七氟醚对老年大鼠术后认知功能及海马miR-132表达的影响

目的 探讨七氟醚对老年大鼠认知功能及海马miR-132表达的影响.方法 雄性SD大鼠60只,18～20月龄,行水迷宫训练5d后,按随机数字表法分为对照组(C组)和七氟醚组(S组),每组30只.S组2％七氟醚,C组纯氧处理后6h、1d、3d、7d进行水迷宫实验,记录逃避潜伏期和游泳总距离.各时点水迷宫实验结束后处死大鼠取海马组织,采用实时定量聚合酶链反应检测海马组织内miR-132的表达.结果 与C组比较,S组麻醉后6h、1d、3d、7d水迷宫测试的逃避潜伏期及游泳总距离明显延长,海马miR-132表达(0.41±0.03、0.43±0.04、0.51±0.03、0.62±0.05)明显降低(P＜0.05).S组内,与麻醉后6h比较,麻醉后1d及以后时间点水迷宫测试的逃避潜伏期[(69±10)、(61±11)、(43±9)s]明显缩短(P＜0.05);麻醉后3、7d水迷宫测试的游泳总距离[(1 424±198)、(1 052±134) cm]明显缩短(P＜0.05),海马miR-132的表达明显增加(P＜0.05).S组内,麻醉后7d与麻醉后各时间点比较,水迷宫测试的逃避潜伏期及游泳总距离明显缩短(P＜0.05),海马miR-132的表达明显增加(P＜0.05).结论 七氟醚可导致老龄大鼠术后认知功能障碍,其机制可能与其抑制海马组织内miR-132表达有关.     

地氟醚与七氟醚麻醉对老年病人术后认知功能的影响

目的 探讨地氟醚及七氟醚复合麻醉对老年病人术后认知功能恢复的影响。方法 70例择期行全膝或全髋关节置换术的病人,年龄均在65岁以上。静注芬太尼、异丙酚、琥珀胆碱快速诱导插管后随机分为地氟醚和异氟醚组。麻醉诱导前及手术后1、3、6及24h应用Mini-Mental State（MMS）测试方法评定其认知功能。结果 与术前相比,两组病人术后1h MMS值均明显降低。地氟醚组由29.5±0.5降至27.8±1.7;七氟醚组由29.2±1.0降至27.4±1.7。其中85％以上病人术后3h MMS恢复至术前水平。两组病人术前及术后1、3、6及24h MMS比较均无显著差异。结论 老年病人应用地氟醚或七氟醚麻醉,其术后认知功能恢复相似,仅有一过性认知障碍。     

异氟醚和七氟醚对老年患者术后认知功能的影响

目的观察异氟醚和七氟醚麻醉对老年患者术后12个月认知功能和血清β淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)浓度的影响。方法选择全麻下行腹部手术患者77例,男43例,女34例,年龄65~75岁,ASAⅠ~Ⅲ级,采用随机数字表法分为两组:异氟醚组(I组,n=32)和七氟醚组(S组,n=45)。采用简易精神状态量表(mini-mental state examination,MMSE)于术前1 d、术后3 d和术后12个月进行认知功能评分。同时留取患者血清,于以上时点测定Aβ40和Aβ42浓度。结果术后3 d I组和S组的MMSE评分明显低于术前(P0.05),且I组明显低于S组(P0.05);术后12个月I组和S组POCD发生率差异无统计学意义[13例(40.6%)vs 15例(33.3%)]。两组不同时点血清Aβ42和Aβ40浓度差异无统计学意义。结论七氟醚对近期认知功能的影响小于异氟醚,但长期的影响可能是一致的;两者对患者术后12个月血清β淀粉样蛋白浓度无影响。     

孕酮减轻七氟醚诱导原代海马神经元损伤

目的探究孕酮是否能够减轻七氟醚诱导的原代海马神经元损伤及其可能机制。方法取新生24 h内的SD乳鼠,提取海马神经元培养至第7天后随机分为对照组(C组)、七氟醚组(S组)、孕酮+七氟醚组(P组)和醋酸乌利司他+孕酮+七氟醚组(U组)。C组神经元加入溶剂二甲基亚砜(DMSO)后正常培养;S组加入DMSO后行七氟醚处理;P组加入孕酮1μmol/L预处理1h后行七氟醚处理;U组加入醋酸乌利司他1μmol/L预处理1 h后,余同P组。采用CCK-8法检测神经元细胞活力,采用TUNEL染色检测细胞凋亡率,采用Western blot法测定蛋白激酶B(Akt)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白含量,在倒置相差显微镜下观察各组细胞形态改变。结果与C组比较,S组细胞活力明显减弱、细胞凋亡率明显升高、p-Akt蛋白含量和p-Akt/Akt比值明显下降(P0.01);与S组比较,P组细胞活力明显增强、细胞凋亡率明显降低、p-Akt蛋白含量和p-Akt/Akt比值明显升高(P0.01);与P组比较,U组细胞活力明显减弱、细胞凋亡率明显升高、p-Akt蛋白含量和p-Akt/Akt比值明显下降(P0.01)。形态学上,C组细胞形态正常,S组和U组细胞表现出凋亡形态,而P组细胞形态基本正常。结论孕酮可通过孕酮受体上调Akt蛋白磷酸化水平减轻七氟醚诱导的原代海马神经元损伤。     

七氟醚对糖尿病小鼠认知功能的影响

目的 观察吸入七氟醚对糖尿病小鼠认知功能的影响. 方法 单剂量腹腔注射链脲佐霉素(150 mg/kg)诱导小鼠糖尿病模型,将造模成功(空腹血糖＞ 11.1 mmol/L)的20只小鼠随机分为糖尿病组(DM组)和七氟醚糖尿病组(DM+S组);另设对照组(C组)及七氟醚组(S组),每组10只.C组吸入空气,DM组吸入空气,S组吸入1.5％七氟烷6h,DM+S组吸入1.5％七氟醚6h.24 h后,分别用跳台法、避暗法记录遗忘小鼠错误次数(error times,ETs)、跳台潜伏期(step down latancy,SDL)和步人潜伏期(step through latancy,STL). 结果 DM+S组SDL和STL分别为(98±9)、(32±32)s,与C组、DM组、S组比较均下降(P＜0.05);跳台实验和避暗实验的ETs分别为(4.7±0.5)次和(3.1±2.1)次,与C组、DM组、S组比较均增加(P＜0.05). 结论 吸入七氟醚对糖尿病小鼠短期内的认知功能有影响,加重糖尿病对认知功能的损害.     

细胞自噬在七氟醚致老年小鼠海马区神经元细胞凋亡中的保护作用

目的探讨细胞自噬在七氟醚致老年小鼠海马区神经元细胞凋亡中的作用机制。方法 18月龄BL/C57小鼠16只, 按随机数字表法分为两组(每组8只):七氟醚组和对照组。七氟醚组吸入47.5%空气+2.5%七氟醚+50%氧气3 h, 对照组吸入50%空气+50%氧气3 h。建模后24 h进行新物体识别实验, 随后断头取海马组织, 尼氏染色检测海马神经元细胞凋亡情况, Western blot法检测海马神经元细胞自噬相关蛋白[微管关联蛋白(microtubule-associated protein, LC)3Ⅱ/LC3Ⅰ、Becline-1、p62蛋白]水平。另取18月龄BL/C57小鼠18只, 按随机数字表法分为3组(每组6只):七氟醚+3-甲基腺嘌呤组(M组, 吸入麻醉前2 h经腹腔注射3-甲基腺嘌呤)、七氟醚+雷帕霉素组(R组, 吸入麻醉前24 h和2 h经腹腔注射雷帕霉素)、七氟醚+生理盐水组(N组, 吸入麻醉前2 h经腹腔注射生理盐水100 μl)。经腹腔注药及七氟醚处理后, 尼氏染色检测海马神经元细胞凋亡情况, Western blot法检测海马神经元细胞自噬相关蛋白(LC3Ⅱ/L...     

异氟醚及七氟醚复合麻醉下老年患者脑氧饱和度与术后认知功能的关系

目的探讨围术期脑氧饱和度(rSO2)与异氟醚及七氟醚复合静脉麻醉下患者术后认知功能变化的关系,确定患者术后发生认知功能变化的rSO2界值.方法 60例患者,ASAⅠ～Ⅱ级,年龄＞60岁,行择期腹部及下肢手术.麻醉前均不用术前药,静注异丙酚、芬太尼、维库溴铵快速诱导气管插管,机械通气,维持呼末CO2分压在正常范围.根据文化程度分为3组(n=20),麻醉维持采用吸入麻醉,以吸入麻醉药平均呼末浓度为1 MAC,随机分为2个亚组异氟醚亚组和七氟醚亚组(n=10),术中定时追加芬太尼和维库溴铵.记录入室后、吸氧后、麻醉诱导后、手术开始后、术中、术毕时的rSO2界值,术中监测在吸入麻醉药平衡15 min后,平均呼气末浓度为1.0 MAC时开始记录rSO2.应用Mini-Mental State Examination(MMSE)测试方法调查患者入室后和术后1、4、8、12、24 h的认知功能变化,常规监测血液动力学指标.结果 rSO2在各亚组术中、术毕与入室后相比显著性下降 (P＜0.05).各组及各亚组诱导后、术中、术毕、苏醒时血液动力学参数的变化差异无显著性 (P＞0.05).术后1 h的MMSE评分与入室后相比显著性下降 (P＜0.05).术后1～4 h患者均发生短暂的认知功能下降,4 h后85 %患者认知功能恢复.发生短暂认知功能下降的rSO2界值在异氟醚亚组中文盲患者为45、小学组患者为47、中学及以上组患者为49;在七氟醚亚组中文盲患者为47、小学组患者为48、中学及以上组患者为50.结论围术期患者的rSO2只要不低于50,就能减少术后发生短暂认知功能变化的机会.     

不同浓度七氟醚麻醉对老年患者左心室功能的影响

目的评价超声心动图下不同浓度七氟醚麻醉对老年患者左心室功能的影响。方法选择全麻下择期手术患者120例,男59例,女61例,年龄65~69岁,ASAⅠ或Ⅱ级,采用随机数字表法按最低肺泡有效浓度(MAC)将患者随机分为四组,每组30例。分别维持呼气末MAC值为1.0(S1组)、1.5(S2组)、2.0(S3组)、2.5(S4组),维持上述预定值10min后静脉注射芬太尼、琥珀胆碱快速诱导气管插管,机械通气,调整吸入浓度。于麻醉诱导前即刻(T0)、呼气末七氟醚浓度达到并维持在预定值3min(T1)、5min(T2)、8min(T3)、10min(T4)时采用心动超声记录左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室射血分数(LVEF)、左心室内径缩短率(LVFS)、心输出量(CO)。同时记录SBP、DBP、HR及吸入七氟醚期间心血管不良事件的发生情况。结果与T0时比较,T1~T4时四组SBP和DBP明显降低,T2~T4时S2、S3、S4组LVEF、LVFS和CO明显降低,S3、S4组LVESD明显升高(P0.05)。T2~T4时S2、S3、S4组LVEF、LVFS和CO明显低于S1组,S3、S4组LVESD明显高于S1组(P0.05)。T2时S3、S4组LVESD明显高于S2组(P0.05)。S1、S2组无一例低血压发生,S3、S4组分别发生6例(20%)和9例(30%)低血压,S3、S4组低血压发生率明显高于S1、S2组(P0.05)。结论低浓度七氟醚麻醉对老年患者左心室功能无明显影响,而高浓度七氟醚麻醉对左心室收缩功能有明显抑制作用,但对舒张功能无明显影响。     

石杉碱甲预处理对老年大鼠七氟醚麻醉后认知功能的影响

目的 探讨石杉碱甲(huperzine A,Hup A)预处理对老年大鼠七氟醚麻醉后认知功能的影响. 方法 24只健康SD大鼠,采用随机数字表法分为两组:对照组(C组),HupA组(H组),每组12只.H组老年大鼠每日1次经口灌胃0.15 mg/kg剂量的Hup A,C组经口灌胃等量蒸馏水,两组大鼠均吸入3％七氟醚100 min/d,连续5d.采用Morris水迷宫实验及旷场试验测定大鼠认知功能,记录逃避潜伏期、穿越平台次数、跨格次数、直立次数及中央格停留时间. 结果 H组老年大鼠逃避潜伏期较C组缩短,穿越平台次数[(2.3±0.8)次]较C组[(2.0±0.5)次]增多,差异均有统计学意义(P＜0.05);H组老年大鼠跨格次数[(66±18)次]较C组[(38±9)次]增多,中央格停留时间[(15±4)s]较C组[(35±8)s]明显减少,直立次数[(8.2±2.1)次]较C组[(4.0±1.3)次]明显增多,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 Hup A预处理可以改善老年大鼠七氟醚麻醉后认知功能.     

术后认知功能障碍老龄大鼠海马神经元缝隙连接蛋白36表达的变化

目的 评价术后认知功能障碍老龄大鼠海马神经元缝隙连接蛋白36(Cx36)表达的变化.方法 健康雄性SD大鼠90只,20月龄,体重500～600 g,按随机数字表法,将其随机分为3组(n=30):正常对照组(C组)、假手术组(S组)和术后认知功能障碍组(POCD组).采用脾脏切除术制备老龄大鼠术后认知功能障碍模型,分别于脾脏切除术后1、3、7 d(T1-3)时每组各取10只大鼠,经旷场分析和Y型迷宫实验测试大鼠认知功能,随后处死大鼠取海马,采用免疫组化法检测海马神经元Cx36的表达.结果 与C组比较,S组各项认知功能指标和海马神经元Cx36表达水平差异无统计学意义(P＞0.05),POCD组中央格停留时间延长,跨格次数、站立次数和正确反应次数减少,全天总反应时间增加,海马神经元Cx36表达水平降低(P＜0.05);与S组比较,POCD组大鼠T1时中央格停留时间延长,跨格次数、站立次数和正确反应次数减少,全天总反应时间增加,海马神经元Cx36表达水平降低(P＜0.05),T2,3时各项认知功能指标及海马神经元Cx36表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 术后认知功能障碍可能与老龄大鼠海马神经元Cx36表达下调有关.     

术后认知功能障碍老年小鼠海马内组蛋白乙酰化含量的变化

目的观察术后认知功能障碍(POCD)老年小鼠海马内组蛋白乙酰化含量的变化。方法采用异氟醚麻醉+腹腔探查术建立POCD模型。老年雄性C57BL/6小鼠24只,随机均分为三组:O2+二甲基亚砜(DMSO)组(OD组)、异氟醚麻醉+腹腔探查术+DMSO(ID组)及异氟醚麻醉+腹腔探查术+SAHA组(一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂,IS组)。麻醉前2h至行为学测试前2h起每天腹腔注射SAHA(50mg/kg)或等容DMSO,连续注射8d。术后第6天行旷场实验和场景性、条件性恐惧实验训练,第7天行场景性、条件性恐惧实验测试。行为学测试后2h,取小鼠海马组织,采用Western blot检测H3、H4、乙酰化-H3、乙酰化-H4、脑原性神经营养因子(BDNF)及caspase-3含量。结果旷场实验测试中,三组探索路程和中央格停留时间差异无统计学意义。与OD组比较,ID组在场景性恐惧实验测试中的僵直反应明显减少,乙酰化-H3、乙酰化-H4、BDNF含量明显减少及caspase-3含量明显增加(P0.05);与ID组比较,IS组僵直反应、乙酰化-H3、乙酰化-H4、BDNF含量明显增加,caspase-3含量明显减少(P0.05);三组H3、H4含量及条件性恐惧实验测试中僵直反应差异无统计学意义。结论 POCD老年小鼠海马内组蛋白乙酰化含量降低;SAHA可提高组蛋白乙酰化水平,预防老年小鼠发生POCD。     

术后认知功能障碍老年小鼠海马内NogoA-NgR1通路的变化

目的观察术后认知功能障碍老年小鼠海马内神经生长抑制因子NogoA及其受体NgR1表达的变化,并探讨其可能机制。方法采用异氟醚麻醉+腹腔探查术建立POCD模型。老年雄性C57BL/6小鼠40只,随机分为四组:O_2+Saline组(OS组)、O_2+NEP1-40组(ON组)、异氟醚麻醉+腹腔探查术+Saline组(SS组)及异氟醚麻醉+腹腔探查术+NEP1-40组(SN组),每组10只。麻醉前7d行右侧脑室置管;麻醉前2h至行为学测试前2h每天侧脑室注射NEP1-40(20μg/2μl)或等容的无菌生理盐水,连续注射8d。术后第5天行旷场实验,第6、7天分别行场景性和条件性恐惧实验训练和测试。行为学测试后2h,取小鼠海马组织,采用Western blot法检测NogoA、NgR1、RhoA、ROCK2和GAP43含量变化;Golgi染色检测海马CA1区神经元树突棘数量改变。结果与OS和ON组比较,SS组在场景性恐惧实验测试中僵直反应百分比明显降低,海马内NogoA、NgR1、RhoA和ROCK2含量明显升高,GAP43含量和总的、新生的和成熟的树突棘数量明显减少(P0.05);与SS组比较,SN组在场景性恐惧实验测试中僵直反应百分比明显升高,海马内RhoA和ROCK2含量明显降低,GAP43含量和总的、新生的和成熟的树突棘数量明显增多(P0.05)。结论麻醉手术致老年小鼠认知功能损害与其海马内NogoA-NgR1通路过度激活有关。     

海马RhoA-ROCK2通路在老年小鼠术后认知功能障碍中的作用

目的探讨海马RhoA-ROCK2通路在老年小鼠术后认知功能障碍(postoperative cognitive dysfunction,POCD)中的作用及潜在机制。方法采用异氟醚麻醉+腹腔探查术建立POCD模型。18月龄雄性C57BL/6小鼠48只,随机均分为四组:对照+生理盐水组(CS组)、对照+法舒地尔(Rho激酶抑制剂)组(CF组)、异氟醚麻醉+腹腔探查术+生理盐水组(SS组)及异氟醚麻醉+腹腔探查术+法舒地尔组(SF组)。水迷宫训练开始前2h至行为学结束前2h,每天腹腔注射法舒地尔25mg/kg或等容量生理盐水,连续注射13d。手术前5d起行水迷宫训练,术后第1、3、7天分别行水迷宫定位航行测试,第7天定位航行测试后4h行空间探索测试。最后一次行为学测试后1h,取小鼠海马及全脑组织,检测海马ROCK2、Rho-GDIα、p-cofilin、cofilin、F-actin、G-actin蛋白含量、RhoA活性及CA1区神经元树突棘数目。结果水迷宫训练阶段,四组游泳速度及逃避潜伏期差异无统计学意义。与CS和CF组比较,术后第1、3、7天SS组逃避潜伏期明显延长,术后第7天平台象限停留时间明显缩短,原平台穿越次数明显减少,海马内RhoA活性及ROCK2蛋白含量明显增加,Rho-GDIα蛋白含量、p-cofilin/coflin、F-actin/G-actin及CA1区神经元树突棘数目明显减少(P0.05);与SS组比较,术后第1、3、7天SF组逃避潜伏期明显缩短,术后第7天平台象限停留时间明显延长,原平台穿越次数明显增加,海马内RhoA活性及ROCK2蛋白含量明显降低、Rho-GDIα蛋白含量、p-cofilin/coflin、F-actin/G-actin及CA1区神经元树突棘数目明显增多(P0.05)。结论术后认知功能障碍老年小鼠海马内RhoA-ROCK2通路活性增加;法舒地尔可改善术后老年小鼠空间记忆损害,其作用机制可能与抑制RhoA-ROCK2通路,增强actin动力学和突触重塑有关。     

短暂性脑缺血再灌注损伤对老年大鼠神经功能的影响及其机制

目的 探讨短暂性脑缺血再灌注损伤对老年大鼠海马神经元凋亡及认知功能的影响及机制.方法 健康雄性老年Wistar大鼠40只,随机分为对照组和缺血组,每组20只,建立全脑缺血模型.缺血后第2～7天应用Morris水迷宫进行行为学检测.行为学检测完成后每组随机取10只大鼠经心脏灌注后取脑制作石蜡切片,分别行苏木素-伊红(HE)染色和原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测海马神经元凋亡.剩余10只大鼠冰上断头取脑后提取海马组织,纯化线粒体蛋白进行二维电泳和凝胶图像分析,对差异蛋白质行基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱分析,应用Mascot Distiller搜索引擎检索NCBInr数据库鉴定蛋白质.结果 Morris水迷宫检测发现,第1天两组大鼠逃避潜伏期差异无统计学意义(P＞0.05),与对照组比较,缺血组第2～4天的逃避潜伏期明显延长(P＜0.05),第5天测试的学习潜伏期缺血组明显长于对照组(P＜0.05);TUNEL凋亡神经元计数缺血组海马神经元凋亡神经元计数较假手术组明显升高,每个高倍镜视野凋亡神经元计数对照组和缺血组分别为(3.21 ±3.76)和(20.50±5.83)个,差异有统计学意义(P＜0.01).差异蛋白质组学研究显示,缺血组大鼠脑海马线粒体蛋白表达存在显著差异,蛋白双向电泳图谱中有10个点表达量与对照组差异有统计学意义(P＜0.05),其中有7个点表达量增高,3个点表达量降低.经质谱鉴定出10种蛋白.结论 老年脑组织对缺血再灌注损伤的敏感性增加,短暂性缺血即造成老年大鼠海马神经元凋亡增多及认知记忆等行为学的改变.经差异蛋白质组学研究结果显示,该现象可能与老年大鼠线粒体中与能量代谢和细胞凋亡有关的蛋白质表达改变有关.     

海马F-肌动蛋白聚合在老年小鼠围术期神经认知障碍中的作用

目的 研究海马F-肌动蛋白聚合在老年小鼠围术期神经认知障碍(PND)中的作用并探讨其可能的作用机制.方法 20月龄雄性C57BL/6小鼠72只,随机均分为四组:对照+溶质组(CV组)、对照+jasplakinolide(F-肌动蛋白聚合诱导剂)组(CJ组)、模型+溶质组(PV组)及模型+jas-plakinolide组...     

海马内DNA甲基转移酶在七氟醚所致新生大鼠远期认知功能损伤中的作用

目的观察海马内DNA甲基转移酶(DNMTs)在七氟醚所致新生大鼠远期认知功能损伤中的作用。方法出生7d雄性SD大鼠64只,随机均分为四组(n=16):对照组(C组)、七氟醚组(S组)、七氟醚+生理盐水组(SN组)及七氟醚+5-杂氮胞苷组(5-AZA,DNMTs抑制剂,SA组)。C组吸入30%O22h,连续3d;S组、SN组和SA组吸入3%七氟醚+30%O22h,连续3d;SA组在七氟醚吸入前1h时侧脑室注入5-AZA 1mg/kg;SN组则注射等容量生理盐水。4周后,一部分大鼠行旷场实验和Morris水迷宫实验(n=8),另一部分取海马组织(n=8),采用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的mRNA和蛋白含量。结果旷场实验中,四组大鼠探索路程和中央格停留时间差异无统计学意义。与C组比较,S组在Morris水迷宫实验中逃逸潜伏期明显延长,目标象限探索时间明显缩短,海马内DNMT3a及DNMT3b的mRNA和蛋白含量明显增加(P0.05);与SN组比较,SA组逃逸潜伏期明显缩短,目标象限探索时间明显延长,海马内DNMT3a及DNMT3b的mRNA和蛋白含量明显减少(P0.05);四组海马内DNMT1的mRNA和蛋白含量差异无统计学意义。结论七氟醚可致新生大鼠远期认知功能损伤伴海马内DNMT3a和DNMT3b表达增加;5-AZA可降低海马内DNMT3a及DNMT3b表达,减轻七氟醚所致新生大鼠远期认知功能损伤,表明DNMTs参与了七氟醚所致新生大鼠远期认知功能损伤的过程。