多巴胺毒性代谢产物对前成骨细胞的增殖、分化、矿化及凋亡的影响

摘要：目的:探究多巴胺的毒性代谢产物3,4-二羟基苯乙醛（DOPAL）对前成骨细胞增殖、分化、矿化及凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:培养MC3T3-E1前成骨细胞,将细胞分为对照组及不同浓度的DOPAL加药组,采用CCK-8检测DOPAL对前成骨细胞增殖的影响;qRT-PCR检测成骨细胞标志因子mRNA相对表达;茜素红染色检测其对成骨细胞骨矿化结节的影响;Tunel及Western Blot检测DOPAL对前成骨细胞凋亡的影响;Western Blot检测α-突触核蛋白（α-S）蛋白相对表达。结果:当DOPAL的加药浓度≥0.1μmol·L-1时,对MC3T3-E1前成骨细胞增殖有显著的抑制作用,与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。与对照组相比,DOPAL各浓度组的成骨细胞标志因子mRNA相对表达显著下调（P<0.05或P<0.01）,细胞凋亡标志因子cleaved-caspase-3蛋白相对表达、细胞凋亡率、α-S蛋白相对表达显著升高（P<0.01）;DOPAL 0.1μmol·L-1和0.5μmol·L-1两个浓度组以上各指标差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。未加入骨诱导剂的对照组,并未出现矿化结节;与骨诱导组相比,DOPAL 0.1μmol·L-1和0.5μmol·L-1组抑制MC3T3-E1细胞分化成熟。结论:DOPAL抑制前成骨细胞的增殖、分化及矿化作用,且促进前成骨细胞的凋亡,可能与前成骨细胞中α-S蛋白相对表达增加从而聚集形成有神经毒性的寡聚体有关,该实验为在体研究奠定基础。     

吗啡对体外培养正常女性成骨细胞的增殖及BGP mRNA表达的影响

目的:观察阿片类药物是否对体外培养正常女性成骨细胞增殖有影响。方法:用胰酶-胶原酶消化法从正常女性松质骨中分离培养成骨细胞,用茜素红染色法、改良Gomonri钙钴法鉴定成骨细胞;制备不同浓度的吗啡及其拮抗剂纳洛酮,作用于体外培养的成人正常成骨细胞上,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测吗啡对其的影响;通过RT-PCR法半定量分析不同浓度的吗啡及其拮抗剂纳洛酮对成骨细胞骨钙素(BGP mRNA)表达的影响。结果:用酶消化法分离的人成骨细胞,在体外培养时可合成碱性磷酸酶(ALP)、形成钙化结节。不同浓度的吗啡组与对照组OD490(optical density,OD)值相比差异有显著性(P<0.001);1×10-7mol·L-1、1×10-6mol·L-1、1×10-5mol·L-1和1×10-4mol·L-1吗啡组的细胞增殖速度依次降低(P<0.001);而吗啡(10-5mol·L-1)+纳洛酮(10-5mol·L-1)组与对照组OD490值相比差异不明显(P>0.05)。吗啡作用24 h呈剂量依赖性抑制BGPmRNA的表达。结论:用酶消化法进行人成骨细胞培养,简捷易行,可培养大量高纯度人成骨细胞供研究使用;外源性阿片类药物吗啡可直接抑制人成骨细胞的增殖。阿片类物质可以抑制成骨细胞内BGP mRNA的表达。     

ERK1/2信号通路在角质细胞生长因子-2诱导角膜基质细胞增殖中的作用

目的观察角质细胞生长因子(keratinocyte growthfactor-2,KGF-2)对角膜基质细胞的增殖作用及ERK1/2信号在角膜基质细胞增殖中的调控作用,探讨KGF-2对角膜基质细胞增殖的可能机制。方法体外培养角膜基质细胞,MTT法检测细胞增殖,Western blot检测磷酸化ERK1/2表达水平。结果 KGF-2在1～100 mg·L-1对角膜基质细胞有明显的促进增殖作用且呈现剂量-效应关系;100 mg·L-1 KGF-2处理角膜基质细胞,5、15、30 min后ERK1/2磷酸化表达水平明显升高,60、90、120、180 min后ERK1/2磷酸化表达水平逐渐减弱;20μmol.L-1 ERK1/2抑制剂PD98059可抑制KGF-2对角膜基质细胞的促增殖作用。结论 KGF-2激活ERK1/2信号通路,提高细胞增殖率,可被抑制剂PD98059阻断;ERK1/2信号通路调控角膜基质细胞的增殖,在角膜基质细胞损伤中发挥作用。     

丙泊酚下调miR-93-5p表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭的影响

摘要：目的:探讨丙泊酚对miR-93-5p以及人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及侵袭的影响。方法:培养对数期MDA-MB-231细胞,进行细胞毒性试验,筛选最佳丙泊酚处理浓度与时间,实验分为空白对照组（0.1%DMSO培养基）、阳性对照组(30μmol·L-1环磷酰胺)、丙泊酚1,2,5 mg·L-1浓度组。CCK8法检测细胞增殖,细胞划痕及Transwell实验检测细胞迁移侵袭情况,免疫印迹法（Western Blot）检测增殖相关蛋白增殖细胞核抗原（PCNA）、侵袭迁移相关蛋白金属机制蛋白酶2（MMP-2）、金属机制蛋白酶2（MMP-9）蛋白表达情况,定量即时聚合酶链锁反应（qRT-PCR）检测细胞miR-93-5p表达情况。结果:与空白对照组相比,阳性对照组与丙泊酚各浓度组MDA-MB-231细胞增殖抑制率、迁移抑制率显著升高,裸鼠肿瘤体积、侵袭细胞数量及PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白表达、miR-93-5p表达显著降低（P<0.05）。与阳性对照组相比,1 mg·L-1和2 mg·L-1丙泊酚组MDA-MB-231细胞裸鼠肿瘤体积、侵袭细胞数量及PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白表达、miR-93-5p表达依次升高,增殖抑制率、迁移抑制率依次降低（P<0.05）。结论:丙泊酚可能通过下调miR-93-5p表达,抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭能力发挥抗肿瘤作用。     

羟基红花黄色素A对氧化低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的探讨羟基红花黄色素A(HSYA)抑制氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖与细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和丝裂原活化蛋白激酶磷酯酶-1(MKP-1)基因转录及蛋白表达之间的关系。方法 HSYA 10μmol.L-1和ox-LDL 35 mg.L-1与VSMC共培育48 h,MTT检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞周期,逆转录PCR(RT-PCR)观察ERK1/2和MKP-1基因表达,Western印迹法观察ERK1/2和MKP-1蛋白表达。结果与ox-LDL 35 mg.L-1模型组比较,加入HSYA 10μmol.L-1组细胞存活率明显下降,G0/G1期细胞明显增多,ERK1 mRNA表达下降了42.2%(P<0.01),MKP-1 mRNA显著增加了86.9%(P<0.01),p-ERK1/2蛋白表达降低了39.9%(P<0.01),MKP-1蛋白表达增加了80.6%(P<0.01);加入PD98059 10μmol.L-1组,细胞存活率明显降低了58.3%(P<0.01),G0/G1期细胞明显增多(P<0.01),ERK1 mRNA表达下降了45.9%(P<0.01);p-ERK1/2蛋白表达下降了45.9%(P<0.01);PD98059 10μmol.L-1+HSYA 10μmol.L-1同时加入,细胞生存率下降了61.9%(P<0.01),G0/G1期细胞明显增多(P<0.01),ERK1 mRNA表达进一步减少(P<0.01),MKP-1 mRNA增加了110%(P<0.01),p-ERK1/2蛋白表达下降了51.2%(P<0.01),MKP-1蛋白表达增加了62.4%(P<0.01)。结论 HSYA通过增强MKP-1蛋白表达、降低p-ERK1/2蛋白活性和抑制细胞周期运转的机制抑制VSMC增殖。     

青藤碱通过COX-2/VEGF通路抑制胃癌MGC803细胞迁移和侵袭的研究

摘要：目的:探讨青藤碱对胃癌MGC803细胞迁移和侵袭的影响及机制。方法:将胃癌MGC803细胞随机分成4组:对照组、青藤碱300,600,1 200 mg·L-1组,采用划痕愈合实验检测细胞迁移率,Transwell实验检测迁移细胞数和侵袭细胞数,qRTPCR检测环氧合酶2（COX-2）、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶9（MMP9）、基质金属蛋白酶2（MMP2） mRNA表达,Western blot检测COX-2、VEGF、MMP9、MMP2蛋白表达。结果:青藤碱300,600,1 200mg·L-1组胃癌MGC803细胞迁移率、迁移细胞数、侵袭细胞数、COX-2、VEGF、MMP9、MMP2 mRNA和蛋白表达显著低于对照组（P<0.05或P<0.01）。结论:青藤碱抑制胃癌MGC803细胞迁移和侵袭,其机制与下调COX-2、VEGF、MMP9、MMP2表达有关。     

基于Nrf2/HO-1通路探讨葛根素对高糖诱导成骨细胞凋亡的影响

摘要：目的:探讨葛根素对高糖诱导的成骨细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法:体外培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1细胞,试验分为对照组(葡萄糖浓度为5.5 mmol·L-1)、高糖组(葡萄糖浓度为33 mmol·L-1)、高糖+葛根素组(葛根素终浓度分别为0.1,1,10μmol·L-1)。采用CCK-8法检测葛根素对高糖诱导的MC3T3-E1细胞活力影响;采用流式细胞法观察葛根素对高糖诱导的MC3T3-E1细胞凋亡能力的影响;采用免疫印迹法（WB）检测凋亡相关蛋白以及核相关E2因子2/血红素加氧酶-1（Nrf2/HO-1）信号通路相关蛋白表达;添加Nrf2/HO-1信号通路特异性抑制剂ML385检测其对细胞凋亡的影响。结果:与对照组相比,高糖组细胞活力、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）蛋白水平、HO-1蛋白水平及细胞核Nrf2蛋白水平降低（P<0.05）,细胞凋亡率、Bcl-2相关X蛋白质（Bax）、cleaved-caspase 3蛋白水平及细胞浆Nrf2蛋白水平升高（P<0.05）;与高糖组相比,高糖+各浓度葛根素组细胞活力、Bcl-2蛋白水平、HO-1蛋白水平及细胞核Nrf2蛋白水平依次升高（P<0.05）,细胞凋亡率、Bax、cleaved-caspase 3蛋白水平及细胞浆Nrf2蛋白水平依次降低（P<0.05）;与高糖+高浓度葛根素相比,高糖+高浓度葛根素+抑制剂组细胞凋亡率、Bax、cleaved-caspase 3蛋白表达升高（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达降低（P<0.05）。结论:葛根素可能通过激活Nrf2/HO-1信号通路,抑制高糖诱导的成骨细胞凋亡。     

HHT对CNE-2Z细胞caspase-3的蛋白和mRNA表达的影响

目的　了解高三尖杉酯碱 (HHT)对鼻咽癌细胞CNE 2Z的caspase 3蛋白和mRNA表达的影响。方法　分别用HHT 0 (对照 )、0 12 5、0 2 5、0 5、1mg·L-1处理CNE 2Z细胞 8h ,采用WesternBlot分析caspase 3酶原蛋白表达的变化 ,用半定量RT PCR检测caspase 3mRNA表达的改变。结果　随HHT处理浓度的增加 ,caspase 3酶原的蛋白表达的减少具有统计学意义 (P <0 0 1) ,而caspase 3mRNA的表达的增高具有统计学意义 (P <0 0 1)。 0 2 5、0 5、1mg·L-1HHT处理组caspase 3酶原的蛋白表达均明显低于对照组 (P <0 0 1) ,1mg·L-1HHT处理组caspase 3mRNA的表达明显高于对照组(P <0 0 1)。结论　HHT可剂量依赖性地下调caspase 3酶原的蛋白表达 ,剂量依赖性地上调caspase 3mRNA的表达 ,HHT处理CNE 2Z细胞过程中可能有caspase 3的活化     

大蒜素对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡的影响

目的 研究大蒜素(Allitridi)对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 分别以不同浓度大蒜素(25、50、100 mg·L-1)和顺铂(1.8 mg·L-1)干预对数生长期人喉癌Hep-2细胞,药物干预24 h后经Hoechst染色后利用倒置显微镜观察细胞的形态,采用MTT比色法测定大蒜素对Hep-2细胞的增殖抑制作用,采用FCM测定细胞周期分布、检测细胞凋亡率;采用RT-PCR检测Bax、Bcl-2 mRNA表达水平,Western-blot检测caspase-3蛋白表达.结果 大蒜素各组和顺铂1.8 mg·L-1组人喉癌Hep-2细胞较空白对照组出现不同程度损伤,以大蒜素100 mg·L-1组损伤最为严重;大蒜素(50、100 mg·L-1)组和顺铂1.8 mg·L-1组人喉癌Hep-2细胞增殖抑制率显著升高,细胞周期G0/G1期显著增长、G2/M期显著缩短,细胞凋亡数量明显增多、凋亡率显著升高,凋亡相关基因bcl-2 mRNA表达显著下调而Bax mRNA显著上调、Bax/bcl-2表达比值显著升高,促凋亡蛋白caspase-3表达显著上调,上述均差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论 大蒜素对人喉癌Hep-2细胞生长具有抑制作用,其机制可能与大蒜素能够阻滞人喉癌Hep-2细胞周期进程、抑制细胞增殖并促进其凋亡有关.     

ERK1/2参与丙泊酚预处理对肾性高血压大鼠离体心肌缺血再灌注损伤的作用

目的探讨丙泊酚预处理对肾性高血压大鼠离体缺血再灌注心肌的作用及细胞外信号调节激酶(ERK1/2)活化在其中的可能机制。方法在Langendorff离体心脏灌注模型上,64只肾性高血压大鼠随机分为8组(n=8):对照组(CTRL组),缺血再灌注组(ISCH组),DMSO组,30、100和300μmol.L-1丙泊酚预处理组(P30、P100和P300组),ERK1/2激酶抑制剂PD98059组(PD组)及PD98059+100μmol.L-1丙泊酚预处理组(PD+P100组)。持续监测心功能指标,实验末生化比色法检测心肌细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,W estern B lotting方法半定量测定p-ERK1/2蛋白表达水平。结果再灌注60 m in末,ISCH组心功能较CTRL组恶化(P<0.01),DMSO组、P30组、P300组和PD组心功能指标与ISCH组相比未见差异,P100组心功能恢复程度高于ISCH组(P<0.01),PD98059能拮抗100μmol.L-1丙泊酚预处理引起的心功能改善。P100组MDA含量低于ISCH组和PD+P100组,SOD活性高于ISCH组和PD+P100组。P100组胞浆p-ERK1、胞核p-ERK1/2活性较ISCH组升高,PD+P100组较P100组胞核p-ERK1/2活性明显降低(P<0.01)。结论100μmol.L-1丙泊酚预处理减轻了肾性高血压大鼠离体心肌缺血再灌注损伤,其机制可能涉及心肌细胞p-ERK1/2,尤其是细胞核p-ERK1/2活性的增加。     

蕨麻多酚抗缺氧诱导的大鼠心肌细胞凋亡作用研究

摘要：目的:探究蕨麻多酚在缺氧条件下对心肌细胞的抗凋亡作用。方法:取新生1～3 d SD大鼠心肌细胞进行原代培养,随机分成5组:正常对照组、缺氧损伤模型组、蕨麻多酚低(0.11 mg·ml-1)、中(0.22 mg·ml-1)、高(0.44 mg·ml-1)浓度组。细胞在5%CO2-95%N2环境下37℃培养6 h,建立缺氧损伤模型;流式细胞术检测细胞凋亡率; Hoechst-PI荧光染色法观察缺氧损伤后心肌细胞凋亡情况;逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测各组细胞p53、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax） mRNA的表达水平;蛋白质印迹法（Western Blotting）检测各组细胞p53、Bcl-2、Bax蛋白的表达水平。结果:与正常对照组相比,缺氧损伤模型组细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,Hoechst-PI染色可见呈亮蓝色荧光的早期凋亡细胞及大量亮红色荧光的晚期凋亡或死亡细胞; p53、Bax mRNA及蛋白表达显著升高（P<0.01）,Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著下降（P<0.01）;蕨麻多酚干预后细胞较缺氧损伤模型组凋亡率显著降低（P<0.01）,Hoechst-PI染色亮红色荧光的晚期凋亡或死亡细胞数量减少。蕨麻多酚各浓度组p53、Bax mRNA及蛋白表达均显著降低（P<0.01）,Bcl-2 mRNA及蛋白表达均显著升高（P<0.01）。结论:缺氧时蕨麻多酚能够通过下调心肌细胞p53和Bax水平,上调Bcl-2表达,抑制心肌细胞凋亡,从而减轻缺氧导致的心肌损伤。     

左归丸含药血清通过ERK/Smads信号通路干预MC3T3-E1细胞的功能基因表达

目的研究ERK1/2信号通路在左归丸含药血清调控MC3T3-E1细胞基因表达中的作用。方法以倍美力为阳性对照药,对SD♀大鼠灌服高、中、低剂量的左归丸混悬液,d7腹主动脉取血分离含药血清。采用MTT法检测左归丸含药血清和PD98059对MC3T3-E1细胞增殖作用的影响,采用Western blot法检测ERK1/2蛋白的磷酸化水平及TGF-β1、Smad4蛋白表达,采用Real Time RT-PCR法检测Cbfα1、COLⅠmRNA表达。结果左归丸含药血清和倍美力能促进MC3T3-E1细胞增殖,诱导ERK1/2蛋白的磷酸化,促进TGF-β1、Smad4蛋白分泌,上调其Cbfα1、COLⅠmRNA表达;加入PD98059后MC3T3-E1细胞增殖下降、ERK1/2蛋白的磷酸化水平降低、TGF-β1蛋白表达进一步升高、Smad4蛋白表达降低、Cbfα1、COLⅠmRNA表达下调。结论左归丸能有效促进成骨细胞增殖和分化;左归丸可能是通过发挥雌激素样作用调控了ERK/Smads信号通路,从而达到防治骨质疏松的目的。     

木樨草素通过抑制miR-142-3p降低LPS诱导的肺泡巨噬细胞损伤

摘要：目的:探讨木樨草素对脂多糖（LPS）诱导的肺泡巨噬细胞损伤的影响及其可能作用机制。方法:采用1 mg·L-1的LPS诱导大鼠肺泡巨噬细胞NR8383建立细胞损伤模型,并用不同剂量(0.025,0.05,0.1,0.2,0.4,0.8,1.6,3.2,6.4μg·ml-1)的木樨草素处理NR8383细胞。实验分为对照组、LPS组(1 mg·L-1)、LPS(1 mg·L-1)+木樨草素低、中、高剂量组(0.1,0.3,0.9μg·ml-1)、LPS(1 mg·L-1)+anti-miR-NC组、LPS(1 mg·L-1)+miR-142-3p inhibor组、LPS(1 mg·L-1)+木樨草素(0.9μg·ml-1)+miR-142-3p mimic组;采用MTT法检测木樨草素对NR8383细胞存活率的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA法检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）的水平;qRT-PCR法检测miR-142-3p的表达量;Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（Caspase3）、Cleaved-Caspase3蛋白表达量。结果:随着木樨草素浓度的升高,LPS组细胞存活率升高,而对照组细胞存活率无明显变化;与对照组比较,LPS组细胞凋亡率、TNF-α和IL-1β的水平、miR-142-3p的表达量、Caspase3、Cleaved-Caspase3蛋白表达升高（P<0.05）;与LPS组比较,LPS+木樨草素低、中、高剂量组细胞凋亡率、TNF-α和IL-1β的水平、miR-142-3p的表达量、Caspase3、Cleaved-Caspase3蛋白表达降低（P<0.05）,且呈剂量依赖性（P<0.05）;与LPS+anti-miR-NC组比较,LPS+miR-142-3p inhibor组细胞凋亡率、TNF-α和IL-1β的水平、Caspase3、Cleaved-Caspase3蛋白表达降低（P<0.05）;与LPS+木樨草素组比较,LPS+木樨草素+miR-142-3p mimic组细胞凋亡率、TNF-α和IL-1β的水平、Caspase3、Cleaved-Caspase3蛋白表达升高（P<0.05）。结论:木樨草素通过抑制miR-142-3p表达可抑制LPS诱导的肺泡巨噬细胞凋亡,改善炎症反应。     

黄精多糖联合miR-204调控骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的研究

摘要：目的:探讨黄精多糖（PSP）联合微小RNA（miR）-204对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响。方法:分离培养大鼠关节软骨细胞,利用白细胞介素1β（IL-1β）诱导软骨细胞构建骨关节炎软骨细胞模型,用不同浓度(30,120,480 mg·L-1)的PSP干预IL-1β诱导的软骨细胞,分别将miR-204 mimics转染至IL-1β诱导的软骨细胞中,再用PSP处理细胞。采用MTT法与流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡率; ELISA检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）的表达水平; Western blot检测细胞周期蛋白1（Cyclin D1）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved-caspase3）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）信号通路相关蛋白表达。结果:与正常对照组比较,IL-1β组软骨细胞存活率与Cyclin D1、Bcl-2、p-PI3K、p-AKT蛋白水平显著降低（P<0.05）,细胞凋亡率与TNF-α、IL-6的水平及cleaved-caspase-3、Bax蛋白水平显著升高（P<0.05）;与IL-1β组比较,IL-1β+PSP 30 mg·L-1组、IL-1β+PSP 120 mg·L-1组、IL-1β+PSP 480 mg·L-1组存活率升高（P<0.05）,凋亡率及TNF-α、IL-6的水平降低（P<0.05）;与IL-1β+miR-con组比较,IL-1β+miR-204组存活率升高（P<0.05）,凋亡率及TNF-α、IL-6的水平降低（P<0.05）;与IL-1β+PSP 120 mg·L-1组比较,IL-1β+PSP+miR-204组存活率与Cyclin D1、Bcl-2、p-PI3K、p-AKT蛋白水平升高（P<0.05）,凋亡率、TNF-α、IL-6水平及cleaved caspase-3、Bax蛋白水平降低（P<0.05）。结论:黄精多糖联合miR-204可促进骨关节炎软骨细胞增殖,抑制细胞凋亡,其作用机制可能与激活PI3K/AKT信号通路有关。     

大明胶囊对糖尿病大鼠心肌L型Ca~(2+)通道蛋白mRNA表达的影响

目的探讨大明胶囊对2型糖尿病大鼠心肌L型Ca2+通道蛋白mRNA表达的影响。方法建立2型糖尿病大鼠模型,筛选空腹血糖值大于16.7mmol·L-1的大鼠随机分组:大明胶囊大(200mg·kg-1·d-1)、中(100mg·kg-1·d-1)、小(50mg·kg-1·d-1)剂量组、糖尿病模型组、苯乙双胍(75mg·kg-1·d-1)组,连续用药14d,用快速血糖仪测空腹血糖值。提取心肌总RNA,采用逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)的方法,观察大明胶囊治疗后2型糖尿病大鼠心肌L型Ca2+通道蛋白mRNA水平的变化。结果2型糖尿病组大鼠心肌L型Ca2+通道蛋白mRNA表达高于正常组大鼠(P<0.01),经大明胶囊治疗后的心肌L型Ca2+通道蛋白mRNA表达降低(P<0.05),空腹血糖也明显下降。结论大明胶囊对2型糖尿病大鼠有明显的降糖作用,并且可以降低2型糖尿病大鼠心肌L型Ca2+通道蛋白mRNA的表达。     

脂多糖通过LDLr诱导巨噬细胞泡沫化:炎症应激下巨噬细胞泡沫化的另一条通路

目的研究炎症介质-脂多糖(LPS)诱导的炎症应激是否通过扰乱固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白-固醇调节元件结合蛋白2(SCAP-SREBP2)复合物介导的低密度脂蛋白受体(LDLr)负反馈调控,增加THP-1巨噬细胞对非修饰低密度脂蛋白胆固醇(LDL)摄取,导致泡沫细胞形成。方法诱导分化成功的THP-1巨噬细胞在无血清培养基中培养4 h后,分为对照组(继续无血清培养),高脂组(加入LDL负荷,终浓度为25 mg·L-1),高脂加炎症刺激组(加入LDL负荷,终浓度为25 mg·L-1,同时加入炎症介质LPS,终浓度200μg·L-1),单纯炎症刺激组(加入炎症介质LPS,终浓度200μg·L-1),以上各组细胞培养24 h后收获。ELISA法检测细胞培养基中TNF-α浓度,酶化学法检测细胞内胆固醇浓度,琼脂糖电泳检测LDL氧化程度,Real time PCR法检测LDLr、SREBP2和SCAP mRNA表达水平,Western blot法检测LDLr、SREBP2和SCAP蛋白表达,激光共聚焦检测SCAP在内质网与高尔基体间的转位情况。结果细胞内胆固醇测定发现,炎症介质LPS通过增加THP-1巨噬细胞对非修饰LDL摄取,导致巨噬细胞转变为泡沫细胞。在无炎症介质LPS时,25 mg·L-1LDL减少LDLr mRNA和蛋白表达(P<0.05)。然而,LPS增加LDLr mRNA和蛋白表达,逆转25 mg·L-1LDL对LDLr的抑制效应,不恰当的增加了巨噬细胞对LDL摄取(P<0.05),LPS刺激也导致了SCAP和SREBP2的mRNA和蛋白过表达(P<0.05),同时促进了SCAP从内质网转移到高尔基体。这些结果提示LPS干扰了胆固醇介导的LDLr负反馈调控,使非修饰LDL在巨噬细胞内堆积,导致泡沫细胞形成。结论本研究提示,在LPS诱导的炎症应激状态条件下,天然LDL可以通过LDLr被巨噬细胞大量摄取入细胞内,导致泡沫细胞形成,这可能是巨噬细胞泡沫化的另一条通路。     

膦甲酸钠干预高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化的研究

目的　观察不同浓度的膦甲酸钠 (PFA)对高磷诱导的牛主动脉血管平滑肌细胞钙沉积和骨钙素 (OC)表达的影响。方法　用不同磷浓度 (正常磷Pi1.5mmol·L-1、高磷Pi2 0mmol·L-1)及含不同浓度膦甲酸钠的培养液 ,体外培养牛主动脉平滑肌细胞 ,观察血管平滑肌细胞钙沉积及骨钙素表达。用甲ο 酚酞络合酮方法测定钙含量 ,BCA法测定蛋白含量。培养上清液中骨钙素浓度用放射免疫法测定 ,用蛋白含量标化钙含量、骨钙素的浓度 ,RT PCR观察骨钙素mR NA的表达。结果　①高磷组较正常磷组平滑肌细胞钙沉积增加 :细胞培养 6d后 ,高磷组 (77 187± 11 6 92 )mg·g-1Pro ,正常磷组 (2 5 76 8± 1 75 0 )mg·g-1Pro ,P <0 0 1;②膦甲酸钠能有效地抑制钙沉积 :培养 6d ,高磷 +PFA 1 0mmol·L-1组 (37 72 9± 5 899)mg·g-1Pro ,与高磷未干预组相比 ,P <0 0 1;③高磷组骨钙素表达明显增高。高磷组与正常磷组相比 ,培养上清液中骨钙素水平 :(1 5 0 3× 10 -2 ±2 6 0 1× 10 -3 )mg·g-1Pro对 (2 981× 10 -3 ± 8 382× 10 -4)mg·g-1Pro ,P <0 0 1;平滑肌细胞骨钙素mRNA表达 (OC/GAPDH) :1 886± 0 16 5对 0 75 2± 0 0 5 2 1,P <0 0 1;④膦甲酸钠能有效地抑制骨钙素的表达。高磷 +PFA 1 0mmol·L-1组与高磷组?     

丹参素经PI3K/Akt/Bax信号通路对脓毒症大鼠脑损伤的改善作用

摘要：目的:探讨丹参素经磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（Akt）/促凋亡基因（Bax）信号通路对脓毒症大鼠脑损伤的改善作用。方法:100只SD大鼠随机分为5组:假手术组、模型组、乌司他丁组（20 mg·kg-1）、丹参素低、高剂量组（40,80 mg·kg-1）,每组20只。除假手术组外,其余各组建立脓毒症模型。乌司他丁组、丹参素低、高剂量组给予相应药物灌胃,假手术组及模型组给予等体积的生理盐水,1次/d,持续给药7 d。实验结束后,评估大鼠神经功能,观察大鼠海马神经元病理结构,测定大鼠海马组织PI3K、Akt、Bax mRNA和蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组Basso-BeattieBresnahan（BBB）评分、经过原平台位置的次数、原平台象限停留时间、PI3K、Akt mRNA和蛋白表达水平明显降低,逃避潜伏期、Bax mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。与模型组比较,乌司他丁组和丹参素低、高剂量组BBB评分、经过原平台位置的次数、原平台象限停留时间、PI3K、Akt mRNA和蛋白表达水平明显升高,逃避潜伏期、Bax mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。与乌司他丁组比较,丹参素低剂量组各指标差异有统计学意义（P<0.05）,高剂量组与其作用相似（P>0.05）。结论:丹参素可减轻脓毒症大鼠脑损伤,其机制与丹参素激活PI3K/Akt信号通路进而抑制Bax的表达有关。     

冬凌草乙素联合放疗对肺癌A549细胞凋亡的协同作用及miR-16-5p/WEE1信号轴的影响

摘要：目的:探讨冬凌草乙素联合放疗对肺癌A549细胞凋亡的协同作用及微小RNA-16-5p（miR-16-5p）/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1（WEE1）信号轴的影响。方法:设A549细胞组、放疗组(6 Gy·min-1的固定剂量率发射,照射孵育24 h)、冬凌草乙素组(20 mg·L-1)、放疗+冬凌草乙素组(冬凌草乙素浓度为20 mg·L-1,并以6 Gy·min-1的固定剂量率发射,照射孵育24 h);培养结束后,CCK-8法测定细胞增殖水平,Transwell腔室系统测定细胞侵袭水平,流式细胞仪测定细胞凋亡水平,实时荧光逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及蛋白免疫印迹法测定细胞miR-16-5p、WEE1 mRNA和蛋白水平。结果:与A549细胞组比较,放疗组、冬凌草乙素组、放疗+冬凌草乙素组光密度（OD）值、存活率、穿膜数、WEE1 mRNA和蛋白表达显著降低（P<0.05）,凋亡率、miR-16-5p表达显著升高（P<0.05）;与放疗组、冬凌草乙素组比较,放疗+冬凌草乙素组OD值、存活率、穿膜数、WEE1 mRNA和蛋白表达显著降低（P<0.05）,凋亡率、miR-16-5p表达显著升高（P<0.05）。结论:冬凌草乙素联合放疗对肺癌A549细胞凋亡具有协同作用,其机制可能与冬凌草乙素促进miR-16-5p的表达进而抑制WEE1表达有关。     

槐定碱对缺氧复氧星形胶质细胞炎症因子释放和细胞凋亡的影响

摘要：目的:研究槐定碱（sophoridine）对缺氧复氧星形胶质细胞炎症因子释放和细胞凋亡的影响及机制。方法:星形胶质细胞分成对照组、缺氧复氧（H/R）组、sophoridine低、中、高剂量组(10,20,40 mg·L-1)、sophoridine(40 mg·L-1)+pcDNA(阴性对照载体组、sophoridine(40 mg·L-1)+pcDNA-Toll样受体4（TLR4）（TLR4过表达载体）组。CCK-8法检测细胞增殖活性变化,流式细胞术检测细胞凋亡变化,Western blot法检测B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、TLR4蛋白表达,ELISA法检测细胞分泌的肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）变化。结果:与对照组比较,H/R组星形胶质细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中Bax蛋白表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6增多,TLR4蛋白水平升高（P<0.05）。与H/R组比较,sophoridine低、中、高剂量组星形胶质细胞增殖活性逐渐升高,细胞凋亡率逐渐降低,细胞中Bax蛋白表达逐渐减少,Bcl-2蛋白表达逐渐增多,细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6逐渐减少,TLR4蛋白水平逐渐降低（P<0.05）,且呈剂量相关性（P<0.05）。与sophoridine+pcDNA组比较,sophoridine+pcDNA-TLR4组星形胶质细胞中TLR4蛋白表达增多,细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中Bax蛋白表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6增多（P<0.05）。结论:槐定碱通过下调TLR4从而抑制缺氧复氧星形胶质细胞炎症因子的释放和细胞凋亡