HSPA12B的表达,进而影响中枢神经系统炎症过程。     

载脂蛋白E基因多态性影响星形胶质细胞损伤后早期NF-κB表达的实验研究

目的探讨载脂蛋白E(apolipoprotein E,APOE)基因多态性与星形胶质细胞损伤后NF-κB表达的相关性。方法通过RT-PCR及定点突变技术扩增人源性APOEε2、ε3、ε4 3种等位基因的CDS区,并构建pEGFP-N1-APOE重组质粒;APOE基因敲除鼠星形胶质细胞的原代培养、鉴定,脂质体法将重组质粒转染入星形胶质细胞,并筛选稳定表达APOE信息的细胞株;利用划痕致伤构建细胞损伤模型,于伤后12、24、48 h,通过RT-PCR测定NF-κB mRNA的转录,通过West-ern blot测定其蛋白的表达。结果伤后12 h,APOEε2、ε3、ε4 3组细胞可检测到NF-κB的表达,但各组间比较差异无统计学意义(P>0.05);伤后24 h,3组细胞NF-κB的表达较伤前增高,且APOEε4组的表达明显高于APOEε2和APOEε3组(P<0.05);伤后48 h,表达进一步增强,APOEε4组的表达依然明显高于APOEε2和APOEε3组(P<0.05)。结论损伤后早期,携带APOEε4等位基因的星形胶质细胞NF-κB的表达水平高于APOEε2和APOEε3型,提示APOEε4携带体可能通...     

脑组织TNFα过度表达对神经胶质细胞及脑缺血梗死灶体积的影响

目的：探讨脑组织肿瘤坏死因子α(TNFα)过度表达对小胶质细胞、星形胶质细胞激活及脑缺血梗死灶体积的影响。方法：用TNFα、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、髓磷脂、整合素αM(OX42)免疫组化染色观察SD大鼠与转小鼠TNFα基因大鼠未缺血脑组织的TNFα表达及3种神经胶质细胞(星形胶质细胞、小胶质细胞与少突神经胶质细胞)的激活状态。采用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型，SD大鼠与转小鼠TNFα基因大鼠缺血1h再灌注72h后，先行神经功能缺损程度评分，再断头取脑四氯氮唑(TIC)染色计算脑梗死体积。结果：转小鼠TNFα基因大鼠与SD大鼠相比，未缺血脑组织见TNFα表达，且星形胶质细胞、小胶质细胞与少突神经胶质细胞呈肥大和增生性变化；缺血1h再灌注72h后神经功能缺损程度评分显著增高，脑梗死灶体积显著增大。结论：未缺血时脑组织TNFα的表达可明显激活3种神经胶质细胞，TNFα的过度表达可使脑缺血时神经功能明显恶化及脑梗死体积明显增加，提示TNFα的过度表达可明显加剧缺血性脑损伤。     

AMPK激动剂AICAR抑制糖氧剥夺损伤后星形胶质细胞的炎性反应及对神经元损伤的保护作用

目的:探讨AMPK激动剂AICAR对糖氧剥夺（oxygen-glucose deprivation,OGD）损伤后原代星形胶质细胞炎性反应的影响及对损伤神经元的保护作用。方法:通过构建原代培养星形胶质细胞和神经元的OGD模型,在正常培养的原代星形胶质细胞中加入对照溶剂和AICAR（0.5 mmol/L）,后给予OGD处理,在复氧第12小时通过ELISA检测促炎因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-6和IL-1β的表达变化,通过Western blotting方法检测磷酸化p38的蛋白表达;再将上述对照组和AICAR组OGD处理后的星形胶质细胞培养液,加入OGD损伤后的原代培养神经元中,通过LDH检测及免疫荧光双标方法,检测AICAR对缺糖缺氧损伤神经元的保护作用。结果:在原代培养神经元及星形胶质细胞OGD损伤模型中,与对照组比较,AICAR组显著地降低了OGD损伤后星形胶质细胞分泌的促炎因子TNF-α、IL-6和IL-1β（P<0.01）,抑制p38磷酸化,且明显降低了缺糖缺氧造成的神经元损伤（P<0.01）,促进损伤的神经突起修复。结论:AICAR抑制OGD损伤后星形胶质细胞炎性因子的释放,对OGD损伤神经元具有保护作用。     

表面活性蛋白A在星形胶质细胞和小胶质细胞中的表达及炎症调节作用

目的探讨表面活性蛋白A (SPA)在星形胶质细胞和小胶质细胞中的表达及其炎症调节作用。方法分别采用免疫荧光双染和免疫组织化学染色法检测SPA在健康大鼠脑组织的星形胶质细胞、体外培养的星形胶质细胞和小胶质细胞中的表达情况。采用不同浓度(1、5、10μg/mL)脂多糖(LPS)培养液培养人星形胶质细胞及小胶质细胞24 h,10μg/mL LPS培养液培养人星形胶质细胞及小胶质细胞2、4、8、16、24 h,采用Western blotting检测细胞中SPA的表达情况。将人星形胶质细胞及小胶质细胞随机各分为LPS组(含有5μg/mL LPS的培养液)、LPS+SPA组(含有5μg/mL LPS和0.5μg/mL SPA的培养液)、SPA组(含有0.5μg/mL SPA的培养液)和对照组(未加入任何处理因素的培养基)。各组细胞培养8 h,采用Western blotting检测各组细胞中TLR4和NF-κB p65蛋白表达;ELISA法检测各组培养液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平。结果 SPA在大鼠脑组织的星形胶质细胞中表达,在体外培养的人星形胶质细胞和...     

骨形态发生蛋白4对反应性星形胶质细胞增殖的影响

[摘要]　目的　利用成年SD大鼠脊髓损伤原代培养的反应性星形胶质细胞模型,探讨骨形态发生蛋白4（BMP4）与反应性星形胶质细胞增殖之间的关系。　方法　建立成年SD大鼠脊髓损伤原代培养的反应性星形胶质细胞模型,用BMP4（10 ng/mL）和BMP4的拮抗剂——Noggin（100 ng/mL）处置反应性星形胶质细胞48 h,通过免疫荧光的方法检测各实验组（正常对照组、BMP4组、Noggin组及BMP4+Noggin组）中星形胶质细胞的标记分子vimentin Brdu,观察BMP4对反应性星形胶质细胞增殖的影响。　结果　BMP4组中Brdu阳性细胞占星形胶质细胞的平均百分比为14.03 %,明显高于正常对照组(3.10%),P<0.01;而BMP4+Noggin组中Brdu阳性细胞数占星形胶质细胞的平均百分比为3.81%,明显低于BMP4组（P<0.01）。　结论　在成年SD大鼠脊髓损伤原代培养的反应性星形胶质细胞模型中,BMP4可刺激反应性星形胶质细胞的增殖。     

载脂蛋白E对星形胶质细胞缺氧性损伤的保护作用

目的探讨载脂蛋白E(apolipoprotein E,APOE)在星形胶质细胞缺氧性损伤中的作用及相关机制。方法①原代培养APOE基因敲除鼠、APOE基因野生鼠的星形胶质细胞,并分别予以缺氧6 h,流式细胞仪分别检测两组细胞早期凋亡率情况;②将培养成熟的APOE基因野生鼠的星形胶质细胞分为常氧组、缺氧组和干预组(缺氧+ERK抑制剂),分别予以缺氧组和干预组缺氧6 h,干预组在缺氧之前向培养基中加入ERK信号通路抑制剂U0126,Western blot法分别检测检测3组细胞APOE蛋白表达变化情况。结果①缺氧6 h后,APOE基因敲除鼠组星形胶质细胞早期凋亡率[(5.67±0.35)%]明显高于APOE基因野生鼠组[(2.77±0.24)%](P<0.05);②与常氧组、干预组相比较,缺氧组星形胶质细胞表达的APOE蛋白明显增加(P<0.05)。结论 APOE对星形胶质细胞缺氧性损伤具有保护作用,缺氧后星形胶质细胞APOE蛋白水平上调与ERK信号通路有关。     

左归丸含药血清对大鼠海马神经元和胶质细胞氧糖剥夺损伤的保护作用及机制研究

目的:探讨左归丸含药血清对大鼠海马神经元和胶质细胞氧糖剥夺损伤的保护作用及机制。方法:原代培养大鼠海马神经元和胶质细胞混合细胞,分为对照组、模型组、含药血清组和抑制剂组。对照组细胞不做特别处理。模型组细胞给予氧糖剥夺。含药血清组细胞除给予氧糖剥夺+左归丸含药血清。抑制剂组细胞给予氧糖剥夺+左归丸含药血清+雌激素受体(ER)非特异性拮抗剂ICI182780。采用CCK-8法检测各组细胞存活率。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞氧化应激和炎症因子谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)表达水平。采用Western blot检测TNF-α、IL-1β、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及磷脂酰肌醇激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路相关蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组细胞存活率、GSH-Px水平下降,MDA、TNF-α、IL-1β水平升高,Bcl-2、磷酸化磷脂酰肌醇激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表...     

白细胞介素-4对原代星形胶质细胞炎症因子的影响

目的：探讨白细胞介素‐4（IL‐4）对星形胶质细胞炎症因子释放的影响。方法选取新生1～2 d的C57乳鼠,取大脑皮层制备原代星形胶质细胞,传代3次,检测星形胶质细胞纯度,IL‐4刺激后,用Q‐PCR来检测多种炎症因子的释放。结果原代培养的星形胶质细胞纯度高达95％,用IL‐4刺激后,抗炎因子A RG1、CD206、TGFβ、IFNβ、IL‐10表达升高,促炎因子 TNFα、IL‐6表达降低。结论 IL‐4对星形胶质细胞抗炎因子的分泌有促进作用,对促炎因子的分泌有抑制作用。     

HSV-1对星形胶质细胞炎性细胞因子表达的影响

目的：探讨单纯疱疹病毒1型（HSV-1）对星形胶质细胞内胞核转录因子kappa B（NF-κB）转录活性及炎性细胞因子肿瘤坏死因子α（ TNF-α）和白细胞介素10（ IL-10）表达的影响。方法 HSV-1感染星形胶质细胞,通过ELISA,Western blot等方法检测星形胶质细胞NF-κB,TNF-α,IL-10的表达;同时研究NF-κB通路抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸（ PDTC）对TNF-α,IL-10表达的影响。结果星形胶质细胞被HSV-1感染后,胞核内NF-κB蛋白表达明显增强,星形胶质细胞分泌的TNF-α,IL-10均上调,与对照组比较差异有显著性（P＜0．05）。PDTC可抑制NF-κB活化,导致核内NF-κB蛋白表达下调,使得细胞分泌TNF-α,IL-10降低,与HSV-1组比较差异显著（ P＜0．05）。结论被HSV-1感染的星形胶质细胞通过活化NF-κB,从而上调TNF-α,IL-10的表达。     

星形胶质细胞来源的GJA1⁃20k在氧化应激后参与神经元保护作用的机制

目的：观察星形胶质细胞（astrocyte）通过上调神经元（neuron）内源性缝隙连接蛋白α1截短单体?20k（gap junction protein alpha 1 truncated monomer? 20k,GJA1?20k）参与氧化应激损伤后神经保护作用的机制。方法：采用C57BL/6胎鼠以原代培养法获取神经元及星形胶质细胞,建立共培养模型,给予神经元过氧化氢（H2O2）损伤,及星形胶质细胞胰岛素样生长因子1（insulin?like growth factor?1,IGF?1）受体阻滞剂AG1024,分别设立Neuron组、Neuron+Stress组、Neuron+Astrocyte +Stress组及Neuron+Astrocyte+Stress+AG1024组,通过Western blot测定神经元GJA1?20k、去磷酸化（non?phosphorylated,NP）?Cx43的表达,谷氨酸转运酶（glutamate transporter?1,GLT?1）、线粒体功能相关蛋白（PGC?1α、mtTFA、Tom20、CoxⅣ）、凋亡相关蛋白（Bcl?2、Bax、Caspases?9）的变化,采用酶联免疫荧光分析（ELFA）及ELISA法分别检测氧化应激因子NAPDH 氧化酶活性和白介素（interleukin,IL）?1β、IL?6、肿瘤坏死因子?α（tumor necrosis factor?α,TNF?α）等炎性因子含量的变化,采用Annexin V?FITC/PI测定神经元凋亡。结果：星形胶质细胞共培养可明显上调在神经元氧化损伤后内源性GJA1?20k和NP?Cx43表达,抑制PGC?1α、mtTFA、Tom20、CoxⅣ的下调,上调凋亡抑制因子Bcl?2表达,下调凋亡促进因子Bax、Caspase?9表达,降低NAPDH氧化酶活性,降低炎性产物IL?1β、IL?6和TNF?α的水平及抑制神经元的凋亡（P < 0.05）。在给予AG1024后,可明显抑制与以上因素相关的星形胶质细胞对神经元的保护作用（P < 0.05）。结论：与IGF?1相关的星形胶质细胞对神经元的保护机制可能与增加神经元内源性GJA1?20k的含量及线粒体功能的保护有关。     

脂多糖对小鼠视网膜Müller细胞和小胶质细胞共培养体系中炎症因子水平的影响及其机制

目的：观察脂多糖（LPS）诱导小鼠视网膜单独培养Müller细胞和Müller细胞与小胶质细胞共培养2种体系中的炎症反应,阐明Müller细胞与小胶质细胞的相互作用机制。方法：培养Müller细胞QMMuC-1和小胶质细胞BV2,免疫荧光染色方法观察2种细胞形态表现。实验分为单独培养对照组[QMMuC-1细胞单独培养,采用磷酸盐（PBS）缓冲液处理]、共培养对照组（QMMuC-1细胞和BV2细胞共培养,细胞比例1∶1,采用PBS缓冲液处理）、单独培养实验组（QMMuC-1细胞单独培养,采用10 mg·L-1 LPS处理）和共培养实验组（QMMuC-1细胞和BV2细胞共培养,采用10 mg·L-1 LPS处理）。采用免疫荧光染色法观察各组细胞中胶质纤维酸性蛋白（GFAP）水平,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组QMMuC-1细胞中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6 (IL-6)和肿瘤坏死因子α (TNF-α) mRNA表达水平。结果：QMMuC-1细胞中神经胶质细胞标志物谷氨酰胺合成酶（GS）和GFAP阳性,BV2细胞中小胶质细胞标志物离子钙接头蛋白分子1 (Iba...     

丙泊酚对小胶质细胞炎症因子的影响及其机制研究

目的 探讨丙泊酚对小胶质细胞炎症因子的影响及其机制。方法 将小胶质BV-2 细胞分为对照组、丙泊酚组、脂多糖（LPS）组、LPS+ 丙泊酚组,对照组细胞加入PBS 液,丙泊酚组细胞加入丙泊酚30μmol/L,LPS 组细胞加入LPS 1μg/ml,LPS+ 丙泊酚组细胞加入丙泊酚30μmol/L+LPS 1μg/ml。采用MTT 比色实验测定细胞活性,采用酶联免疫吸附法测定细胞上清液中白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,采用逆转录- 聚合酶链反应测定细胞p38MAPK 和TLR4mRNA 的表达,采用Western blot 检测细胞p38MAPK 和TLR4 蛋白表达量。结果 LPS 组和LPS+ 丙泊酚组小胶质细胞活性低于对照组和丙泊酚组（P <0.05）,LPS+ 丙泊酚组小胶质细胞活性高于LPS 组（P <0.05）;LPS 组和LPS+ 丙泊酚组小胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α 水平高于对照组和丙泊酚组（P <0.05）,LPS+ 丙泊酚组小胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α 水平低于LPS 组（P <0.05）;LPS 组和LPS+ 丙泊酚组小胶质细胞p38MAPK、TLR4 mRNA 和蛋白表达量高于对照组和丙泊酚组（P <0.05）,LPS+ 丙泊酚 组小胶质细胞p38MAPK、TLR4 mRNA 和蛋白表达量低于LPS 组（P <0.05）;丙泊酚组和对照组小胶质细胞各指标比较,差异无统计学意义（P >0.05）。结论 丙泊酚能抑制小胶质细胞过度活化和炎症反应,其机制可能与丙泊酚可下调TLR4-p38MAPK 信号通路有关。     

丹参多酚酸与三七总皂苷合用保护OGD/R损伤胶质细胞线粒体、促进神经因子表达作用研究*

目的 探讨丹参多酚酸（Salvianolate Acid，SAL）和三七总皂苷（Panax Notoginseng Saponins，PNS）合用保护氧糖剥夺/复氧复糖（Oxygen-Glucose Deprivation/Reoxygenation，OGD/R）损伤后星形胶质细胞线粒体、促进神经营养因子表达的作用及机制。方法 大鼠星形胶质细胞原代培养，建立OGD/R损伤模型。Cell counting kit-8（CCK-8）法检测星形胶质细胞活力，流式细胞仪检测活性氧（reactive oxygen species，ROS）释放量、胞内Ca2+ 浓度、线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential，MMP）变化，实时定量PCR（real time polymerase chain reaction，RT-PCR）和蛋白质免疫印迹（western blot，WB）法检测HIF-1α、PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白及脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）、神经生长因子（nerve growth factor，NGF）、胰岛素样生长因子（insulin-like growth factors，IGF-1α）的表达情况。结果 胶质细胞OGD/R条件确定为OGD4h/R24h，给药浓度确定为SAL 25 μg·mL-1、PNS 6.25 μg·mL-1。与OGD/R组相比，SAL 25 μg·mL-1、PNS 6.25 μg·mL-1、SAL 25 μg·mL-1与PNS 6.25 μg·mL-1合用均能增强损伤后星形胶质细胞活力（P＜0.05），升高MMP，降低ROS释放量（P＜0.05），降低损伤后星形胶质细胞HIF-1α蛋白和mRNA的表达，升高磷脂酰肌醇激酶（PI3K）磷酸化水平（P＜0.05）；SAL还可升高mTOR蛋白磷酸化水平（P＜0.05），PNS可提高Akt磷酸化水平（P＜0.05），增加损伤星形胶质细胞BDNF mRNA 表达（P＜0.05）；SAL、SAL与PNS合用能增加损伤后星形胶质细胞 BDNF、NGF、IGF-1α mRNA 表达（P＜0.05）。结论 丹参多酚酸和三七总皂苷组分合用可保护OGD/R损伤后星形胶质细胞线粒体、促进胶质细胞表达神经营养因子BDNF、NGF、IGF-1α。     

细胞外液谷氨酸激活星形胶质细胞的离体实验研究

目的 研究不同浓度的谷氨酸（Glu）诱导星形胶质细胞炎症反应的作用。方法 本研究通过不同浓度的Glu（0μM,25μM,50μM,100μM）刺激原代星形胶质细胞24 h,Western blot技术检测胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和白细胞介素-1β （IL-1β）蛋白表达。结果 与0μM组相比,100μM Glu处理组GFAP蛋白表达水平明显升高,50μM和100μM Glu处理组炎性因子IL-1β蛋白表达水平明显升高。结论 在离体水平,细胞外液高水平Glu能够激活星形胶质细胞并释放炎性因子。     

氯胺酮对NMDA诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞凋亡的影响

目的:观察氯胺酮对N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体过度激活诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞凋亡、Bc l-2及白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)变化的影响。方法:取新生2~3天W istar大鼠T11-L6脊髓背角星形胶质细胞原代纯化培养、鉴定。将细胞随机分6组:对照组(C组),NMDA组(N组),氯胺酮组(K组),及NMDA+不同浓度氯胺酮组(0.1、1.0、10mmol/L,标记为NK1~NK3组),检测各组IL-1β和TNFα浓度及Bc l-2平均光密度(OD)值,并观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:N组和NK1组细胞发生大量凋亡(p<0.01),Bc l-2表达阴性,其OD值较低(P<0.01),IL-1β和TNF-α浓度明显上升(p<0.01),两组间比较无显著差异(P>0.05)。NK2组细胞凋亡显著减少(p<0.01),Bc l-2强阳性表达,其OD值升高(p<0.01),IL-1β和TNFα浓度低(p<0.01);NK3组细胞几乎全部死亡,未能上机检测凋亡,IL-1β和TNF-α浓度升高(p<0.05)。结论:1 mmol/L氯胺酮可增强Bc l-2蛋白表达,显著抑制NMDA受体激活诱导星形胶质细胞的凋亡,并抑制IL-1β和TNF-α的分泌。     

TNF-α反义寡核苷酸对马桑内酯刺激的星形胶质细胞的影响

为进一步探讨TNF-α在星形胶质细胞激活中的作用，用TNF－α反义寡核苷酸抑制由马桑内酯（coriaria lactone,CL)诱导的星形胶质细胞TNF－α的产生，观察NFκBq65核转位和IkBa降解的变化。在应用TNF－α反义寡核苷酸后，由CL刺激引起的TNFα生成在2、4、12、24h均显著减少，NFkBp65核转位在相同的4个时间点也均受到明显抑制，相应胞浆蛋白的IkBa降解也低于对照组。实验结果表明：由CL诱导产生的TNF－α在星形胶质细胞的激活过程中发挥重要作用。     

异丙酚对谷氨酸体外激活脊髓背角星形胶质细胞及相关炎性细胞因子的影响

目的观察不同浓度异丙酚对谷氨酸体外激活大鼠脊髓背角星形胶质细胞及促炎性细胞因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）和抗炎性细胞因子IL-10变化的影响。方法取新生2~3d Wistar大鼠T11~L6脊髓背角星形胶质细胞原代纯化培养3周。将细胞随机分为7组：正常对照组（C组）加入Hanks液;乳剂对照组（L组）加入乳剂0.2ml/L;谷氨酸组（G组）加入谷氨酸至终浓度100μmol/L;异丙酚组（P组）加入异丙酚至终浓度250μmol/L;GP1、GP2、GP3组先加入谷氨酸至终浓度100μmol/L,10min后分别加入异丙酚至终浓度5、25、250μmol/L。加药后培养24h取各组培养孔上清液检测IL-1β、TNF-αI、L-6和IL-10含量,用神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）标记星形胶质细胞（免疫细胞化学法）,多媒体彩色病理图像分析系统检测阳性细胞面密度（AD）和平均光密度（AOD）。结果与C组比较,G组和GP1组细胞被激活增生肥大,AD和AOD均升高（P〈0.01）,其上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α含量上升（P〈0.01）,G组IL-10浓度无明显变化（P〉0.05）,GP1组IL-10浓度升高（分别与C组和G组比较P〈0.05）。与G组比较,GP2组和GP3组细胞激活被抑制,AD、AODI、L-1βI、L-6和TNF-α含量均低（其中GP2组P〈0.05,GP3组P〈0.01）,而IL-10含量均上调（P〈0.01）。结论异丙酚可抑制谷氨酸对体外培养的大鼠脊髓背角星形胶质细胞的激活作用,同时抑制星形胶质细胞分泌IL-1βI、L-6和TNF-α,增强IL-10的合成释放,其作用程度与剂量有关。     

外伤性视神经损伤后大鼠视网膜中细胞因子的变化和来源

目的 利用大鼠视神经夹持损伤模型,观察视网膜中小胶质细胞和星形胶质细胞在不同时间点的激活水平,炎性介质和神经营养因子的时空表达变化情况,探讨这2种胶质细胞在大鼠视神经夹持损伤后在视网膜中可能的免疫调控机制.方法 建立SD大鼠视神经夹持模型,分别在建模后1 d、3 d、5d和7 d处死模型大鼠并取材.Western blot检测分析各时间点视网膜IL-1β和TNF-α及iNOS的表达变化情况;免疫荧光组织染色法标记检测各时间点视网膜小胶质细胞和星形胶质细胞的激活情况并检测相应组织中IL-1β、TNF-α、iNOS以及Nestin的表达及分布情况.结果 夹持组与对照组相比Western blot法检测发现IL-1β蛋白在损伤后3 d表达量最高,差异与对照组相比有统计学意义(P<0.05),5 d后表达下降,差异与对照组相比无统计学意义(P>0.05).TNF-α在损伤后各时间点表达均升高(P<0.05),损伤后3d表达量达到峰值,与对照组相比差异有显著统计学意义(P<0.01).iNOS水平在损伤后1d显著上升(P<0.05),且表达量最高,在损伤后3 d出现下降,差异与对照组相比无统计学意义(P>0.05).免疫组织荧光化学染色法显示手术组视网膜中小胶质细胞及星形胶质细胞出现了活化.在小胶质细胞中和星形胶质细胞中检测到了IL-1β,iNOS的表达,但在所有时间点都未能观察到星形胶质细胞中TNF-α的表达.在损伤后7d,在星形细胞中观察到了Nestin表达.结论 视神经夹持损伤后,视网膜内活化的星形胶质细胞和小胶质细胞是IL-1β、iNOS的主要来源.星形胶质细胞在该模型中随着时间的推移可能展现出神经保护作用.