微小 RNA-335-3p靶向小鼠双微体基因调控骨髓瘤细胞的增殖和凋亡

目的 探讨微小RNA(miR)-335-3p对骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 2018年5月至2019年1月,培养正常骨髓细胞MNC和骨髓瘤细胞KM3和U266,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-335-3p表达水平.将KM3细胞分为miR-NC组(转染模拟对照序列)、miR-335-3p组[转染miR-335-3p模拟物(miR-335-3p mimics)]、pcDNA3.1+miR-335-3p组(共转染空载体和miR-335-3p mimics)和pcDNA3.1-MDM2+miR-335-3p组[共转染小鼠双微体基因(MDM2)过表达载体和miR-335-3p mimics],MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡的影响,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(P21)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白和Bcl-2相关X(Bax)蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验验证KM3细胞中miR-335-3p与MDM2调控关系.结果 骨髓瘤细胞KM3和U266中miR-335-3p表达水平分别为0.24±0.01、0.38±0.02,显著低于正常骨髓细胞MNC中的miR-335-3p表达水平0.77±0.03(均P<0.05).与miR-NC组比较,miR-335-3p组KM3细胞吸光度[48 h:(0.60±0.03)比(0.99±0.06);72 h:(0.82±0.05)比(1.67±0.07)]、细胞中cyclin D1和Bcl-2蛋白表达均降低(均P<0.05),细胞凋亡率[(24.31±0.99)％比(8.13±0.83)％]、细胞中P21和Bax蛋白表达均升高(均P<0.05).miR-335-3p在KM3细胞中负调控MDM2表达.与pcDNA3.1+miR-335-3p组比较,pcDNA3.1-MDM2+miR-335-3p组KM3细胞吸光度[48 h:(0.80±0.05)比(0.63±0.04);72 h:(1.28±0.06)比(0.88±0.05)]、细胞中cyclin D1和Bcl-2蛋白表达均升高(均P<0.05),凋亡率[(15.34±0.66)％比(23.98±1.41)％]、细胞中P21、Bax蛋白表达均降低(均P<0.05).结论 miR-335-3p可能通过下调MDM2表达抑制骨髓瘤细胞的增殖,并诱导细胞凋亡.     

长链非编码 SNHG15靶向 miR-141对甲状腺癌细胞侵袭及凋亡的影响研究

目的 探讨长链非编码(lncRNA)核仁小RNA宿主基因15(SNHG15)靶向调节微小RNA-141(miR-141)对甲状腺癌细胞侵袭、凋亡影响及机制.方法 本研究起止时间为2018年10月至2019年5月,参照Lipofectamine 2000说明将SNHG15小干扰RNA(siRNA)、siRNA阴性对照(siRNA control)、miR-141抑制剂(miR-141 inhibitor)或抑制剂阴性对照(inhibitor control)转染至甲状腺癌FRO细胞,细胞随机分组空白对照(si-control)组、转染阴性对照(si-NC)组、转染SNHG15 siRNA(si-SNHG15)组、转染SNHG15 siRNA和inhibitor control(si-SNHG15+anti-control)组和转染SNHG15 siRNA和miR-141 inhibitor(si-SNHG15+anti-miR-141)组,,转染48 h,qRT-PCR检测SNHG15和miR-141 mRNA表达;Transwell小室及流式细胞术分别检测细胞侵袭能力及凋亡率;双荧光素酶报告系统检测SNHG15和miR-141的靶向关系.Western blotting检测上皮钙黏素(E-cadherin)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达.结果 与si-control组比较,si-SNHG15组中SNHG15 mRNA表达[(1.000)比(0.263±0.032)]明显降低,细胞侵袭能力[(168.6±7.1)个比(78.2±3.3)个]明显降低,凋亡率[(4.31±0.42)％比(33.11±1.69)％]明显升高,E-cadherin[(0.105±0.011)比(0.602±0.058)]和Bax表达[(0.049±0.008)比(0.263±0.028)]明显升高,Bcl-2表达[(0.587±0.063)比(0.131±0.015)]明显降低(P<0.05).SNHG15与miR-141存在靶向关系.与si-SNHG15+anti-control组比较,si-SNHG15+anti-miR-141组细胞侵袭能力[(79.9±4.2)个比(130.3±5.2)个]明显升高,凋亡率[(34.08±1.63)％比(15.66±0.87)％]降低,E-cadherin[(0.641±0.062)比(0.309±0.032)]和Bax表达[(0.282±0.030)比(0.144±0.015)]明显降低,Bcl-2表达[(0.138±0.017)比(0.478±0.052)]明显升高(P<0.05).结论 lncRNA SNHG15可靶向调节miR-141影响甲状腺癌细胞侵袭和凋亡,机制与调节E-cadherin、Bcl-2和Bax表达有关.     

miR-187通过靶向胰岛素生长因子 -1受体基因对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究miR-187通过靶向胰岛素生长因子-1受体(IGF-1R)基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测人正常乳腺上皮细胞HBL-100和不同乳腺癌细胞中miR-187的表达水平.在MDA-MB-231细胞中分别转染miR-187 mimics(miR-187组)或阴性对照mimics-NC(miR-NC组),以未转染的MDA-MB-231细胞为空白对照(空白对照组).采用qRT-PCR和蛋白免疫印迹(Western blotting)法分别检测转染后细胞中miR-187和IGF-1R蛋白表达水平,噻唑蓝(MTT)法和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡情况.Western blot检测与增殖和凋亡相关蛋白表达水平.采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-187与IGF-1R靶向调控关系.结果 与人正常乳腺上皮细胞HBL-100(1.00±0.10)相比,乳腺癌细胞中miR-187表达水平明显降低(P<0.05),在MDA-MB-231细胞中表达水平最低(0.11±0.01).与miR-NC组和空白对照组相比,miR-187组的miR-187表达水平明显上调[(0.98±0.09)、(1.00±0.11)比(3.18±0.33),P<0.05],IGF-1R蛋白表达水平明显下调[(0.28±0.03)、(0.27±0.03)比(0.09±0.01),P<0.05],细胞增殖活力OD值[(0.79±0.08)、(0.82±0.08)比(0.43±0.04)]和PCNA表达水平[(0.39±0.04)、(0.40±0.04)比(0.20±0.02)]均显著降低(P<0.05),凋亡率[(5.02±1.13)％、(4.61±1.01)％比(20.38±3.44)％]和Cleaved Caspase-3表达水平[(0.09±0.02)、(0.08±0.02)比(0.58±0.07)]显著升高(P<0.05).双荧光素酶报告基因实验显示miR-187与IGF-1R基因3'非编码区(UTR)存在靶向关系.结论 miR-187对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有增殖抑制和凋亡诱导作用,其作用机制与靶向抑制IGF-1R基因表达有关.     

微小 RNA-595在人晶状体上皮细胞凋亡中的调控作用

目的 探讨微小RNA-595(miR-595)在年龄相关性白内障晶状体组织中的表达情况及其对人晶状体上皮细胞凋亡的影响与机制.方法 收集年龄相关性白内障病人晶状体前囊膜组织(白内障组)及正常供体眼球晶状体前囊膜组织(健康组)标本,以H2O2诱导构建人晶状体上皮细胞SRA01/04凋亡模型(H2O2组),并以正常培养的SRA01/04细胞作为对照(对照组),采用实时荧光定量PCR检测miR-595的表达改变.将体外培养的SRA01/04细胞分为mimics-NC组、miR-595 mimics组、inhibitor-NC组和miR-595 inhibitor组,将miR-595 mimics/inhibitor及其阴性对照mimics/inhibitor-NC转染至SRA01/04细胞后,采用实时荧光定量PCR检测检测各组细胞中miR-595的表达情况;转染48 h后暴露于200μmol/L H2O21 h,采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,免疫印迹法检测细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白的表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-595和Bcl-2的靶向关系.结果 与健康组相比,白内障组中miR-595表达水平明显升高[(5.52±1.64)比(1.00±0.00),P<0.05];同时,H2O2组细胞中miR-595表达水平明显高于对照组[(3.86±1.12)比(1.00±0.00),P<0.05].与mimics-NC组比较,miR-595 mimics组细胞中miR-595表达水平[(4.16±0.78)比(1.00±0.00)]、细胞凋亡率[(17.52±3.05)％比(8.86±1.21)％]明显升高,而Bcl-2蛋白的表达水平明显降低(P<0.05);但miR-595 inhibitor组细胞中miR-595表达水平、细胞凋亡率明显低于inhibitor-NC组,而Bcl-2蛋白的表达水平明显高于inhibitor-NC组(P<0.05).Bcl-2是miR-595的靶基因.结论 miR-595在年龄相关性白内障晶状体组织中高表达,并靶向调控Bcl-2表达促进人晶状体上皮细胞凋亡.     

微小 RNA-7-5p靶向调节锌指蛋白核转录因子 4基因抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

目的 探讨微小RNA(miR)-7-5p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡及锌指蛋白核转录因子4(KLF4)基因表达调控的影响.方法 研究起止时间为2018年3—10月.实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-7-5p在人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF及口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量.将miR-7-5p模拟物(miR-7-5p mimics)及阴性对照序列(mimics Control)分别转染至SCC25细胞,分为三组:Control组(未转染的SCC25细胞)、NC组(转染mimics Con-trol的SCC25细胞)、miR-7-5p组(转染miR-7-5p mimics的SCC25细胞).以qRT-PCR检测miR-7-5p在SCC25细胞中的转染效果;MTT法检测miR-7-5p对SCC25细胞增殖的影响;流式细胞术检测miR-7-5p对SCC25细胞凋亡的影响;通过双荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blotting)检测miR-7-5p对KLF4的靶向关系.结果 miR-7-5p在3种口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量[(0.21±0.02)、(0.43±0.04)、(0.48±0.05)]明显低于人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF(1.00±0.09)(P<0.05);转染miR-7-5p mimics能够上调SCC25细胞中miR-7-5p的表达(P<0.05);miR-7-5p过表达能够明显抑制SCC25细胞增殖能力[Control组、NC组72 h吸光度(1.43±0.13)、(1.46±0.15)比miR-7-5p组(0.81±0.09)](P<0.05),并诱导细胞凋亡[Control组、NC组凋亡率(9.48±2.65)％、(10.21±3.02)％比miR-7-5p组(24.41±8.15)％](P<0.05);双荧光素酶报告基因实验结果表明miR-7-5p过表达可抑制KLF4-Wt报告基因载体细胞相对荧光活性;qRT-PCR和Western blotting进一步证实了miR-7-5p能够靶向调节KLF4 mRNA和蛋白表达.结论 miR-7-5p直接靶向调控KLF4基因的表达来抑制口腔鳞状细胞癌SCC25细胞增殖,诱导细胞凋亡.     

微小 RNA-216b-5p对骨肉瘤 MG63细胞功能的影响及其与高迁移率族蛋白 B1的靶向关系

目的 探讨微小RNA-216b-5p(miR-216b-5p)对骨肉瘤MG63细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其与高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的靶向关系.方法 将体外培养的MG63细胞分为mimics-NC组、miR-216b-5p mimics组、inhibitor-NC组和miR-216b-5p inhibitor组,采用实时荧光定量PCR检测miR-216b-5p的表达,MTT法、Transwell小室和流式细胞仪分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡能力.采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-216b-5p和HMGB1的靶向关系,蛋白质印迹法(Western blot-ting)检测HMGB1蛋白的表达.结果 与mimics-NC组相比,miR-216b-5p mimics组细胞中miR-216b-5p的表达水平[(5.36±0.54)比(1.00±0.11)]和细胞凋亡率[(20.36±3.15)％比(8.58±1.22)％]明显升高,而细胞增殖活力、侵袭能力和细胞中HMGB1蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05);miR-216b-5p inhibitor组细胞中miR-216b-5p的表达水平[(0.24±0.03)比(0.96±0.08)]和细胞凋亡率[(2.05±0.38)比(9.27±1.16)]较inhibitor-NC组明显降低,而细胞增殖活力、侵袭能力和HMGB1蛋白的表达水平较inhibitor-NC组均明显升高(P<0.05).双荧光素酶报告基因实验证实HMGB1是miR-216b-5p的靶基因.结论 miR-216b-5p可能通过靶向调控HMGB1表达,抑制骨肉瘤MG63细胞增殖、侵袭并诱导细胞凋亡.     

长链非编码 RNA母系表达基因 8靶向微小 RNA-497-5p调控血管瘤血管内皮细胞的增殖和凋亡

目的 探讨长链非编码RNA母系表达基因8(MEG8)靶向微小RNA(miR)-497-5p对血管瘤血管内皮细胞的增殖和凋亡的影响.方法 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测河南中医药大学第一附属医院2017年1月至2018年6月收集的52例血管瘤组织和与其对应的瘤旁正常皮肤组织中MEG8和miR-497-5p的表达水平.血管瘤血管内皮细胞HemEC分为si-NC组、si-MEG8组、miR-NC组、miR-497-5p组、si-MEG8+anti-miR-NC组、si-MEG8+anti-miR-497-5p组.四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和P21、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl相关X(Bax)蛋白的表达水平.双荧光素酶报告基因实验验证MEG8和miR-497-5p的靶向关系.结果 与瘤旁正常皮肤组织相比,血管瘤组织中MEG8表达水平[(0.82±0.08)比(0.33±0.03)]升高(P<0.05),miR-497-5p表达水平[(0.34±0.03)比(0.84±0.08)]降低(P<0.05).与si-NC组比较,si-MEG8组HemEC细胞存活率[(39.61±4.06)％比(103.50±11.04)％]、cyclin D1和Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率[(26.57±2.73)％比(8.33±0.85)％]、P21和Bax蛋白表达升高(P<0.05).与miR-NC组比较,miR-497-5p组HemEC细胞存活率[(48.87±5.09)％比(104.11±10.64)％]、cy?clin D1和Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率[(21.26±2.45)％比(8.33±0.85)％]、P21和Bax蛋白表达升高(P<0.05).MEG8和miR-497-5p直接特异性结合.与si-MEG8+anti-miR-NC组比较,si-MEG8+anti-miR-497-5p组HemEC细胞存活率[(86.10±8.81)％比(40.23±4.35)％]、cyclin D1和Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05),凋亡率[(15.32±1.67)％比(26.81±2.94)％]、P21和Bax蛋白表达降低(P<0.05).结论 抑制MEG8通过靶向miR-497-5p能够抑制血管瘤血管内皮细胞增殖,促进细胞凋亡,进而遏制血管瘤的发生发展.     

肿瘤蛋白 53靶基因 1靶向微小 RNA-33a对胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响

目的 探讨肿瘤蛋白53靶基因1(TP53TG1)对胶质瘤细胞增殖、凋亡及迁移侵袭的影响和机制.方法 本研究起止时间为2019年1—6月,人正常神经胶质细胞(HA)和神经胶质瘤细胞U251购于上海斯信生物科技有限公司.实时定量PCR(qRT-PCR)检测HA和U251细胞中TP53TG1的表达水平.构建过表达TP53TG1的U251细胞株,噻唑蓝(MTT)法用于评估细胞增殖能力,流式细胞术分析细胞凋亡,Transwell法测定迁移和侵袭数,Western blotting检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白激酶抑制剂(P21)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl相关x蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、E钙黏蛋白(E-cad?herin)表达水平.双荧光素酶报告基因实验和Western blotting验证TP53TG1和微小RNA-33a(miR-33a)的靶向关系.结果 与人正常神经胶质细胞HA比较,神经胶质瘤细胞U251中TP53TG1的表达水平[(1.03±0.10)比(0.28±0.03)]显著降低.过表达TP53TG1能够显著抑制U251细胞活力,下调Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白水平,减少细胞迁移数[(138±14.01)个比(72±7.26)个]和侵袭数[(126±12.54)个比(65±6.63)个],上调P21、Bax和E-cadherin蛋白表达,促进细胞凋亡[(8.16±0.86)％比(22.57±2.65)％].TP53TG1能够靶向负性调控miR-33a的表达.过表达miR-33a能够逆转miR-33a对U251细胞增殖、凋亡[(22.68±2.69)％比(11.36±1.20)％]、迁移[(70±7.05)个比(108±11.37)个]和侵袭[(70±7.05)个比(108±11.37)个]的影响.结论 TP53TG1通过靶向miR-33a抑制胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡.     

miR-144通过靶向TIGAR调控胃癌细胞增殖与凋亡及自噬的分子机制

目的研究miR-144对胃癌细胞增殖、凋亡和自噬的影响和机制。方法将miR-144 mimics、mimics control分别转染胃癌细胞,依次标记为mimics-NC组、miR-144 mimics组。将miR-144 mimics分别与pcDNA3.1、pcDNA3.1-TIGAR共转染至胃癌细胞,依次标记为miR-144 mimics+NC组、miR-144 mimics+TIGAR组。正常培养的胃癌细胞标记为Control组。以噻唑蓝法检测细胞增殖,以流式细胞术测定细胞凋亡,以Western blot检测凋亡蛋白caspase-3和自噬蛋白Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ表达变化,以生物信息学软件预测miR-144的靶基因可能为TIGAR,利用荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。结果 mimics-NC组和miR-144 mimics组的细胞增殖能力分别为0.36±0.05,0.20±0.02,细胞凋亡率分别为3.05±0.34,13.84±1.47,caspase-3表达水平分别为0.22±0.04,0.43±0.05, Beclin1分别为0.38±0.06,0.73±0.07,LC3Ⅱ分别为0.19±0.03,0.39±0.05,差异均有统计学意义(均P<0.05)。miR-144 mimics+NC组和miR-144 mimics+TIGAR组的细胞增殖能力分别为0.21±0.04,0.32±0.03,细胞凋亡率分别为12.04±1.25,5.98±0.73,caspase-3表达水平分别为0.40±0.03,0.24±0.05,Beclin1分别为0.60±0.05,0.46±0.06,LC3Ⅱ分别为0.34±0.06,0.20±0.03,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 miR-144靶向抑制TIGAR表达降低胃癌细胞增殖能力,并诱导胃癌细胞凋亡和自噬。     

微小 RNA-466靶向调控 Twist1影响宫颈癌 SiHa细胞增殖和迁移

目的 研究微小RNA-466(miR-466)靶向调控碱性螺旋-环-螺旋转录因子1(Twist1)对宫颈癌SiHa细胞增殖和迁移的影响和机制.方法 本研究起止时间为2019年1—10月.宫颈癌Caski、SiHa、C33A细胞购自上海沪震生物科技有限公司;正常宫颈上皮End1/E6E7细胞购自上海雅吉生物科技有限公司.定量即时聚合酶链锁反应(qRT-PCR)方法测定宫颈癌细胞中miR-466表达变化.在宫颈癌SiHa细胞中转染miR-466模拟物(miR-466 mimics),噻唑蓝(MTT)方法检测细胞增殖变化,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力变化,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞中波形蛋白(Vimentin)和上皮钙黏素(E-cadherin)蛋白表达变化.在线靶基因预测软件预测miR-466的靶基因可能为Twist1,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系.将Twist1过表达载体和miR-466 mimics共转染到宫颈癌SiHa细胞中,检测细胞增殖、迁移和侵袭能力变化.结果 正常宫颈上皮End1/E6E7细胞和宫颈癌Caski、SiHa、C33A细胞中miR-466表达水平依次为:(1.00±0.09)、(0.58±0.06)、(0.20±0.03)、(0.45±0.04);宫颈癌细胞系Caski、SiHa、C33A中miR-466表达水平低于End1/E6E7细胞,差异有统计学意义(P<0.0001).与miR-NC组比较,miR-466组SiHa细胞细胞吸光度(0.29±0.04)比(0.45±0.02)降低,细胞侵袭数目[(81.46±6.35)个比(117.95±11.62)个]和迁移数目[(90.17±7.43)个比(147.15±12.04)个]下降,Vimentin蛋白表达水平降低,E-cadherin蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.001).与miR-466+pCDNA3.1组比较,miR-466+pCDNA3.1-Twist1组宫颈癌SiHa细胞吸光度(0.41±0.04)比(0.30±0.03)升高,细胞迁移数目[(127.34±10.26)个比(93.05±6.84)个]和侵袭数目[(108.94±10.24)个比(83.26±5.17)个]增加,Vimentin、Twist1蛋白表达增多,E-cadherin蛋白表达减少,差异有统计学意义(P<0.05).上调miR-466靶向抑制Twist1表达.结论 miR-466靶向抑制Twist1降低宫颈癌SiHa细胞增殖和迁移能力.     

微小 RNA-520a-5p通过靶向调控鼠双微体基因影响胶质瘤细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的探讨微小 RNA-520a-5p(miR-520a-5p)在胶质瘤发生发展中的作用和机制。方法选取 2016年 5月至 2018年 11月在宝鸡高新人民医院治疗的胶质瘤病人肿瘤组织作 56例为研究对象。实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)检测 56例胶质瘤组织和 56例正常脑组织中 miR-520a-5p表达水平。体外培养胶质瘤 U251细胞,转染 miR模拟对照序列( miR-NC)、 miR-520a-5p9模拟物( miR-520a-5p mimics)至 U251细胞,分别采用四甲基噻唑蓝染色法( MTT)、流式细胞仪、 Transwell和蛋白质印迹法检测过表达 miR-520a-5p对 U251细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭及细胞中鼠双微体基因( MDM2)、细胞周期蛋白 D1(cyclin D1)、 P21、B淋巴细胞瘤 -2相关蛋白( Bax)、 B淋巴细胞瘤 -2(Bcl-2)、基质金属蛋白酶 2(MMP-2)和 E-钙黏蛋白( E-cadherin)蛋白表达的影响。双萤光素酶报告基因实验验证 miR-520a-5p与 MDM2靶向关系,蛋白质印迹法检测转染 miR-520a-5p mimics、miR-520a-5p抑制剂( anti-miR-520a-5p)对 U251细胞中 MDM2蛋白表达的影响。共转染 miR-520a-5p mimics和 MDM2过表达载体( pcD. NA3.1-MDM2)至 U251细胞,上述相同方法观察过表达 MDM2能否逆转过表达 miR-520a-5p对 U251细胞增殖、迁移和侵袭及相关蛋白表达的影响。结果与正常脑组织相比,胶质瘤组织中 miR-520a-5p表达降低( P<0.05)。与转染 miR-NC的 U251细胞比较,转染 miR-520a-5p mimics的 U251细胞 24 h、48 h和 72 h的 OD值［(0.36±0.04)比( 0.50±0.05)、(0.49±0.05)比( 0.95±0.09)、(0.71±0.07)比( 1.36±0.13)］、迁移细胞数［(67±6.26)比( 144±13.38)］、侵袭细胞数［(59±5.47)比( 135±13.12)］均降低( P<0.05),凋亡率［( 21.17±2.06)%比( 7.82±0.77)%］升高( P<0.05)细胞中 cyclin D1、Bcl-2和 MMP-2的蛋白表达水平均降低( P<0.05)而 P21、Bax和 E-cadherin的蛋白表达水平均升高( P<0.05miR-520a-5p可与 MDM2的 3’UTR靶向结合,mimics的 U251细胞中 MDM2蛋白水平显著低于转染 miR-NC的细胞,而转染 anti-miR-520a-5p的 U251细胞中 MDM2的蛋白水平显著高于转染 anti-miR-NC的细胞。与共转染 miR-520a-5p mimics与 pcDNA3.1的 U251细胞比较,共转染 miR-520a-5p mim. ics与 pcDNA3.1-MDM2的 U251细胞 24 h、48 h和 72 h的 OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数均升高( P<0.05)凋亡率降低( P< 0.05)。,同时转染miR-520a-5p,细胞中 cyclin D1、Bcl-2和 MMP-2的蛋白表达水平均升高( P<0.05),而 P21、Bax和 E-cadherin的蛋白表达水平均降低( P<0.05)。结论 miR-520a-5p在胶质瘤组织中表达降低,过表达 miR-520a-5p可能通过靶向负调控 MDM2抑制胶质瘤 U251细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导其凋亡。     

miR-18a靶向WNT2B对子宫肌瘤细胞增殖和凋亡的影响研究

目的 观察微小核糖核酸-18a(miR-18a)靶向WNT家族成员2B(WNT2B)对子宫肌瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法 于2019年10月至2020年3月研究miR-18a靶向WNT2B对子宫肌瘤细胞增殖和凋亡的影响;子宫肌瘤组织和正常子宫肌组织收集自延安市人民医院;在子宫肌瘤细胞中转染miR-18a模拟物(miR-...     

微小RNA-150 靶向c-Myb 表达对T 淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖的影响

目的探讨微小RNA-150(miR-150)靶向c-Myb表达对人T淋巴细胞白血病(T-LL)Jurkat细胞增殖的影响。方法体外培养人Jurkat细胞,分为空白对照组(不转染)、阴性对照组(转染negative control-miR-150)和miR-150过表达组(转染hsamiR-150 mimic)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测Jurkat细胞中miR-150 及c-Myb 表达;人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)法检测Jurkat细胞增殖;流式细胞仪检测各组Jurkat细胞凋亡情况;双荧光素酶报告基因实验检测miR-150和c-Myb的靶向关系;蛋白质印迹法(Western blotting)检测各组Jurkat细胞中c-Myb、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达情况。结果空白对照组与阴性对照组Jurkat细胞中miR-150表达水平、c-Myb mRNA及蛋白表达水平、OD值、细胞凋亡率、及PCNA、Bax蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05);与空白对照组相比,miR-150过表达组Jurkat细胞中miR-150表达水平［(1.42±0.14)比(1.03±0.09)］、凋亡率［(20.79±1.15)%比(8.76±0.74)%］、Bax蛋白表达水平［(0.65±0.18)比(0.42±0.13)］显著升高(P<0.05),c-Myb mRNA［(0.66±0.14)比(0.98±0.09)］及蛋白表达水平［(0.37±0.06)比(0.64±0.12)］、OD值［(0.25±0.06)比(0.46±0.09)］、PCNA蛋白表达水平［(0.33±0.07)比(0.56±0.11)］显著降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,c-Myb是miR-150的靶基因。结论miR-150靶向c-Myb表达抑制Jurkat细胞增殖并诱导其凋亡。     

长链非编码 RNA人类白细胞抗原复合体 18通过微 RNA-497-5p/细胞周期蛋白 E1轴调节弥漫性大 B细胞淋巴瘤的增殖、凋亡和侵袭

目的探讨长链非编码 RNA人类白细胞抗原复合体 18(lncRNA HCG18)调控微 RNA-497-5p(miR-497-5p)/细胞周期蛋白 E1(CCNE1)轴对弥漫性大 B细胞淋巴瘤( DLBCL)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)、蛋白质印迹法分别检测 2018年 5月至 2021年 5月收集的恩施土家族苗族自治州中心医院 DLBCL病人淋巴组织、良性淋巴结增生病人的淋巴组织、人正常 B细胞永生化细胞 HMy2.CIR、DLBCL细胞系 SU-DHL-1、OCI-LY8、U2932中 HCG18、miR-497-5p表达及 CCNE1蛋白表达,将 OCI-LY8细胞分为 Ct组(正常培养的 OCI-LY8细胞)、 pcDNA组(细胞转染过表达物阴性对照)、 pcD? NA-HCG18组(细胞转染 HCG18过表达物)、 si-NC组(细胞转染小干扰 RNA阴性对照)、 si-HCG18组(细胞转染 HCG18小干扰 RNA)、 si-HCG18+inhibitorNC组(细胞转染 HCG18小干扰 RNA和抑制物阴性对照)、 si-HCG18+miR-497-5p inhibitor组(细胞转染 HCG18小干扰 RNA和 miR-497-5p抑制物),CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡, Transwell检测细胞侵袭,蛋白质印迹法检测 CCNE1、增殖细胞核抗原( PCNA)、 Bcl-2相关 X蛋白( Bax)、基质金属蛋白酶 9(MMP-9)蛋白表达,双萤光素酶验证 HCG18与 miR-497-5p、miR-497-5p与 CCNE1的关系。结果在 DLBCL淋巴组织和细胞中, HCG18、CCNE1蛋白高表达, miR-497-5p低表达,且在 OCI-LY8细胞中 HCG18、CCNE1蛋白表达上调最高, miR-497-5p表达下调最多( P<0.05)因此,以 OCI-LY8细胞进行后续研究,与 si-NC组比较, si-HCG18组 HCG18(0.26±0.03比 1.01±0.01)、 CCNE1蛋白( 0.45±0.03比,1.44±0.19)表达降低, miR-497-5p(1.95±0.14比 1.03±0.02)表达升高( P<0.05)与 pcDNA组比较, pcDNA-HCG18组 HCG18(1.96±0.23比 1.02±0.01)、 CCNE1蛋白( 2.33±0.21比 1.42±0.18)表达升高, miR-497-5,p(0.28±0.02比 1.02±0.02)表达降低( P<0.05),与 siHCG18组、 si-HCG18+inhibitor NC组比较, miR-497-5p表达降低( 1.21±0.09比 1.95±0.14、1.94±0.13)CCNE1蛋白( 0.87±0.08比0.45±0.03、0.44±0.04)表达上调( P<0.05)沉默 HCG18可抑制 OCI-LY8细胞增殖、侵袭行为及 PCNAMP-9蛋白表达,诱导细胞凋亡及 Bax蛋白表达,而上调 HCG18相反趋势,下调 miR-497-5p逆转了沉默 HCG18对 OCI-LY8细胞增殖、侵袭、凋亡的影响, HCG18靶向调控 miR-497-5p/CCNE1。结论沉默 HCG18可能通过调控 miR-497-5p/CCNE1抑制 OCI-LY8细胞增殖、侵袭,诱导细胞凋亡。     

微小 RNA-525-5p通过靶向 RECQ样蛋白 5调控乳腺癌放射敏感性

目的探讨微小 RNA-525-5p(miR-525-5p)对乳腺癌细胞辐射照射敏感性的影响及机制。方法该研究起止时间为 2019年 6月至 2020年 6月,人乳腺癌细胞 MDA-MB-231、MCF-7、BT474、非恶性乳腺上皮细胞 MCF-10A均购自美国菌种保藏中心。运用 qRT-PCR法检测人乳腺癌细胞 MDA-MB-231、MCF-7、BT474、非恶性乳腺上皮细胞 MCF-10A中 miR-525-5p的 mRNA的表达;将 miR-525-5p模拟物( miR-525-5p mimics)阴性对照( miR-NC)组(转染 miR-NC)、 miR-525-5p组(转染 miR-525-5p mim. ics)、 RECQL5小干扰 RNA阴性对照( si-NC)组(转染 si-NC)、 RECQL5小干扰 RNA(si-RECQL5)组(转染 si-RECQL5)、 miR-525-5p+RECQL5过表达空载体( pcDNA)组(共转染 miR-525-5p mimics和 pcDNA)、 miR-525-5p+RECQL5过表达载体( pcDNA-REC. QL5)组(共转染 miR-525-5p mimics和 pcDNA-RECQL5),均用脂质体法转染至 MDA-MB-231细胞; Western blotting检测细胞中 RECQ样蛋白 5(RECQL5)的蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性;克隆形成实验检测细胞的存活分数。结果与非恶性乳腺上皮细胞 MCF-10A相比,人乳腺癌细胞 MDA-MB-231、MCF-7、BT474中 miR-525-5p表达［ 0.28±0.02,0.33±0.02,0.42±0.03比 1.01±0.08］显著降低, RECQL5 mRNA和蛋白表达［ 1.68±0.15,1.58±0.12,     

微RNA-132-3p靶向第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物调控葡萄膜黑色素瘤细胞增殖与凋亡

目的 研究微RNA(miR)-132-3p在葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡中的作用及其作用机制。方法 该研究起止时间为2018年2月至2019年7月。定量聚合酶链反应（qPCR）检测正常葡萄膜上皮细胞ARPE-19和葡萄膜黑色素瘤细胞SP6.5、M23中miR-132-3p表达。SP6.5细胞中转染miR-132-3p干扰质粒（anti-miR-132-3p）、第10号染色体上缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物（PTEN）过表达质粒（pcDNA3.1-PTEN）或共转染anti-miR-132-3p和PTEN干扰质粒（si-PTEN）,MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡,蛋白质印迹法检测PTEN、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、周期素依赖激酶抑制剂p21(P21)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达,生物信息学预测结合双萤光素酶报告实验分析miR-132-3p与PTEN的靶向关系。结果 与ARPE-19细胞相比,SP6.5、M23细胞中miR-132-3p表达量（0.26±0.02比0.94±0.09、0.81±0.08）明显升高（P<...     

长链非编码前列腺癌相关转录因子 6靶向微小 RNA-139-3p对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)前列腺癌相关转录因子6(PCAT6)对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响和分子机制.方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测20例骨肉瘤组织和与其对应的癌旁组织中PCAT6和微小RNA-139-3p(miR-139-3p)的表达水平.双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR验证PCAT6对miR-139-3p的靶向调控关系.将PCAT6小干扰RNA(si-PCAT6)、miR-139-3p模拟物(miR-139-3p mimics)分别转染骨肉瘤细胞SAOS2,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测SAOS2细胞增殖活力,流式细胞术检测SAOS2细胞凋亡,蛋白质印迹法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、细胞周期素D1(Cyclin D1)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和P21、的表达水平.将si-PCAT6和miR-139-3p抑制物(anti-miR-139-3p)共转染至SAOS2细胞,采用上述方法检测细胞增殖、迁移侵袭能力以及凋亡变化.结果 与瘤旁组织相比,骨肉瘤组织中PCAT6的表达水平[(2.76±0.27)比(1.01±0.09)]显著升高,miR-139-3p的表达水平[(0.51±0.05)比(1.00±0.08)]显著降低(P<0.05).miR-139-3p是PCAT6的靶基因,PCAT6靶向负性调控miR-139-3p表达.抑制PCAT6表达或过表达miR-139-3p均可下调SAOS2细胞CyclinD1和Bcl-2蛋白表达,上调p21和Bax蛋白表达,降低细胞活力,促进细胞凋亡(P<0.05).抑制miR-139-3p表达可逆转si-PCAT6对骨肉瘤SAOS2细胞增殖抑制和凋亡的影响(P<0.05).结论 lncRNA PCAT6在骨肉瘤组织中表达上调,抑制miR-139-3p通过靶向miR-139-3p抑制骨肉瘤细胞增殖,诱导骨肉瘤细胞凋亡.     

微小RNA-455-3p 下调TRIM27 对鼻咽癌细胞增殖、凋亡的影响

目的研究微小RNA-455-3p(miR-455-3p)对鼻咽癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法运用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测人鼻咽癌细胞5-8F、CNE-1和鼻咽上皮细胞NP69中miR-455-3p的表达;将miR-NC、miR-455-3p mimics、pcDNA3.1、pcDNA3.1- TRIM27、si-NC、si- TRIM27 组、miR-455-3p mimics 和pcDNA3.1、miR-455-3p mimics 和pcDNA3.1-TRIM27通过脂质体试剂转染到5-8F;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)、流式细胞术、蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞的增殖、凋亡和TRIM27蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中miR-455-3p与TRIM27的靶向关系。结果与鼻咽上皮细胞NP69(1.37±0.06)相比,人鼻咽癌细胞5-8F(0.42±0.02)、CNE-1(0.96±0.05)中miR-455-3p的表达显著降低(F =314.35,P =0.001)。过表达miR-455-3p 可明显抑制5-8F、CNE-1 细胞的增殖,促进其凋亡;miR-455-3p 可抑制野生型TRIM27细胞的荧光活性,且与TRIM27的表达呈负相关;抑制TRIM27可抑制抑制5-8F细胞的增殖,促进凋亡,过表达TRIM27能够逆转miR-455-3p对鼻咽癌细胞5-8F增殖凋亡的作用。结论miR-455-3p能够调控鼻咽癌细胞增殖、凋亡的作用机制与其靶向TRIM27相关,将可为鼻咽癌的治疗提供新靶点。