复合枸杞多糖的海藻酸钙凝胶微球载体修复小鼠脊髓损伤的实验研究

[目的]研究复合枸杞多糖(LBPs)的海藻酸钙(ALG-Ca)凝胶微球对小鼠急性脊髓损伤的(SCI)修复作用。[方法]采用高压静电液滴法制备ALG-Ca凝胶微球、复合LBPs的ALG-Ca凝胶微球,用扫描电镜观察微球结构。用脊髓撞击仪(NYU Impactor ModelⅡ)制作96例C57BL/6小鼠(T12)脊髓损伤模型,随机分为单纯损伤组(A组);单纯ALG-Ca微球组(B组);单纯LBPs组(C组);复合LBPs的ALG-Ca凝胶微球组(D组),每组24只。对各组实验动物SCI后肢体功能恢复情况进行行为学评分(BMS评分),用尼氏(Nissl)染色和免疫荧光评估神经元内细胞结构的变化情况、小胶质细胞(microglia,MG)激活形态及在脊髓损伤区的分布情况。[结果]扫描电镜观察示ALG-Ca凝胶微球呈多空样结构;复合LBPs的ALG-Ca凝胶微球能改善小鼠SCI后后肢功能恢复。D组优于其他组,各组间BMS评分差异有统计学意(P<0.05);Iba1免疫荧光染色平均光密度组间差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]ALG-Ca凝胶微球是LBPs治疗SCI的良好载体,具有潜在的应用前景;复合LBPs的ALG-Ca凝胶微球载体可以通过抑制小胶质细胞的激活,减轻炎症反应,发挥保护神经元的作用,从而促进脊髓损伤恢复。     

枸杞多糖对去势雌性大鼠骨质疏松的作用

目的研究枸杞多糖（LBP）对去势雌性大鼠骨质疏松的作用。方法选用2月龄成年雌性SD实验大鼠50只体重180~230g,随机分为5组,每组10只,选取1组大鼠打开腹腔切去少量腹腔脂肪组织,作为假手术组,其余4组大鼠切除双侧卵巢建立骨质疏松动物模型。各组给药干预,12周后行股骨干重测量、骨矿密度检查并观察骨的形态学改变。SPSS10.0统计软件分析查看各组是否有统计学意义。结果与去势＋生理盐水组相比,去势＋枸杞多糖高剂量组、去势＋枸杞多糖低剂量组均能增加去势雌性SD大鼠股骨干重、骨密度值,两组骨小梁结构较完整、连续性较好、吸收陷窝少。结论枸杞多糖对成年去势雌性大鼠骨质疏松有明显的治疗作用。     

枸杞多糖对体外培养小鼠睾丸组织形态学影响的研究

本研究是通过对小鼠睾丸组织培养，观察枸杞多糖（LBP）对不同培养条件下的睾丸组织形态学变化的影响。结果显示，32℃条件下培养的睾丸组织结构变化在对照组与LBP实验组之间差异不显著；37℃条件下培养48h时组间差异不显著，但在培养72h时，对照组显示曲精小管上皮细胞结构紊乱，大量细胞脱落和退化，管壁上仅剩精原细胞和支持细胞；在LBP实验组，曲精小管上皮细胞结构明显好于对照组，生精上应仍为复层上皮，管腔内脱落细胞较少。此结果表明，LBP可减弱由于培养温度过高所致的曲精小管结构损伤。     

海藻酸钙敷料对大鼠创面愈合影响的组织学研究

目的：探讨海藻酸钙敷料对大鼠创面愈合的影响。方法：48只雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组,每组24只。制作大鼠背部全层皮肤缺损模型,在创面局部以海藻酸钙敷料（实验组）或干棉纱布（对照组）包扎,观察伤后3、7、14 d创面愈合率的变化;于伤后3、7、14 d取创面组织,石蜡包埋、切片、分别行HE和Masson染色,计算血管横断面面积与肉芽组织面积的比值、肉芽组织厚度和胶原蛋白含量（胶原面积与创面面积比值）。结果：术后第3天时实验组大鼠较对照组创面愈合率明显增加（P〈0.05）。术后第3天实验组与对照组肉芽组织厚度[分别为（1 540.0±118.5）μm和（1 504.6±131.8）μm,P〉0.05]和新生肉芽组织血管面积与肉芽组织面积之比[分别为0.118±0.007和0.113±0.007,P〉0.05）差异均无显著性,但术后3 d实验组胶原蛋白面积较对照组明显增多[分别为（45.7±5.3）%和（11.6±2.5）%,P〈0.05];术后第7天实验组以上指标均高于对照组（P〈0.05）,第14天时这种趋势依然存在（P〈0.05）。结论：海藻酸钙能提高伤口皮肤组织内的胶原蛋白含量,加速创面肉芽组织形成,促进伤口的愈合。     

枸杞多糖延缓小鼠皮肤衰老的实验研究

目的：研究枸杞多糖（Lyciumbar barum polysaccharides,LBP）对D-半乳糖拟衰老小鼠皮肤组织的延缓皮肤衰老作用。方法：80只2月龄昆明种小鼠随机分为四组：正常组（N）、衰老模型组（C）、低剂量LBP抗衰老组（L）和高剂量LBP抗衰老组（H）。衰老模型组与抗衰老用药组每日颈背皮下注射D-半乳糖溶液制造衰老模型。抗衰老用药组在注射D-半乳糖期间以LBP灌胃。42天后取小鼠背部皮肤检测。结果：衰老模型组、低、高剂量LBP抗衰老组小鼠皮肤含水量、表皮厚度、真皮厚度以及成纤维细胞数与正常对照组比较差异有显著性意义（P〈0.01）,组间两两比较差异有统计学意义。结论：D-半乳糖诱导的亚急性衰老模型是可靠的衰老实验动物模型,枸杞多糖能延缓皮肤衰老。     

枸杞多糖对体外培养小鼠睾丸组织形态学影响的研究

本研究是通过对小鼠睾丸组织培养，观察枸杞多糖（ＬＢＰ）对不同培养条件下的睾丸组织形态学变化的影响，结果显示：３２℃条件下培养的睾丸组织结构变化在对照组与ＬＢＰ实验且之间差异不显著，３７℃条件下培养４８ｈ时组间差异不显著，但在培养７２ｈ时，对照组显示曲精小管上皮细胞结构紊乱，大量细胞脱落和退化，管壁上仅剩精原细胞和支持细胞；在ＬＢＰ实验组，曲精小管上皮细胞结构明显好于对照组，生精上皮仍为复层上皮，管     

Tunel法检测海藻酸钙敷料对成纤维细胞凋亡的实验研究

目的 :探讨海藻酸钙敷料诱导成纤维细胞(L-929)的凋亡情况。方法:将成纤维细胞(L-929细胞)与海藻酸钙材料共培养72h作为实验组,另设空白培养液作为对照组,采用原位标记法(Tunel法)对细胞死亡类型进行检测,并在正置荧光显微镜下观察细胞凋亡情况,计算凋亡率。结果:两组均出现凋亡细胞,且随培养时间呈现持续升高趋势,实验组凋亡检出率与对照组相比无明显差异。结论:海藻酸钙敷料无明显诱导细胞的凋亡,具有良好生物相容性,有望成为良好的新型伤口敷料。     

海藻酸钙敷料的细胞毒性体外检测结果分析

目的:探讨海藻酸钙敷料对体外培养的成纤维细胞相对增殖率的影响,初步评价该材料的细胞毒性作用并探讨对细胞增殖影响最低的条件。方法:第一步:采用四唑盐(MTT)比色法检测不同浓度(0、50%和100%)敷料浸提液的吸光度,分别计算各浓度下成纤维细胞的相对增殖率,初步评价其细胞毒性。第二步:根据上述结果,继续采用MTT法检测细分浓度(0、10%、20%、30%、40%和50%)敷料浸提液对成纤维细胞增长率影响,测出对细胞增殖无影响的材料溶液浓度。结果:各浓度浸提液均出现较高相对细胞增殖率,其细胞毒性均为0或1级,无毒性。精检MTT结果提示,相对浸提液浓度低于10%海藻酸盐敷料浸提液对成纤维细胞的生长无任何影响,浓度高于20%的浸提液对成纤维细胞的生长开始产生影响,但仍未到毒性标准。结论:海藻酸钙敷料无细胞毒性,具有良好细胞相容性,满足人体植入材料体外细胞毒性实验要求,可作为安全的伤口敷料使用。     

复合脉冲电磁场对去卵巢大鼠骨质疏松预防作用的研究

目的 观察复合脉冲电磁场（PEMFs)对去卵巢大鼠骨质疏松（OP）的预防作用,以寻求防治OP的新途径。方法 3月龄SD大鼠随机分为正常对照组（N）、去卵巢组（O）、去卵巢加苯甲酸雌二醇处理组（E）及去卵巢加PEMFs处理组（EM）,治疗8周后测定骨生物力学、骨密度、骨形态学。结果 生物力学性能测定显示,经PEMFs治疗后股骨最大抗拉强度和椎骨最大抗压强度明显提高,较O组分别增加39．2％、37．9％（P＜0．01）,并超过N组和E组（P＜0．01）;EM组骨密度（BMD）尽管未恢复至正常（P＜0．05）,但与0组相比仍有明显改善（P＜0．01）,且已基本达到E组水平;骨形态学分析发现EM组骨小梁增宽、致密,分布有序,结构优于O组和E组。结论 PEMFs能够增加骱密度,改善骨生物力学性能和骨结构。鉴于其对OP的预防作用主要是通过提高骨质量来实现的,我们认为在PEMFs一定程度上优于苯甲酸雌二醇,是颇具潜力的预防骨质疏松的方法。     

枸杞多糖对热应激大鼠生精细胞凋亡的保护作用及其机制研究

目的:研究枸杞多糖对热应激所致大鼠生精细胞凋亡的保护作用及其作用机制。方法:雄性SD大鼠90只,随机分为正常对照组、热应激组(HS)、枸杞多糖高(HLBP)、中(MLBP)、低(LLBP)剂量组[剂量分别为100、50、10 mg/(kg.d)],每组18只。按以上剂量给枸杞多糖组大鼠连续灌胃14 d,正常对照组和热应激组给予等量生理盐水灌胃。第15 d给予热应激组和各枸杞多糖组大鼠43℃水浴30 min。热应激后24 h、48 h和7 d颈椎脱臼处死大鼠,TUNEL法检测生精细胞凋亡,免疫组化法检测Caspase-3蛋白的表达,ELISA法检测睾丸组织胞质细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)浓度。结果:与热应激组比较,各枸杞多糖组的凋亡指数均明显降低(P<0.05),免疫组化显示生精细胞Caspase-3阳性表达明显减少(P<0.05),胞质Cyt C浓度显著降低(P<0.05)。结论:枸杞多糖能抑制Cyt C自线粒体释放出来,使Caspase-3的活化减少,导致生精细胞的凋亡减少,推断其通过线粒体途径抑制生精细胞的凋亡而起到保护睾丸组织的作用。     

防己诺林碱对去卵巢小鼠骨代谢及骨微结构的影响

目的探讨防己诺林碱对去卵巢小鼠骨质疏松的保护作用。方法将40只C57BL/6小鼠随机分为空白(假手术)对照组、模型(去卵巢)组、阳性(雌二醇,E2)对照组、防己诺林碱组共4组,每组10只。连续腹腔给药7周后处死小鼠,取股骨及外周血清,通过ELISA法检测骨代谢相关血清学指标:抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAc P)、I型胶原羧基末端肽(CTX)及I型胶原氨基末端肽(NTX);通过Micro-CT评估各组小鼠骨组织微结构相关指标:骨小梁百分比(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁分离度(Tb.Sp)和骨小梁厚度(Tb.Th);通过实时荧光定量PCR检测小鼠骨质疏松骨吸收相关基因的表达情况,包括TRAc P、组织蛋白酶K(Cathepsin K)、活化T细胞核因子1(NFATc1)以及降钙素受体(CTR)。结果与去卵巢模型组比较,防己诺林碱治疗组小鼠BV/TV、Tb.N、Tb.Th显著升高,Tb.Sp明显降低,骨代谢相关指标(TRAc P、CTX、NTX)显著降低,破骨细胞标志基因(TRAc P、Cathepsin K、NFATc1以及CTR)表达水平明显下降。结论防己诺林碱对去卵巢小鼠骨质疏松有保护作用,有望为骨质疏松的临床用药提供新思路。     

枸杞多糖对热应激大鼠生精细胞Bax和Cyt C表达的影响

目的研究枸杞多糖(L B P )对热应激睾丸组织形态学及生精细胞中B a x 和细胞色素C (cytochrome c,Cyt C)表达的影响.方法90只雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、热应激组、LBP高剂量组(100mg/kg ·d-1)、中剂量(50 mg/kg ·d-1)和低剂量组(10 mg/kg ·d-1).LB P 组大鼠按以上剂量给予LBP连续灌胃14 d,正常对照组及热应激组给予等量生理盐水灌胃,于第15天给予热应激组和LBP组大鼠43℃水浴30min.于热应激后1d、2d和7d,分别处死各组大鼠,取出睾丸组织.采用HE染色观察睾丸组织形态学变化,免疫组化法检测睾丸生精细胞Bax和Cyt C的表达.结果与热应激组比较,各LBP组大鼠的体质量、睾丸质量、睾丸指数及生精小管直径显著增加(P<0.05),生精细胞中Bax和Cyt C的表达显著降低(P<0.05),以10mg/kg·d-1组效果最为明显.结论 LBP可能通过抑制Bax的活化,从而抑制Cyt C自线粒体释放到胞浆,进而减少Caspase-3的活化,通过线粒体途径起到保护睾丸组织的作用.     

肠道菌群介导贞术调脂胶囊抑制去势小鼠骨丢失的机制研究

目的 基于肠道菌群的变化,探讨贞术调脂胶囊（FTZ）抑制去卵巢（OVX）小鼠骨丢失的作用机制。方法选取18只11周C57BL6/J雌性小鼠,平均分为假手术组（SHAM组）、OVX组和FTZ组。FTZ组在OVX基础上给予FTZ[1.55 g/(kg·d）]灌胃,SHAM组和OVX组以等剂量0.9%氯化钠溶液灌胃,12周后收集小鼠左侧股骨、血清和粪便标本。左侧股骨行Micro-CT扫描;采用ELISA法检测血清中TNF-α、IL-10、IL-6、LPS和TRACP5b的含量;末次灌胃结束24 h后收集小鼠粪便,提取并检测粪菌总DNA,利用16S rRNA高通量肠菌基因测序技术,对标本中的细菌16S rRNA 基因V3-V4可变区进行定性分析和OUT分析。结果 与SHAM组相比,OVX组BV/TV、Tb.N、BMD和IL-10均显著性降低(P＜0. 05),Tb.Sp、TNF-α、IL-6、LPS和TRACP5b显著性增高（P＜0. 05）;与OVX组相比,FTZ组Tb.N和IL-10显著性增高（P＜0. 05）,Tb.Sp、TNF-α、IL-6和TRACP5b显著性降低（P＜0. 05）。在门水平,OVX组Firmicutes/Bacteroidota（F/B）率较SHAM组有增高趋势（P=0.310）,但无显著性差异,而与OVX组相比,FTZ组F/B率显著性降低（P=0.002）。在属水平,与SHAM组相比,Faecalibaculum和Coriobacteriaceae_UCG-002丰度在OVX组中显著减少（P=0.030,P=0.005）,Lachnoclostridium丰度在OVX组中显著增加（P=0.037）,而与OVX组相比,FTZ组Faecalibaculum和Coriobacteriaceae_UCG-002丰度显著增加（P =0.045,P=0.005）,Lachnoclostridium丰度显著减少（P=0.013）。结论 FTZ能够延缓去势小鼠骨量丢失,其机制可能是通过调节肠道菌群中Faecalibaculum、Coriobacteriaceae_UCG-002和Lachnoclostridium丰度实现的,且同时抑制炎性反应。     

Effect of ipriflavone in combination with calcium supplements on bone metabolism in elderly osteoporotic women

Ipriflavone and calcium supplements are used in the treatment of osteoporosis. However, the effect of ipriflavone in combination with high-dose calcium supplements (1 g/day) on bone metabolism in elderly osteoporotic women is still a matter of controversy. Enrolled in this study were 22 women over 70 years of age diagnosed as having involutional osteoporosis. The patients were randomly assigned to treatment with either ipriflavone plus calcium or with calcium supplements only for 6 months. Biochemical markers of bone metabolism and bone mass of the hand were determined at baseline and at 6 months. Serum parathyroid hormone, serum osteocalcin, serum alkaline phosphatase, and the urinary hydroxyproline/creatinine ratio decreased in both groups. These decreases were greater in the ipriflavone plus calcium supplement group than in the calcium supplement only group. Serum calcitonin increased in the ipriflavone plus calcium supplement group. Metacarpal index and metacarpal bone mineral density did not change in either group. These findings suggest that treatment with ipriflavone plus calcium supplements may inhibit bone resorption and modulate bone turnover in elderly osteoporotic women and may be more effective than calcium supplements alone.     

GYY4137对去卵巢诱导的骨质疏松大鼠的实验研究

目的探讨GYY4137对去卵巢诱导的骨质疏松大鼠的影响。方法将80只大鼠随机分为4组,采用雌性SD大鼠双侧卵巢全切除术(OVX)或假手术(Sham),建立骨质疏松模型,通过骨密度的检测确认模型建立成功,随后OVX大鼠给予腹腔注射GYY4137和阿仑膦酸钠治疗。测定血浆硫化氢(H2S)、血清碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素(OCN)、降钙素、甲状旁腺激素和瘦素水平。采用双能X线骨密度仪测定左侧股骨密度(bone mineral density,BMD)。采用股骨三点弯曲试验获得股骨骨折的最大应力。结果成功建立OVX骨质疏松模型。OVX-GYY组在观察期内注射GYY4137显著提高血浆H2S水平(P 0.05)。12周时OVX-GYY组大鼠股骨密度增加(P0.05),OVX组股骨BMD值明显降低(P0.05)。双侧卵巢切除可引起大鼠生化骨代谢和血浆激素水平的改变(P均0.05)。卵巢切除还可以降低血钙、血磷和降钙素,增加甲状旁腺激素和瘦素。阿仑膦酸钠组和GYY4137组则显著改善上述指标(P均0.05)。结论 GYY4137对去卵巢大鼠骨质疏松有积极的治疗作用。     

Effect of strontium ranelate on fracture healing in the osteoporotic rats

The aim of this study was to evaluate the effect of strontium ranelate (SrR) on fracture healing in the osteoporotic rat model. Forty female Sprague–Dawley rats aged 3 months were enrolled in the study. Osteoporosis was induced by bilateral ovariectomy and subsequent daily heparin injection started 1 week after surgery and lasted for 4 weeks. Osteoporosis was confirmed by a reduction of bone mineral density (BMD). Twenty of the osteoporotic rats were assigned to the SrR group and the remaining 20 to the control group. An open right tibial midshaft transverse fracture was created and then an intramedullary fixation was performed. SrR group was treated by 450 mg/kg/day SrR per oral. Six weeks after surgical induction of fracture, all animals were sacrificed. One animal from each group died after ovariectomy. Two tibiae from the control group failed to unite. SrR‐treated group showed higher mechanical strength and fracture stiffness when compared to the control group (p = 0.006, p = 0.001, respectively). SrR‐treated group had mature woven bone or predominantly woven bone compared with osteoporotic control group (p = 0.038). SrR‐treated group's callus maturity was significantly higher than control group (p = 0.001). SrR is associated with better fracture healing in the osteoporotic rat model. © 2010 Orthopaedic Research Society. Published by Wiley Periodicals, Inc. J Orthop Res 29:138–142, 2011     

绝经后骨质疏松患者的缺钙和补钙的作用

２４例绝经后骨质疏松症患者分两组进行了钙平衡试验，年龄５６．３１±２．９９和５８．６６±４．２６，绝经年限１２．５±７．１１和１０．７７±４．５６，该组妇女平均食物钙摄入４２２．６ｍｇ／日，未补钙者平均负钙平衡１２．８８ｍｇ／日，补钙５００ｍｇ／日者平均正钙平衡３１８．２２ｍｇ／日，摄入钙的利用率占３３％，经２年单纯补钙，ＱＣＴ腰椎骨密度增高１３％，低钙摄入的妇女单纯补钙有一定预防骨质疏松的作用。