骨髓增生异常综合征患者白血病干细胞的表达

目的：检测细胞表面抗原 CD123（IL -3受体α链）在骨髓增生异常综合征（Myelodysplastic syndrome , MDS）患者骨髓中的表达,并探讨其与患者预后的关系。方法选择2010年11月至2012年8月在泰山医学院附属医院就诊的53例 MDS 患者及30例非恶性血液病患者骨髓标本,采用流式细胞术检测 CD34＋ CD38- CD123＋的表达情况;同时依据国际预后积分系统（IPSS）将 MDS 患者划分为低危组、中危- I 组、中危- II 组和高危组,分析CD34＋ CD38- CD123＋的表达与 MDS 患者预后的相关性。结果53例 MDS 患者骨髓 CD34＋ CD38- CD123＋/CD34＋表达为14.29±7.89%,显著高于对照组的表达水平1.22±0.89%,t ＝9.013,P ＝0.000;其中高危组 CD34＋CD38- CD123＋/ CD34＋的比例显著高于中危- I 组和低危组,P ﹤0.01;中危- II 组显著高于低危组和中危- I 组, P ﹤0.01,中危- I 组高于低危组,P ﹤0.05。结论在 MDS 患者骨髓单个核细胞中 CD123异常过度表达,有助于MDS 的诊断及预后判断。     

铁调素调节蛋白、骨形成蛋白6及铁调素在乳腺癌组织中的表达及其与贫血的关系

目的 研究乳腺癌组织中铁调素调节蛋白（hemojuvelin,HJV）、骨形成蛋白6（bone morphogenetic protein 6,bmp6）及铁调素（hepcidin）的表达的临床意义及和贫血的关系。方法 采用免疫组化方法对64例乳腺癌患者组织以及15例癌旁的正常乳腺组织中的铁调素调节蛋白、骨形成蛋白6及铁调素的表达情况进行检测,并分析上述指标之间的关系及其与患者临床特征、乳腺癌内分泌分型以及贫血的关系。结果 乳腺癌组织中铁调素表达阳性率为48.4%,明显高于癌旁组织（P<0.01）。铁调素调节蛋白、骨形成蛋白6的表达阳性率在乳腺癌组织中与癌旁组织比较,差异无统计学意义（P>0.05）。预后较好的luminal A型+luminal B型组中铁调素表达阳性率明显低于预后差的组;而铁调素调节蛋白、骨形成蛋白6的表达在两组无明显区别。铁调素的表达在ER阴性组中明显高于ER阳性组,而铁调素调节蛋白、骨形成蛋白6的表达在两组无明显区别。铁调素的表达与淋巴结转移有关,与患者的年龄、T分期无关,铁调素调节蛋白及骨形成蛋白6的表达与患者的年龄、T分期、和淋巴结转移均无关。铁调素调节蛋白、骨形成蛋白6的表达与铁调素无相关。贫血组与无贫血组患者铁调素调节蛋白、骨形成蛋白6及铁调素的表达无区别。结论 乳腺癌组织中铁调素的表达阳性率高于癌旁正常组织,铁调素的表达与乳腺癌内分泌分型及肿瘤的临床病理特征有关。乳腺癌组织中铁调素调节蛋白、骨形成蛋白6的表达与铁调素的表达无关。乳腺癌患者术前贫血与肿瘤组织中的铁调素、铁调素调节蛋白及骨形成蛋白6的表达无关。     

骨髓增生异常综合征与再生障碍性贫血患者骨髓细胞免疫表型比较分析

目的探讨骨髓细胞免疫表型对骨髓增生异常综合征(MDS)与再生障碍性贫血(AA)的临床鉴别诊断价值。方法采用单克隆抗体-生物素-亲和素酶标法对本院4年内初诊未治疗的23例AA患者、19例MDS患者及50例缺铁性贫血患者(对照组)骨髓细胞免疫表型进行检测,统计分析CD3、CD5、CD10、CD13、CD19和CD33抗原在三种疾病中表达差异。结果 AA患者骨髓细胞CD3和CD5抗原表达率明显高于对照组和MDS组(P<0.05),CD10、CD13和CD33抗原表达在AA组与对照组间无差异(P>0.05)。MDS患者骨髓细胞CD13和CD33抗原表达率均明显比对照组和AA组高(P<0.05),CD19表达低于AA组和对照组,CD3抗原表达在MDS组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论骨髓细胞免疫表型对于AA与MDS的鉴别有一定参考价值。     

髓源性抑制细胞在骨髓增生异常综合征中的表达

目的 探讨不同危险度分层骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓血髓源性抑制细胞(MDSCs)、外周血T淋巴细胞各亚群及相关免疫抑制因子的表达变化,阐明其在MDS疾病进展中的作用。方法 应用流式细胞术检测60例初治MDS患者(MDS组)和20例缺铁性贫血患者(对照组)骨髓血MDSCs,外周血CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、颗粒酶B及调节性T细胞(Tregs)的表达水平,ELISA法检测免疫抑制因子白介素10(IL-10)和转化生长因子β(TGF-β)的表达水平,同时根据修订的国际预后积分系统(IPSS-R)将MDS患者分为较低危组(L-MDS组)和较高危组(H-MDS组),分析不同分组患者中MDSCs、CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、颗粒酶B及Tregs,免疫抑制因子IL-10及TGF-β的表达差异。结果 与对照组相比,MDS患者MDSCs及Tregs的表达量增高,CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、颗粒酶B表达量显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。...     

高脂血症小鼠铁调素表达与肝功能损伤的关系

目的 观察高脂血症小鼠血清铁调素表达变化,探讨肝功能损伤与高脂血症小鼠铁调素的相关性。方法 60只4周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为6组,每组10只,分别为0、2、4、6、8周组以及8周正常对照组,造模组40只给予脂肪乳灌胃,分别在2、4、6、8周处死,复制高脂血症伴有肝脏损伤模型。对照组给予等体积生理盐水,造模成功后,取血分离肝脏。全自动生化分析仪检测血脂（TC、TG、LDL-C、HDL-C）、肝功能（ALT、AST）、血清铁（FER、TRF）。血清酶联免疫吸附法测：血清铁调素（hepcidin）水平。结果 与空白组比较,模型组TC、TG水平明显升高（P<0.05）造模成功,2周组小鼠hepcidin表达水平明显下降（P<0.05）。与空白组比较,小鼠铁调素（hepcidin）表达水平随高脂喂养时间延长,铁调素表达有升高趋势,以8周组下降差异有统计学意义（P<0.05）。血清铁调素与肝功能损伤程度间呈负性相关（r=0.878,P<0.01）。结论 高脂血症小鼠血清铁调素表达随血脂水平升高而增多。伴随肝功能受损程度加重,铁调素表达下降,表明铁调素水平能反映肝脏损害程度。     

血清铁蛋白和乳酸脱氢酶检测对骨髓增生异常综合症的临床意义

目的：检测骨髓增生异常综合症（MDS）患者血清中铁蛋白（SF）和乳酸脱氢酶（LDH）的表达水平,探讨这两者与MDS各亚型,年龄之间关系.方法：分别用化学发光法和酶法检测128例MDS患者与30例正常人的血清SF和LDH水平,进行数据分析对照比较.     

Th17细胞在骨髓增生异常综合征骨髓组织中的表达及意义

目的了解骨髓增生异常综合征(MDS)骨髓Th17细胞、调节性T细胞(Treg)的表达量,以探讨MDS的免疫学机制。方法流式细胞术检测65例MDS患者和18例健康对照骨髓细胞Th17细胞及Treg细胞表达量。ELISA方法分析骨髓血浆细胞因子IL-17、IL-10、TGF-β、IL-21、IL-22水平。结果 MDS患者骨髓Th17细胞及Treg细胞数量均高于健康对照组(P均<0.01)。在MDS亚型中Th17细胞及Treg细胞数量从RA/RAS、RAEB-Ⅰ到RAEB-Ⅱ逐渐增高(P均<0.05)。骨髓细胞因子IL-17、IL-10、TGF-β、IL-21、IL-22水平较对照组显著增高(P均<0.01),在MDS亚型中细胞因子IL-17、IL-10、TGF-β、IL-21、IL-22水平从RA/RAS、RAEB-Ⅰ到RAEB-Ⅱ也逐渐增高(P均<0.05)。结论 MDS骨髓微环境中Th17细胞、Treg细胞表达量均增多,可能促进了MDS病程进展。     

Treg细胞在骨髓增生异常综合征中的变化及其意义

目的 研究CD4+Treg细胞在骨髓增生异常综合征(MDS)中的变化及其意义.并探讨CD4+Treg细胞在MDS低危组和MDS高危组中的变化和内在联系.方法 流式细胞仪检测MDS低危组(21例)、MDS高危组(15例)及正常对照组(22例)CD4+CD25+T细胞和CD4+FOXP3+T细胞分别占CD4+T细胞的比例,采用直接免疫荧光法标记T细胞特征抗原.结论 CD4+FOXP3+T细胞占CD4+T细胞的比例在各组中比较:MDS低危组与高危组均明显高于正常对照组,MDS高危组高于低危组,差异有统计学意义,CD4+CD25+T细胞占CD4+T的比例在各组中无明显差异.结论CD4+Treg细胞在MDS组较正常对照组明显升高,并且随着疾病的进展CD4+Treg细胞逐渐升高.     

骨髓增生异常综合征患者骨髓造血细胞分化抗原表达及其意义

目的 了解骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓成熟粒系和红系细胞分化抗原表达特点并分析其与IPSS、WPSS评分的相关性.方法 采用流式细胞术检测34例(12例低危、22例高危)MDS患者及31名正常骨髓粒系CD11b、CD13、CD16、HLA-DR以及红系CD71和血型糖蛋白A(GlyA)抗原的序贯表达比例和模式.结果 选择CD13/CD11b、CD13/CD16及CD11b/CD16组合来分析粒细胞分化抗原表达模式,对照组骨髓粒系细胞组合模式分别为"对钩"、"镰刀"或"反7"状,MDS患者骨髓粒系细胞发育分化中的抗原表达模式出现不同程度的改变.高危组CD11b-/CD11b+比值(0.39±0.34)明显高于低危组(0.10±0.09)和对照组(0.07±0.05)(P<0.01);高危组CD16-/CD16+比值(1.33±0.77)明显高于对照组(0.39 ±0.31)(P<0.05);低危和高危组骨髓粒细胞CD13的平均荧光强度(MFI)高于对照组,侧向角散射光信号(SSC)的MFI低于对照组,但差异无统计学意义.高危组CD11b-HLA-DR+3.88%±3.07%、CD11b-HLA-DR-16.23%±15.59%、CD16-HLA-DR-41.12%±24.53%、CD11b+CD16-33.53%±17.26%及CD13+CD16-44.51%±21.99%细胞占粒细胞比例明显高于低危组和对照组(P<0.05),其他组间比较差异无统计学意义.应用CD71和GlyA的组合来分析红系细胞的分化,对照组两种抗原的组合模式均为双阳性表达,部分MDS患者可见CD71和GlyA表达不同步现象.低危组和高危组CD71+和GIyA+双阳性细胞分别占CD45-细胞和GIyA+细胞的比例均显著低于对照组.MDS患者粒、红系抗原表达的比例和模式异常数目与IPSS积分(r=0.690,P=0.000)、WPSS积分(r=0.651,P=0.000)均呈正相关.结论 MDS患者造血细胞分化抗原表达异常,异常程度与预后相关.这提示分化抗原检测可能有助于MDS患者的诊断和预后判断.     

CIP2A在骨髓增生异常综合症中的意义探讨

目的探讨CIP2A在骨髓增生异常综合症（MDS）中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法对31例MDS患者、19例急性髓系白血病（AML）患者（包括4例由MDS转变而来）和20例对照组骨髓单个核细胞中CIP2A蛋白质水平进行检测。结果 MDS组CIP2A蛋白的表达水平高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。MDS高危组CIP2A蛋白的表达水平显著高于MDS低危组（P〈0.05）,AML组CIP2A蛋白的表达水平显著高于MDS高危组（P〈0.05）。结论 CIP2A在MDS骨髓单个核细胞中高表达可能与MDS的疾病发展有关。     

SHIP和Caspase-3 mRNA在骨髓增生异常综合征患者骨髓组织中的表达及其临床意义

［摘 要］ 目的：检测骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓组织中SHIP、Caspase-3 mRNA的表达,探讨其表达与MDS发病及向白血病转化过程的关系。方法：根据国际预后评分系统（IPSS）选择62例MDS患者,其中低危（low-risk）组20例、中危1（Int-1）组12例、中危2（Int-2）组13例和高危（high-risk）组17例,采用RT-PCR法检测62例MDS患者及30例健康正常者(对照组)骨髓单个核细胞(BMNC)中SHIP mRNA及Caspase-3 mRNA的表达水平,并分析两者之间的关系。 结果：MDS低危组和中危1组BMNC中SHIP mRNA表达率（100%,100%）及表达水平(4.467±2.899,4.529±1.975)分别与对照组（100%,4.623±2.979）比较差异均无统计学意义（P>0.05）;在中危2组和高危组中,BMNC中SHIP表达率（92%,88%）下降,表达水平(2.124±1.880,2.574±1.807)低于对照组（P<0.05）。Pearson相关分析,MDS患者BMNC中SHIP mRNA与Caspase-3 mRNA表达水平呈正相关关系（r=0.714,P<0.05）。随骨髓原始细胞比例升高,SHIP mRNA表达水平降低(F=3.7,P<0.05) ,不同性别（t=0.940,P>0.05）、不同年龄（t=1.419,P>0.05）患者SHIP mRNA表达水平差异无统计学意义。 结论：SHIP在高危MDS患者BMNC中呈低表达或不表达,其表达水平可以作为判定MDS预后的一个指标。     

AA、MDS和AML患者CD4~+T细胞亚群的变化及其临床意义

目的探讨CD4+T细胞亚群(Th1、Th2、Th17及Treg细胞)在再生障碍性贫血(AA)、骨髓增生异常综合征(MDS)、急性髓系白血病(AML)患者免疫发病机制中的作用,为临床治疗提供实验依据。方法采用流式细胞术检测AA组25例,MDS组48例[其中难治性贫血(MDS-RA)22例,难治性贫血伴原始细胞增多(MDS-RAEB)26例],AML组12例和正常对照组8例的外周血单个核细胞Th1、Th2、Th17及Treg细胞比例并对比分析,评价各组的细胞免疫状态。结果与正常对照组相比,AA组Th1、Th17细胞及Th1/Th2升高,而Th2和Treg细胞比例减低(P<0.05);MDS组Th1、Th2细胞、Th1/Th2与正常对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05),而Th17和Treg细胞比例升高(P<0.05);MDS-RA组Th1、Th17细胞比例和Th1/Th2均升高(P<0.05),Th2细胞比例减低(P<0.05),而Treg细胞比例差异无统计学意义(P>0.05);MDS-RAEB组和AML组Th1、Th17细胞比例和Th1/Th2减低(P<0.05),Th2和Treg细胞比例升高(P<0.05)。结论 AA、MDS不同阶段与AML患者的细胞免疫状态不同,在AA和MDS早期阶段,免疫因素介导的凋亡过度是骨髓衰竭的主要原因;而在MDS晚期和AML阶段,异常克隆细胞的大量积聚可能是其主要原因。     

莫诺苷对小鼠T细胞体外活化与分化的影响

目的: 探讨山茱萸提取物莫诺苷对小鼠T细胞功能的影响及可能的机制。方法: 将C57BL/6小鼠脾脏制成单细胞悬液,采用抗CD3、抗CD28功能抗体模拟抗原刺激活化T细胞,分为对照组(不做任何处理)和莫诺苷组(10 μmol/L莫诺苷处理)。采用流式细胞术分析CD4+T和CD8+T细胞表面分子CD69、CD25表达水平,以及其增殖、凋亡与分化为Th1、Th2、Treg等细胞的情况;利用实时荧光定量PCR检测细胞中Tbx21、Gata3、淋巴样增强因子1(lymphoid enhance factor 1, LEF1)等mRNA水平;应用ELISA法测定培养上清液中IFN-γ、IL-4以及TGF-β含量;运用蛋白质免疫印迹技术测定细胞β 连环蛋白表达量。结果： 与对照组相比,莫诺苷组中活化T细胞向Th1、Th2、Treg分化比例增加(P<0.05),CD25活化标志增强,T细胞增殖标志Ki67有所增强,但增殖和凋亡差异均无统计学意义;IL-4和Treg细胞相关的TGF-β因子水平增加(P<0.05),但Th1细胞分泌的IFN-γ差异无统计学意义;Tbx21、Gata3、LEF1等mRNA水平均增加(P<0.05);蛋白质印迹显示β 连环蛋白表达明显上调(P<0.01)。结论： 山茱萸提取物莫诺苷可促进小鼠T细胞分化,其机制可能与Wnt信号通路有关。     

重组人G-CSF治疗不同白细胞减少症的疗效与机制

目的 探讨重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）治疗不同白细胞减少症的疗效与机制。方法 临床选取四组患者：再生障碍性贫血组（AA组,n=10）、骨髓增生异常综合征组（MDS组,n=10）、药物性白细胞减少组（药物组,n=20）（根据骨髓粒系增生程度再分为增生活跃组和增生减低组）和缺铁性贫血组（对照组,n=10）。ELISA法测定外周血G-CSF浓度;流式细胞仪检测骨髓单个核细胞（BMMNC）G-CSF受体(G-CSFR)的表达率及CD34+细胞比例;培养BMMNC,比较粒细胞集落形成单位（CFU-G）集落数。比较AA组、MDS组和药物组进行rhG-CSF治疗的效果。结果 AA组和药物组的血清G-CSF浓度均高于对照组和MDS组（P<0.05）。AA组的G-CSFR表达率低于其余各组（P<0.05）,但MDS组与药物组和对照组之间差异无统计学意义（P>0.05）;增生减低组G-CSFR表达率低于增生活跃组和对照组（P<0.05）,但增生活跃组与对照组差异无统计学意义（P>0.05）。AA组的CD34+细胞比例低于其余各组（P<0.05）,但其余各组间差异无统计学意义（P>0.05）。AA组和MDS组的CFU-G集落数均低于对照组和药物组（P<0.05）,但AA组与MDS组、药物组与对照组之间差异无统计学意义（P>0.05）。经rhG-CSF治疗后,药物组疗效优于MDS组,MDS组疗效优于AA组（P<0.05）。结论 rhG-CSF疗效与骨髓G-CSFR表达率、CD34+细胞比例、干祖细胞对G-CSF的反应性及内源性G-CSF浓度有关。     

特发性肺纤维化患者外周血单个核细胞T淋巴细胞亚群及Th1/Th2型细胞因子的检测

目的：通过流式细胞术检测特发性肺纤维化(IPF)患者外周血T淋巴细胞亚群及Th1/Th2型细胞因子水平,探讨其在IPF发病机制中的作用及临床意义。方法：采用流式细胞术检测25例IPF患者外周血单个核细胞(PBMC)的T淋巴细胞亚群(CD3⁺、CD4⁺及CD8⁺)以及Th1型细胞因子(IFN-γ)和Th2型细胞因子(IL-4)水平,并观察CD4⁺/CD8⁺和Th1/Th2比值变化。25例健康体检者为正常对照组。结果：IPF组患者CD4⁺以及CD4⁺/CD8⁺比值均低于正常对照组(P<0.05),CD8⁺明显高于正常对照组 (P<0.01),CD3⁺水平与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05)。IPF组患者IL-4水平高于正常对照组(P<0.01),IFN-γ的水平与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05),Th1/Th2比值显著低于正常对照组(P<0.01)。结论：细胞免疫过强和Th2型免疫优势可能参与IPF发病,这将为IPF的诊断和细胞因子治疗提供理论基础。     

双染色Th细胞测定法的初步临床应用

目的:研究双染色Th细胞测定法(双色法)在临床Th1/Th2状态分析中的可行性。方法:以双色法、RTPCR和ELISA法分析乙型肝炎、哮喘和类风湿关节炎(RA)患者的Th1/Th2状态。结果:①乙型肝炎患者肝功能异常组的IFNγmRNA显著升高(P<0.05),肝功能正常组的IL4mRNA升高(P<0.05)。血浆IFNγ和IL4水平分析,肝功能异常组IFNγ升高(P<0.05),肝功能正常组IL4升高(P<0.05)。②RA患者血浆IL4和IL6水平显著升(P<0.05和P<0.01)。RA患者CD3+和CD4+细胞水平与对照组相比,差异无显著意义(P>0.05);CD8+/CD28-细胞水平明显低于对照组(P<0.01);CD25+细胞水平明显高于对照组(P<0.01)。RA患者CD19+细胞水平高于对照组(P<0.05)。③与正常对照组比较,不管是蛋白水平还是转录水平,哮喘患者IL4升高,IFNγ无明显变化。④双色法分析临床Th1和Th2的变化,类风湿性关节炎和哮喘患者以Th2细胞升高为主,乙型肝炎肝功能正常的患者Th2细胞升高,肝功异常组Th1细胞增加。结论:双色法可用于临床Th1/Th2分析。     

胃癌患者外周血中 CD4+CD25+ 调节性 T 细胞和 Th17 细胞的表达和临床意义

目的检测CD4~+CD25~+调节性T细胞和Th17细胞在胃癌患者外周血中的表达,探讨两种细胞在胃癌中的临床意义。方法随机选取我院收治的胃癌患者30例,作为胃癌组,另选取同期在我院进行健康体检人员30例作为正常组,对两组外周血中CD4、CD25、Foxp3、IL-17的表达进行检测,分析CD4~+CD25~+调节性T细胞和Th17细胞的数量和比例。结果胃癌组外周血中CD4~+CD25~+调节性T细胞和Th17细胞的表达均高于正常组(P0.05);胃癌组中晚期、T3+T4、有淋巴结转移患者外周血中CD4~+CD25~+调节性T细胞的表达分别高于早期、T1+T2、无淋巴结转移患者(P0.05),但不同肿瘤分期、浸润深度、淋巴结转移患者之间Th17细胞的表达差异均不显著(P0.05)。结论胃癌患者外周血中CD4~+CD25调节性T细胞和Th17细胞的表达均显著升高,且提示肿瘤进展和CD4~+CD25~+调节性T细胞相关,但与Th17细胞无明显统计学相关。