“从脾论治方”对原发免疫性血小板减少症小鼠血管活性因子的影响

目的：观察“从脾论治方”对原发免疫性血小板减少症（ITP）小鼠血管活性因子的影响,探讨“从脾论治方”的止血效应机制。方法：以被动型免疫造模法建立ITP小鼠模型,以泼尼松、归脾汤、健脾益气方、健脾益气摄血方为干预药物,以ELISA检测模型小鼠血清血管内皮素-1（ET-1）、血栓素A2（TXA2）、血管性血友病因子(vWF)、血管内皮细胞黏附分子-1（VCAM-1）、前列腺素（PG）、前列环素（PGI2）、一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶3（NOS3）、血栓调节蛋白（TM）水平。结果：1）升血小板疗效：注射APS后第15天（给药第8天）,模型对照组小鼠外周血血小板计数（PLT）仍显著低于正常对照组,而各给药组小鼠外周血PLT与正常对照组比较差异无统计学意义（P>0.05),并且明显高于模型对照组。2）止血疗效：注射APS后各组小鼠均有不同程度出血倾向,药物干预第6天及第8天,各观察组出血等级明显低于模型对照组。3）血管促凝活性因子：实验各组VCAM-1水平显著低于正常对照组,差异有统计学意义（P<0.05);健脾益气组和归脾汤组VCAM-1水平均显著高于模型对照组和泼尼松组,健脾益气摄血组VCAM-1水平明显高于泼尼松组,差异有统计学意义（P<0.05)。4）血管抗凝活性因子：实验各组TM水平明显低于正常对照组,健脾益气摄血组TM水平显著低于模型对照组,差异有统计学意义（P<0.05)。结论：“从脾论治”方可以升高ITP模型小鼠外周血PLT,降低出血分级,并且可以通过上调VCAM-1、下调TM检测值调节促凝与抗凝活性因子的动态平衡。     

健脾益气摄血方调控免疫性血小板减少症T细胞亚群功能失调研究

目的：通过研究健脾益气摄血方对免疫性血小板减少症(Immune Thrombocytopenia, ITP)模型小鼠脑肠肽及T细胞相关细胞因子的影响,探讨健脾益气摄血方治疗ITP的效应机制。方法：以被动型免疫造模法建立ITP模型,实验前从30只BALB/c小鼠尾静脉取血,用全自动血细胞计数仪检测血小板计数,按照血小板计数随机分为对照组、ITP组、泼尼松组和健脾益气摄血方中剂量组、高剂量组,每组6只。以酶联免疫吸附试验法检测小鼠脑、结肠及血清中3种脑肠肽和血清、脾T细胞相关细胞因子的水平。结果：与ITP组比较,除血清小鼠垂体腺苷酸环化酶激活多肽(PACAP)外,泼尼松组3种脑肠肽在3种组织均升高;健脾益气摄血方中高剂量均可升高脑血管活性肠肽、结肠食欲刺激素和3种组织的PACAP水平。泼尼松组血清PACAP低于健脾益气摄血方中高剂量组。与ITP组比较,泼尼松降低血清、脾γ干扰素,升高血清、脾白细胞介素-2和脾白细胞介素-4、白细胞介素-10;在血清、脾,健脾益气摄血方中高剂量组可升高白细胞介素-2、白细胞介素-10,降低白细胞介素-17A。处理组间对比,益气摄血方高剂量组血清白细胞介素-2...     

基于线粒体功能特性研究健脾益气摄血方调控ITP乏力机制

目的:验证健脾益气摄血方缓解ITP乏力症状与改善线粒体功能的相关性。方法:通过被动免疫造模法建立ITP小鼠模型,分为正常组、模型组、强的松组、健脾益气摄血(JPYQSX)中、高剂量组。通过光谱法检测小鼠脾脏组织活性氧含量;通过实时荧光定量PCR(qPCR)检测线粒体DNA相对拷贝数;通过免疫荧光法检测结肠ATP含量。结果:与正常组比较,模型组(P0.01)、强的松组(P0.05)、健脾益气摄血各剂量组(P0.01)小鼠脾脏组织ROS含量增多,脾脏组织线粒体DNA相对拷贝数明显下调(P0.01),结肠组织ATP含量明显下调(P0.01);与模型组比较,强的松组、健脾益气摄血各剂量组小鼠脾脏组织ROS含量减少,脾脏组织线粒体DNA相对拷贝数比较无统计学意义(P0.05),结肠组织ATP含量均显著升高(P0.01)。结论:健脾益气摄血方可通过改善线粒体功能来有效缓解ITP乏力症状。     

健脾益气摄血方对ITP模型小鼠血清SIgA和β-EP影响研究

目的:研究健脾益气摄血方对ITP小鼠血清中SIg A(分泌型免疫球蛋白A)、β-EP(β-内啡肽)的影响。方法:免疫造模法建立ITP小鼠模型,以强的松和健脾益气摄血方(颗粒)为干预药物,酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清SIg A和β-EP含量。结果:与空白对照组比较,模型小鼠血清SIg A、β-EP含量升高,差异具有统计学意义(P0.05)。与模型对照组比较,经强的松干预治疗后SIg A含量下调,差异具有统计学意义(P0.05);经健脾益气摄血方干预后,β-EP含量下调,差异具有统计学意义(P0.05)。结果提示,强的松对SIg A、β-EP均有调节效应;健脾益气摄血方虽然不能调控SIg A,但对β-EP具有调控作用。结论:健脾益气摄血方治疗ITP效应机制与调控β-EP含量,影响免疫问答有一定关系。     

健脾益气摄血方对原发免疫性血小板减少症模型小鼠肠道免疫的影响

目的 探讨健脾益气摄血方治疗原发免疫性血小板减少症(ITP)的可能效应机制.方法 30只BALB/c小鼠随机分为正常组,模型组,强的松组和健脾益气摄血中、高剂量组,每组6只.除正常组外,其余各组小鼠使用豚鼠抗小鼠血小板血清(GP-APS)注射法建立ITP小鼠模型.造模成功后第8天,正常组、模型组均予0.1 ml/10 ...     

健脾益气摄血方对原发免疫性血小板减少症模型小鼠凝血功能的影响

目的：探讨健脾益气摄血方治疗原发免疫性血小板减少症(ITP)的可能作用机制。方法：将100只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、泼尼松组、非从脾论治组、健脾益气摄血组,每组20只。在造模成功后的第8天,正常组、模型组小鼠给予生理盐水0.1 mL/10 g体积灌胃,泼尼松组给予浓度为2 mg/mL泼尼松溶液0.1 mL/10 g灌胃,中药组均按照0.1 mL/10 g体积灌胃给药,所有组给药1次/d,持续8 d。通过全自动血液凝固分析仪检测凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB),评估出血程度及指标变化。结果：与正常组比较,给药前各组出血程度显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);药物干预第6、8天,与模型组比较,泼尼松组、健脾益气摄血组出血程度明显改善,差异有统计学意义(P<0.01)。与正常组比较,模型组小鼠PT、APTT显著升高,FIB水平下降,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,泼尼松组与健脾益气摄血组PT、APTT明显下降,FIB上升,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与非从脾论...     

脾气虚型免疫性血小板减少症小鼠模型与白细胞介素-27、白细胞介素-10的表达

目的：研究脾气虚型免疫性血小板减少症(ITP)模型小鼠血清与脾脏组织中白细胞介素-27(IL-27)、白细胞介素-10(IL-10)的表达水平及意义。方法：24只白变种实验小鼠以区间分组法随机分为对照组、模型组、泼尼松组、健脾益气摄血组。除对照组外,其余组均以被动免疫造模法建立脾气虚型ITP小鼠模型。造模后,模型组、对照组用生理盐水灌胃,泼尼松组、健脾益气摄血组分别用泼尼松、健脾益气摄血颗粒灌胃。各组均灌胃1次/d,连续8 d。采用酶联免疫吸附试验检测外周血中血小板计数及血清与脾脏中IL-27、IL-10表达水平。结果：与对照组比较,模型组血清和脾脏IL-27、IL-10均显著降低(均P<0.01)。与模型组比较,泼尼松组、健脾益气摄血组血清和脾脏IL-10均明显升高(P<0.05);泼尼松组、健脾益气摄血组血清与脾脏IL-27均有所升高,但差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论：IL-27、IL-10可能在脾气虚型ITP中发挥保护性作用,且发挥作用的主要场所在外周血而非脾脏;此外泼尼松与健脾益气摄血颗粒治疗ITP的机制可能与提高IL-10的含量有关,而与提高IL...     

特发性血小板减少性紫癜脾不统血证动物模型建立

目的 :建立特发性血小板减少性紫癜 (ITP)脾不统血证动物模型。方法 :采用现代医学免疫法腹腔注射抗血小板抗血清 ,结合中医苦寒泻下法灌胃番泻叶水浸剂 ,建立ITP脾不统血证动物模型。观察小鼠一般体征、外周血象、血清D -木糖含量、T淋巴细胞亚群及骨髓巨核细胞计数变化 ,并予中药复健方加减归脾汤治疗。结果 :ITP脾不统血证动物模型符合ITP疾病特点 ,未改变ITP疾病模型的关键指标 ,未影响血小板减少造模法的主要特点 ;同时模型小鼠出现明显脾不统血证主症及脾虚客观指标变化 ,经中药复健方治疗后 ,脾不统血证主症和脾虚指标明显改善。结论 :免疫法结合苦寒泻下法建立ITP脾不统血证病证结合动物模型方法可靠 ,重现性强 ,为中医药研究治疗ITP脾不统血证提供了较为合适的动物模型。     

健脾益气摄血方调控原发免疫性血小板减少症肠道免疫机制研究

原发免疫性血小板减少症(ITP)是一种以血小板减少为特征的自身免疫性疾病,其发病机制、发病原因目前尚未完全明确.ITP的中医病名为"紫癜病".陈信义教授团队认为ITP的病机为"脾气亏虚、脾不统血",拟定健脾益气摄血方,临床上取得良好疗效.并为此开展一系列临床和基础研究证实其免疫调控效果,以期阐明其具体起效机制.文章就陈...     

健脾摄血方对ITP模型小鼠生命体征和脏器指数的影响

目的:观察健脾摄血方对ITP小鼠生命体征和脏器指数的影响,为临床应用提供支撑。方法:以抗小鼠血小板血清(APS)免疫造模法,建立BALB/c小鼠模型,体内造成ITP小鼠模型,观察强的松、健脾摄血方对ITP小鼠生命体征和胸腺、脾脏指数影响。结果:(1)各实验组小鼠体质量、体温与空白对照组比较,无统计学意义(P0.05)。(2)造模第8天,模型组、强的松组、健脾组小鼠游泳时间与空白对照组比较,有统计学意义(P0.01);实验结束后,模型组小鼠游泳时间仍低于空白组(P0.05),强的松组、健脾组小鼠游泳时间均有所延长,以健脾摄血效果最佳。(3)从注射APS第4天开始,模型组、强的松组、健脾摄血组小鼠进食量明显减少,与空白对照组比较,具有统计学意义(P0.05);干预给药第10天、第12天,强的松组模型小鼠进食量增加,与对照组比较,具有统计学意义(P0.05);第16天健脾摄血组小鼠进食量增加,与模型组比较,具有统计学意义(P0.05)。(4)从注射APS第6天开始,模型组饮水量增加,与空白组比较,具有统计学意义(P0.05);给药第10天开始,强的松组小鼠饮水量增加,与空白组比较,具有统计学意义(P0.05),而健脾摄血组小鼠饮水量无明显增加。(5)注射APS后由于免疫效应,模型组脾脏、胸腺明显增大,与空白组比较,具有统计学意义(P0.05);经强的松干预后,脾脏、胸腺缩小,与模型组比较,具有统计学意义(P0.01)。经健脾摄血方干预后,脾脏与模型组比较,无统计学意义(P0.05);胸腺具有统计学意义(P0.01)。结论:(1)注射APS复制的ITP小鼠模型符合病证结合模型特征。(2)强的松、健脾摄血方对ITP模型小鼠不耐劳力、食欲不振等脾气虚症状有明显改善效果。     

益气健脾、益气健脾祛痰化瘀法对脑老化小鼠学习记忆功能及神经递质受体表达的影响

目的:观察益气健脾、益气健脾祛痰化瘀法对D-半乳糖(D-gal)所致脑老化小鼠学习记忆功能及神经递质受体表达的影响.方法:采用D-gal复制衰老及脑老化小鼠模型.以Morris水迷宫测试小鼠学习记忆功能;免疫组化技术与病理图文分析系统相结合检测烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor NAChR)和谷氨酸N-甲基-D-门冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate recetor,NMDAR)表达水平.结果:两法均能明显改善脑老化小鼠的学习记忆能力,提高NAChR和NMDAR1的表达水平,益气健脾祛痰化瘀法对NAChR在大脑皮质的表达优于益气健脾法;对NMDAR1的表达两法无明显差异,单纯益气健脾法呈现较好趋势.结论:提高NAChR和NMDAR1表达水平可能是两法改善脑老化小鼠学习记忆功能的部分机制,两法在不同的环节和靶点上各有优势.     

健脾益气方对实验性重症肌无力小鼠FoxP3和TGF-β1的干预研究

目的:观察健脾益气方对EAMG小鼠FoxP3和TGF-β1调节作用。方法:采用N2AchR加等量福氏完全佐剂,分2次免疫C57BL/6小鼠,并复制重症肌无力(experimental auto-immune myasthenia gravis,EAMG)模型,及对模型进行评价。小鼠随机分为佐剂组、模型组、地塞米松组和健脾益气方组,采用ELISA法观察各组动物血清AChR-Ab水平和TGF-β1水平,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-FQ-PCR)分析4组小鼠脾细胞中Foxp3mRNA的表达。结果:健脾益气方组(起效剂量18.8g/kg,剂量范围18.8g/kg～37.6g/kg)、地塞米松组小鼠血清AchR-Ab滴度明显降低,与模型组和佐剂组比较有非常显著性差异,但两治疗组之间无显著性差异。结论:通过降低FOXP3mRNA、TGF-β1的表达,可能增加AChR抗体的产生,在MG的发病中起到重要作用;中药健脾益气方具有良好的防治EAMG效果,可能是通过上调TGF-β1和FoxP3水平,抑制AchR-Ab产生而起到治疗作用。     

填精生血法治疗特发性血小板减少性紫癜疗效分析

目的探讨中医药治疗特发性血小板减少性紫癜(ITP)的有效方法.方法选择诊断明确的慢性ITP患者42例,观察以健脾填精、益气养血为主的归蓉补血片对不同证型ITP的疗效,以及对大、小鼠环磷酰胺血虚及失血性贫血模型的影响.结果归蓉补血片对ITP的总有效率为85.7%,临床可有效改善ITP的出血症状,升高血小板数量,抑制血小板抗体的形成,似可促进骨髓巨核细胞的分化;可提高模型动物的血小板、骨髓有核细胞、红细胞数及血红蛋白含量,缩短电泳时间.结论填精生血法对ITP有较好的疗效.     

健脾益气摄血方对ITP模型小鼠外周血象的影响

目的:研究健脾益气摄血治则对ITP小鼠外周血象的影响。方法:制备豚鼠抗小鼠血小板血清(APS),注射于BALB/c小鼠体内造成ITP小鼠模型,模型稳定后给予强的松和健脾益气摄血颗粒干预,检测小鼠外周血象的变化情况。结果:注射APS造模后,小鼠外周血血小板计数减少,白细胞计数升高,血红蛋白含量降低,血小板分布宽度基本无影响;给药干预后,血小板计数回升,白细胞计数降低,但与药物作用不相关,血红蛋白含量回升,血小板分布宽度无影响。结论:健脾益气摄血治则能够有效提升ITP小鼠血小板数量及血红蛋白含量。     

益气健脾方对脾虚模型小鼠的影响

目的:研究益气健脾方对大黄致小鼠脾虚模型的影响,探讨其健脾作用.方法:采用连续灌胃大黄水煎液14天造成小鼠脾虚模型,以补中益气丸为阳性对照,益气健脾方水煎液高、低剂量组进行治疗.观察测定实验动物外周血细胞指标的变化、胸腺及脾脏质量指数、小肠推进率.结果:益气健脾方各剂量组能够显著升高血红蛋白量、红细胞计数、白细胞计数值...     

生血灵治疗特发性血小板减少性紫临床研究

探讨特发性血小板减少性紫癜(ITP)血管内皮细胞(VEC)活性以及健脾滋肾活血泻火方 (生血灵 )的作用机理 ,测定 55例ITP患者血浆Fn、TXB2 、6-酮 -前列环素F1α(PGF1α)含量 ,临床观察 34例ITP患者用生血灵治疗前后BPC、血浆Fn、TXB2 、PGF1α的变化。结果 :55例不同证型ITP患者的血浆Fn含量明显高于正常对照组 ;33例火伤血络型(Ⅱ型)患者PGF1α含量明显高于正常对照组 ;1 8例Ⅱ型患者服用生血灵后Fn、PGF1a明显下降。提示ITP存在血管内皮损伤 ;生血灵具有改善VEC活性功能的作用     

益气健脾法对结肠炎小鼠EGF及其mRNA表达的影响

目的:观察益气健脾法对结肠炎小鼠EGF及其mRNA表达的影响.方法:将BALB/C小鼠随机分为5组,分别为正常对照、模型、柳氮磺胺吡啶(SASP)、益气法及健脾法组,以葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠形成结肠慢性炎症,用免疫组织化学、原位分子杂交方法观察EGF及其mRNA的表达.结果:模型组结肠组织EGF及其mRNA的表达与正常对照组比较无明显差别(均为P＞0.05);益气及健脾法组结肠组织EGF及其mRNA的表达均高于模型组(均为P＜0.05).结论:增加EGF及其mRNA的表达是益气健脾法方药的作用机制之一.     

三种提取工艺制备的益气通阳汤对免疫性血小板减少小鼠治疗作用的比较研究

目的比较3种提取工艺制备的益气通阳汤对免疫性血小板减少症(Immune thrombocytopenia,ITP)小鼠的治疗作用。方法分别用全方水提、全方水提醇沉、水提和醇提同时应用等3种工艺制备益气通阳汤,得益气通阳1号、2号、3号;用豚鼠抗小鼠血小板血清(APS)腹腔注射小鼠,复制ITP小鼠模型,灌胃给予等剂量的益气通阳1号、2号、3号,连续11 d,比较其对ITP小鼠血小板(Platelet,PLT)数、血红蛋白(Hemoglobin,Hb)、骨髓巨核细胞数和脾脏系数的影响。结果不同提取工艺的益气通阳汤均可提高ITP小鼠的PLT,其中益气通阳1号组和2号组PLT升高较接近正常;益气通阳3号组Hb降低,低于正常对照组和模型组(P0.05)。与模型组相比,益气通阳1号组和2号组脾脏系数下降(P0.05),益气通阳3号组脾脏系数上升(P0.05)。各益气通阳汤组小鼠骨髓产板巨核细胞数均增加(P0.05),其中益气通阳2号组与正常对照组比较无统计学差异(P0.05)。结论益气通阳汤3种提取工艺治疗都能够升高ITP小鼠PLT,其中益气通阳2号治疗效果最佳。     

补肾方、补肾健脾方、益气健脾化痰祛瘀方对快速老化模型小鼠心肌葡萄糖转运体蛋白的影响

目的:观察补肾方、补肾健脾方、益气健脾化痰祛瘀方对快速老化模型小鼠心肌葡萄糖转运体蛋白的影响,探讨中医不同治法心肌保护作用的机制。方法:选用快速老化模型小鼠,分为对照组、模型组、补肾方组、补肾健脾方组、益气健脾化瘀祛痰方组。连续灌胃给药3个月,采用生化分析仪检测血清TC和LDL-C,采用ELISA法检测血清IL-6水平,采用HE染色法观察胸主动脉和心肌组织形态,采用油红O染色法观察胸主动脉脂质面积,采用Masson染色法观察胸主动脉胶原纤维的变化,采用Western blot法检测心肌组织GLUT-1和VCAM-1蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组血清TC、LDL-C和IL-6水平明显升高(P0.05,P0.01),胸主动脉和心肌组织病理形态发生改变,心肌组织GLUT-1蛋白表达降低和VCAM-1蛋白表达显著升高;与模型组比较,给药组血清TC和LDL-C水平降低(P0.01),改善胸主动脉和心肌组织的病理变化,益气健脾化痰祛瘀方组血清IL-6水平降低(P0.05),提高心肌组织GLUT-1蛋白表达和抑制心肌组织VCAM-1蛋白表达。结论:补肾方、补肾健脾方、益气健脾化瘀祛痰方对快速老化模型小鼠具有代谢调节、心肌保护、血管保护三重作用,改善衰老所致的心肌能量代谢障碍、血管损伤,炎症反应,其作用机制可能与其干预心肌葡萄糖转运体蛋白有关,以益气健脾化痰祛瘀方效果较为明显。     

益气健脾、益气健脾祛痰化瘀方药对脑老化小鼠神经元保护作用的比较研究

目的:比较益气健脾、益气健脾祛痰化瘀方药对脑老化小鼠神经元保护作用.方法:采用D-半乳糖(D-galactose, D-gal)复制亚急性衰老及脑老化动物模型.以流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测大脑神经元线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential,MMP)及凋亡百分率,病理图文分析系统检测大脑神经元密度.结果:益气健脾和益气健脾祛痰化瘀方药均能明显:(1)稳定MMP,益气健脾方药更具优势;(2)抑制大脑皮质神经元密度的下降(对海马神经元密度的作用不显著).益气健脾法方药还能明显降低神经元凋亡百分比(益气健脾祛痰化瘀法作用不显著).结论:益气健脾和益气健脾祛痰化瘀方药均有一定的神经元保护作用,单纯益气健脾方药作用更为显著.