miR-93-3p对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌的影响

目的 微小miRNA-93-3p（miR-93-3p）对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌的影响。方法 体外培养肾小管上皮细胞,分为NC组、HG组、anti miR NC组、anti miR-93-3p组、HG+ miR NC组、HG+miR-93-3p组。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR 93 3p的表达;酶联免疫吸附（ELISA）法检测肿瘤坏死因子 α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）水平;甲基噻唑基四唑（MTT）检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白1（CyclinD1）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（C caspase-3）、磷酸化 磷脂酰肌醇激酶（p-PI3K）、磷酸化 蛋白激酶 B（p-AKT）表达量。结果 与NC组相比,HG组miR 93 3p的表达水平显著降低（P＜0.05）,细胞存活率显著降低（P＜0.05）,CyclinD1蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,而细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,C caspase 3、p PI3K、p AKT蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,TNF α、IL 6水平显著升高（P＜0.05）;与anti miR NC组相比,anti miR-93-3p组细胞存活率显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,C caspase 3蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,TNF α、IL 6水平显著升高（P＜0.05）;与HG+ miR NC组相比,HG+miR 93 3p组细胞存活率显著升高（P＜0.05）,细胞凋亡率显著降低（P＜0.05）,CyclinD1蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,C caspase 3、p PI3K、p AKT蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,TNF α、IL 6水平显著降低（P＜0.05）。结论 miR 93 3p通过调控PI3K/AKT信号通路抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌。     

丙泊酚激活线粒体凋亡通路诱导乳头状甲状腺癌TPC 1细胞凋亡和生长阻滞

【摘要】目的 探讨丙泊酚（PPF）通过线粒体凋亡通路对乳头状甲状腺癌TPC 1细胞凋亡和生长的影响。方法 分别采用0、12.5、25、50 μM丙泊酚处理TPC 1细胞,将细胞随机分为PPF 0 μM组、PPF 12.5 μM组、PPF 25 μM组和PPF 50 μM组进行后续实验。BrdU染色检测细胞增殖;克隆形成法检测细胞生长;流式细胞仪检测细胞凋亡;流式分选检测线粒体膜电位;蛋白免疫印迹检测Ki67、PCNA、Bcl 2、Bax、Caspase 3、Caspase 9、c Myc蛋白表达水平;试剂盒检测SOD、MDA、GSH含量。结果 与PPF 0μM组相比较,PPF 25 μM组和PDF 50 μM组BrdU阳性细胞数显著降低（P＜005）,克隆形成率显著降低（P＜005）,Ki67、PCNA蛋白水平显著降低（P＜005）,细胞凋亡率显著升高（P＜005）,细胞线粒体膜电位明显降低,Bax/Bcl 2、cleaved caspase 3/Caspase 3、cleaved caspase 9/Caspase 9比值显著升高（P＜005）,c Myc蛋白水平显著降低（P＜005）,SOD含量显著降低（P＜005）,MDA、GSH含量显著升高（P＜005）。结论 丙泊酚激活线粒体凋亡通路诱导乳头状甲状腺癌TPC 1细胞凋亡和生长阻滞。     

利多卡因调控miR 15a 5p对肝癌细胞生物学功能的影响及其机制

【摘要】目的 探讨利多卡因对肝癌细胞凋亡、迁移和侵袭的影响及其机制。 方法 使用不同浓度利多卡因作用于肝癌细胞HepG2,正常培养的HepG2细胞为对照组。流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法（Western blot）检测B细胞淋巴瘤/白血病 2（Bcl 2）、Bcl 2相关X蛋白（Bax）、E 钙黏蛋白（E cadherin）、基质金属蛋白酶 2（MMP 2）蛋白表〖JP2〗达,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭,qPCR检测细胞中miR 15a 5p表达。在细胞中转染miR 15a 5p、anti miR 15a 5p〖JP〗及各自阴性对照的转染并使用01 mmol/L利多卡因处理细胞,观察其对HepG2细胞凋亡、迁移、侵袭的影响。 结果 与对照组相比,001、01和1 mmol/L利多卡因增加细胞凋亡率和Bax蛋白表达量（P＜005）,降低Bcl 2蛋白水平（P＜005）。01 mmol/L利多卡因明显降低迁移细胞数、侵袭细胞数和MMP 2蛋白表达量（P＜005）,升高E cadherin蛋白水平和miR 15a 5p表达量（P＜005）。过表达miR 15a 5p增加细胞凋亡率、Bax和E cadherin蛋白表达量（P＜005）,减少迁移细胞数、侵袭细胞数、Bcl 2和MMP 2蛋白表达量（P＜005）。 结论 利多卡因通过调控miR 15a 5p表达抑制肝癌细胞迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡。     

茯苓酸抑制H2O2诱导的脑微血管内皮细胞凋亡及促进细胞存活

【摘要】目的 探讨茯苓酸（PA）对过氧化氢（H2O2）诱导的脑微血管内皮细胞凋亡及增殖的影响。方法 体外培养小鼠脑微血管内皮细胞株bEnd.3,随机分为NC组（正常培养细胞）、H2O2组（H2O2浓度为100 μmol/L）、H2O2+PA 10 μmol/L组（H2O2浓度为100 μmol/L,PA浓度为10 μmol/L）、H2O2+PA 20 μmol/L组（H2O2浓度为100 μmol/L,PA浓度为20 μmol/L）、H2O2+PA 40 μmol/L组（H2O2浓度为100 μmol/L,PA浓度为40 μmol/L）。采用甲基噻唑基四唑（MTT）法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;检测乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH Px）、活性氧（ROS）的水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved caspase 3）的表达量。结果 与NC组比较,H2O2组细胞存活率及CAT、SOD、GSH Px的水平显著降低（P＜005）,LDH、MDA、ROS的水平显著升高（P＜005）,细胞凋亡率与Cleaved caspase 3蛋白水平显著升高（P＜005）;与H2O2组比较,H2O2+PA 10 μmol/L组、H2O2+PA 20 μmol/L组、H2O2+PA 40 μmol/L组细胞存活率及CAT、SOD、GSH Px的水平显著升高（P＜0.05）,LDH、MDA、ROS的水平显著降低（P＜005）,细胞凋亡率与Cleaved caspase 3蛋白水平显著降低（P＜005）。结论 茯苓酸可抑制H2O2诱导的脑微血管内皮细胞凋亡及促进细胞存活。     

NLRP3对病毒感染心肌细胞凋亡及炎症反应的作用

【摘要】目的 探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）对病毒感染的心肌细胞炎症及凋亡的影响。方法 分离培养SD乳鼠心肌细胞,采用基因沉默的方法敲减NLRP3基因的表达,然后随机分为4组,分别包括正常对照组、Scrambled siRNA组、CVB3+Scrambled siRNA组、CVB3+NLRP3 siRNA组。ELISA检测心肌损伤标志物CK MB、cTnI及IL 1β、IL 18等炎症因子水平,RT qPCR、Western blot检测NLRP3炎性小体通路的激活情况以及细胞内外源凋亡途径caspase 8、Bcl 2、Bax、caspase 9、caspase 3等的水平。结果 与正常对照组相比,CVB3+Scrambled siRNA组中NLRP3通路被激活,其下游的caspase 1被活化,IL 1β、IL 18表达增加（P＜005）,caspase 8、caspase 3、caspase 9活化增强,Bcl 2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增高,Bax/Bcl 2比值增大（P＜005）,心肌细胞凋亡及CK MB、cTnI均增加（P＜005）。敲减NLRP3基因表达后,与CVB3+Scrambled siRNA组比较, caspase 1活性被抑制,IL 1β、IL 18表达降低（P＜005）,caspase 3、caspase 9活性降低,Bcl 2下降程度减弱,Bax/Bcl 2比值降低（P＜005）,但对caspase 8、Bax的蛋白表达无明显影响（P＞005）。结论 NLRP3信号通路在病毒感染早期导致心肌细胞损伤过程中起重要作用,抑制NLRP3过度激活会减轻心肌细胞炎症损伤及细胞凋亡,可能是治疗病毒性心肌炎的潜在靶点。     

Akt2-Bad信号通路参与NSCLC凋亡

【摘要】目的 探讨Akt2/Bad信号通路在非小细胞肺癌（NSCLC）凋亡中的作用机制。方法 构建稳定过表达Bad同时稳定干扰Akt2的双病毒载体,将未感染慢病毒载体的H1299、H292、SPC A1、H460及SK MES 1细胞为NSCLC组,阴性对照病毒转染NSCLC细胞为NC组;稳定干扰Akt2的NSCLC细胞为shAkt2组;稳定过表达Bad的NSCLC细胞为Bad组;稳定干扰Akt2表达的同时稳定过表达Bad基因的NSCLC细胞为shAkt2+Bad组。通过体外实验,观察共感染组细胞凋亡及侵袭能力的变化。应用Western blot技术检测各组NSCLC细胞株Bad、Akt2以及凋亡相关信号蛋白BCL 2、BCL XL、caspase 9、Cyto c蛋白的表达水平。体内构建H1299及SPC A1荷瘤裸鼠模型,观测瘤体重量,利用TUNEL染色比较Akt2/Bad信号通路对肺癌细胞凋亡的作用。 结果 与NSCLC组比较,shAkt2+Bad组细胞和移植瘤体中Akt2蛋白水平明显减少(P＜005),Bad蛋白水平显著增加(P＜005)。shAkt2+Bad组细胞凋亡率明显高于shAkt2组及Bad组(P＜005), H1299/SPC A1体内荷瘤实验表明, shAkt2+Bad组瘤体重量明显低于Bad组、NSCLC组及NC组(均P＜005),细胞凋亡率均高于其他3组(均P＜005)。shAkt2和shAkt2+Bad组caspase 9表达显著降低;Bad组、shAkt2组和shAkt2+Bad组cyto C表达显著增加,而BCL 2、BCL XL在各组细胞中表达比较差异无统计学意义（P＞005）。结论 Akt2 Bad信号通路参与NSCLC的凋亡。     

大鼠心肌梗死后与FSTL1和miRNA 200的表达及其机制

【摘要】 目的 探讨SD大鼠急性心肌梗死（AMI）与血清卵泡抑素样蛋白1（FSTL1）及其相关miR 200b 3p的表达情况。方法 20只SD大鼠分为AMI组和Sham组,AMI组结扎大鼠左冠状动脉前降支,而Sham组不结扎,术后1d收集两组大鼠静脉血和心脏组织,采用ELISA法检测大鼠血浆cTnI和FSTL1的表达,用qRT PCR法检测大鼠血浆、组织rno miR 200b 3p和组织FSTL1的表达,采用Western blot法检测组织FSTL1的表达。结果 AMI组大鼠心肌梗死后1d血浆FSTL1的表达较Sham组明显升高（P＜005）,其ROC曲线AUC为1000（P＜005）;而AMI组大鼠心肌梗死后1d心脏组织中FSTL1的表达无论在基因水平还是蛋白水平都较Sham组明显降低（P＜005）;AMI组大鼠术后1d血浆中rno miR 200b 3p的表达较Sham组明显降低（P＜005）,而AMI组大鼠术后1d心脏组织中rno miR 200b 3p较Sham组明显升高（P＜005）。结论 FSTL1和rno miR 200b 3p都可能与大鼠AMI有关,FSTL1可以作为AMI的心肌标志物,rno miR 200b 3p可能通过调控FSTL1的表达而参与AMI发病机制的炎症反应、氧化应激和细胞凋亡等过程。     

miR-1275通过靶向〖STBX〗IGF 1R〖STBZ〗基因对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制

【摘要】目的 探讨miR 1275靶向胰岛素样生长因子1受体（IGF 1R）对鼻咽癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法 通过在线生物信息学软件预测miR 1275和IGF 1R的靶向关系,采用双荧光素酶报告基因实验进行验证。Western blot检测转染miR 1275 模拟物（mimics）或抑制物（inhitior）后的鼻咽癌HONE 1细胞IGF 1R表达。MTT法、流式细胞术及Western blot检测miR 1275/IGF 1R分子轴对HONE 1细胞增殖、凋亡及蛋白激酶B（AKT）、磷酸化的蛋白激酶B（p AKT）、细胞增殖核抗原( PCNA)和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase 3）表达的影响。结果 HONE 1细胞转染miR 1275 mimics后,miR 1275表达明显升高,细胞增殖活力明显降低,凋亡率明显升高,p AKT和PCNA表达明显降低,cleaved caspase3表达明显升高（P＜005）。miR 1275可靶向作用于IGF 1R并下调其表达。抑制IGF 1R表达可明显降低HONE 1细胞增殖活力,促进细胞凋亡,下调p AKT和PCNA,上调cleaved caspase3表达（P＜005）。抑制miR 1275和IGF 1R表达可逆转IGF 1R对细胞增殖、凋亡及p AKT、PCNA和cleaved caspase3表达的影响。结论 过表达miR 1275可抑制鼻咽癌HONE 1细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制AKT信号途径。IGF 1R是miR 1275的靶基因,miR 1275可靶向IGF 1R并调控AKT信号途径影响鼻咽癌细胞增殖和凋亡,miR 1275/IGF 1R分子轴可能成为鼻咽癌治疗的重要靶点。     

SOX4基因抑制肝癌细胞增殖与侵袭能力

【摘要】目的 探讨小干扰RNA技术（siRNA）沉默SOX4基因对肝癌细胞增殖、侵袭能力的影响。方法 构建siRNA转染人肝癌细胞株SMMC 7721,按转染质粒区别分为siRNA SOX4组、siRNA NC组,并设立空白对照组。实时荧光定量聚合酶联反应（RT PCR）检测各组细胞SOX4 mRNA,蛋白印迹法（WB）测定SOX4蛋白水平,噻唑蓝法（MTT）测定转染不同时间肝癌细胞增殖能力,流式细胞术测定肝癌细胞凋亡率,Transwell小室实验测定肝癌细胞侵袭能力。结果 转染后siRNA SOX4组SOX4 mRNA相对表达量低于空白对照组和siRNA NC组（P＜005）;转染后siRNA SOX4组SOX4蛋白表达量为低于空白对照组和siRNA NC组（P＜005）;转染不同时间siRNASOX4组细胞增殖活性均低于空白对照组和siRNA NC组（P＜005）;转染后siRNA SOX4组细胞凋亡率高于空白对照组和siRNA NC组（P＜005）;转染后siRNASOX4组穿膜细胞比例低于空白对照组和siRNA NC组（P＜005）。结论 siRNA技术沉默SOX4基因可降低肝癌细胞增殖及侵袭能力,促进癌细胞凋亡。     

miR-224-5p 通过靶向SMAD5对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖和凋亡的调控作用

【摘要】目的 探讨miR 224 5p对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖和凋亡的作用及机制。方法 RT qPCR检测弥漫大B细胞淋巴瘤组织和细胞中miR 224 5p与SMAD5 mRNA的表达。利用Lipofectamine 2000将miR NC、miR 1224 5p mimic、miR 224 5p inhibitor 、pc SMAD5质粒分别或联合转染进入U2932细胞分别记为miR NC组、miR 1224 5p mimic组、miR 224 5p inhibitor组,未转染正常培养的U2932细胞记为Control组。MTT法检测细胞生长,克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白印迹法检测cleaved caspase 3、Bax、Bcl 2、SMAD5蛋白相对表达量,双荧光素酶报告检测靶向关系。结果 miR 224 5p在弥漫大B细胞淋巴瘤组织和细胞中均明显下调。与Control组相比,miR 224 5p mimic组U2932细胞吸光值和克隆细胞数目明显减少、细胞凋亡率及cleaved Caspase 3、Bax表达明显升高、Bcl 2表达明显降低（P＜001）,miR 224 5p inhibitor组U2932细胞吸光值和克隆细胞数目明显增加、细胞凋亡率及cleaved Caspase 3、Bax表达明显降低、Bcl 2表达明显升高（P＜001）。miR 224 5p靶向下调SMAD5。共转染pc SMAD5后逆转miR 224 5p对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖和凋亡的作用。结论 miR 224 5p过表达靶向SMAD5抑制弥漫大B细胞淋巴瘤U2932细胞增殖并诱导其凋亡。     

干扰LINC00308促进miR-634对前列腺癌细胞增殖与凋亡的影响

【摘要】 目的 研究干扰长链非编码RNA（lncRNA）LINC00308是否通过促进微小RNA（miRNA） 634影响前列腺癌细胞的增殖与凋亡。 方法 实时荧光定量PCR（qRT PCR）检测前列腺癌组织中LINC00308的表达。利用LINC00308小干扰RNA（si LINC00308）转染前列腺癌细胞PC 3M和DU145，构建干扰LINC00308的细胞，采用qRT PCR检测LINC00308和miR 634的表达水平，流式细胞术评估细胞的周期与凋亡，蛋白质印迹法（Western Blot）检测细胞核相关抗原Ki67（Ki67）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（Caspase3）蛋白的表达。starBase在线工具预测结合双荧光素酶报告实验分析LINC00308对miR 634的靶向调控。在PC 3M和DU145细胞中转染miR 634 mimic，利用上述方法检测miR 634在细胞增殖凋亡中的作用。 结果 前列腺癌组织中的LINC00308表达水平明显高于癌旁组织（P＜005）。干扰LINC00308显著提高PC 3M和DU145细胞的miR 634的表达水平、G0 G1期细胞比例、细胞凋亡率和Caspase3蛋白水平，明显降低S期细胞比例、Ki67蛋白水平（P＜005）。LINC00308靶向调控miR 634的表达。转染miR 634 mimic显著增加PC 3M和DU145细胞的G0 G1期细胞比例、凋亡率和Caspase3蛋白水平，明显减少S期细胞比例和Ki67蛋白水平（P＜005）。 结论 干扰LINC00308可以促进miR 634的表达，阻滞前列腺癌细胞周期，并诱导细胞凋亡。     

重症急性胰腺炎患者外周血miR 21 3p、miR 22 3p与并发肺损伤的相关性

【摘要】目的 探讨重症急性胰腺炎（SAP）患者外周血miR 21 3p、miR 22 3p与并发肺损伤（ALI）的相关性。方法 选择2017年7月~2020年2月本院收治的124例SAP患者作为研究对象,按照是否合并ALI分为单纯SAP组（78例）、SAP合并ALI组（46例）;另选择同期体检的50例健康志愿者作为对照组。采集患者外周静脉血,采用实时荧光反转录定量聚合酶链式反应检测miR 21 3p、miR 22 3p表达,收集SAP患者临床资料。结果 单纯SAP组、SAP合并ALI组患者外周血miR 21 3p、miR 22 3p显著高于对照组（P＜005）;SAP合并ALI组高于单纯SAP组（P＜005）。不同CT分级、伴有胸水与否、急性生理学与慢性健康状况Ⅱ（APACHEⅡ）评分患者外周血miR 21 3p、miR 22 3p水平比较差异具统计学意义（P＜005）;CT分级为E级、合并胸水、APACHEⅡ评分≥15分患者外周血miR 21 3p、miR 22 3p水平高于CT分级为D级、无胸水、APACHEⅡ评分＜15分的患者（P＜005）。Logistic回归分析显示,CT分级、胸水、外周血miR 21 3p、miR 22 3p表达水平与SAP患者并发ALI相关（P＜005）。外周血miR 21 3p、miR 22 3p诊断ALI曲线下面积（AUC）为0770、0812,当截点值为2668、1815时,约登指数最大;两者联合诊断AUC为0869。结论SAP患者外周血miR 21 3p、miR 22 3p与ALI并发密切相关,临床可检测其水平明确SAP程度及是否发生ALI,对指导临床治疗具有重要价值。     

不同病理类型及分期甲状腺癌中miR221 miR222 miR197和miR346的表达研究

【摘要】目的 探讨不同病理类型及分期甲状腺癌中miR 221、miR 222、miR 197和miR 346的表达水平,为临床手术方式选择及术后治疗提供参考。方法 选取2013年6月～2017年8月行甲状腺手术的40例甲状腺癌（乳头状癌、滤泡癌各20例）及癌旁正常甲状腺组织、20例良性甲状腺疾病组织,术中取材后,立即放入液氮中保存后转入-70℃保存。采用定量RT PCR检测miR 221、miR 222、miR 197和miR 346在相应组织标本中的表达水平。结果 对甲状腺癌,miR 221与miR 222的表达与患者的年龄、性别、最大肿瘤灶等无明显相关性(P＞005),与TNM分期及淋巴转移情况相关（P＜005）;miR 197和miR 346的表达在20例甲状腺滤泡癌中均有明显升高（P＜005）,乳头状癌组织中未见显著变化（P＞005）。miR 221与miR 222在良性甲状腺疾病组织表达量变化均不明显（P＞005）;但在甲状腺癌组织中的表达变化显著,差异均有统计学意义（P＜005）;对miR 197和miR 346在相应组织标本中的表达水平进行比较结果显示,良性甲状腺疾病组织中miR 197和miR 346表达没有明显变化(P＞005);在20例滤泡癌组织中明显升高,差异有统计学意义（P＜005）;在乳头状癌组织及癌旁正常组织中的均无明显变化(P＞005)。结论 不同病理类型及分期甲状腺癌中miRNA的表达可作为甲状腺癌早期诊断、淋巴结转移、复发及远处转移密切相关的预警分子,为甲状腺癌手术方式选择及术后指导治疗提供了重要依据。     

布比卡因介导PI3K/AKT/mTOR通路诱导结肠癌SW480细胞自噬和凋亡及抑制裸鼠移植瘤的形成

【摘要】目的 探究布比卡因介导PI3K/AKT/mTOR通路诱导结肠癌SW480细胞自噬和凋亡的机制及其对裸鼠移植瘤形成的抑制作用。方法 结肠癌SW480细胞分为对照组、布比卡因组（025、05、1 mM）。各组细胞处理24h后采用Edu染色检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测增殖、凋亡、自噬及信号通路相关蛋白表达。建立结肠癌裸鼠模型,随机分为布比卡因组（5、10、20 mg）及对照组,分别腹腔注射5、10、20 mg/kg的布比卡因及等体积生理盐水,1次/d,连续治疗30d后处死小鼠,取瘤、称重,免疫组化检测肿瘤组织Ki67蛋白阳性表达,并绘制各组裸鼠生存曲线。〖HT结果 随着布比卡因浓度增加,SW480细胞增殖数及增殖相关蛋白Ki67、PCNA表达量逐渐降低（F=94068、160905、49255,P＜005）,且均低于对照组（P＜005）;SW480细胞凋亡数及凋亡相关蛋白Caspase 3、Caspase 9表达量逐渐升高（F=30948、110730、233550,P＜005）,且均高于对照组（P＜005）。随着布比卡因浓度增加,SW480细胞Beclin1、ATG8蛋白相对表达量,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及LC3阳性数均逐渐升高（F=65287、112337、50602、26690,P＜005）,且高于对照组（P＜005）;p62蛋白相对表达量及p PI3K/PI3K、p AKT/AKT、p mTOR/mTOR比值逐渐降低（F=33276、98246、102488、58051,P＜005）,且均低于对照组（P＜005）。给药30d后,布比卡因给药组裸鼠肿瘤质量、Ki67阳性细胞占比及30d生存率均低于对照组（P＜005）。结论 布比卡因可抑制结肠癌SW480细胞增殖,诱导其发生自噬及凋亡,并抑制裸鼠移植瘤的形成,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR通路有关。     

内质网应激自噬参与葫芦素E诱导的结肠癌细胞凋亡

【摘要】目的 观察内质网应激和自噬反应对葫芦素E（CuE）诱导人结肠癌细胞系HT 29凋亡的作用。方法 采用0001、001、01、1、10 μmol/L的CuE分别处理培养的HT 29细胞24、48及72 h,对照组仅用DMEM培养液。Annexin V FITC/PI双染色流式细胞分析法检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹法检测内质网应激相关蛋白CHOP、Grp78以及自噬相关蛋白Beclin1、LC3表达水平。结果 Annexin V FITC/PI双染色流式细胞分析结果表明,随着CuE浓度升高,作用时间延长,凋亡细胞占总细胞比例明显升高（P＜005）,呈时间与剂量依赖性。蛋白印迹分析结果显示,用CuE处理HT 29细胞24 h后,与对照组相比,内质网应激相关蛋白CHOP及Grp78蛋白表达明显升高（P＜005）,自噬相关蛋白Beclin1表达逐渐增（P＞005）,胞浆型LC3（LC3 Ⅰ）发生酶解,转变为自噬体膜型LC3 Ⅱ,且LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ比值大小呈现出先上升（P＜005）后下降（P＞005）的趋势。结论 内质网应激和自噬反应参与介导了CuE引起的人结肠癌细胞HT 29凋亡,其可能是CuE诱导结肠癌细胞凋亡的重要途径。     

金雀异黄酮对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响

【摘要】目的 探讨金雀异黄酮对心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)大鼠心肌细胞凋亡Bcl 2、Bax和Caspase 3蛋白及mRNA表达的影响。方法 60只雄性SD大鼠分别为假手术组、模型组、阿司匹林组（10 mg·kg-1·d-1）、金雀异黄酮低剂量组（20 mg·kg-1·d-1）、中剂量组（40 mg·kg-1·d-1）和高剂量组（80 mg·kg-1·d-1）,每组10只。给药2周后经典方法构建MI/RI大鼠模型后HE染色检测心肌组织;采集血清测乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同功酶(CK MB)和α 羟丁酸脱氢酶（α HBD）,采集心脏检测丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、总抗氧化能力(T AOC)和一氧化氮合酶（NOS）;同时,RT PCR和Western Blotting检测心肌组织中Bcl 2、Bax和Caspase 3蛋白及mRNA表达。结果 假手术组心肌排列整齐无断裂,模型组出现大量断裂;与模型组相比,各治疗组明显改善;模型组大鼠血清LDH、CK、CK MB、α HBD高于假手术组（P＜005）,心肌MDA水平高于假手术组（P＜005）,心肌SOD、T AOC及 NOS水平均低于假手术组（P＜005）;与模型组比较,金雀异黄酮三个剂量组和阿司匹林组血清LDH、CK、CK MB、α HBD明显降低（P＜005）,心肌MDA明显降低（P＜005）,心肌SOD、T AOC及NOS明显升高（P＜005）;模型组大鼠心肌Bcl 2蛋白和mRNA表达均低于假手术组（P＜005）,Bax和Caspase 3蛋白和mRNA表达均高于假手术组（P＜005）,而金雀异黄酮三个剂量组和阿司匹林组Bcl 2显著上调（P＜005）,Bax和Caspase 3显著下调（P＜005）。结论 金雀异黄酮可抑制心肌细胞凋亡,同时提高心肌抗氧化能力,抑制MI/RI给心肌带来的损伤。     

法舒地尔联合依达拉奉对颅内破裂动脉瘤术后脑血管痉挛患者血清SICAM-1及Caspase-3的影响

【摘要】 目的 探讨法舒地尔联合依达拉奉对颅内破裂动脉瘤术后脑血管痉挛患者血清可溶性细胞间黏附分子 1（SICAM 1）、天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase 3）的影响。方法 选择2015年5月~2017年3月收治的蛛网膜下腔出血患者95例,经脑血管造影确诊为动脉瘤,以随机数表法分为观察组50例和对照组45例,对照组使用依达拉奉治疗,观察组在对照组的基础上使用法舒地尔进行治疗。比较两组的术后血管痉挛及迟发脑梗死发生率、治疗前后血清SICAM 1、Caspase 3水平、格拉斯哥昏迷评分（Glasgow Coma Scale,GCS ）、巴氏（Barthel）指数评分、神经功能缺损( NFI) 评分、大脑中动脉(MCA) 平均血流速度及不良反应发生情况。结果 观察组后血管痉挛及迟发脑梗死发生率均显著低于对照组（P＜005）。治疗前,两组患者血清SICAM 1、Caspase 3水平无显著差异（P＞005）;治疗后,两组各血清SICAM 1、Caspase 3水平较治疗前均显著下降（P＜005）,且观察组血清SICAM 1、Caspase 3水平均明显低于对照组（P＜005）。治疗前,两组患者MCA平均血流速度无显著差异（P＞005）;治疗后,两组MCA平均血流速度较治疗前均显著升高（P＜005）,且观察组MCA平均血流速度均明显高于对照组（P＜005）。治疗前,两组患者GCS评分、Barthel 指数评分及NFI评分无显著差异（P＞005）;治疗后,两组GCS评分、Barthel 指数评分较治疗前均显著升高,NFI评分显著降低（P＜005）,且观察组GCS评分、Brthel 指数评分均明显高于对照组,NFI评分显著低于对照组（P＜005）。观察组不良反应总发生率为1200%,显著低于对照组的3333%（P＜005）。结论 在颅内破裂动脉瘤术后脑血管痉挛患者中使用法舒地尔联合依达拉奉效果显著,可有效改善患者的血清血清SICAM 1、Caspase 3水平,值得推广与运用。     

抑制TNFR/RIPK信号通路对神经细胞凋亡的影响及机制研究

【摘要】 目的 研究抑制TNFR/RIPK信号通路对急性脊髓损伤（ASCI）大鼠神经细胞凋亡的影响及作用机制。方法 160只雄性SD大鼠,随机分为空白对照组、假手术组、模型组、Nec 1组,每组又根据时间点分为12h、24h、3d、7d四个亚组。采用动脉夹钳夹法制作ASCI模型,空白对照组不做任何处理,假手术组仅暴露脊髓,不损伤脊髓,模型组和Nec 1组用动脉瘤夹脊髓全横截面1min,缝合伤口。空白对照组、假手术组和模型组注射给予生理盐水,Nec 1组注射坏死性凋亡抑制剂Necrostain 1（Nec 1）溶液1μl/kg,1次/d,分别给药12h、24h、3d、7d。给药后以BBB评分对各组大鼠后肢神经功能恢复情况进行评分,完成评分后,取10只给药7d的大鼠脊髓,进行HE染色、Nissl染色、碘化丙啶（PI）染色、Tunel染色;另取10只给药7d的大鼠,取脊髓,用Western Blot检测RIP1、RIP3、Bcl 2蛋白表达情况。结果 模型组和Nec 1组各时间点的BBB评分均显著低于空白对照组和假手术组（P＜005）,Nec 1组各时间点的BBB评分显著高于模型组（P＜005）。造模7d后,模型组脊髓出现坏死、空洞现象,大量炎性细胞浸润,坏死区域面积显著高于假手术组（P＜005）;尼氏体呈细颗粒状,神经元数量减少、染色浅、排列无序,坏死性凋亡细胞较多;PI红染细胞、Tunel阳性细胞数、凋亡小体数量,以及RIPK1、RIPK3、Bcl 2蛋白表达水平显著多于假手术组（P＜005）。给予Nec 1治疗7d后,Nec 1组脊髓坏死组织较模型组少,空洞现象得到改善,炎性细胞浸润现象好转,Nec 1组坏死区域面积显著低于空白对照组和假手术组（P＜005）;尼氏体着色的神经元细胞染色较深,颗粒变粗,存活神经元数量显著高于模型组（P＜005）;PI红染细胞数、凋亡小体数,以及RIPK1、RIPK3蛋白表达水平显著少于模型组（P＜005）,Bcl 2蛋白表达水平显著高于模型组（P＜005）。结论 坏死性凋亡抑制剂Nec 1能通过抑制TNFR/RIPK信号通路,下调RIPK1、RIPK3、上调Bcl 2的表达来缩小ASCI损伤面积,缓解炎症浸润,减少损伤周围神经元数量,改善神经元功能,提高损伤神经元及胶质细胞存活率,改善大鼠BBB评分,抑制坏死性凋亡。     

普拉克索对颅脑损伤大鼠神经功能的保护作用

【摘要】目的 探讨普拉克索对颅脑损伤大鼠神经功能的保护作用。方法 健康成年SD大鼠60只,随机分为假手术组、模型组、普拉克索低（0125mg/kg）和高（025mg/kg）剂量四组,每组15只。模型组和普拉克索组大鼠固定在Feeney’s自由落体架构建大鼠颅脑损伤模型,假手术组只做头部窗口不予打击。模型构建后,普拉克索组灌胃相应剂量的普拉克索,假手术组和模型组灌胃等体积容量的生理盐水,治疗1次/1d,连续14d,分别在治疗第1d、第7d和14d用mNSS评分系统评估各组大鼠的神经功能;术后9～13d进行Morris水迷宫测试,记录各组大鼠逃避潜伏期、目标象限内的穿台次数和停留时间;术后15d取大鼠的脑组织进行免疫组化染色分析活化caspase 3和IL 6的表达;western blot检测大鼠脑组织中NF κB、MMP 9和VEGF蛋白表达量。结果 大鼠术后治疗第一天,各组mNSS评分比较差异无统计学意义（P＞005）,而第7d和14d普拉克索组大鼠mNSS评分显著降低（P＜005）;Morris水迷宫结果显示普拉克索组大鼠的逃避潜伏期显著低于模型组,目标象限的穿台次数和时间明显高于模型组（P＜005）;免疫组化染色结果显示普拉克索组活化caspase 3蛋白和IL 6的表达明显低于模型组;western blot结果显示普拉克索组NF κB、MMP 9和VEGF蛋白表达量显著高于模型组（P＜005）。结论 普拉索克能通过降低脑损伤模型大鼠活化IL 6和活化caspase 3蛋白表达,抑制细胞凋亡,通过激活NF κB信号通路上调MMP 9和VEGF蛋白表达,促进细胞增殖和血管生长,保护脑损伤大鼠神经功能。     

全氟化碳对脂多糖诱导肺泡上皮细胞炎性反应及单免疫球蛋白白介素1相关蛋白表达的影响

【摘要】 目的 探讨全氟化碳（PFC）对脂多糖（LPS）诱导人肺泡上皮A549细胞炎性反应及单免疫球蛋白白介素 1受体相关蛋白（SIGIRR）表达的影响。方法 实验分为正常细胞组、全氟化碳+脂多糖（PFC+LPS）组、全氟化碳（PFC）组及脂多糖（LPS）组。各组细胞经相应处理24 h后,用酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养上清中的TNF α、IL 6和IL 10含量,用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测核转录因子 κB （NF κB）和SIGIRR的表达。结果 ELISA结果显示,LPS组TNF α、IL 6水平较正常细胞组升高（P＜005）;PFC+LPS组TNF α、IL 6水平较LPS组下降（P＜005）;与正常细胞组相比,PFC组IL 10水平升高（P＜005）,PFC+LPS组IL 10水平较LPS组升高（P＜005）。Western blot 结果显示,与正常细胞组相比,LPS组核内磷酸化NF κB p65表达上调（P＜005）,PFC+LPS组核内磷酸化NF κB p65表达水平较LPS组降低（P＜005）;与正常细胞组相比,LPS组SIGIRR表达水平下调（P＜005）,PFC+LPS组SIGIRR表达水平较LPS组上调（P＜005）。PFC本身对TNF α、IL 6含量及NF κB p65表达无影响,但PFC可促进A549细胞释放IL 10及上调SIGIRR表达（P＜005）。结论 PFC可减轻A549细胞对LPS诱导的炎性反应,促进抗炎因子IL 10分泌及上调负调控分子SIGIRR表达是可能的分子机制。