GRP78蛋白在胃癌中的表达及作用

目的探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在胃癌中的表达及作用。方法收集不同临床分期和分化程度的胃癌标本48例,癌旁正常胃黏膜组织28例。运用免疫组织化学技术检测胃癌及其转移癌组织中GRP78蛋白的表达;采用MTT及Transwell观察GRP78蛋白对SGC-7901胃癌细胞增殖和迁移能力的影响。结果免疫组织化学结合临床病理分析结果显示:GRP78蛋白位于胞质,且在胃癌组织中GRP78蛋白较正常胃黏膜组织明显增加,其阳性表达率与胃癌的直径、分化、淋巴结转移、分期、复发有关(P＜0.05)。MTT及Transwell结果显示:干扰GRP78蛋白表达可抑制SGC-7901胃癌细胞的增殖和迁移能力。结论GRP78蛋白在胃癌组织中高表达,其表达水平与胃癌肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、临床分期及预后有关。     

胆囊良恶性病变组织中GRP78和GRP94蛋白表达及临床病理意义

目的 研究胆囊腺癌、癌旁组织、腺瘤性息肉和慢性胆囊炎组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和94(GRP94)蛋白表达水平及其临床病理意义.方法 应用EnVisionTM免疫组化法检测108例胆囊腺癌、46例癌旁组织、15例腺瘤性息肉和35例慢性胆囊炎组织中GRP78和GRP94蛋白的表达;分析两者表达与胆囊腺癌临床病理特征的相关性及患者生存期的关系.结果 胆囊腺癌中GRP78和GRP94蛋白表达明显高于癌旁组织、腺瘤性息肉和慢性胆囊炎(P ＜0.01);GRP78和/或GRP94蛋白阳性表达的良性病变胆囊上皮呈不同程度非典型增生.高分化腺癌、淋巴结未转移及未侵犯周围组织器官病例GRP78和GRP94蛋白表达明显低于低分化腺癌、淋巴结转移及侵犯周围组织器官病例(P ＜0.05或P＜0.01).Kaplan-Meier单因素生存分析显示GRP78(P=0.009)或GRP94(P=0.022)蛋白阳性表达与生存期减少密切相关,Cox回归多因素因素分析显示GRP78(P =0.014)或GRP94(P =0.020)蛋白阳性表达是胆囊腺癌预后不良的独立评估指标.结论 GRP78和GRP94蛋白表达水平可能是反映胆囊腺癌发生发展、临床生物学行为及预后的重要标记物,检测胆囊腺癌中GRP78和GRP94蛋白表达水平可能对指导临床辅助治疗有重要临床价值.此外,检测胆囊良性病变组织中GRP78和GRP94蛋白表达水平对早期发现胆囊腺癌可能有较重要的临床意义.     

胃癌组织中GRP78的表达与临床病理特征的相关性分析

目的探讨胃癌组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达与临床病理特征的相关性及其与胃癌发生、发展的关系。方法收集临床资料完整的胃癌组织蜡块76例、胃正常组织蜡块(含正常胃黏膜组织及癌旁正常胃组织)20例制成组织芯片,免疫组化SP法检测其GRP78蛋白的表达。结果胃癌组织、胃正常组织中均有GRP78蛋白的表达,胃癌组织表达指数为(5.80±3.45),胃正常组织表达指数为(3.20±1.70),两组比较差异有统计学意义(P=0.002)。胃癌组织中GRP78蛋白的表达随肿瘤分化程度的降低而增强(P=0.001),但与患者的年龄、性别、肿瘤大小、有无淋巴结转移、浸润深度等无关。结论胃癌组织中GRP78蛋白的表达增高,并与胃癌的分化程度密切相关。     

胃癌中葡萄糖调节蛋白78的表达及其临床病理学意义

目的检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在胃癌组织中的表达,分析其临床病理学意义,探讨GRP78在胃癌发生发展中的作用。方法收集48例不同临床分期及不同分化程度胃腺癌及28例癌旁正常胃黏膜组织标本,分别应用RT-PCR、Western Blotting和免疫组化检测GRP78 mRNA和蛋白质的表达。结果与正常胃黏膜组织相比,胃癌组织中GRP78 mRNA及蛋白表达水平显著增加(P<0.05)。免疫组化检测GRP78阳性表达定位于胞浆,在正常胃粘膜组织中GRP78阳性表达率为10.7%(3/28),高、中分化与低分化胃癌组织阳性表达率分别为59.4%(19/32)和93.8%(15/16);直径≥5 cm的胃癌组织中GRP78阳性表达率(88.9%,16/18)高于直径<5 cm的胃癌组织(60%,18/30),Ⅲ、Ⅳ期(TNM分期)病例胃癌组织中GRP78阳性表达率(90.5%,19/21)高于Ⅰ、Ⅱ期病例(55.6%,15/27);5年内病情复发或者死亡病例胃癌组织中GRP78阳性表达率(82.8%,24/29)高于5年内病情无复发病例(52.6%,10/19);淋巴结转移胃癌组织中GRP78阳性表达率(96.2%,25/26)明显高于非淋巴结转移胃癌组织(40.9%,9/22),各组间差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 GRP78在胃癌组织中高表达,其表达水平与胃癌肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、临床分期及预后密切相关。     

CD40和CD40mRNA在胃癌中的表达及其意义

应用免疫组化技术检测56例胃癌组织和32例癌旁正常组织中CD40分子的表达,采用RT-PCR法分别检测11例胃癌和癌旁正常组织中CD40mRNA的表达。结果:免疫组化检测显示CD40分子在胃癌组织中的阳性表达率为33.9％,与癌旁正常组织相比,差异具显著性(P<0.01);RT-PCR检测发现CD40mRNA在胃癌组织中的阳性表达率为72.7％,而在癌旁正常组织中无表达;CD40和CD40mRNA阳性表达均与淋巴结转移及远处转移有关(P<0.001-0.01),与肿瘤分化程度、浸润深度和瘤块大小无关(P>0.05)。结果表明:CD40及其mRNA在胃癌组织中异常表达,且其表达与侵袭转移等生物学行为密切相关,有可能作为胃癌诊断、评价转移及预后的客观指标之一。     

Pokemon在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的检测Pokemon基因在胃癌组织和癌旁正常胃黏膜组织中的表达水平,并分析其与临床病理特征之间的关系。方法采用免疫组织化学Eli Vision法检测75例胃癌组织和35例癌旁正常胃黏膜组织中Pokemon蛋白的表达。应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测30例新鲜胃癌组织及相应癌旁正常胃黏膜组织中Pokemon mRNA的表达。结果免疫组织化学分析结果显示,在胃癌和癌旁正常胃黏膜组织中,Pokemon蛋白的阳性表达率分别为78.7%(59/75)和34.3%(12/35),差异具有统计学意义(P<0.05);RT-PCR结果显示,30例新鲜胃癌组织中Pokemon mRNA的表达水平显著高于相应癌旁正常胃黏膜组织,差异有统计学意义(P<0.05);胃癌组织中Pokemon的表达与浸润深度、临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05)。结论 Pokemon在胃癌的发生、发展和侵袭转移中具有重要作用,可能成为胃癌治疗的有效靶点。     

Expression of GRP78 in gastric cancer and its correlation with the clinical pathological characteristics

目的 探讨胃癌组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达与临床病理特征的相关性及其与胃癌发生、发展的关系.方法 收集临床资料完整的胃癌组织蜡块76例、胃正常组织蜡块(含正常胃黏膜组织及癌旁正常胃组织)20例制成组织芯片,免疫组化SP法检测其GRP78蛋白的表达.结果 胃癌组织、胃正常组织中均有GRP78蛋白的表达,胃癌组织表达指数为(5.80±3.45),胃正常组织表达指数为(3.20±1.70),两组比较差异有统计学意义(P=0.002 ).胃癌组织中GRP78蛋白的表达随肿瘤分化程度的降低而增强(P=0.001),但与患者的年龄、性别、肿瘤大小、有无淋巴结转移、浸润深度等无关.结论 胃癌组织中GRP78蛋白的表达增高,并与胃癌的分化程度密切相关.     

Stathmin在胃癌组织中的表达及临床意义

目的通过检测Stathmin在胃癌及癌旁组织中的表达,分析其表达与胃癌临床病理特征的相关性。方法联合应用免疫组化SP法和RT-PCR技术检测34例胃癌及癌旁组织中Stathmin蛋白和mRNA表达情况,并对Stathmin的表达情况与胃癌临床病理特征的关系进行研究。结果胃癌组织中Stathmin的表达较癌旁组织明显升高(P<0.05);Stathmin与胃癌组织分化程度、浸润深度、有无淋巴结转移以及临床分期均相关(P<0.05),而与患者的年龄、性别无关。结论 Stathmin表达与胃癌的恶性生物学行为有关。     

大鼠肝纤维化进程中内质网应激相关蛋白的动态变化研究

目的探讨内质网应激(ERS)相关蛋白在大鼠肝纤维化形成与自发逆转过程中的作用。方法建立CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,免疫组化法检测各组ERS标志性蛋白CHOP、GRP78的表达;RT-PCR法检测CHOP、GRP78 mRNA的表达;Western blot检测CHOP蛋白表达变化。结果与正常组大鼠相比,模型组大鼠CHOP、GRP78的表达显著升高(P<0.05)。与模型组相比,停止CCl4诱导4周和8周后CHOP、GRP78表达降低(P<0.05)。结论 ERS存在于大鼠肝纤维化进程中,可能与肝纤维化的发生、发展和逆转存在密切联系。     

短发夹状RNA对GRP78基因在结直肠癌RKO细胞中表达的抑制作用

目的探讨短发夹状RNA对糖调节蛋白78(GRP78)在结直肠癌RKO细胞中表达抑制作用。方法以脂质体Lipofectamine2000介导GRP78短发卡状RNA(shRNA-GRP78)质粒表达载体转染RKO细胞,G418筛选得到稳定表达株,半定量RT-PCR和Westernblooting方法检测GRP78mRNA和蛋白水平变化。结果转染成功并筛选出稳定表达RKO细胞株。与对照组相比,shRNA-GRP78转染RKO细胞GRP78的mRNA及蛋白水平均显著下降(t=7.079、7.510,P<0.05)。结论 shRNA-GRP78能明显抑制RKO细胞GRP78mRNA及蛋白的表达,为进一步在体内外研究GRP78在结直肠癌中的作用奠定了基础。     

葡萄糖调节蛋白78和钙网蛋白在外阴鳞癌中的表达及意义

目的 探讨葡萄糖调节蛋白78(GBP78)和钙网蛋白(CRT)在外阴鳞癌(VSCC)中的表达情况.方法 采用免疫组化和Western blot方法检测GRP78和CRT在30例VSCC及15例外阴正常皮肤中的表达情况.结果 GRP78和CRT在VSCC组织中阳性细胞的平均光密度值分别为0.358 5±0.006 2和0.296 2±0.012 6,在正常外阴皮肤中分别为0.331 6±0.006 0和0.284 7±0.004 3,比较GRP78和CRT在VSCC和外阴正常皮肤中的表达,差异均有统计学意义(P＜0.05).Pearson相关分析结果显示:GRP78和CRT在VSCC中的表达呈正相关(R2=0.583,P＜0.001).GRP78和CRT在VSCC中的平均灰度值比值分别为0.66±0.21和0.84±0.15,在正常外阴皮肤中分别为0.34±0.11和0.65±0.17,比较两者在VSCC和外阴正常皮肤中的表达水平,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 GRP78和CRT的表达与VSCC的发生发展有关,两者在VSCC中的表达呈正相关.     

Wnt信号通路调控肠癌细胞GRP78表达与细胞膜转位

 目的 本研究旨在探讨Wnt/β catenin信号通路和葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)两者在肠癌细胞中的调控关系。方法 本研究采用氯化锂(LiCl)处理肠癌HT 29和DLD1细胞,激活其Wnt/β catenin信号通路。通过Western blot和荧光定量PCR,检测Wnt信号活化对GRP78表达的影响;通过对细胞组分的分离和免疫荧光染色技术分析Wnt信号活化对GRP78细胞膜转运的影响。结果 LiCl处理能够显著激活HT 29和DLD1细胞中的Wnt/β catenin信号通路,GRP78蛋白在HT 29细胞膜表面呈独特的“簇状”分布,LiCl处理明显提高了细胞中GRP78的转录和翻译水平,且GRP78在细胞表面的分布水平也有明显增加。结论 肠癌细胞中GRP78的表达和细胞膜转位受Wnt/β catenin信号通路活性的调控。     

人GRP78基因真核表达载体的构建及鉴定

目的利用PCR技术克隆人GRP78基因编码基因（约2000bp）。方法将PCR产物连接到pcDNA3.1（＋）载体上,酶切鉴定后测序分析。结果序列分析表明,扩增片段与GenBank里登陆的序列同源性为100%。并以pcDNA3.1（＋）表达载体为框架结构,尝试构建真核表达载体。结论测序分析结果表明序列同源性为100%。     

GRP78和Mn-SOD表达与鼻咽癌组织放疗敏感相关性研究

目的 研究GRP78、Mn-SOD mRNA在放射治疗鼻咽癌中的表达, 探讨其在放射治疗鼻咽癌中的意义。方法 取60例2006年1月13日~11月26日第1次入院放射治疗鼻咽癌, 运用原位杂交方法检测放射治疗鼻咽癌中GRP78及Mn-SOD mRNA的表达。结果 在放疗敏感及放疗抗拒鼻咽癌患者中, GRP78 mRNA中度和强阳性表达率分别为20.00%和47.50%, Mn-SOD mRNA中度和强阳性表达率分别为55.00%和40.00%, 差异有统计学意义。在放疗抗拒鼻咽癌患者中, GRP78 mRNA中度和强阳性表达率与TNM分期呈正相关, Ⅲ~Ⅳ期GRP78 mRNA中度和强阳性表达率为58.62%, Ⅰ~Ⅱ期表达率为18.18%, 与T分期呈正相关, T₃~T₄期中表达率为68.42%, T₁~T₂期中表达率为28.57%;Mn-SOD mRNA中度和强阳性表达率与T分期呈正相关, T₃~T₄期中表达率为63.16%, T₁~T₂期中表达率为19.05%;在有、无远处转移中, GRP78 mRNA中度和强阳性表达率分别为72.73%和37.93%, Mn-SOD mRNA中度和强阳性表达率分别为81.82%和24.14%, 差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GRP78、Mn-SOD参与了放疗抗拒鼻咽癌的发展。     

GRP及GRPR在结直肠癌、黏膜炎症中的表达及其意义

目的检测胃泌素释放肽(GRP)及其受体(GRPR)在结直肠癌、黏膜炎症中的表达及其意义。方法选择本院2009年1月~2012年10月经病理诊断为结直肠癌患者60例的病理标本为研究组,选取同期病理诊断为黏膜炎性改变患者60例的病理标本为对照组,采用免疫组化方法,分别检测结直肠癌组织及黏膜炎性组织中GRP及GRPR的表达情况。结果研究组GRP及GRPR表达阳性率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组中结肠癌及直肠癌患者GRP及GRPR表达阳性率差异无统计学意义(P>0.05);结直肠癌Duks分期A、B期患者GRP及GRPR表达阳性率明显低于C、D期患者(P<0.05);低分化癌患者GRP及GRPR表达阳性率明显高于分化及高分化癌患者(P<0.05)。结论 GRP及GRPR在结直肠癌中表达明显升高,并且随着肿瘤恶性程度增高,GRP及GRPR表达增加,可为临床结直肠癌诊断治疗提供新的方向。     

沉默GRP94基因对肝癌细胞的影响

目的:探讨GRP94基因对肝癌细胞的影响。方法:用脂质体法转染GRP94 siRNA序列及阴性对照序列,采用实时荧光定量PCR及Western blotting方法检测转染后GRP94的mRNA和蛋白表达水平。以CCK-8和流式细胞仪来检测细胞增殖和细胞凋亡的情况。以划痕实验和Transwell方法检测转染后细胞的迁移和侵袭能力。结果:在肝癌细胞HepG2中瞬时转染siRNA-GRP94序列及阴性对照序列后,其mRNA和蛋白表达显著减低;转染48 h后,细胞增殖能力明显下降,而细胞凋亡率明显上升。划痕实验检测发现24 h细胞愈合率明显抑制,Transwell实验发现迁移和侵袭至下室的细胞数目显著减少。结论:GRP94基因对肝癌细胞HepG2凋亡有抑制作用,促进增殖、迁移和侵袭能力,为进一步研究GRP94在肝细胞肝癌发生和进展中的作用奠定了基础。     

葡萄糖调节蛋白78在乳腺癌细胞侵袭、转移的作用

目的 探讨葡萄糖调节蛋白78（GRP78）在乳腺癌细胞（231）侵袭、转移过程所起的作用。方法 构建GRP78真核反义表达载体,转染入231细胞,利用PCR和蛋白印迹方法检测转染有反义GRP78的231细胞和MCF-7细胞的GRP78表达情况;并用伤口愈合实验和体外侵袭实验证验转染细胞转移和侵袭的变化。结果 转染反义GRP78的231细胞内GRP78RNA和蛋白表达明显低于未转染细胞;反义GRP78基因对乳腺癌细胞231细胞的侵袭和转移有抑制作用。结论 GRP78是乳腺癌的一个促癌基因,下调GRP78基因表达能明显抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移能力。GRP78为乳腺癌基因治疗的一个新靶点。     

GRP78基因短发夹RNA表达载体的构建和鉴定

目的构建葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因短发夹RNA表达载体并鉴定,为探讨GRP78对胃癌发生发展作用及机制提供前期基础。方法运用核糖核酸(RNA)干扰技术构建靶向干扰GRP78蛋白短发夹RNA(GRP78-shRNA)载体,载体经转化、抽提及测序,用脂质体将GRP78-shRNA载体瞬时转染至SGC-7901胃癌细胞中,应用荧光显微镜、反转录定量PCR(qRT-PCR)及免疫印迹(Western blot)观察GRP78表达情况。结果GRP78-shRNA载体测序显示序列正确;转染GRP78-shRNA载体的SGC-7901胃癌细胞可见绿色荧光;qRT-PCR和Western blot结果显示,转染GRP78-shRNA载体的SGC-7901胃癌细胞中GRP78基因和蛋白表达降低。结论成功构建并鉴定GRP78基因短发夹RNA表达载体。