猪射出精子体外获能与顶体反应的超微结构研究

应用透射电镜技术，研究了猪射出精子的超微结构，添加咖啡因和透明质酸，对体外培养猪射出精子获能和顶体反应的影响。在体外培养液中，精子发生两种顶体反应，主要表现为质膜大部分完整，顶体外膜在质膜下发生囊泡化和质膜消失；顶体外膜发生囊泡化两种类型。透明质酸处理，不能产生诱导顶体反应：添加获能剂的自发顶体反应中，主要表现为前一种类型，而在咖啡因诱导的顶体反应中，第二种类型反应增加，质膜可能与顶体外膜发生融合而产生杂合泡。     

人骨髓间充质干细胞体外优化条件的研究

目的通过比较5种不同体外培养人骨髓问充质干细胞（hMSCs）条件，找到一种能在质和量上均能满足需要的体外培养条件。方法使用Percoll-Paque液（1．073g／ml）分离人骨髓血，采用DMEM＋15%的小牛血清、人体白蛋白、人血清、脐带血清及MesenCult培养基，在相同培养条件下，动态观察hMSCs的生长状况、细胞数量变化，通过流式细胞仪检测细胞的纯化状况。结果5种培养条件在一定时相内均能获得较为纯化的hMSCs，但在生长速度和纯化率上存在一定的差异。结论Mesen Cult是一种较为优秀的hMSCs培养基．胎儿脐带血清培养也能在短期内获得足量纯化的hMSCs．人血清的使用还需要做进一步的研究。     

人类蜕膜细胞体外培养研究

为了简化人类蜕膜细胞外培养技术,采用复合消化酶改进蜕膜组织的消化过程,全组份蜕膜细胞培养加传代简化蜕膜细胞（ｄｅｃｉｄｕａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌ,ＤＳＣ）提纯、泌乳素（ｐｒｏｌａｃｔｉｎ,ＰＲＬ）免疫组化检测培养细胞组成。所采用的消化方法具有耗时少,消化彻底、活细胞率高等优点,ＰＲＬ免疫组化显示９５％蜕膜细胞为ＤＳＣ。结果提示实验方法简单、经济、实用,简化了原来复杂的ＤＳＣ提纯程序。     

成体小鼠肝干细胞的长期体外培养和体内分化研究

目的：从成体小鼠肝脏中分离培养肝干细胞，并分析其分化潜能。方法：利用门静脉灌流消化法从成体小鼠肝脏中分离细胞并进行体外长期培养，通过脾结节形成实验对其增殖和分化潜能作进一步分析。结果：从成体小鼠肝脏中分离的细胞呈集落样生长，不仅可稳定传代，而且移植至经致死剂量照射的小鼠体内能够形成脾结节，结节中含有肝细胞和胆管上皮细胞特异性标志的细胞。结论：成体小鼠肝脏中存在具有多潜能性的肝干细胞，该细胞的体外成功培养为肝干细胞生物学特性的研究及干细胞的应用奠定了基础。     

饲养层与干细胞的体外培养

干细胞的体外培养要求在保持其未分化状态的同时,还要保持其旺盛的分裂增殖能力,所以在原代或初期培养时,干细胞的体外培养依赖饲养层细胞及其分泌的生长因子,饲养层细胞一方面可促进胚胎干细胞的附着,另一方面可分泌一些促干细胞增殖并抑制其分化的细胞因子,不同实验室在体外培养干细胞过程中所使用的饲养层细胞有所不同,故在此予以综述。     

不同脑区来源的成体大鼠神经干细胞体外增殖特性

目的：探讨成年大鼠神经干细胞的脑内分布及体外培养条件，增殖特性，为自体神经干细胞移植修复神经损伤提供理论依据。方法：分离成年大鼠纹状体，室区（VZ）和室下区（SVZ）的细胞，利用无血清培养技术培养并观察神经干细胞的生长规律，采用SABC法进行神经上皮干细胞蛋白（Nestin)，增殖细胞核抗原（PCNA）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）及胶质纤维酸蛋白（GFAP）检测，并作姬母萨染色，对细胞进行鉴定，结果：由成年大鼠纹状体，VZ和SVZ区获得的细胞群，均可在体外分裂增殖形成神经球，Nestin阳性，进一步分化后分别呈现NSE和GFAP阳性。结论：成年大鼠脑内特定区域具有存在神经干细胞。     

探讨保持胚胎干细胞全能性的体外培养条件

目的 探讨保持胚胎干细胞全能性的体外培养条件。方法 将ＥＳ－Ｄ３细胞株培养在ＳＮＬ饲养层细胞和原代小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上以及在无饲养层的条件下，培养基中加入小鼠白血病抑制因子或用Ｂｕｆｆａｌｏ Ｒａｔ Ｌｉｖｅｒ（ＢＲＬ）条件培养Ａ在进行培养，并对培养细胞进行碱性磷酸酶检测和染色分析。结果 ＥＳ－Ｄ３在上述培养体系中能形成正常形态伯克隆，并且经多次传代后碱性磷酸酶检测为阳性，而且核型保持稳定。     

人类睾丸生精细胞体外培养的初步研究

目的对人类生精细胞体外培养分化、成熟进行初步研究。方法将4例患者的睾丸组织制备成生精细胞，观察生精细胞体外培养后生精细胞的分化、成熟情况。结果4例患者睾丸生精细胞经体外培养后均有不同程度的分化、成熟。初级精母细胞能分化为精子细胞，分化率平均为0．47％～1．50％；Sa期精子细胞能变形、成熟为Sc期精子细胞，成熟率为0．93％～5．72％。结论在该研究条件下，人类睾丸生精细胞体外培养能进一步分化、成熟。     

人胚神经干细胞体外培养体系的成功建立

本研究通过体外的无血清培养技术和免疫细胞化学技术,成功地从临床流产的胚胎中建立起人中枢神经系统的神经干细胞培养体系,培养出人胚神经干细胞系,并初步比较了人神经干细胞和小鼠神经干细胞的体外生长特性。为进一步探讨有关神经干细胞的细胞学特性提供了一个良好的模型。这也是国内首次成功建立的人神经干细胞体外培养模型。     

胰腺成体干细胞的体外培养和鉴定

目的:用目前常用的干细胞分离方法对正常SD大鼠的胰腺成体干细胞进行分离、培养和鉴定,为胰腺癌干细胞的进一步研究奠定基础.方法:选取正常SD大鼠胰腺用胶原酶P消化分离,并用低血清无糖培养基纯化胰腺细胞,以RT-PCR,免疫组化和Western blot方法鉴定胰腺成体干细胞标志物巢蛋白(nestin)并通过RT-PCR证明细胞中存在ABCG2(ATP-binding cassette superfamily G member 2).结果:成功分离到所需胰腺成体干细胞,并通过以上3种方法证明分离所得细胞表达巢蛋白.结论:以胶原酶P作为消化液,低血清无糖培养作为分离方法能够成功的从正常胰腺中分离得胰腺成体干细胞.     

人类无精子症的研究进展

由于无精子症的发病机制相当复杂 ,给临床治疗带来了许多困难。随着这些年来的辅助生殖技术 (ART)不断完善和深入发展 ,人们对无精子症的病因及治疗的研究都有了更深刻的认识。下面就近年来人们对无精子症的相关研究及治疗进展做一综述。1　无精子症的基因研究　　无精子症 ,即     

Boule基因在小鼠精子发生过程中的动态表达

目的:研究雄性不育相关基因Boule在小鼠出生后首个精子发生波中的动态表达,探讨Boule在精子发生过程中的调控作用。方法:运用免疫印迹法分析BOULE蛋白在多组织中的表达情况。运用实时荧光定量、免疫组织化学和免疫荧光技术检测Boule m RNA和BOULE蛋白在雄性小鼠出生后首个精子发生波各个时间点中的表达。结果:1免疫印迹法显示BOULE蛋白在睾丸中特异性高表达,在出生后16 d睾丸可被检测到,并在随后的发育中睾丸和成年睾丸持续表达;2实时荧光定量方法证实Boule m RNA在雄鼠出生后14 d睾丸中可被检测到,20 d呈现表达高峰;3免疫组织化学显示在精母细胞及圆形精子细胞胞质中存在BOULE蛋白阳性信号。结论:Boule在精子发生过程中的表达是在发育水平精密调控的,在粗线期精母细胞和圆形精子细胞阶段的特异表达提示Boule可能在精母细胞进程和圆形精子细胞中发挥作用。     

人类卵子体外成熟及其胚胎冷冻复苏研究

目的:探讨取卵周期准备、卵泡发育状态、培养液成分对未成熟卵的获取率、体外成熟率、受精率、胚胎质量、胚胎移植后成功率及其胚胎冷冻复苏移植的影响。方法:19例进行卵子体外成熟的不孕不育患者为研究对象。其中1例为自然周期,14例为促性腺激素(Gn)诱导排卵周期,4例常规控制性促排卵(COS)周期;分别以TCM 199或人输卵管液(HTF)为基础培养液,进行卵子体外成熟培养。结果:当取卵时卵泡大小不均一且最大卵泡直径≥12 mm时,获卵率、受精率和胚胎质量下降;TCM 199组优质胚胎的形成率显著高于HTF组(P<0.01)。IVM胚胎经冷冻复苏、胚胎移植能获得与常规IVF周期相似的妊娠成功,出生后代健康、无畸形。结论:在IVM周期取卵时卵泡大小不均一且最大卵泡直径≥12 mm时,将影响胚胎着床率和累积妊娠率。TCM 199优于HTF培养液,能提高未成熟卵体外成熟后受精卵所形成胚胎的发育能力。IVM胚胎经冷冻复苏-胚胎移植能获得与常规IVF周期相似的妊娠成功,出生后代健康、无畸形。     

Induction of spermatogenesis in hypogonadotrophic hypogonadism.

A young male who presented with isolated bihormonal gonadotrophin deficiency is described, Basal levels of LH and FSH were low and there was no response to clomiphene citrate or LHRH. The remaining anterior pituitary function was intact. The administration of a combination of human menopausal gonadotrophin and human chorionic gonadotrophin caused testicular maturation with spermatogenesis and full androgenization. The patient was able to father a child.