人单核细胞表达蛋白酶激活受体

目的：使用高纯化的人外周血单核细胞研究蛋白酶激活受体（protease activated receptors,PARs）在单核细胞上的表达。方法：采用密度梯度离心法和磁激活细胞分选法分离人外周血单核细胞,采用流式细胞仪、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）分析单核细胞PARs表达情况。结果：流式细胞分析示人外周血单核细胞表达PAR-1、PAR-3、PAR-4蛋白质,但不表达PAR-2蛋白质;RT-PCR示单核细胞表达PAR-1和PAR-3,但不表达PAR-2和PAR-4 mRNA。结论：单核细胞表达PARs,为进一步研究PARs在单核细胞上的功能提供依据。     

人肺上皮细胞表达蛋白酶激活受体

目的: 蛋白酶激活受体(protease-activated receptors, PARs) 广泛分布在多种组织细胞上,但4种PARs在肺上皮细胞的表达情况尚不清楚. 我们用A549细胞研究PARs在肺上皮细胞的表达. 方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞仪和免疫荧光细胞染色分析技术分析肺上皮细胞系A549细胞PARs的表达情况. 结果:4种PARs在肺上皮细胞上均有不同程度的表达. 结论:肺上皮细胞同时表达PAR 1～4 4种受体,这为进一步研究PARs在肺上皮细胞的功能奠定了基础.     

TNF-α对凝血酶引起的肥大细胞蛋白酶激活受体表达的影响

目的:探讨TNF-α对凝血酶引起的P815肥大细胞上蛋白酶激活受体表达的影响。方法:用或不用TNF-α预处理肥大细胞后,以不同浓度凝血酶激发P815肥大细胞,用流式细胞术检测肥大细胞上PAR-1,2,3,4表达的变化情况。结果:TNF-α不影响凝血酶作用肥大细胞P815后PAR-1表达;TNF-α预处理后凝血酶作用肥大细胞P815后,PAR-2,3,4表达较基础培养液对照组和非TNF-α处理组增强。结论:促炎因子TNF-α能够调节凝血酶引起的肥大细胞PAR表达进而参与肥大细胞相关的炎症反应。     

蛋白酶激活受体在心搏骤停后综合征兔肾组织的表达

目的:探讨蛋白酶激活受体(protease-activated receptor,PAR)在心搏骤停后综合征(post-cardiac arrest syndrome,PCAS)兔肾组织的表达及其意义。方法:采用窒息性心搏骤停制备兔心搏骤停后综合征模型(PCAS组),取股静脉血监测器官功能,心肺复苏后48 h,取肾脏组织,采用免疫组织化学技术分别测定兔肾组织PAR-1、PAR-2蛋白表达情况。同时,以假手术组作为对照组。结果:免疫组化结果显示PCAS组、假手术组肾组织PAR-1平均光密度值分别为(1047.67±186.04)、(2278.79±285.77);PCAS组、假手术组肾组织PAR-2平均光密度值分别为(1495.99±133.26)、(2020.85±419.02),PCAS组兔肾脏组织PAR-1、PAR-2蛋白含量均显著减少,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PAR-1、PAR-2蛋白表达减少可能与PAR激活有关,并可能与心搏骤停后综合征的多器官功能障碍发生发展相关。     

蛋白酶激活受体介导的凝血激活在脓毒症中的作用

脓毒症时由于内毒素及炎性递质的作用,机体处于高凝状态,凝血激活过程中产生的许多蛋白酶,如凝血酶、组织因子复合物等又可通过其特异的受体--蛋白酶激活受体(Protease-activated receptors,PARs)促进炎性反应过程。目前已有许多针对脓毒症时的凝血紊乱进行干预的临床前及临床试验,其中许多与PARs有关的试验都得出了肯定的结论。本文就有关PARs介导的凝血激活在脓毒症中的作用研究做一综述。     

蛋白酶激活受体1介导人肺上皮细胞分泌MCP-1

目的探讨蛋白酶激活受体1(protease-activated receptors1,PAR1)激动肽和凝血酶对人肺上皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)分泌的影响.方法人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内,并分别用不同浓度的PAR1激动肽SFLLR和反PAR1激动肽RLLFS以及不同浓度的凝血酶和/或凝血酶抑制剂水蛭素进行刺激,刺激时间为2、16 h.用ELISA方法检测上清液中的MCP-1水平.结果经过16 h的培养,PAR1激动剂SFLLR可引起浓度相关性MCP-1的释放增加,增加到300μmol/L时诱导MCP-1的释放量比基础分泌量增加了近12倍,反PAR1激动剂RLLFS不能引起MCP-1的释放增加.凝血酶也可引起浓度相关性MCP-1释放,凝血酶在浓度3 000 U/L时就可引起MCP-1释放量增加,10 000 U/L时诱导MCP-1的释放量达高峰,为基础分泌量的5倍.凝血酶抑制剂水蛭素可以抑制凝血酶对MCP-1的释放作用.时间相关曲线表明,从2 h起即可引起PAR1介导的MCP-1释放增加,16 h达高峰.结论PAR1激动肽和凝血酶可促进人肺上皮细胞分泌MCP-1,PAR1拮抗剂和凝血酶抑制剂可能具有抗炎作用.     

蛋白酶激活受体2激动剂诱导上皮细胞分泌MCP-1

目的:探讨蛋白酶激活受体(PAR)-2激动剂对人上皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)分泌的影响.方法:人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内,并分别用不同浓度的PAR-2激动剂,反PAR-2激动剂进行刺激.刺激时间为2,8和16 h.用ELISA方法检测上清液中的MCP-1水平.结果:经过16 h的培养,PAR-2激动剂SLIGKV和tc-LIGRLO均可引起浓度相关性MCP-1释放增加,tc-LIGRLO引起的最大MCP-1释放量达基础分泌量的13倍.反PAR-2激动剂对MCP-1释放的影响较小.时间相关曲线表明,PAR-2激动剂的作用从2 h开始,16 h达高峰.结论:PAR-2激动剂是高效的人肺上皮细胞MCP-1的促分泌剂.其拮抗剂有可能具有抑制呼吸道炎症的作用.     

蛋白酶激活受体-2与哮喘

蛋白酶激活受体-2为一种细胞膜表面受体,属于G蛋白耦联受体家族,广泛分布于肺组织,具有较特异的激活方式.该受体与哮喘的关系正倍受关注,本文综述了其在哮喘发生与发展过程中所发挥的作用,显示在哮喘方面潜在的应用价值.     

蛋白酶激活受体2在溃疡性结肠炎患者肠黏膜中的表达

目的探讨溃疡性结肠炎(UC)患者肠黏膜蛋白酶激活受体2(PAR-2)表达和肥大细胞的变化,以及两者在UC发病机制中的作用。方法32个黏膜标本取自行结肠镜检查的UC患者,对照组肠黏膜取自15名健康成人,半定量RT-PCR检测两组肠黏膜PAR-2的mRNA表达,免疫组化方法检测PAR-2蛋白表达和肥大细胞数量。结果与对照组相比,UC肠黏膜中PAR-2mRNA和蛋白过度表达,PAR-2mRNA表达与疾病严重程度正相关(P<0.01)。UC组肠黏膜肥大细胞数显著高于对照组(P<0.01)。免疫组化结果显示,PAR-2蛋白表达于UC肠黏膜表面上皮、隐窝上皮和固有层炎性细胞。病理分级Ⅲ、Ⅳ级肠黏膜PAR-2蛋白表达及肥大细胞数较病理分级Ⅰ、Ⅱ级组明显增加(P<0.05)。PAR-2与肥大细胞数量之间呈正相关(r=0.78,P<0.01)。结论UC的发生发展与PAR-2的表达、肥大细胞数量变化密切相关,PAR-2可能由肥大细胞分泌的类胰蛋白酶激活而参与UC的发病。     

生长抑素受体亚型在人肝星状细胞的表达及其临床意义

目的研究人肝星状细胞系(LX-2细胞)生长抑素受体(somatostatin receptor,SSTR)亚型的表达情况,探讨其临床意义。方法选择对数生长期的LX-2细胞,将细胞以8×104个/孔接种于预置入盖玻片的6孔板中,分为LX-2组、中药复方861组、奥曲肽(octreotide)处理组及SSTR亚型阳性细胞(PANC-1)对照组,每组重复2孔。应用免疫细胞化学染色方法,观察LX-2细胞SSTR 2、SSTR5的表达;用RT-PCR方法观察SSTR亚型1~5的表达。结果免疫细胞化学染色结果发现,LX-2细胞SSTR亚型2、5表达阳性,阳性物质呈棕红色,主要位于细胞膜及细胞质,复方861处理组SSTR2、5表达增强,细胞着色较深;RT-PCR结果发现,LX-2细胞SSTR亚型1~5的表达均阳性,阳性表达的高低依次为SSTR1、SSTR4>SSTR2、SSTR5>SSTR3(P<0.05)。结论LX-2表达5种SSTR亚型,肝星状细胞可能是SST及其类似物降低门静脉压力的作用靶点。奥曲肽可能通过SSTR2、SSTR5亚型调节肝星状细胞的舒张与收缩功能,从而影响肝内阻力及门静脉压力。     

NGF在人胚胎脊髓中的表达及变化

目的探讨神经生长因子(NGF)在人胚胎脊髓胸段中的表达及变化.方法从各时间段(6周、8周、10周、3月、4月、5月、6月流产胚胎中取出脊髓后,用免疫组织化学和RT-PCR方法检测NGF的抗原和mRNA表达情况及变化规律.结果免疫组织化学检测到在胸段脊髓的灰质处有NGF-IR的分布;RT-PCR均检测到NGF的mRNA在胸段脊髓表达,从6周开始上调,在8周有一个高峰,10周~6月整体趋于稳定.结论在人早、中期胚胎脊髓中NGF均有表达,说明胚胎脊髓发育和NGF存在一定的关系.     

人脑胶质瘤组织中HMGB1基因的表达及其意义

目的 通过检测人脑胶质瘤组织中HMGB1基因的表达水平,探讨其与胶质瘤发生发展的关系.方法 采用荧光实时定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法,检测了42例人脑胶质瘤组织和20例正常脑组织中HMGB1 mRNA表达水平,分析其与胶质瘤的关系.结果 HMGB1 mRNA在胶质瘤组、Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤组、Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤组及对照组中的表达量分别为21.460％±3.185％、24.300％±6.673％、19.710％±3.179％、7.616％士1.449％.统计显示HMGB1 mRNA表达水平在胶质瘤组明显高于对照组(P＜0.05),且在Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤组及Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤组中均明显高于对照组(P＜0.05),但HMGB1 mRNA在Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤组与Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤组中的表达水平无显著差异(P＞0.05).结论 HMGB1基因在人脑胶质瘤组织中有高表达,说明HMGB1基因与胶质瘤的发生、发展过程密切相关.     

血管内皮生长因子及其受体在舌癌细胞中表达及意义

【目的】探讨人舌癌细胞株血管内皮生长因子(VEGF)及其受体KDR、Flt-1的表达,进一步认识VEGF在舌癌生长过程中的作用机制。【方法】以人脐静脉血管内皮细胞ECV304和小鼠成纤维细胞系L929作为对照,应用免疫组化染色和RT-PCR方法,检测体外培养的人舌癌细胞系Tca8113、GNM中VEGF及其受体的表达。【结果】GNM、Tca8113中皆有VEGF表达,Tca8113表达KDR和FLT-1,GNM表达KDR。【结论】在舌癌的生长过程中可能存在VEGF的自分泌机制。     

血管内皮生长因子及受体在大鼠衰老肾脏的表达

[目的]研究血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(VEGFR)在大鼠衰老肾脏的表达及探讨它们在肾脏衰老中的作用.[方法]取3月龄、12月龄大鼠作为对照组,24月龄大鼠作为观察组各6只,提取其肾脏组织的RNA,应用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测肾脏组织内VEGF mRNA转录水平,以及应用免疫组化技术检测肾小球VEGF和VEGFR蛋白的表达;应用酶联免疫法检测肾组织培养液的VEGF总含量.[结果]3、12、24月龄的大鼠VEGF总的含量(g/L)分别为126.49±32.29,95.14±49.17,79.21±61.17,P=0.048.3、12、24月龄的大鼠VEGF mRNA表达量(g/L)分别是0.821±0.132,0.713±0.143,0.678±0.126,P=0.012.24月龄组VEGF mRNA和VEGF总含量较3、12月龄两组减少(P＜0.05);24月龄大鼠肾小球VEGF和VEGFR-2的表达较3、12月龄两组减弱.[结论]证实了随着增龄大鼠肾组织VEGF mRNA转录水平和VEGF含量减少,肾小球VEGF-VEGFR的表达量也随着增龄而减少.肾小球VEGF-VEGFR系统在肾脏衰老过程中起到重要的作用.     

胃癌中雌激素受体-α36与α66 mRNA的表达及其临床病理意义

目的:探讨胃癌中雌激素受体(ER)-α36与ER-α66的mRNA表达及其临床病理意义。方法:采用实时荧光定量RT-PCR方法检测4株胃癌细胞株中ER-α36和ER-α66 mRNA的表达情况;采用半定量RT-PCR方法检测20例人胃腺癌组织中肿块、癌旁组织及正常组织中的ER-α36和ER-α66 mRNA表达情况。结果:ER-α36和ER-α66 mRNA在胃癌细胞株和人体胃癌样本中均有表达。胃癌细胞株中ER-α36表达量高于ER-α66;人体样本中ER-α66在正常组织表达量最高,ER-α36在癌组织中表达量最高,且与患者的年龄、肿瘤的大小、组织学分级以及淋巴结转移相关。结论:ER-α36在胃癌细胞中发挥的作用可能大于ER-α66,ER-α36 mRNA的高表达与胃癌的生物学行为相关。     

人内皮抑素基因对人脐静脉内皮细胞增殖的抑制作用

目的研究人内皮抑素基因对人脐静脉内皮细胞增殖能力的影响。方法RT-PCR获取人内皮抑素基因，通过酶切，测序鉴定获取的hES，MTT法检测该基因对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖的影响。结果获得的hES基因经测序证实成功克隆人内皮抑素基因；hES基因转染HUVEC细胞24h、4h和72h，细胞增殖率均较正常组明显降低（P〈0．05），而脂质体对照与载体对照与对照组无明显变化。结论hES基因能够抑制HUVEC增殖。     

食管鳞癌组织PTTG和bFGF的表达与临床病理特征的相关性研究

目的探讨食管鳞癌组织中垂体瘤转化基因（PTTG）mRNA及其蛋白和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）蛋白的表达及相互关系,以及其与肿瘤临床病理指标及预后的关系。方法采用RT-PCR技术检测40例食管癌及相应的40例癌旁组织中PTTG mRNA的表达,同时采用免疫组织化学SP法检测相应标本中PTTG和bFGF蛋白的表达。结果在食管癌组织中PTTG基因呈过度表达,食管癌组织中PTTG mRNA的平均表达水平（0.71±0.08）显著高于相应的癌旁正常组织（0.32±0.06）,两组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。免疫组化结果显示,PTTG蛋白在食管癌组织中的表达（34/40）明显高于在癌旁组织中的阳性表达（9/40）（P〈0.01）。其阳性率高低,与TNM分期和分化程度有关。食管癌组织中,bFGF蛋白表达阳性、阴性标本中,PTTG mRNA表达水平分别为0.74±0.03和0.59±0.02。结论 PTTG基因和bFGF基因的异常表达可对食管癌的发生和发展起重要作用,它们可能为食管癌的早期诊断和基因治疗提供新的靶点。     

Paxillin和FAK mRNA在食管癌组织中的表达及临床意义

目的 研究桩蛋白(paxillin)和黏着斑激酶(focal adhesion kinase, FAK)mRNA在食管癌组织中的表达及其与临床病理学参数的关系,并分析两者在食管癌中表达的相关性.方法 运用RT-PCR技术检测59例食管癌组织、27例不典型增生组织和36例正常食管黏膜组织中paxillin和FAK mRN...