黄芪甲苷对乌拉坦诱导肺癌小鼠的防治作用及其机制

目的探讨黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对乌拉坦诱导的肺癌小鼠的防治作用及其机制。方法将100只美国癌症研究所小鼠随机分为对照组、模型组、低剂量AS-Ⅳ组、中剂量AS-Ⅳ组和高剂量AS-Ⅳ组,每组20只。模型组、低剂量AS-Ⅳ组、中剂量AS-Ⅳ组和高剂量AS-Ⅳ组小鼠腹腔注射乌拉坦600 mg·kg-1,每周1次,持续10周,建立肺癌模型;对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水。造模当天,低剂量AS-Ⅳ组、中剂量AS-Ⅳ组和高剂量AS-Ⅳ组小鼠分别给予AS-Ⅳ12.5、25.0、50.0 mg·kg-1灌胃,对照组和模型组小鼠给予等量蒸馏水灌胃,每日1次,连续19周。记录各组小鼠的体质量、自主活动次数,每2周1次。各组小鼠乙醚麻醉后脱臼处死,取肺组织,计算肺癌发生率和肺肿瘤数;苏木精-伊红染色观察各组小鼠肺组织病理学变化。采用酶联免疫吸附法检测各组小鼠血清中癌胚抗原(CEA)、癌抗原125(CA125)水平,实时荧光定量聚合酶链式反应法检测各组小鼠肺组织中Wnt-1、β-连环蛋白(β-catenin)、C-myc、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1) mRNA表达水平,Western blot法检测各组小鼠肺组织中Wnt-1、β-catenin、C-myc、Cyclin D1蛋白表达水平。结果造模后第1、3周,5组小鼠体质量和自主活动次数比较差异无统计学意义(P> 0.05)。造模后第5～19周,模型组小鼠体质量显著低于对照组(P <0.05),低剂量AS-Ⅳ组、中剂量AS-Ⅳ组和高剂量AS-Ⅳ组小鼠体质量分别从第5、7、11周开始高于模型组(P <0.05)。造模后第5～19周,模型组小鼠自主活动次数显著少于对照组(P <0.05),中剂量AS-Ⅳ组和高剂量AS-Ⅳ组小鼠自主活动次数从第11周开始多于模型组(P <0.05),低剂量组小鼠自主活动次数从第13周开始高于模型组(P <0.05)。低剂量AS-Ⅳ组、中剂量AS-Ⅳ组和高剂量AS-Ⅳ组小鼠肺癌发生率和肺肿瘤数低于模型组(P <0.05),中剂量AS-Ⅳ组、高剂量AS-Ⅳ组小鼠肺癌发生率和肺肿瘤数低于低剂量AS-Ⅳ组(P <0.05),高剂量AS-Ⅳ组小鼠肺癌发生率和肺肿瘤数低于中剂量AS-Ⅳ组(P <0.05)。对照组小鼠肺组织形态正常,无增生和炎症细胞浸润;模型组小鼠肺组织被大量肿瘤细胞浸润,出现明显瘤区,失去原有肺组织形态;低剂量AS-Ⅳ组、中剂量AS-Ⅳ组和高剂量AS-Ⅳ组小鼠肺组织结构基本清晰,较少出现细胞核密集增生和炎症细胞浸润。模型组、低剂量AS-Ⅳ组、中剂量AS-Ⅳ组和高剂量AS-Ⅳ组小鼠血清中CEA和CA125水平高于对照组(P <0.05),低剂量AS-Ⅳ组、中剂量AS-Ⅳ组和高剂量AS-Ⅳ组小鼠血清中CEA和CA125水平低于模型组(P <0.05),中剂量AS-Ⅳ组、高剂量AS-Ⅳ组小鼠血清中CEA和CA125水平低于低剂量AS-Ⅳ组(P <0.05),高剂量AS-Ⅳ组小鼠血清中CEA和CA125水平低于中剂量AS-Ⅳ组(P <0.05)。模型组、低剂量AS-Ⅳ组、中剂量AS-Ⅳ组和高剂量AS-Ⅳ组小鼠肺组织中Wnt-1、β-catenin、C-myc和Cyclin D1 mRNA相对表达量高于对照组(P <0.05),低剂量AS-Ⅳ组、中剂量AS-Ⅳ组和高剂量AS-Ⅳ组小鼠肺组织中Wnt-1、β-catenin、C-myc和Cyclin D1 mRNA相对表达量低于模型组(P <0.05),中剂量AS-Ⅳ组、高剂量AS-Ⅳ组小鼠肺组织中Wnt-1、β-catenin、C-myc和Cyclin D1 mRNA相对表达量低于低剂量AS-Ⅳ组(P <0.05),高剂量AS-Ⅳ组小鼠肺组织中Wnt-1、β-catenin、C-myc和Cyclin D1 mRNA相对表达量低于中剂量AS-Ⅳ组(P <0.05)。模型组、低剂量AS-Ⅳ组、中剂量AS-Ⅳ组小鼠肺组织中Wnt-1、β-catenin、C-myc和Cyclin D1蛋白相对表达量高于对照组(P <0.05),低剂量AS-Ⅳ组、中剂量AS-Ⅳ组和高剂量AS-Ⅳ组小鼠肺组织中Wnt-1、β-catenin、C-myc和Cyclin D1蛋白相对表达量低于模型组(P <0.05),中剂量AS-Ⅳ组、高剂量AS-Ⅳ组小鼠肺组织中Wnt-1、β-catenin、C-myc和Cyclin D1蛋白相对表达量低于低剂量AS-Ⅳ组(P <0.05),高剂量AS-Ⅳ组小鼠肺组织中Wnt-1、β-catenin、C-myc和Cyclin D1蛋白相对表达量低于中剂量AS-Ⅳ组(P <0.05),高剂量AS-Ⅳ组小鼠肺组织中C-myc蛋白相对表达量高于对照组(P <0.05),高剂量AS-Ⅳ组与对照组小鼠肺组织中Wnt-1、β-catenin和Cyclin D1蛋白表达量比较差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 AS-Ⅳ可显著抑制乌拉坦诱导的小鼠肺癌发生,其作用机制可能与减少Wnt-1、β-catenin、C-myc、Cyclin D1蛋白表达及抑制Wnt/β-catenin信号通路活化有关。     

人甲状旁腺激素（1-34）在人成骨肉瘤细胞中对基质Gla蛋白及Wnt/β-catenin信号通路的调节作用

目的观察人甲状旁腺激素（PTH）的N端活性片段PTH（1-34）对人成骨肉瘤细胞MG63 基质Gla 蛋白（MGP）表达的影 响,以及PTH通过Wnt/β-catenin 信号通路介导MGP表达调控的作用,探讨PTH（1-34）在防治骨质疏松症作用中可能的分子 机制。方法（1）用不同浓度PTH（1-34）（10-9、10-8、10-7 mol/L）,单独或联合Wnt/β-catenin信号通路抑制剂DKK-1（200 ng/mL）干预 MG63 细胞;（2）检测碱性磷酸酶（ALP）染色及活力测定用于判断细胞分化情况;（3）MGP及Wnt/β-catenin 信号通路各组分 的mRNA及蛋白的表达分别采用实时定量RT-PCR 及Western blotting 方法。结果（1）PTH（1-34）上调MGP基因的表达, MGP mRNA的表达分别是对照组的2.56 倍、4.14 倍、7.81 倍（P<0.05 或P<0.01）,且呈剂量依赖性增高;（2）PTH增强MG63 细胞ALP活力,Dkk-1 抑制ALP活性,Dkk-1 与PTH联用部分阻断PTH上调ALP活力（P<0.05）;（3）PTH上调MGP及Wnt/ β-catenin 信号通路中相关因子LRP5、β-catenin、Runx2 mRNA及蛋白水平,其mRNA分别是对照组的2.65、4.01、3.48 倍（P< 0.05 或<0.01）;DKK-1 对PTH（1-34）促MGP表达没有影响,但大部分阻断了Wnt/β-catenin 信号通路中相关因子的表达。结 论PTH（1-34）能明显上调MGP及Wnt/β-catenin 信号通路中相关因子的表达,Wnt/β-catenin 信号通路和MGP在PTH调节骨 代谢中起重要作用。     

骨形态发生蛋白-7调节肾病鼠Wnt1/β-catenin信号通路

目的观察骨形态发生蛋白-7(BMP-7)对嘌呤霉素氨基核苷酸肾病(PAN)鼠肾小球Wnt/β-catenin表达的影响,探讨BMP-7的肾保护作用及可能机制。方法 20只嘌呤霉素氨基核苷酸诱导的大鼠随机分为PAN组和PAN+BMP-7组(BMP-7组),每组各10只。BMP-7组每周2次腹腔注射人重组BMP-7 30微克/(千克.次)。另设正常对照组(NC,n=10)。第12周检测尿液红细胞(UE)、24h尿蛋白(24h UP),血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Cys C)、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)。处死大鼠,反转录-聚合酶链反应检测Wnt1和β-catenin mRNA表达水平。Western blotting检测Wnt1和β-catenin蛋白表达水平。结果与NC组相比,PAN组UE、24h UP、Cys C、MIC、肾小球Wnt1和β-catenin mRNA和蛋白质的表达水平均显著升高,差异具有显著的统计学意义(P均<0.01)。BMP-6组UE、24h UP、Cys C、MIF、肾小球Wnt1和β-catenin mRNA和蛋白质的表达较PAN组降低,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论 BMP-7减轻尿液红细胞及尿蛋白的排泄,降低血清CysC、MIC水平,下调肾小球Wnt1/β-catenin信号通路的表达,减轻肾损伤。     

人参皂苷Rh2对糖尿病肾病变大鼠肾损伤的保护作用及其机制

目的：探讨人参皂苷Rh2对糖尿病肾病变(DKL)大鼠肾脏损伤的保护作用,并阐明其作用机制。方法：通过高脂高能量饲料配以链脲佐菌素(STZ)腹腔注射方法制备DKL大鼠模型。将30只SD成模大鼠随机分为模型组、低剂量(10 mg·kg^-1) Rh2组和高剂量(20 mg·kg^-1) Rh2组,每组10只,另选取10只SD大鼠作为正常对照组。检测各组大鼠体质量和肾脏质量,并计算肾指数,干预8周后全自动分析仪检测各组大鼠血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)和24 h尿蛋白(UP)水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组大鼠肾组织中Ⅳ型胶原(ColⅣ)水平,Western blotting法检测各组大鼠肾组织中转化生长因子β1 (TGF-β1)、Smad3和Smad7蛋白表达水平。结果：与正常对照组比较,模型组大鼠体质量降低(P<0.01),肾脏质量和肾指数明显升高(P<0.01),血清中Scr、BUN和24 h UP水平均升高(P<0.01),肾组织中ColⅣ水平升高(P<0.01),肾组织中TGF-β1和Smad3蛋白...     

益气活血化瘀汤对慢性肾衰竭大鼠钙磷代谢紊乱及血管钙化的影响及其机制研究

目的 探究益气活血化瘀汤对慢性肾衰竭（CRF）大鼠钙磷代谢紊乱及血管钙化的影响及其相关机制。方法 将50只大鼠随机分为5组：假手术组、肾衰组、低剂量组、高剂量组和骨化三醇组，每组10只。采用5/6肾切除法复制CRF大鼠，假手术组不切除肾脏。模型复制成功2周后开始灌胃益气活血化瘀汤：低剂量组8.8 g/kg，高剂量组35.2 g/kg；骨化三醇组灌胃骨化三醇25 ng/kg；假手术组灌胃等体积生理盐水，1次/d，连续8周。肾衰组未做任何处理。给药结束后，代谢笼收集大鼠24 h尿液，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测尿蛋白（UP）、甲状旁腺激素（PTH）、血清肌酐（Scr）、成纤维细胞生长因子23（FGF-23）与25-羟维生素D₃ 25（OH）D₃；全自动生化仪检测血钙、血磷；化学显色法检测血尿素氮（BUN）。采用茜素红对大鼠主动脉进行大体染色和切片染色，观察血管钙化结节。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和Western blotting检测结肠腺瘤样息肉蛋白（APC）、T细胞因子4（TCF4）、β-catenin mRNA和蛋白相对表达量。结果 与肾衰组比较，低剂量组、高剂量组和骨化三醇组血钙、25（OH）D₃升高（P <0.05）；高剂量组和骨化三醇组血钙、25（OH）D₃高于低剂量组（P <0.05）；骨化三醇组血钙、25（OH）D₃高于高剂量组（P <0.05）；与肾衰组比较，低剂量组、高剂量组和骨化三醇组血磷、PTH、BUN、Scr、24 h UP、FGF-23降低（P <0.05）；高剂量组和骨化三醇组血磷、PTH、BUN、Scr、24 h UP、FGF-23低于低剂量组（P <0.05）；骨化三醇组血磷、PTH、BUN、Scr、24 h UP、FGF-23低于高剂量组（P <0.05）。假手术组均未见红色钙化结节；肾衰组可见大面积红色钙化结节，呈弥散式分布；相比于肾衰组，低剂量组、高剂量组和骨化三醇组的钙化出现不同程度减轻。与肾衰组比较，低剂量组、高剂量组和骨化三醇组APC mRNA和蛋白相对表达量升高（P <0.05）；高剂量组和骨化三醇组APC mRNA和蛋白相对表达量高于低剂量组（P <0.05）；骨化三醇组APC mRNA和蛋白相对表达量高于高剂量组（P <0.05）；与肾衰组比较，低剂量组、高剂量组和骨化三醇组TCF4、β-catenin mRNA和蛋白相对表达量降低（P <0.05）。高剂量组和骨化三醇组TCF4、β-catenin mRNA和蛋白相对表达量低于低剂量组（P <0.05）；骨化三醇组TCF4、β-catenin mRNA和蛋白相对表达量低于高剂量组（P <0.05）。结论 益气活血化瘀汤可以改善CRF模型大鼠的钙磷代谢紊乱，缓解血管钙化程度，这可能与其调节Wnt/β-catenin通路有关。     

Astragaloside Ⅳ inhibited hypoxia-enhanced proliferation and migration of human pulmonary arterial smooth muscle cells through modulating Wnt/β-catenin signaling pathway

Objective This study aims to determine the effects of astragaloside Ⅳ (AS-Ⅳ) treatment on the viability, proliferation and migration of hypoxia-stimulated human pulmonary arterial smooth muscle cells (PASMCs), and to explore the underlying molecular mechanisms. Methods The mRNA and protein expression levels of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) were determined qRT-PCR and Western blot assays, respectively. Cell viability and cell proliferation were determined by CCK-8 and 5-ethynyl-2′-deoxyuridine (EdU) cell proliferation assays, respectively. The cell migration was determined by Transwell migration assay. Results Hypoxia stimulation up-regulated the mRNA and protein expression of PCNA in PASMCs (P<0.05); hypoxia stimulation significantly promoted PASMC viability and proliferation (P<0.05), and also increased the migration of PASMCs (P<0.05). AS - Ⅳ concentration-dependently down-regulated the mRNA expression and protein expression of PCNA (P<0.05), inhibited the viability, proliferation and migration of PASMCs under hypoxia (P<0.05). Hypoxia stimulation activated the Wnt/β-catenin signaling in PASMCs; while AS-Ⅳ concentration-dependently repressed the Wnt/βcatenin signaling in the hypoxia-stimulated PASMCs (P<0.05). Moreover, the treatment of XAV393, a Wnt/β - catenin inhibitor, attenuated the hypoxia-induced increase in the viability, proliferation and migration of PASMCs (P<0.05). The treatment of LiCl, a Wnt/β - catenin activator, restored the mRNA and protein expression levels of PCNA in the hypoxia-stimulated PASMCs with AS-Ⅳ treatment (P<0.05). The inhibitory effects of AS-Ⅳ treatment on the viability, proliferation and migration of PASMCs under hypoxia was attenuated by LiCl treatment (P<0.05). Conclusion Our results indicate that AS-Ⅳ reversed hypoxia-induced proliferation and migration of human pulmonary artery smooth muscle cells, which may be by regulating the Wnt/β-catenin signaling pathway. © 2022 China Tropical Medicine. All rights reserved.     

骨痹通方干预凋亡软骨细胞Wnt/β-catenin通路的实验研究

目的探讨骨痹通方通过Wnt/β-catenin通路抑制软骨细胞凋亡的作用机制。方法SD大鼠关节软骨细胞传至第三代后分为空白组,模型组,骨痹通方高、中、低剂量组(简称高、中、低剂量组)。除空白组外其余各组用白细胞介素-1β(IL-1β)诱导软骨细胞凋亡,空白组及模型组培养基中加空白大鼠血清,骨痹通方各组分别加相应剂量的含药血清,并于培养0 h、24 h、72 h时测定各组软骨细胞MTT值,干预后第4天收集软骨细胞,运用PCR及Western Blot法测定Wnt5a、β-catenin mRNA的表达量及蛋白表达水平。结果各组0 h、24 h及72 h所测的MTT值无显著差异(P0.05)。模型组Wnt5a与β-catenin的mRNA表达量与空白组比较明显升高(P0.05),骨痹通方各剂量组能够下调Wnt5a与β-catenin表达,且骨痹通方低剂量组与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。模型组与空白组比较Wnt5a、β-catenin的蛋白表达量上调,差异不显著(P0.05),骨痹通方高、中、低剂量组Wnt5a、β-catenin的蛋白表达量与模型组比较均有下调趋势,差异不显著(P0.05),骨痹通方各组间Wnt5a、β-catenin的蛋白表达量比较差异无统计学意义(P0.05)。结论骨痹通方可能通过抑制Wnt5a与β-catenin的表达,从而达到延缓软骨细胞凋亡的作用。     

商陆皂甙甲对阿霉素肾小球硬化大鼠细胞外基质的影响

目的观察商陆皂甙甲(EsA)对阿霉素肾小球硬化大鼠细胞外基质的影响并探讨其可能机制。方法将48只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、EsA组、依那普利组,模型组、EsA组、依那普利组采用单侧肾切除并尾静脉重复注射阿霉素的方法建立大鼠肾小球硬化模型,假手术组大鼠仅剥离肾脂肪包膜,不切除肾脏,术后给予等量生理盐水尾静脉注射。术后1周开始,EsA组按20 mg.kg-1.d-1给EsA腹腔注射,依那普利组按10 mg.kg-1.d-1给依那普利混悬液灌胃,假手术组和模型组给2 mL生理盐水灌胃,连续治疗93 d后处死。观察EsA对肾小球硬化大鼠24 h尿蛋白、血浆白蛋白、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)含量、肾小球病理改变及肾小球Ⅳ型胶原表达的影响。结果8周、13周时,模型组、EsA组和依那普利组大鼠24 h尿蛋白均明显高于假手术组(P<0.01),但EsA组和依那普利组大鼠尿蛋白明显低于模型组(P<0.01)。处死前模型组、EsA组和依那普利组大鼠血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平较假手术组明显升高(P<0.05),血清白蛋白显著减低(P<0.05);EsA组和依那普利组与模型组比较Scr、BUN水平明显降低(P<0.01),血清白蛋白明显高于模型组(P<0.01)。模型组大鼠、EsA组、依那普利组肾小球硬化指数、Col-Ⅳ的表达均较假手术组明显增强(P<0.05),但EsA组、依那普利组肾小球硬化指数、Col-Ⅳ的表达较模型组明显减弱(P<0.01)。EsA组和依那普利组之间血清白蛋白、Scr、BUN、肾小球硬化指数、Col-Ⅳ的表达及8周和13周尿蛋白比较差别无统计学意义(P>0.05)。结论EsA可减轻肾小球硬化大鼠系膜基质中Ⅳ型胶原的过度沉积,减少尿蛋白,延缓肾小球硬化的发生、发展。     

大承气汤对大鼠胰腺纤维化的改善作用及Wnt/β-catenin通路的影响

目的探讨大承气汤对大鼠胰腺纤维化的改善作用及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路的影响。方法2020年7—9月在上海中医药大学附属龙华医院实验室进行实验。48只SD大鼠建立胰腺纤维化模型成功后,采用随机数字表法分成模型组、清胰利胆颗粒组(2.678 g/kg)、大承气汤低剂量组(6 g/kg)、大承气汤高剂量组(12 g/kg),每组12只;另取12只大鼠作为空白对照组。各药物组给予相应药物灌胃,空白对照组及模型组给予等体积的生理盐水,每天1次,给药周期为4周;干预结束后,测定各组血清淀粉酶、透明质酸水平,苏木精—伊红(HE)染色观察胰腺组织病理结构并判定胰腺纤维化指数、腺体破坏指数评分,测定胰腺组织中Wnt、β-catenin mRNA和蛋白表达水平。结果空白对照组胰腺结构正常;模型组胰腺出现导管增生,见大量纤维组织、空泡样变、嗜酸性粒细胞浸润明显,且胰腺组织间隔增宽,脂肪组织代替部分坏死腺体组织;清胰利胆颗粒组及大承气汤低、高剂量组胰腺组织纤维化程度减轻,炎性细胞、脂肪细胞浸润减少。与空白对照组比较,模型组纤维化指数评分、腺体破坏指数评分、血清淀粉酶、透明质酸、胰腺组织Wnt、β-catenin mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05);与模型组比较,清胰利胆颗粒组及大承气汤低、高剂量组纤维化指数评分、腺体破坏指数评分、血清淀粉酶、透明质酸、胰腺组织Wnt、β-catenin mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05),且大承气汤高剂量组水平低于大承气汤低剂量组(P<0.05);清胰利胆颗粒组和大承气汤高剂量组各指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论大承气汤对大鼠胰腺纤维化具有明显改善作用,其机制可能与大承气汤抑制大鼠胰腺组织Wnt/β-catenin通路的激活有关。     

降钙素基因相关肽对高氧暴露胎鼠原代肺泡Ⅱ型细胞的保护作用及其Wnt信号机制

目的探讨降钙素基因相关肽(calcitonin generelated peptide,CGRP)是否可促进高氧损伤肺泡Ⅱ型上皮细胞(typeⅡalveolar epithelial cells,AECⅡ)的存活及其可能涉及的Wnt信号机制。方法 SD胎鼠原代AECⅡ分为空气组、高氧组、高氧+CGRP组、高氧+CGRP+hCGRP8-37组,采用MTT测定各组细胞增殖,流式细胞仪检测细胞死亡,Western blot检测Wnt7b、β-catenin及p-β-catenin表达。结果与空气组对照比较,高氧暴露24 h后死亡细胞数显著升高(P<0.01),细胞增殖活性明显受到抑制(P<0.01),CGRP干预可明显下调高氧暴露后死亡细胞数(P<0.01),减弱高氧对细胞增殖的抑制作用(P<0.01)。高氧暴露后Wnt7b及β-catenin蛋白表达水平明显降低(P<0.01),p-β-catenin表达水平显著增加(P<0.01),CGRP干预后,与单纯高氧暴露组相比Wnt7b、β-catenin蛋白表达水平增加,而p-β-catenin表达水平降低,具统计学差异(P<0.01)。结论 CGRP可减少高氧诱导的细胞死亡、减弱高氧对细胞增殖的抑制效应,改善AECⅡ存活,Wnt7b/β-catenin通路可能参与了CGRP这一调控过程。     

Wnt/β-catenin通路抑制剂Wnt-C59抑制子宫内膜异位症子宫内膜干细胞的增殖

目的分析Wnt/β-catenin通路抑制剂Wnt-C59对子宫内膜异位症(EM)子宫内膜干细胞增殖的影响。 方法分离纯化获得子宫内膜干细胞,随机分为对照组、低剂量组(5 mmol/L Wnt-C59)和高剂量组(30 mmol/L Wnt-C59)。MTT法分析各组细胞增殖情况,Western blotting法分析细胞凋亡蛋白及Wnt/β-catenin通路蛋白的表达变化,酶联免疫吸附测定法分析LC3、Beclin1水平变化。结果与对照组比较,低剂量组和高剂量组细胞增殖受到明显抑制,Wnt3a及β-catenin蛋白水平明显降低,细胞凋亡蛋白Caspase-3及Caspase-9水平明显升高,LC3、Beclin1蛋白水平明显升高(P＜0.05),且高剂量组均更为明显(P＜0.05)。Pearson相关性分析显示,Wnt3a及β-catenin蛋白水平均与细胞增殖抑制率呈负相关(P＜0.05)。结论Wnt/β-catenin通路抑制剂Wnt-C59能有效抑制EM子宫内膜干细胞增殖,促进其凋亡、自噬作用,其作用可能与其对Wnt/β-catenin信号通路的抑制有关。     

连续不卧床腹膜透析的慢性肾功能衰竭患者继发甲状旁腺功能亢进的相关因素

目的 探讨连续不卧床腹膜透析(continuous ambulatory peritoneal dialysis,CAPD)的慢性肾功能衰竭患者甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)升高的相关因素.方法 检测93例患者腹膜透析前后血红蛋白(Hb)、白蛋白(Alb)、血钙(Ca)、血磷(P)、肌酐(Scr)、PTH、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、碱性磷酸酶(ALP)、尿素氮(BUN)等生化指标,并将PTH是否大于300 pg/L分组,对PTH与Hb、Ca、P、Alb、ALP、BUN、Scr等指标的相关性进行多元逐步回归分析.结果 腹膜透析患者的继发性甲状旁腺功能亢进发生率为67.7%,高PTH与贫血、营养状况有关.Ca、BUN、ALP是PTH升高的独立危险因素(P<0.05).结论 腹膜透析的患者普遍存在继发性甲状旁腺功能亢进,高血清Ca、高BUN、高ALP可能与甲状旁腺素升高相关.     

砖茶型氟铝联合应用对大鼠牙齿和骨代谢生化指标的影响

目的 观察砖茶型氟铝联合中毒对大鼠牙齿和骨代谢相关血清学指标的影响,以定量评估氟和铝对牙齿和骨代谢的损伤作用。方法 5周龄SPF级Wistar大鼠70只,随机分为7组,正常对照组,氟组,铝组,氟铝组,高剂量高氟高铝砖茶组,低剂量高氟高铝砖茶组,低氟低铝砖茶组。定期观察大鼠牙齿状态,使用酶联免疫吸附实验检测大鼠血清PTH、OT、CT水平,并且进行血清Ca、P、ALP的检测。结果 氟组、氟铝组、高剂量高氟高铝砖茶组均出现不同程度的氟斑牙;铝组除个别出现牙釉质光泽度消失外未见氟斑牙表现;低氟低铝砖茶组仅出现一例轻度氟斑牙。氟组、氟铝组、高剂量高氟高铝砖茶组的血清PTH、OT都高于对照组(P<0.01),且氟组最高;而铝组PTH,OT,ALP均较对照组降低(P<0.01);氟铝组和所有砖茶组的血清Ca水平都低于对照组(P<0.01),且低剂量高氟高铝砖茶组最低;氟组,氟铝组和高剂量高氟高铝砖茶组血清CT均比对照组低(P<0.01),以氟铝组最低,但铝组则呈显著性升高(P<0.01)。结论 本次研究的剂量条件下单氟对牙齿的损伤作用较明显,氟铝联合作用时表现为拮抗作用,且OT、PTH、CT和ALP能间接的反应骨骼的损伤情况。     

健脾补肾方对腺嘌呤所诱发大鼠肾间质纤维化的治疗作用

[目的]观察健脾补肾方对腺嘌呤所诱发大鼠肾间质纤维化的治疗作用.[方法]灌胃给予200mg/(kg.d)腺嘌呤24d建立大鼠肾间质纤维化模型,将实验动物分为正常对照组、模型对照组、西药组、健脾补肾方小、大剂量组.建立模型后治疗第4周末检测大鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、Ca和P含量.取肾组织行HE和直接红染色,观察肾组织的病理变化和纤维组织增生程度,采用免疫组织化学SP法观察肾组织中α-SMA和Ⅳ型胶原的表达.[结果]与西药组比较,健脾补肾方大剂量组大鼠血清BUN与Scr值明显降低,Ca与P平衡改善(P<0.01);西药组及健脾补肾方小、大剂量组肾组织病理改变及间质纤维化减轻,胶原纤维、α-SMA和Ⅳ型胶原阳性面密度明显低于模型对照组(P<0.01,P<0.001).[结论]健脾补肾方可改善肾功能,减轻腺嘌呤诱发大鼠肾间质纤维化,其机制可能与通过抑制肌成纤维细胞的增殖和活化,减少细胞外基质合成和分泌有关.     

益肾通癃颗粒调控Wnt/β-catenin信号通路对人前列腺癌PC3细胞荷瘤裸鼠的干预作用

目的 观察益肾通癃颗粒对人前列腺癌PC3细胞荷瘤裸鼠Wnt/β-catenin信号通路的干预作用。方法 利用人前列腺癌骨转移细胞PC3建立前列腺癌荷瘤裸鼠模型,将其随机分为模型对照组、阳性药物组、益肾通癃颗粒低剂量组、益肾通癃颗粒中剂量组、益肾通癃颗粒高剂量组和联合用药组,给予相应的药物干预,连续4周。给药结束后处死动物获取皮下移植瘤瘤体组织样本,分别进行HE染色观察病理变化,免疫组化检测细胞增殖情况,TUNEL检测细胞凋亡情况,Western blot及免疫组织化学法检测Wnt信号通路相关基因蛋白的表达水平。结果 益肾通癃颗粒可以有效改善荷瘤裸鼠皮下移植瘤瘤体组织的病理改变,可以显著抑制肿瘤细胞的增殖,促进细胞凋亡的发生,药效呈浓度依赖性。益肾通癃颗粒还可以下调Wnt/β-catenin信号通路相关基因Wnt1、Wnt3a、β-catenin、APC蛋白的表达（P<0.01）,上调Wnt/β-catenin信号通路相关基因GSK-3β蛋白的表达（P<0.01）,降低p-GSK-3β蛋白的活性（P<0.01）,药效与剂量呈正相关性,与Wnt信号通路阻断剂ICG联合时效...     

胡椒碱对成骨细胞成骨分化的影响

目的探讨胡椒碱对成骨细胞成骨分化的影响以及机制。方法分离、培养胎鼠颅骨成骨细胞,分别给予不同浓度的胡椒碱处理,采用MTT法检测胡椒碱对成骨细胞毒性的影响;采用碱性磷酸酶（ALP）染色和ALP活性检测试剂盒检测ALP活性;采用茜素红S染色评估成骨细胞成骨及矿化水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测ALP、I型胶原蛋白α1（COL1A1）、成骨相关转录因子蛋白（OSX）、骨桥蛋白（OPN）、runt相关转录因子2（Runx2）的mRNA表达水平;采用Western blot检测Wnt 1和β-catenin蛋白水平;采用免疫荧光检测β-catenin分布与表达;采用Wnt/β-catenin信号途径特异性拮抗剂IWR-1验证胡椒碱对成骨细胞成骨分化的信号通路。结果在0～60μmol·L-1浓度范围内,胡椒碱对成骨细胞活力无明显影响（P>0.05）。在0～40μmol·L-1浓度范围内,胡椒碱呈剂量依赖性促进成骨细胞ALP活性（P<0.01或P<0.001）和矿化结节形成（P<0.05或P<0.01）,促进ALP、COL1A1、OSX、OPN和Runx2的mRNA表达水平（P<0.05或P<0.01或P<0.001）,促进Wnt 1和β-catenin蛋白的表达水平（P<0.05或P<0.01或P<0.001）。用IWR-1预处理后,由胡椒碱诱导的成骨细胞的基质矿化受到明显抑制（P<0.01）。结论胡椒碱可通过增强Wnt/β-catenin信号促进成骨细胞的成骨分化。     

消瘤方对子宫内膜异位症模型大鼠子宫内膜细胞Wnt通路的影响

目的:探讨消瘤方对子宫内膜异位症模型大鼠子宫内膜细胞Wnt通路的影响。方法:雌性8~12周龄SD大鼠,采用自体移植法手术造模成功后,随机分为模型组、西药组、消瘤方高剂量与低剂量组;另设正常组、假手术组为对照。模型组和假手术组灌胃0.9%Na Cl溶液,西药组灌胃丹那唑混悬液,消瘤方高、低剂量组灌胃不同剂量(55.0、27.5 g·kg-1·d-1)的消瘤方药液,连续给药4周。剖腹观察子宫内膜组织种植及生长情况,并采用Western-blot法检测药物干预后模型大鼠在位及异位子宫内膜细胞Wnt7a、β-catenin蛋白表达的变化。结果:模型组异位内膜组织生长良好,中药高剂量与西药组异位内膜组织萎缩,而各组在位的子宫内膜组织肉眼观察无明显变化;与模型组比较,中药高剂量组和西药组在位、异位内膜细胞中Wnt7a、β-catenin蛋白的表达水平下降(P0.05),且均优于中药低剂量组(P0.05)。结论:消瘤方可促进子宫内膜细胞凋亡,并可抑制Wnt通路的关键调节因子。     

慢性肾病大鼠血管钙化与骨代谢标志物的相关性研究

目的研究慢性肾病(CKD)大鼠血管钙化与血清骨代谢标志物的相关性。方法将36只雄性SD大鼠随机分为对照组(18只)和CKD血管钙化组(18只)。钙化组予以腺嘌呤联合高磷饲料,对照组予以生理盐水和普通饲料。实验第2、4、6周末处死大鼠,留取主动脉行Von Kossa染色和钙含量检测钙化程度,留取血、尿检测尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)和骨代谢标志物:钙(Ca)、磷(P)、1,25-二羟基维生素D3(1,25(OH)2D3)、甲状旁腺素(PTH)、骨源性碱性磷酸酶(BALP)、骨钙素(OC)、总Ⅰ型前胶原氨基末端肽(tPINP)、β-Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(β-CTX)、抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(TRACP-5b)及24 h尿蛋白定量(24 h-Upro)。结果对照组各时间点主动脉Von Kossa染色均未见黑色物质沉积,CKD血管钙化组随时间进展黑色物质沉积逐渐增多。与对照组相比,CKD血管钙化组BUN、Scr、24 h-Upro、主动脉钙含量升高(P<0.05);Ca、1,25(OH)2D3、PTH、tPINP、β-CTX、TRACP-5b降低(P<0.05),P、Ca*P升高(P<0.05),BALP、OC升高(P>0.05);经二元logistic回归发现血清Ca*P升高、PTH和TRACP-5b降低是血管钙化的独立危险因素。根据主动脉钙化程度,将CKD血管钙化组进一步分为轻中度钙化(2 W和4W)和重度钙化(6 W)两个亚组。与轻中度钙化组相比,重度钙化组BUN、Scr、主动脉钙含量升高(P<0.05),24 h-Upro升高(P>0.05);Ca、P、1,25(OH)2D3、tPINP、TRACP-5b升高(P>0.05),Ca*P、PTH、BALP、β-CTX升高(P<0.05),OC降低(P<0.05);进行血管钙化严重程度的危险因素分析发现血清Ca*P升高和OC降低是血管钙化严重程度的独立危险因素。相关性分析显示血清Ca*P、PTH、BALP、β-CTX水平与血管钙化程度呈正相关,OC与血管钙化程度呈负相关。结论 CKD大鼠血管钙化与骨代谢密切相关,检测血清骨代谢标志物有助于评估血管钙化的发生和判断血管钙化的严重程度及进展。     

肾衰合剂对CRF大鼠钙磷的影响

目的:通过动物实验,探讨肾衰合剂治疗慢性肾功能衰竭的机制。方法:用腺嘌呤按250mg/kg·d的剂量制作慢性肾功能衰竭的模型,连续灌胃21天后,收集模型组与对照组血尿备检;将剩下的模型动物分为2组,分别灌服2ml生理盐水或肾衰合剂中药,连续30天,采血备检。结果:灌胃21天时,病理组与对照组比较体重下降,血BUN、Cr、P增高,Ca降低;尿蛋白、钙增高,尿磷(P)降低(P<0.01);连续治疗30天后,治疗组与病理组比较血BUN、Cr、P、尿蛋白、尿Ca降低,血PTH、Ca、尿P升高(P<0.01)。结论:中药肾衰合剂可通过升高血PTH、降低CT而纠正高钙低磷状态,达到治疗慢性肾功能衰竭的目的。     

不同血透模式对尿毒症患者β2微球蛋白清除效果的比较研究

目的探讨不同血透模式对尿毒症患者β2微球蛋白的清除效果。方法尿毒症患者50例随机分为研究组(高通量血透组)和对照组(普通血透组)各25例,比较两组透析前及透析3个月后PTH、BUN、Cr水平。以及透析前及透析2 h末及透析3个月后β2-MG的水平。结果研究组透析后2 h及透析结束时β2-MG较透析前及对照组均明显降低(P<0.05)。研究组透析后PTH、BUN、Scr上述指标较透析前及对照组均明显降低(P<0.05或P<0.01)。研究组透析后下降率较对照组高(P<0.05)。结论高通量透析方式可以明显降低β2微球蛋白水平,提高对β2微球蛋白的清除率,其清除效果明显优于常规普通透析法,值得推广和应用。