黄芩苷联合顺铂体外诱导人肝癌细胞HepG2.0凋亡的实验研究

目的观察黄芩苷联合顺铂是否能诱导HepG2.0细胞凋亡及探讨其对凋亡相关蛋白表达的影响。方法采用体外细胞培养方法,分别用黄芩苷、顺铂及黄芩苷联合顺铂干预HepG2.0细胞。用CCK-8法检测细胞活性;光学显微镜观察HepG2.0细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪检测HepG2.0细胞凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、c-myc表达的影响。结果光学显微镜下可观察到药物组细胞凋亡的形态改变;各药物组细胞早期凋亡率显著升高;各药物组细胞Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax、c-myc和Caspase-3表达升高。结论黄芩苷、顺铂及黄芩苷联合顺铂均能诱导HepG2.0细胞凋亡,其机制可能通过调控Bcl-2、Bax、Caspase-3、c-myc蛋白的表达有关。     

染料木苷对FFAs诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗的影响

目的观察染料木苷对游离脂肪酸(FFAs)诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗的影响。方法软脂酸诱导HepG2细胞胰岛素抵抗,给予不同浓度的染料木苷(1、2、4μmol/L)、罗格列酮(1μmol/L)干预,采用MTT法检测药物对细胞增殖的影响,以葡萄糖氧化酶法检测葡萄糖消耗量(GC),使用Western blot法检测肝细胞葡萄糖转运体1(GLUT1)蛋白的表达水平。结果不同浓度的染料木苷对HepG2细胞增殖无影响;与对照组比较,软脂酸作用24h后,HepG2细胞在胰岛素刺激下的GC降低,GLUT1表达减少(P0.05,P0.01);与模型组比较,染料木苷组HepG2细胞GC随浓度增加而明显提高,GLUT1蛋白表达明显增加(P0.05,P0.01)。结论染料木苷能改善软脂酸诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗。     

黄芩苷锌对PC12细胞缺氧缺糖损伤的保护作用。

目的:检验黄芩苷锌(HBZn)是否对神经细胞具有保护功能,并初步探讨其保护机制.方法:以缺氧缺糖(oxygen and glucose deprivation,OGD)诱导PC12细胞损伤模型拟脑缺血病理的改变,采用MTT法检测细胞存活率,研究黄芩苷锌的体外神经细胞保护活性.结果:黄芩苷锌对PC12细胞OGD损伤的保护作用与黄芩苷、灯盏花素的保护效果接近,但在OGD损伤前2h给药保护作用明显.结论:黄芩苷锌对OGD诱导PC12细胞的损伤有预防保护作用.     

一种实用的体外非酒精性脂肪肝细胞模型

目的:探讨体外建立非酒精性脂肪肝细胞模型的方法.方法:体外用MEM培养基培养HepG2细胞,分为模型组和正常组.当细胞融合达到70%~80%,正常组换用新鲜MEM培养液,而模型组改为含有游离脂肪酸(油酸和棕榈酸)混合物的MEM培养基诱导培养24 h.以油红O染色和电镜定性观察细胞内脂滴,同时检测细胞内甘油三酯和丙二醛含量.结果:模型组HepG2细胞内脂滴大量形成,且甘油三酯明显升高,而丙二醛较正常组没有明显升高.结论:采用游离脂肪酸(油酸和棕榈酸)混合物体外诱导HepG2细胞建立的脂肪肝细胞模型,是一种研究细胞脂肪变性简便实用的的方法.     

内质网应激诱导肝细胞脂肪沉积及可能机制

目的 利用毒胡萝卜素诱导肝细胞内质网应激模型,观察在内质网应激状态下肝细胞脂肪沉积情况,并初步探讨其分子机制.方法 以人L02、HepG2肝细胞株为研究靶细胞,将两种细胞均分为正常对照组和实验组(培养液内含毒胡萝卜素1 μmol/L),采用三酰甘油(TG)试剂盒、油红O染色检测肝细胞脂肪沉积情况,实时荧光定量PCR法检测SREBP-1c、LXRs的mRNA表达情况,蛋白质印迹法检测GRP78、SREBP-1c、LXRs的蛋白表达情况.结果 蛋白质印迹结果显示,实验组GRP78的表达较对照组升高(P＜0.05),表明肝细胞内质网应激模型建立成功.在内质网应激状态下,毒胡萝卜素作用48 h后实验组L02与HepG2细胞脂肪沉积均较对照组增加(P＜0.01).与对照组相比,实验组L02和HepG2细胞SREBP-1c在基因水平和蛋白水平表达均升高(P＜0.05),而LXRs在基因水平和蛋白水平的表达均无变化.结论 内质网应激可能通过上调SREBP-1c诱导肝细胞脂肪沉积,而LXRs未参与该过程.     

磷脂酶D1促进非酒精性脂肪肝体外模型的脂肪生成

目的探讨PLD1在非酒精性脂肪肝体外细胞模型中对脂肪生成的作用。方法实验分为空白对照组、FFA模型对照组、si-PLD1对照组、si-PLD1+FFA模型干预组、Ad-PLD1对照组、Ad-PLD1+FFA模型干预组。1mmol/L浓度游离脂肪酸（free fatty acid, FFA）体外持续作用HepG2细胞诱导脂肪肝细胞体外模型;CCK-8检测FFA的细胞毒性;空白对照组和FFA模型对照组行油红O染色,鉴定脂肪肝细胞模型成功构建。qRT-PCR检测空白对照组和FFA模型对照组PLD1和PLD2 mRNA表达水平;以PLD1为干预靶点,构建PLD1特异性小干扰RNA（si-PLD1 RNA）转染细胞和过表达慢病毒株（Ad-PLD1）感染细胞,通过流式细胞术检测各组尼罗红染色后的平均荧光强度,通过RT-qPCR检测各组细胞成脂相关基因的表达。结果非酒精性脂肪肝体外细胞模型构建成功,且CCK-8检测显示FFA无细胞毒性（P<0.01）;FFA模型对照组PLD1 mRNA表达水平明显低于空白对照组（P<0.05）;沉默PLD1后,流式细胞术示FFA模型对照组较空白对照组细胞内脂滴显著增加（P<0.001）,而si-PLD1+FFA模型干预组较FFA模型对照组细胞内脂滴显著减少（P<0.001）;RT-qPCR显示,FFA模型对照组较空白对照组FASN表达明显升高（P<0.05）,而si-PLD1+FFA模型干预组较FFA模型对照组FASN表达明显减少（P<0.01）。过表达PLD1后,流式细胞术示FFA模型对照组较空白对照组细胞内脂滴显著增加（P<0.001）,且Ad-PLD1+FFA模型干预组较FFA模型对照组细胞内脂滴增多（P<0.001）;同时RT-qPCR显示FFA模型对照组较空白对照组FASN表达明显升高（P<0.05）,且Ad-PLD1+FFA模型干预组较FFA模型对照组FASN表达明显增加（P<0.05）。结论非酒精性脂肪肝体外细胞模型中PLD1参与细胞脂滴生成,并可促进细胞脂滴生成。PLD1可能成为NAFLD的治疗新靶标。     

黄芩苷栀子苷配伍对脂多糖致BV2小胶质细胞激活损伤的影响

目的观察黄芩苷、栀子苷配伍组分(BG)对脂多糖(LPS)诱导小鼠小胶质细胞激活损伤的影响。方法体外培养BV2小鼠小胶质细胞株,取生长良好的细胞分别加入LPS(终浓度500ng/m L)和不同浓度黄芩苷、栀子苷配伍组分(终浓度12.5、25、50μg/m L)进行干预,并设置正常对照组;采用MTT法检测脂多糖对BV2细胞存活率的影响;取培养24 h细胞上清液,用Griess法检测NO生成量。结果 (1)MTT检测结果显示,与对照组相比,LPS单独刺激的BV2小胶质细胞活性明显降低,有统计学差异;与LPS单独处理的模型组细胞相比,给药组(LPS+BG)有效的提高了LPS处理后的BV2小胶质细胞活性,有统计学意义。(2)Griess法检测结果显示:与对照组相比,LPS可明显促进BV2细胞NO的生成,有统计学意义;加入黄芩苷栀子苷配伍组分可抑制LPS诱导的BV2小胶质细胞NO的生成,与LPS组差异有统计学意义。结论黄芩苷、栀子苷配伍组分可显著提高脂多糖诱导的BV2小胶质细胞的存活率,同时显著降低脂多糖诱导BV2细胞NO的表达,初步判断黄芩苷、栀子苷配伍组分可抑制脂多糖所致BV2小胶质细胞的激活与损伤,具有一定的神经保护作用。     

二甲双胍对非酒精性脂肪性肝病细胞模型内质网应激与自噬的影响

目的观察二甲双胍对游离脂肪酸(FFA)诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)HepG2细胞模型内质网应激(ERS)及自噬的影响。方法 2020年7—11月于武汉大学人民医院消化系统疾病湖北省重点实验室进行实验。分别用0(空白对照)、10、20、40、80 mmol/L的二甲双胍处理HepG2细胞24 h,评估二甲双胍对细胞活力的影响。取对数生长期HepG细胞分为对照组(BSA组)、模型组(FFA组)、二甲双胍低浓度组(Met L组)、二甲双胍高浓度组(Met H组)4组,FFA、Met L、Met H组利用FFA处理HepG2细胞24 h建造NAFLD细胞模型,Met L、Met H组分别加入1 mmol/L和10 mmol/L二甲双胍干预其过程。Western-blot法分别检测HepG2细胞ERS相关蛋白磷酸化PERK(p-PERK)、ATF4及自噬相关蛋白p62、LC3表达水平的变化,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测ATF4 mRNA表达。结果二甲双胍可剂量依赖性地降低HepG2细胞活力(F/P=1 759.000/0.000)。与BSA组比较,FFA组内p-PERK、p62、ATF4蛋白和mRNA表达水平增高(t/P=3.273/0.029、16.190/0.000、47.290/0.000、13.730/0.000),LC3Ⅱ/Ⅰ比值下降(t/P=17.980/0.000);与FFA组比较,Met L组和Met H组p-PERK、p62、ATF4蛋白和mRNA表达水平降低(F/P=70.310/0.000、106.700/0.000、995.600/0.000、66.960/0.000),LC3Ⅱ/Ⅰ比值升高(F/P=166.400/0.000),且与Met L组比较,Met H组上述指标变化更明显(P<0.05),但p62水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论二甲双胍可降低FFA诱导的NAFLD细胞模型ERS水平并提高细胞自噬水平。     

黄连碱促进肝细胞自噬及胆固醇外流改善脂肪肝的脂质蓄积

目的用油酸和棕榈酸处理HepG2细胞构建脂肪肝细胞模型,观察黄连碱（COP）对脂肪肝细胞中脂质蓄积的影响及其作用机制。方法采用100 μmol/L油酸和50 μmol/L棕榈酸诱导HepG2细胞脂肪变性形成细胞内脂质蓄积,构建脂肪肝细胞模型;通过CCK8检测不同浓度的黄连碱对HepG2细胞增殖活性的影响,设置4组细胞模型:对照组、脂肪肝细胞模型组（FFA组）、COP+HepG2组以及COP+FFA组;通过RT-PCR和Western blotting检测3组细胞的自噬基因LC3Ⅰ/Ⅱ、ATG5及胆固醇外流介导因子ABCA1 mRNA及蛋白水平的表达变化;采用油红O染色观察对照组、FFA组和COP+FFA组3组细胞的脂滴变化。结果油红O染色结果显示相较于对照组,HepG2细胞经过油酸和棕榈酸共同处理后的FFA组细胞内脂质明显增多;而COP+FFA组中细胞的脂滴明显减少。CCK8结果显示0~25 μmol/L的黄连碱对HepG2细胞活性无明显影响（P>0.05）。Western blotting与RT-PCR结果显示:相对于对照组,FFA组细胞自噬以及胆固醇外流ABCA1水平明显降低,而COP+HepG2组自噬基因LC3Ⅰ/Ⅱ和ATG5以及ABCA1表达水平明显升高;相对于FFA组,COP+FFA组细胞中脂质蓄积明显减少,差异均有统计学意义（P < 0.05~P < 0.01）,且自噬与胆固醇外流障碍也被改善。结论黄连碱可通过促进HepG2细胞自噬及胆固醇外流,减少油酸与棕榈酸诱导形成的脂肪肝细胞中的脂质蓄积。     

不同膳食脂肪酸对肝细胞SREBP-1c表达及脂代谢的影响

目的探讨不同膳食脂肪酸构成对肝细胞脂代谢及固醇调节元件结合蛋白-1c(sterol-regulatory elementarybinding protein-1c,SREBP-1c)表达的影响。方法以HepG2肝细胞为研究对象,分为空白对照组、二十碳五烯酸(EPA)组、棕榈酸(PA)组、EPA和亚油酸(LA)1∶1混合组、PA和油酸(OA)1∶1混合组,EPA、PA单独处理组终浓度为150μmol/L,混合处理组各组分浓度为75μmol/L,总浓度为150μmol/L,处理细胞24 h。采用油红O染色观察细胞内脂滴的变化,测定甘油三酯(TG)含量来评价细胞内脂质含量;采用RT-PCR、Western blot法检测SREBP-1c mRNA及蛋白的表达。结果 PA组、PA和OA 1∶1混合组SREBP-1c mRNA及蛋白的表达上调,EPA和LA 1∶1混合组、EPA组SREBP-1c mRNA及蛋白的表达下调,与对照组相比差异显著(P<0.05)。与对照组相比,EPA和LA 1∶1混合组、EPA组肝细胞内TG含量显著减少(P<0.05);PA和OA 1∶1混合组、PA组肝细胞内TG含量显著增加(P<0.05)。结论 PA、OA上调肝细胞SREBP-1c的表达并促进细胞内TG的合成,可能促进肝细胞脂肪变性;而EPA、LA下调肝细胞SREBP-1c的表达并显著降低肝细胞内TG含量,减轻肝细胞脂肪变性。     

乙肝病毒X蛋白对油酸钠诱导HepG2细胞脂质沉积的影响

目的探讨乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)是否增加油酸钠诱导HepG2细胞的脂质沉积。方法将质粒pIRES2-eGFP-HBx瞬时转染入HepG2细胞中,建立表达HBx的细胞模型(HepG2-HBx);以转染空载体pIRES2-eGFP(HepG2-pIRES2)和HepG2细胞(HepG2)作对照。观察转染后绿色荧光蛋白(GFP)的表达;转染后16 h开始用油酸钠处理各组细胞24、48 h(分别命名为HBx/OA组、空/OA组、G2/OA组),细胞内甘油三酯(TG)含量测定及油红O染色了解细胞内脂质沉积情况;在油酸钠处理细胞24 h,RT-PCR法检测SREBP-1和LXRα的mRNA表达水平,Westernblot检测HBx、LXRα及FAS蛋白表达水平。结果转染后16 h HepG2-HBx细胞和HepG2-pIRES2细胞中开始有GFP的表达,提示转染成功;仅在HepG2-HBx细胞内有HBx表达,表明HepG2-HBx细胞模型构建成功。在相同油酸钠处理的条件下,HBx/OA组细胞内脂质含量和TG含量与对照组相比均明显增加(P<0.01)。在油酸钠处理细胞24 h,HBx/OA组细胞内LXRα、SREBP-1的mRNA表达量和LXRα、FAS蛋白表达量较对照组均明显增加(P<0.01/0.05)。结论 HBx通过上调HBx-LXRα-SREBP1/FAS通路脂质合成相关基因表达,可能增加HepG2-HBx细胞对外界脂代谢紊乱因素的易感性,从而增加油酸钠诱导HepG2细胞脂质沉积。     

乙肝病毒X基因诱导肝细胞脂肪变性作用机制的研究

[摘要] 目的 探讨沉默肝X受体α(liver x receptor alpha,LXRα)对HepG2.2.15细胞脂质代谢相关基因表达的影响。方法 设立空白对照组（不转染任何质粒）、阴性对照组（转染阴性HK质粒）、shLXRα转染组（转染LXRα质粒）。构建针对LXRα基因的shLXRα质粒,转染HepG2.2.15细胞,荧光显微镜及Western blot检测转染质粒24～96h绿色荧光蛋白和LXRα蛋白的表达以确定质粒的最佳干扰时间,根据结果予油酸钠刺激细胞,甘油三酯（TG）检测细胞脂肪变程度,RT-PCR检测固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)mRNA的表达,Western blot检测乙肝病毒x蛋白(hepatitis B virus x protein, HBx)及脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)蛋白的表达。结果 成功构建shLXRα质粒并转染HepG2.2.15细胞;与空白对照组和阴性对照组比较,shLXRα转染组LXRα蛋白表达明显下降,于转染后48～72h表达最低[（0.43±0.03） vs (0.61±0.03),(0.33±0.03) vs (0.69±0.02),P＜0.01],差异有统计学意义;随着油酸钠处理时间延长各组TG含量、SREBP-1c mRNA水平、HBx和FAS蛋白表达均逐渐增加,同一时间点,HBx蛋白各组无明显差异（P>0.05）,而TG含量、SREBP-1c mRNA水平、FAS蛋白与空白对照组和阴性对照组比较, shLXRα转染组中表达较低[TG：（21.21±3.39）μg/mg vs（32.61±5.09）μg/mg];SREBP-1c：（0.418±0.051 vs 0.516±0.037;FAS：0.48±0.03 vs 0.63±0.03,P<0.01）,差异有统计学意义。结论 HBx对脂代谢的调控是通过LXRα/ SREBP-1c /FAS途径实现的。     

Effects of Berberine and Cinnamic Acid on Palmitic Acid-Induced Intracellular Triglyceride Accumulation in NIT-1 Pancreatic β Cells

Objective: To investigate the effects of berberine(BBR) and cinnamic acid(CA), the main active components in Jiaotai Pill(交泰丸, JTP), on palmitic acid(PA)-induced intracellular triglyceride(TG) accumulation in NIT-1 pancreatic β cells. Methods: Cells were incubated in culture medium containing PA(0.25 mmol/L) for 24 h. Then treatments with BBR(10 μmol/L), CA(100 μmol/L) and the combination of BBR and CA(BBR+CA) were performed respectively. Intracellular lipid accumulation was assessed by Oil Red O staining and TG content was measured by colorimetric assay. The expression of adenosine monophosphate-activated protein kinase(AMPK) protein and its downstream lipogenic and fatty acid oxidation genes, including fatty acid synthase(FAS), acetyl-co A carboxylase(ACC), phosphorylation acetyl-co A carboxylase(p ACC), carnitine acyl transferase 1(CPT-1) and sterol regulating element binding protein 1c(SREBP-1c) were determined by Western blot or real time polymerase chain reaction. Results: PA induced an obvious lipid accumulation and a significant increase in intracellular TG content in NIT-1 cells. PA also induced a remarkable decrease in AMPK protein expression and its downstream targets such as p ACC and CPT-1. Meanwhile, AMPK downstream lipogenic genes including SREBP-1c m RNA, FAS and ACC protein expressions were increased. Treatments with BBR and BBR+CA, superior to CA, significantly reversed the above genes changes in NIT-1 pancreatic β cells. However, the synergistic effect of BBR and CA on intracellular TG content was not observed in the present study. Conclusion: It can be concluded that in vitro, BBR and BBR+CA could inhibit PA-induced lipid accumulation by decreasing lipogenesis and increasing lipid oxidation in NIT-1 pancreatic β cells.     

Exendin-4对胰岛素抵抗人肝癌HepG2细胞脂代谢相关因子基因表达的影响

目的：探讨Exendin-4（Ex-4）对胰岛素抵抗（IR）人肝癌HepG₂细胞脂代谢相关因子表达的影响,阐明Ex-4改善IR的作用。方法：选取处于对数生长期的人肝癌HepG₂细胞,采用高浓度胰岛素诱导HepG₂细胞制备IR模型（HepG₂-IR细胞）,再将其分为对照组（不含胰岛素的HepG₂细胞）、IR组（IR模型,即HepG₂-IR细胞）和Ex-4组（IR模型中加入10 nmol·L^-1 Ex-4）。采用葡萄糖氧化酶法（GOD-POD）检测细胞中葡萄糖消耗量,采用油红O染色观察细胞形态及胞内脂滴形成情况,应用甘油三酯（TG）试剂盒检测细胞中TG水平,采用荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测细胞中乙酰辅酶A羧化酶（ACC）、脂肪酸合成酶（FAS）、固醇调节元件结合蛋白1c（SREBP-1c）和载脂蛋白B100（apoB100）等脂代谢相关因子mRNA表达水平。结果：HepG₂细胞建立IR模型后,与对照组比较,IR组HepG₂-IR细胞葡萄糖消耗量明显降低（P<0.01）;与IR组比较,Ex-4组HepG₂-IR细胞葡萄糖消耗量明显增加（P<0.05）。油红O染色法,与对照组比较,IR组细胞含脂率明显升高（P<0.05）;与IR组比较,Ex-4组细胞中含脂率明显降低（P<0.05）。与对照组比较,IR组细胞中TG水平明显升高（P<0.01）;与IR组比较,Ex-4组细胞中TG水平明显降低（P<0.05）。qRT-PCR检测,与对照组比较,IR组细胞中ACC、FAS和SREBP-1c mRNA表达水平明显升高（P<0.01）,apoB100mRNA表达水平明显降低（P<0.05）;与IR组比较,Ex-4组细胞中ACC、FAS和SREBP-1c mRNA表达水平降低（P<0.05）,apoB100 mRNA表达水平升高（P<0.01）。结论：Ex-4可通过调节人肝癌HepG₂细胞脂类代谢相关因子的表达进而改善IR。     

Kupffer细胞在果糖引起的非酒精性脂肪肝中的作用

目的探讨肝脏Kupffer细胞在果糖引起非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中的作用及其可能的机制。方法选取48只雌性ICR小鼠随机分为4组:对照组、果糖组、三氯化钆(GdCl3)组和GdCl3+果糖组。对照组与GdCl3组小鼠均饮用自来水,GdCl3组同时给予GdCl3(10 mg/kg,ip)每周2次;果糖组与GdCl3+果糖组小鼠均饮用30%果糖水溶液,GdCl3+果糖组小鼠同时给予GdCl3(10 mg/kg,ip)每周2次。喂养10周后剖杀所有小鼠,取血清检测甘油三酯(TG)含量;取肝脏组织制备石蜡切片用于病理学检查,制备冰冻切片用于油红O染色;其它肝脏组织用于RT-PCR、Westernblot和肝脏TG含量检测。结果果糖组小鼠血清和肝脏TG含量显著升高,肝脏组织HE和油红O染色显示小鼠肝脏脂质沉积明显,而GdCl3干预明显降低果糖组小鼠肝脏TG含量,同时肝脏脂质沉积明显得到改善;果糖组小鼠肝脏核蛋白固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)明显激活,其靶基因肝脏脂肪酸合成酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和硬脂酰辅酶A去饱和酶-1(SCD-1)等TG合成相关酶表达水平显著上调,而GdCl3干预明显抑制肝脏核蛋白SREBP-1c的激活及其靶基因上调。结论果糖引起肝脏组织SREBP-1c激活导致肝细胞TG合成增加。肝脏Kupffer细胞激活在果糖诱导的小鼠肝脏SREBP-1c激活和脂质沉积中起重要作用。     

肝X受体的激活对小鼠糖尿病肝脏脂肪酸合成酶表达的调节

目的 探讨肝X受体(LXR)对糖尿病肝脏脂肪酸合成酶(FAS)表达的影响及机制.方法 将16周龄、雄性、C57BL/6背景下瘦素受体基因缺陷的db/db小鼠和对照的db/m小鼠,分别予以LXR激动剂TO901317(TO)(3 mg·kg-1·d-1)或DMSO灌胃处理7 d;TO(10 μmol/L)刺激人肝癌细胞系HepG2细胞24 h.此外,HepG2细胞转染小鼠FAS启动子报告基因表达质粒,同时转染pcDNA3.1表达载体或LXR或活化型固醇调节元件结合蛋白(SREBP-1c)表达质粒12 h;采用免疫组织化学方法检测FAS蛋白在肝脏上的表达,实时荧光定量PCR和蛋白印迹方法分别在mRNA和蛋白水平检测FAS和SREBP-1的表达及TO对其表达的影响,荧光素酶报告基因方法检测LXR激动剂和SREBP-1c对小鼠FAS启动子活性的影响.结果 免疫组化结果显示FAS蛋白在肝脏广泛表达,主要位于肝细胞胞质内.TO可显著降低db/db小鼠空腹血糖水平[由(12.00±1.06)mmol/L下降到(7.73±0.69)mmool/L,P＜0.01]和糖化血红蛋白水平(由5.67%±0.10%下降到4.87%±0.08%,P＜0.01).db/db小鼠肝脏FAS mRNA水平明显高于db/m小鼠,约为5.5倍(P＜0.01);在蛋白水平,db/db小鼠肝脏上的FAS也明显高于db/m小鼠.TO处理可使db/m小鼠肝脏FAS mRNA表达升高约3.5倍(P＜0.05),可使db/db小鼠肝脏FAS mRNA升高约1.7倍(P＜0.05);TO处理可使db/m小鼠肝脏SREBP-1 mRNA升高约2.4倍(P＜0.05),使db/db小鼠肝脏SREBP-1 mRNA升高约2.1倍(P＜0.01).TO能够上调HepG2细胞FAS的mRNA表达水平,升高约1.9倍(P＜0.05);LXR的激活还能显著增加HepG2细胞中FAS基因启动子活性,约为对照组的1.5倍;过表达LXR或SREBP-1c也能增加HepG2细胞FAS基因启动子活性,分别为对照组的1.9倍和1.6倍(均P＜0.01).结论 LXR可能通过其本身的直接作用和SREBP-1C的间接作用上调肝脏FAS的表达,LXR可能介导了糖尿病肝脏的脂质生成过程.     

AMPK参与调节大鼠脂肪肝相关性肝癌前病变的形成

目的 探讨单磷酸腺苷活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)在低剂量二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine, DEN)合并高脂饮食诱导的大鼠肝癌前病变发生中的作用及其机制。方法 体内实验采用腹腔注射DEN(30 mg/kg)合并高脂饮食饲喂大鼠16周诱导肝癌前病变模型,通过HE染色、Western blotting、Real-time PCR、免疫组织化学等方法观察谷胱甘肽S转移酶(glutathione S-transferase-π,GST-π)、固醇调节元件结合蛋白1c(sterol regulatory element binding protein-1c, SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase,ACC)、硬脂酰辅酶A去饱和酶1(stearoyl-CoA desaturase 1,SCD1)及AMPK、p-AMPK的表达变化;体外实验观察AMPK对棕榈酸(palmitic acid, PA)诱导的大鼠H4IIE细胞脂质代谢的影响。结果 与单纯DEN处理组比较,DEN+高脂组大鼠肝细胞脂肪变性、气球样变、伴有炎性细胞浸润及小灶性坏死;GST-π表达水平增高;三酰甘油(triglyceride,TG)及SREBP-1c、FAS、ACC、SCD1表达水平上升;p-AMPK水平下降。AMPK通过抑制SREBP-1c的表达水平降低棕榈酸诱导的H4IIE细胞内脂质合成。结论 AMPK可能通过抑制SREBP-1c的表达水平参与大鼠肝癌前病变的形成。     

羟基肉桂酸对HepG2和C2C12细胞糖脂代谢的调节作用

目的 研究羟基肉桂酸对HepG2细胞脂质堆积和葡萄糖消耗及C2C12细胞葡萄糖摄取的调节作用及其机制.方法 利用油酸诱导HepG2细胞建立脂质堆积模型,通过油红O染色法观察不同浓度羟基肉桂酸对脂质堆积的作用,并检测细胞内总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量;同时,采用MTT法检测羟基肉桂酸对细胞活力的影响;通过葡萄糖消耗实验和葡萄糖摄取实验检测羟基肉桂酸对细胞葡萄糖利用的影响;采用实时荧光定量PCR技术分析糖脂代谢关键基因的表达.结果 羟基肉桂酸能够显著抑制油酸诱导的HepG2细胞脂质堆积,同时降低细胞中TC和TG含量;羟基肉桂酸还能够显著增强细胞对葡萄糖的消耗,促进葡萄糖的摄取,显著降低固醇调节元件结合蛋白-1a、-1c、-2和脂肪酸合酶,乙酰辅酶A羧化酶和3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶的mRNA表达水平,同时升高过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)的表达.结论羟基肉桂酸具有调节细胞糖脂代谢的作用,能够改善HepG2细胞中的脂质堆积,并且显著提高葡萄糖的利用率.其作用机制可能与激活PPAR等关键基因的表达有关.