miR-124对胃癌细胞的生物学功能影响

目的:探讨miR-124对胃癌细胞增殖、凋亡与迁移的影响及其相关调控机制。方法:收集确诊为胃癌的癌组织和癌旁组织42组,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测癌和癌旁组织以及正常胃黏膜上皮细胞GES-1和胃癌细胞株BGC-823、MGC-803、SGC-7901、AGS中miR-124的相对表达量;在胃癌细胞株BGC-823中过表达miR-124,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞技术检测细胞凋亡,Transwell检测细胞迁移,Western blot检测过表达miR-124前后磷酸化PI3K/AKT的变化。结果:胃癌组织中miR-124水平低于癌旁组织(0.70±0.15 vs. 1.14±0.27,t=10.14,P=0.000),胃癌细胞株中miR-124水平低于GES-1(F=38.012,P=0.000);过表达miR-124后细胞BGC-823的增殖与迁移能力均减低(0.94±0.09 vs. 0.62±0.06,t=6.615,P=0.000;152.33±14.05 vs. 53.67±12.58,t=9.061,P=0.001),而细胞凋亡率增加(2.10±0.56 vs. 8.30±0.31,t=16.777,P=0.000);过表达miR-124后p-AKT、p-PI3K蛋白表达均出现下调(118.90±10.51 vs. 34.87±4.23,t=12.847,P=0.000;158.53±10.94 vs. 71.07±4.51,t=12.802,P=0.000)。结论:miR-124在胃癌中低表达;miR-124抑制胃癌细胞的增殖、迁移,促进胃癌细胞凋亡,可能是靶向PI3K/AKT信号通路实现的。     

胃癌组织中脂肪酶H的表达情况及临床意义

目的 研究胃癌中脂肪酶H(LIPH)的表达情况及其临床意义。方法 选取正常胃黏膜细胞GES-1和胃癌细胞株SGC-7901、AGS、MGC-803、BGC-823、MKN-45,通过Western blot检测LIPH在其中的表达情况。选取2014年1月至2015年12月蚌埠医学院第一附属医院收治的95例胃癌患者,采用Western blot和免疫组织化学法检测LIPH在其癌组织和癌旁组织中的表达水平。根据LIPH表达情况将其分为阳性组和阴性组,对两组进行60个月的随访,采用生存曲线和Cox回归分析LIPH在胃癌中的临床意义。结果 胃癌细胞株MGC-803、AGS、MKN-45、BGC-823、SGC-7901的LIPH表达高于正常胃黏膜细胞GES-1,差异有统计学意义（P <0.05）。免疫组化结果显示,胃癌组织中LIPH阳性表达呈棕色或棕褐色。癌组织中LIPH表达阳性率高于癌旁组织,差异有统计学意义（P <0.05）。95例患者累积生存率为22.1%,阳性组（56例）累积生存率低于阴性组（39例）,差异有统计学意义（P <0.05）。单因素分析结果显示LIPH表达...     

Hsa_circ_0001947对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

［摘要］目的: 探讨环状RNA hsa_circ_0001947(circ_0001947)在胃腺癌细胞和组织中的表达及其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法: 通过高通量测序筛选出5例临床胃腺癌、癌旁组织标本中差异表达的5种环状RNA,挑选升高表达最明显的circ_0001947继续研究。实时荧光定量PCR检测circ_0001947在75例临床胃腺癌、癌旁组织以及胃癌BGC-823,HGC-27,MGC-803,SGC-7901细胞株、正常人胃黏膜上皮GES-1细胞株中的表达。将细胞株BGC 823、SGC 7901各分为两组,设si circ_0001947组(转染si RNA)和si NC组(转染无关序列)。细胞培养0、12、24、48、72 h后,采用CCK 8实验测定细胞活力。采用克隆形成实验测定细胞增殖能力;流式细胞术测定细胞凋亡率,蛋白印迹测定凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3,Bcl-2和Bax表达水平。结果： 高通量测序筛选出的胃腺癌组织中差异表达的环状RNA为hsa_circ_0000033,hsa_circ_0000038,hsa_circ_0004916,hsa_circ_0058092,hsa_circ_0001947。circ_0001947在胃腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.01),在胃癌BGC-823,HGC-27,MGC-803,SGC-7901细胞株中表达量明显高于正常胃黏膜上皮GES-1细胞株(P均<0.05)。si RNA能够明显抑制BGC 823、SGC-7901细胞中circ_0001947表达。si-circ_0001947组BGC 823,SGC-7901细胞光密度值明显低于si-NC组(P均<0.01);si circ_0001947组BGC 823,SGC-7901细胞克隆形成率和细胞凋亡率明显低于si NC组(P均<0.01)。与si-NC组相比,si-circ_0001947组BGC 823,SGC 7901细胞中Cleaved caspase-3 及Bax表达明显上调,Bcl 2表达明显下调(P均<0.05)。结论： circ_0001947在胃癌细胞和组织中呈高表达,干扰circ_0001947表达可抑制胃癌细胞增殖并诱导其凋亡。     

miR-885-3p抑制胃癌细胞的增殖和迁移

目的 探讨微小RNA miRNA-885-3p对胃癌细胞增殖和迁移的影响.方法 采用qRT-PCR检测miR-NA-885-3p在4种胃癌细胞株(SGC-7901、MGC-803、BGC-823、AGS)以及人胃正常黏膜GES-1细胞中的表达.将mimic(miRNA-885-3p模拟物)或miRNA-NC转染SGC-...     

Notch 1在GES-1和其他胃癌细胞中表达差异性的比较

目的 探讨Notch 1在GES-1、AGS、 SGC-7901和BGC-823中的表达差异性.方法 采用real time RT-PCR技术和Western blot方法研究Notch 1在GES-1、AGS、SGC-7901和BGC-823细胞mRNA和蛋白质水平上的表达.结果 与GES-1相比较,Notch 1 mRNA和NOTCH 1蛋白在 AGS,SGC-7901 和BGC-823中表达显著降低,差异均具有显著性(P < 0.01).结论 Notch 1在胃癌的发生中可能作为抑癌基因起作用.     

SHH在GES-1和其他胃癌细胞中表达差异性的比较

目的探讨SHH在GES-1、AGS、SGC-7901和BGC-823中的表达差异性。方法采用real time RT-PCR技术和Western blot方法研究SHH在GES-1、AGS、SGC-7901和BGC-823细胞mRNA和蛋白质水平上的表达。结果与GES-1相比较,SHH mRNA和SHH蛋白在AGS、SGC-7901和BGC-823中的表达明显减少,差异均具有显著性（P〈0.01）。结论 SHH信号通路在胃癌的发生中具有重要的作用。     

生长抑制因子4在人胃癌中的表达及其意义

目的：探讨多种人胃癌细胞株中及胃癌组织中生长抑制因子4（ING4）的表达及其意义。方法：体外培养3种分化不同的胃癌细胞MKN-1（高分化）、SGC-7901（中分化）、BGC-823（低分化）以及人胃黏膜细胞GES-1,收集绍兴第二医院病理科40例原发胃癌患者的石蜡标本。以RT-PCR、Western Blot法分别检测4种细胞株ING4 mRNA及其蛋白表达水平。免疫组织化学法检测胃癌组织及癌旁组织中ING4蛋白表达情况。结果：SGC-7901、BGC-823组中ING4 mRNA及其蛋白表达水平较MKN-1、GES-1组明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,BGC-823组中ING4 mRNA及其蛋白表达水平较SGC-7901组明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,MKN-1组与GES-1组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。胃癌组织中ING4表达阳性率明显低于癌旁组织,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：ING4作为抑癌基因参与了胃癌的发生,且与胃癌分化程度有关。     

miR-34a-5p在胃癌细胞和胃癌组织中的表达及其靶基因信号通路富集分析

目的研究胃癌细胞和胃癌组织中miR-34a-5p的表达,分析其临床意义,并采用生物信息学方法进行miR-34a-5p靶基因预测和信号通路富集分析。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-34a-5p在不同分化程度的胃癌细胞和正常胃黏膜上皮细胞中的表达以及在胃癌组织和癌旁组织中的表达,比较并分析其临床意义;采用miRWalk网站的生物信息学软件预测miR-34a-5p的靶基因,采用DAVID6.7软件对靶基因进行信号通路富集聚类分析。结果与正常胃黏膜上皮细胞比较,miR-34a-5p在胃癌细胞HGC-27、SGC-7901中的相对表达量未明显上调,差异均无统计学意义(P0.05),在胃癌细胞MKN-45、MKN-28、MGC-803、BGC-823、AGS中的相对表达量均明显上调,差异有统计学意义(P0.05或P 0.01);与癌旁组织比较,miR-34a-5p在胃癌组织中有32例表达上调[2.79(1.91,5.78)],18例表达下调[0.37(0.14,0.45)],差异有统计学意义(Z=5.821,P=0.000),提示miR-34a-5p在胃癌组织中以高表达为主;在胃癌组织中,miR-34a-5p的高表达与胃癌分化程度、淋巴结转移具有相关性(P0.05);生物信息学分析结果提示,miR-34a-5p的靶基因富集在与肿瘤相关的28个信号通路中。结论 miR-34a-5p是胃癌的高表达分子标志物,是潜在的具有临床相关性的癌基因。     

HES1对胃癌细胞株增殖､凋亡及迁移能力的影响

目的:探讨siRNA靶向HES1对胃癌细胞株BGC-823和SGC-7901增殖?凋亡及迁移能力的影响?方法:采用荧光实时定量PCR(qPCR)法检测胃癌组织及胃癌细胞株BGC-823和SGC-7901的HES1水平,采用脂质体法将2条靶向HES1的siRNA片段(siHES1-1和siHES1-2)高效转染至BGC-823和SGC-7901细胞,经qPCR法检测后选取抑制效率最高的siRNA进行后续功能学研究;分别采用MTT?流式细胞术及Transwell法检测转染后BGC-823和SGC-7901细胞的增殖?凋亡及迁移能力的改变?结果:71例胃癌组织的HES1 mRNA水平高于59例癌旁组织,BGC-823和SGC-7901细胞的HES1 mRNA水平明显高于正常胃黏膜细胞株GES-1(P < 0.05);转染HES1 siRNA可降低BGC-823和SGC-7901细胞的HES1水平,此外,较转染对照组细胞,其存活率及穿膜细胞数目明显降低,凋亡率明显升高(P < 0.05)?结论:胃癌组织及细胞株中的HES1高表达,靶向沉默HES1可抑制胃癌细胞增殖及迁移并诱导细胞凋亡?     

MicroRNA-152在胃癌细胞中表达及对细胞增殖的影响

目的探讨microRNA-152(miR-152)在胃癌细胞中的表达情况以及对胃癌细胞增殖的影响及其可能的机制。方法采用实时荧光定量PCR(real-timePCR)方法检测胃癌细胞系MGC-803、SGC-7901、BGC-823和胃上皮细胞GES-1(作为对照)中miR-152的表达情况。采用脂质体法,转染miR-152模拟物(miR-152mimics)构建miR-152过表达体系,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测miR-152对MGC-803胃癌细胞系增殖能力的影响,Westernblot检测转染miR-152mimics后E2F3蛋白的表达情况。结果 MGC-803、SGC-7901、BGC-823胃癌细胞系中miR-152的相对表达量分别为(0.05±0.01)、(0.19±0.03)、(0.48±0.09),表明在胃癌细胞中miR-152的表达明显下调(P<0.05)。MTT法检测结果显示,转染miR-152mimics后可明显抑制MGC-803胃癌细胞的增殖(P<0.05)。Westernblot结果表明,转染miR-152后,E2F3蛋白水平显著下降。结论 miR-152在胃癌细胞中明显低表达,并可能通过下调癌基因E2F3的表达,抑制肿瘤细胞的增殖,从而发挥抑癌基因的功能。     

子宫内膜异位症中miR-143、miR-145和miR-126的差异表达

目的探索子宫内膜异位症（EMs）中miR-143、miR-145和miR-126的差异表达,以及不同月经周期的影响。方法利用realtimeRT-PCR技术,比较miR-143、miR-145和miR-126在EMs患者在位内膜（EU,2例）、异位内膜（EC,14例）、配对EU+EC（14例）,与非EMs患者内膜（EN,28例）中的表达差异;并分析EN和EC组不同月经周期对miR-143、miR-145和miR-126表达的影响。结果不同月经周期的影响分析,发现仅EN标本中miR-143增生期表达量高于分泌期,差异有统计学意义（P＜0.05）。与EN相比,miR-143和miR-145在EU中均表达上调（P＜0.05）,miR-143、miR-145和miR-126在EC中均表达上调（P＜0.01）。配对EU-EC中,miR-143、miR-145和miR-126在EC中均表达上调（P＜0.01）。结论miR-143、miR-145和miR-126在EMs中表达高于非EMs,在EC中表达高于EU。     

miR-432、miR-646和miR-100在骨肉瘤细胞中的表达

目的探讨miR-432、miR-646和miR-100在骨肉瘤细胞中的表达及临床意义。方法选择行根治性切除手术的72例骨肉瘤组织作为研究对象,同时选择38例骨肉瘤旁组织作为对照组。采用RT-qPCR的方法检测各组组织细胞中miR-432、miR-646和miR-100的表达水平与骨肉瘤病人临床病理参数的关系,并分析miR-432、miR-646和miR-100的表达水平之间的相关性。结果骨肉瘤组的miR-432、miR-646和miR-100的表达水平低于骨肉瘤旁组织（P < 0.01）。骨肉瘤组织细胞中miR-432、miR-646和miR-100的表达水平与病人的性别、年龄、肿瘤直径、组织学类型、发病部位和TCNR均无关（P>0.05）,而与病人的TNM分期和是否发生肺转移相关,miR-432和miR-100表达量随着TNM分期增加而降低,miR-646表达量Ⅲ期低于Ⅰ期和Ⅱ期,发生肺转移病人miR-432、miR-646和miR-100表达量均低于非肺转移病人（P < 0.05~P < 0.01）。Pearson相关性分析,miR-432的表达水平与miR-646和miR-100的表达水平正相关（r=0.76和0.79,P < 0.05）,而肿瘤病人中miR-646的表达水平与miR-100的表达水平呈正相关（r=0.81,P < 0.01）。结论miR-432、miR-646和miR-100在骨肉瘤组织细胞中异常表达,并且与骨肉瘤的发生及发展密切相关,为临床上骨肉瘤的诊断和治疗提供依据。     

小鼠着床前胚胎miR-125a,miR-295和miR-181b的表达

目的：研究小鼠着床前胚胎发育过程中miRNA表达水平的变化，探讨miRNA对着床前胚胎发育过程的作用．方法：建立小鼠超排、交配系统，收集着床前胚胎，提取smallRNA；采用miRNA特异RT引物进行反转录，采用SYBRGreen实时定量PCR技术，研究miR-125a，miR-295和miR-181b在小鼠着床前胚胎发育过程中表达水平的变化．结果：着床前胚胎发育的各阶段均表达miR-125a，miR-295和miR-181b；随着胚胎发育进程，miR-295的表达呈逐渐上升的趋势；miR-125a在卵母细胞到2细胞发育阶段呈下降趋势，以后随发育进程呈逐渐上升趋势．结论：小鼠着床前胚胎中表达miRNA，着床前胚胎的发育和分化过程可能受到miRNA的调控．     

miR-31、miR-21和miR-155在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及意义

目的分析mi R-31、mi R-21和mi R-155在弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)中的表达水平,并探讨其与DLBCL临床病理特征的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitativepolymerase chain reaction,RT-PCR)检测92例DLBCL患者和84例对照mi R-31、mi R-21和mi R-155的表达水平,间期荧光原位杂交技术分析患者MYC和p53基因的异常情况,根据Hans的分类方法分为生发中心B细胞型(germinal center Bcell type,GCB型)和非生发中心B细胞型(non-GCB型)。结果 DLBCL组mi R-31、mi R-21及mi R-155表达水平高于对照组(P0.05),mi R-31、mi R-21及mi R-155在non-GCB型的表达高于GCB型(P0.05)。与MYC基因没有发生重排的患者相比,mi R-31、mi R-21及mi R-155在MYC重排的患者中表达下调(P0.05)。mi R-31、mi R-21及mi R-155在p53基因丢失组的表达较基因正常组下调(P0.05)。BCL-2蛋白阳性组mi R-31、mi R-21及mi R-155的表达较BCL-2蛋白阴性组下调(P0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,mi R-31、mi R-21及mi R-155高表达的DLBCL患者生存率低于低表达的患者(P0.05)。应用单因素和多因素Cox模型分析,发现mi R-31、mi R-21及mi R-155表达水平、免疫分型、p53基因与预后差异有统计学意义(P0.05)。结论 mi R-31、mi R-21和mi R-155对DLBCL的诊断分型及预后判断有一定的参考价值,有望成为DLBCL治疗的新靶点。     

MicroRNA-21、microRNA-137 和microRNA-498在肺腺癌患者血清中表达情况及其临床意义

目的 研究肺腺癌相关MicroRNAs 在正常人群及肺腺癌患者血清中的表达情况,分析其在肺腺癌诊断中的临床价值。方法 收集59 例肺腺癌及40 例正常体检人群血清,通过实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测各组miR-498、miR-21、miR-137、miR-206、miR-138、miR-32 及miR-125b 的表达情况。统计分析两组之间miRNA 的表达差异以及单个血清miRNA 在肺腺癌诊断中的价值,进一步用统计学方法分析多个miRNAs 联合检测的诊断价值。结果 相比正常体检人群,肺腺癌患者血清中miR-498、miR-21 和miR-137 表达增加,差异有统计学意义（P <0.05）;两组miR-206、miR-138、miR-32 及miR-125b 的表达量比较,差异无统计学意义。AUC 曲线分析结果显示,miR-498 的AUC 为0.73（95%CI,0.63～ 0.81）,miR-21 的AUC 为0.83（95%CI,0.74 ～ 0.90）,miR-137 的AUC 为0.74（95%CI,0.64 ～ 0.82）。miR-498、miR-21 联合miR-137 在肺腺癌诊断中AUC 值为0.93（95%CI,0.85 ～ 0.97）,3 者联合优于单个miRNA 任一检测,差异有统计学意义（P <0.05）。结论 miR-498、miR-21 和miR-137 在肺腺癌患者血清中升高,血清中miR-498、miR-21 和miR-137 在肺腺癌的诊断中具有潜在的应用价值。     

miR-143、miR-145在膀胱癌中的表达及意义

【目的】探讨膀胱癌中miR-143、miR-145的表达及其与膀胱癌临床病理特征的关系。【方法】采用miRNA表达谱芯片、Northen blot、Real-time PCR法检测miR-143、miR-145在膀胱癌中的表达,分析miR-143、miR-145的表达与膀胱癌临床分期分级的关系。【结果】miRNA表达谱芯片、Northen blot、Real-time PCR法均提示miR-143、miR-145在膀胱癌中较癌旁正常膀胱组织中表达明显降低,差异具有统计学意义。miR-143、miR-145的低表达在不同临床分期与分级的膀胱癌中差异不明显。【结论】miR-143、miR-145在膀胱癌中明显低表达,可能与膀胱癌的发生密切相关。     

miR-101、miR-223和miR-424在肺结核诊断中的价值

目的 探寻对肺结核有潜在诊断价值的miRNA标记物.方法 以健康组、肺炎组和肺癌组作为对照组,以肺结核患者作为肺结核组,采用qRT-PCR技术检测并分析8种miRNA(miR-21、miR-29a、miR-101、miR-378、miR-146a、miR-223、miR-361-5p和miR-424)在44例肺结核组和98例对照组外周血单个核细胞中的表达差异.选取合适的miRNA采用Logistic回归进行筛选并建立回归方程,通过ROC曲线评价该方程的诊断效能.结果 Logistic回归筛选出3种对肺结核诊断有意义的miRNA分子即miR-101、miR-223和miR-424,ROC曲线分析显示这3种miRNA的组合对肺结核具有良好的诊断效能:AUC=0.939,诊断特异性为81.63％,灵敏性为90.91％.结论 miR-101、miR-223和miR-424可作为肺结核潜在的有诊断价值的标记物.     

miR-21、miR-126、miR-143和miR-373在正常宫颈组织、宫颈癌组织及Hela细胞中的表达差异

目的研究miR-21、miR-126、miR-143和miR-373在正常宫颈组织、宫颈癌组织及Hela细胞中的表达差异,探讨microRNAs(miRNAs)对宫颈癌发生的调控作用。方法荧光实时定量检测20例良性肿瘤患者的正常宫颈组织,20例宫颈癌组织及Hela细胞中miR-21、miR-126、miR-143和miR-373的表达。结果 miR-21在宫颈癌组织及Hela细胞系中高表达,在正常宫颈标本中低表达,在宫颈癌组织中相对定量为正常宫颈组织的11.3196倍(P<0.05);miR-143、miR-373在宫颈癌组织及Hela细胞中均低表达,在正常宫颈标本中高表达,miR-143、miR-373在宫颈癌组织中相对定量分别为正常宫颈组织的0.1553倍和0.4907倍(P<0.05);miR-126的表达无明显变化。结论 miRNAs与宫颈癌的发生和调控密切相关。在宫颈癌组织和Hela细胞中,miR-21表达上调,可能在宫颈癌的发生过程中发挥癌基因的作用;miR-143、miR-373表达下调可能发挥抑癌基因的作用;miR-126表达无差异,与宫颈癌无明显关系。     

溃疡性结肠炎患者miR-21和miR-206的表达及临床意义

目的观察溃疡性结肠炎(UC)患者外周血中miR-21及miR-206的表达情况,并探讨其临床意义。方法选择2016年3月至2018年3月空军军医大学(第四军医大学)唐都医院消化内科住院部及门诊部诊治的42例UC患者作为观察组,并选择同期在本科门诊进行结肠镜检查且未发现器质性疾病的42名健康体检者作为健康对照组,应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测两组受试者血清miR-21及miR-206表达情况,以miR-21及miR-206的平均值为截点,分析miR-21、miR-206表达与UC临床特征的关系,以及UC患者miR-21与miR-206表达的相关性。结果观察组患者血清miR-21及miR-206表达均显著高于健康对照组(2. 32±0. 66比1. 11±0. 36,3. 33±0. 86比1. 21±0. 65)(P <0. 01)。以观察组患者血清miR-21及miR-206表达量的平均值为截点,结果提示UC患者活动期的血清miR-21及miR-206高表达率高于缓解期患者(均P <0. 05),不同性别、年龄、病变部位、疾病分级的miR-21和miR-206高表达率比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。Pearson相关分析结果显示,UC患者血清中miR-21表达量与miR-206表达量呈正相关(r=0. 396,P=0. 009)。结论 UC患者血清中miR-21表达量随着miR-206的升高而升高,提示miR-21及miR-206在UC中呈高表达,表明miR-21及miR-206可能在UC的发生、发展中发挥重要作用。