蒺藜皂苷对PC12细胞凋亡的保护作用及机制

目的探讨蒺藜皂苷(gross saponin tribulus terrestris,GSTT)对过氧化氢(H2O2)诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(pheochromocytoma cells,PC12)凋亡的保护作用及其机制。方法PC12细胞分为对照组、模型组及蒺藜皂苷高(GSTT1)、低(GSTT2)剂量组。用H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,MTT法检测PC12细胞活性,倒置相差显微镜观察细胞形态,Hoechst 33258荧光核染色,流式细胞仪检测PC12细胞亚二倍体峰比率及Western blot方法检测与凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax。结果与模型组比较蒺藜皂苷组随着剂量的增加PC12细胞存活率提高(P<0.01),凋亡细胞减少,凋亡比率下降(P<0.01),Bcl-2表达增加(P<0.05),而Bax的表达降低(P<0.05)。结论蒺藜皂苷可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制线粒体途径的细胞凋亡及影响凋亡相关蛋白的表达有关。     

蒺藜皂苷激活PKCε抗氧化应激诱导心肌细胞凋亡的机制

观察蒺藜皂苷 (gross saponins of Tribulus terrestris, GSTT) 在过氧化氢 (hydrogen peroxide, H₂O₂) 诱导新生大鼠心肌细胞凋亡过程中对蛋白激酶C Eplison亚型 (protein kinase C Eplison, PKCε) 及凋亡相关蛋白的影响, 探讨蒺藜皂苷抗心肌细胞凋亡的作用机制。新生大鼠心肌细胞原代培养, H₂O₂建立心肌细胞凋亡模型, 流式细胞术检测细胞凋亡率; Western blotting法检测phospho-PKCε及Bcl-2、Bax的蛋白含量; 免疫细胞化学技术检测cleaved caspase-3蛋白含量。与模型组比较, GSTT (100 mg·L^-1) 预处理可明显降低H₂O₂诱导的心肌细胞凋亡率 (P < 0.01), 并增加phospho-PKCε及Bcl-2的蛋白含量 (P < 0.01), 降低Bax及cleaved caspase-3的蛋白含量 (P < 0.01); PKC抑制剂白屈菜红碱 (chelerythrine, Che) 可部分阻断蒺藜皂苷抗心肌细胞凋亡作用, 与蒺藜皂苷组比较具有统计学意义 (P < 0.05, P < 0.01)。GSTT抗心肌细胞凋亡的作用机制可能与激活PKCε后抑制线粒体依赖的凋亡有关。     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导胃癌细胞AGS凋亡的机制研究

目的 蛋白酶体抑制剂MG132已在几种肿瘤治疗中取得一定疗效,但MG132对胃癌细胞凋亡的作用机制尚不完全清楚。因此,本文主要探讨MG132对胃癌细胞AGS凋亡的影响及其可能机制,旨在为胃癌治疗提供实验基础。方法 选择AGS细胞为研究对象,实验分为6个组(MG132浓度分别为0、0.5、1、2.5、5、10μmol·L^-1),利用CCK-8和克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡及活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平,全自动生化分析仪检测乳酸脱氢酶(detect lactate dehydrogenase, LDH)水平,免疫沉淀(immunoprecipitation, IP)探讨脑型糖原磷酸化酶(brain-type glycogen phosphorylase, PYGB)、受体相互作用蛋白3(receptor interacting protein 3,RIP3)和受体相互作用蛋白1(receptor interacting protein1,RIP1)的相互作用关系,进一步用Western blot检测PYGB...     

雷酚萜甲醚抑制人胃癌细胞AGS增殖及诱导凋亡作用研究

目的研究雷酚萜甲醚(TME)在体外对人胃癌AGS细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法采用MTT法观察TME对人胃癌AGS细胞、正常人胃黏膜上皮细胞GES-1的增殖抑制作用;克隆形成实验观察细胞克隆的形成;光镜下及AO/EB染色观察细胞形态;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;JC-1染色和DCFH-DA荧光探针分别检测TME对AGS细胞线粒体膜电位的改变和活性氧产生的影响;Western blot检测凋亡蛋白caspase-3、caspase-8和Bcl-2、Bax表达情况,以及caspase广谱抑制剂z-VAD-fmk对caspase-3、caspase-8蛋白表达的影响。结果 TME可明显抑制人胃癌AGS细胞的增殖,并诱导其凋亡,作用48 h时IC50为23.85μmol·L-1,而对正常人胃黏膜上皮细胞GES-1的抑制作用明显低于AGS。TME能够抑制AGS细胞克隆形成,并使细胞出现明显的凋亡形态改变。Annexin V-FITC/PI双染实验表明,随TME剂量的增加,细胞凋亡百分数也增加。JC-1和DCFH-DA结果显示,TME使细胞内线粒体膜电位降低、细胞内活性氧水平增加。Western blot结果显示,TME增加了Bax/Bcl-2的比例,激活caspase-8和caspase-3,并且加入z-VAD-fmk后,caspase-3、caspase-8蛋白的表达降低。TME可使AGS细胞周期阻滞于G0/G1期。结论 TME能抑制人胃癌AGS细胞增殖和诱导凋亡,抗肿瘤作用机制与激活凋亡通路、影响细胞周期及Bcl-2蛋白家族相关。     

蒺藜皂苷通过上调PDCD4表达阻滞肺癌A549细胞周期并诱导细胞凋亡

摘要：目的:研究蒺藜皂苷（STT）对肺癌A549细胞周期和凋亡的影响和机制。方法:肺癌A549细胞分成Control、STT、STT+si-NC、STT+si-PDCD4组,使用噻唑蓝（MTT）方法测定细胞增殖,平板克隆实验测定细胞克隆能力,碘化丙啶（PI）单染法检测细胞周期,膜联蛋白V-FITC（Annexin V-FITC）/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、p27、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（C-caspase-3）、caspase-3、程序性细胞死亡4（PDCD4）蛋白表达。结果:与Control组比较,STT组细胞增殖能力、克隆能力显著降低（P<0.05）,细胞G0/G1比例和凋亡率显著升高（P<0.05）,Cyclin D1蛋白表达明显减少（P<0.05）,p27、C-caspase-3、caspase-3、PDCD4等蛋白表达水平升高（P<0.05）。与STT+si-NC组比较,STT+si-PDCD4组细胞存活率和克隆形成数目明显增加（P<0.05）,G0/G1细胞比例降低与细胞凋亡率明显降低（P<0.05）,细胞中Cyclin D1蛋白水平升高（P<0.05）,p27、C-caspase-3、caspase-3、PDCD4等蛋白水平下降（P<0.05）。结论:蒺藜皂苷通过上调PDCD4表达阻滞肺癌A549细胞周期并诱导细胞凋亡。     

重楼皂苷Ⅱ诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的体外研究

目的初步探讨重楼皂苷Ⅱ抑制人胃癌MGC-803细胞增殖并诱导其凋亡的作用及机制。方法体外培养人胃癌MGC-803细胞,CCK-8法检测不同浓度的重楼皂苷Ⅱ作用于细胞后其存活率;DAPI染色观察细胞凋亡;AV/PI双染检测细胞凋亡率;比色法检测天冬氨酸蛋白水解酶caspase-3的活性;Western blot法检测Cyt-c的蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,重楼皂苷Ⅱ可降低MGC-803细胞的存活率,且呈剂量与时间依赖性;镜下可见细胞核破碎,具有明显凋亡特征,凋亡率随着浓度的增大而增加(P <0.01);细胞内caspase-3的活性增加(P <0.01),Cyt-c蛋白的表达量明显增加(P<0.01)。结论重楼皂苷Ⅱ可明显抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖,并诱导细胞发生凋亡。     

蒺藜皂苷对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究蒺藜皂苷调控lncRNA NKILA对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及机制研究。方法 将膀胱癌细胞J82分为对照组（Control组）、GSTT组、GSTT+si-NC组及GSTT+si-NKILA组。对照组用0 mg·L^-1蒺藜皂苷处理,GSTT组用80 mg·L^-1蒺藜皂苷处理,将siRNA control和NKILA siRNA转染到细胞内,细胞转染后以含有80 mg·L^-1蒺藜皂苷细胞培养液培养细胞,为GSTT+si-NC组及GSTT+si-NKILA组。通过细胞计数法-8（CCK-8）检测J82细胞活力;以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测NKILA的表达水平;以克隆形成实验检测各组细胞增殖能力;以流式细胞术检测J82细胞凋亡情况;以蛋白质印迹法检测凋亡蛋白水平。结果 Control组、GSTT组、GSTT+si-NC和GSTT+si-NKILA组NKILA mRNA表达分别为1.00±0.05,1.99±0.10,2.04±0.11和1.19±0.12;细胞活力分别为（100.00±7...     

高效液相色谱法-蒸发光散射检测测定蒺藜皂苷1的含量

建立用HPLC-ELSD法测定蒺藜皂苷1(Terrestrosin 1)的含量.用Diamonsil C18柱;乙腈-水(36∶64)为流动相.蒺藜皂苷1在15～3000μg*ml-1范围内,进样量与峰面积有良好的线性关系(n=6,r=0.9997).回收率为98.39%,RSD为1.11%(n=9).测定三批蒺藜皂苷1含量均>98%.方法简便准确,可作为蒺藜皂苷1的含量测定方法.     

三七总皂苷对人胃癌细胞株MKN-28增殖和凋亡的影响

目的观察三七总皂苷(Total Saponins of Panax notoginseng,TSPN)对人胃癌细胞株MKN-28增殖和凋亡的影响,探讨其诱导细胞凋亡是否涉及上调死亡受体5(DR5)的表达。方法体外培养人胃癌细胞株MKN-28,平皿克隆形成法测定细胞锚定依赖性生长能力,PI染色流式细胞术(Flow cytometry,FCM)分析细胞周期和凋亡率,Hoechst 33258染色荧光显微镜观察凋亡细胞的形态,Western Bloting检测分析药物对DR5蛋白表达的影响。结果平皿集落形成法检测显示TSPN对MKN-28细胞生长有抑制作用,且呈浓度依赖性。PI染色FCM结果表明TSPN以时间和浓度依赖性方式诱导MKN-28细胞凋亡,且使细胞周期阻滞于G1期。Hoechst 33258染色荧光显微镜观察可见核染色质凝集,凋亡细胞呈致密浓染,与对照组相比,TSPN处理后,凋亡细胞比例增加,且呈时间和浓度依赖性。Western Bloting检测显示TSPN诱导细胞凋亡的机制涉及上调死亡受体5的表达活性。结论 TSPN在体外对人胃癌MKN-28细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用,初步推断TSPN诱发胃癌细胞凋亡与其上调死亡受体5的表达活性有关。     

蒺藜总皂苷含量测定方法研究

目的建立蒺藜总皂苷的含量测定方法。方法采用分光光度法,选用菝葜皂苷元(Sarsasa- pogenin)为对照品,通过高氯酸显色,计算蒺藜药材中总皂苷的含量。结果菝葜皂苷元在0．230 4-0．720 0 mg 范围内具有良好的线性关系(γ=0．999 3),平均回收率为98．54％,RSD为1．57％。结论该方法简便、准确、灵敏,重现性良好,适用于蒺藜总皂苷的含量测定。     

HPLC法测定蒺藜粗皂苷中蒺藜呋甾皂苷甲的含量

目的:建立蒺藜粗皂苷中有效成分蒺藜呋甾皂苷甲的含量测定方法。方法:采用HPLC法。色谱柱:Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈-水(29∶71),流速:0.7 ml.min-1,蒸发光散射检测器,漂移管温度:110℃,气体流速:2.0L.min-1。结果:进样量在1.376～8.256μg范围内线性关系良好,平均加样回收率为100.24%,RSD=1.6%,样品含量80.8～107.6 mg.g-1。结论:该方法简便、结果准确可靠、重现性好,且灵敏度高,专属性强,可用于蒺藜呋甾皂苷甲的含量测定。     

蒺藜皂苷对阿霉素损伤心肌细胞的保护作用

 观察蒺藜皂苷 (gross saponins of Tribulus terrestris, GSTT) 对阿霉素 (adriamycin, ADR) 诱导大鼠乳鼠心肌细胞损伤的保护作用, 并初步探讨其作用机制。分离出生1～3 d大鼠心肌细胞, 培养72 h后随机分为正常对照组、ADR (终浓度为2.0 mg·L⁻¹) 模型组和GSTT (100、30及10 mg·L⁻¹) 组, 继续培养24 h后, 应用MTT比色法检测细胞存活率, 测定培养基中肌酸激酶 (CK)、乳酸脱氢酶 (LDH)、天门冬氨酸氨基转移酶 (AST) 释放量, 超氧化物歧化酶 (SOD) 活性, 丙二醛 (MDA)、一氧化氮 (NO) 含量, 并采用流式细胞仪检测细胞凋亡及应用Western blotting检测GSTT对凋亡相关蛋白caspase-3的作用。结果表明, 与正常对照组比较, ADR模型组心肌细胞存活数明显减少, 心肌细胞培养液中CK、LDH、AST释放量增加 (P < 0.01, P < 0.001), 同时SOD活力下降 (P < 0.01) 而MDA、NO含量升高 (P < 0.001); 与ADR模型组比较, GSTT (100和30 mg·L⁻¹) 组存活心肌细胞数增多 (P < 0.05, P < 0.001), 心肌细胞培养液中CK、LDH、AST含量明显降低, SOD活力增加、MDA和NO含量降低 (P < 0.05, P < 0.01, P < 0.001)。流式细胞仪检测GSTT (100和30 mg·L⁻¹) 组心肌细胞凋亡数明显减少 (P < 0.05, P < 0.01), caspase-3含量下降 (P < 0.05, P < 0.001)。GSTT对ADR损伤的心肌细胞具有保护作用, 可减轻心肌细胞损伤, 抑制心肌细胞凋亡, 其机制与抗自由基作用有关。     

HPLC-CAD法与ELSD法用于测定蒺藜皂苷提取物中蒺藜皂苷K的对比研究

目的：分别建立高效液相色谱-电雾式（CAD）和蒸发光散射（ELSD）2种通用型检测器测定蒺藜皂苷提取物中蒺藜皂苷K含量的方法。方法：采用高效液相色谱法,Waters Symmetry Shield RP18为色谱柱,以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,体积流速为1.0 mL·min^-1,柱温为25 ℃;使用CAD和ELSD检测器测定,并对样品实测结果进行比较。结果：2种方法线性关系均良好,精密度、重复性、稳定性及加样回收率皆符合方法学要求,CAD的检出限和定量限均比ELSD低。结论：2种检测方法都可用于蒺藜皂苷提取物中蒺藜皂苷K的含量测定,CAD检测器比ELSD检测器具有更高的灵敏度和精密度。     

蒺藜皂苷滴丸成型工艺的研究

目的:研究蒺藜皂苷滴丸的最佳成型工艺。方法:以滴丸的圆整度、丸重变异系数、溶散时限、外观作为评价指标对蒺藜皂苷与基质的配比、滴制的温度、滴距、滴速进行考察,并在预试验的基础上采用正交试验法对上述因素进行优选。结果:在基质与蒺藜皂苷的配比为5∶1,滴制温度为85℃,滴速为8d.min-1,滴距为12cm时,滴丸成型性最好。结论:该工艺简便、可行,评价指标可靠、合理,符合2005年版《中国药典》对滴丸制剂的要求。     

绞股蓝皂苷对人胃癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制

目的 探索绞股蓝皂苷对人胃癌细胞SGC-7901和AGS增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法 不同浓度的绞股蓝皂苷分别处理SGC-7901和AGS细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖活性并计算得到IC₅₀;细胞克隆实验检测集落形成情况;流式实验检测细胞凋亡;caspase活性检测实验检测细胞内caspase-9和caspase-3的活性;Western blot实验检测细胞内凋亡相关蛋白的表达。结果 CCK-8和细胞克隆实验结果显示,绞股蓝皂苷能抑制SGC-7901和AGS细胞的增殖。流式结果表明,绞股蓝皂苷能够促进细胞的凋亡。caspase活性检测结果表明,绞股蓝皂苷能增加细胞内caspase-9和caspase-3的活性。Western blot结果表明,绞股蓝皂苷主要通过上调人胃癌细胞cleaved-PARP、caspase-9和caspase-3蛋白的表达,同时下调Bcl-2蛋白的表达,诱导细胞凋亡。结论 绞股蓝皂苷能抑制SGC-7901和AGS细胞的增殖,并调控凋亡途径所涉及的cleaved-PARP、caspase-9、caspase-3和Bcl-2等相关...     

蒺藜化学成分的研究

目的:研究蒺藜( Tribulusterrestris L.) 中生物活性物质。方法:用硅胶柱色谱、HPLC进行分离,根据光谱数据鉴定其结构。结果:分离纯化得到两种呋甾皂苷,确定其结构为26-O-β-D 吡喃葡糖基-(25 R,S)-5α- 呋甾-12-羰基-20(22)-烯基-3β,26-二醇-3-O-β-D-吡喃葡糖基(1 →4)-β-D-吡喃半乳糖苷(I) ;26 O-β-D-吡喃葡糖基-(25 R)-5α-呋甾-12-羰基 3β,22α,26 三醇-3-O-β-D-吡喃葡糖基(1→2)-β-D-吡喃半乳糖苷(II)。结论:I,II均为新化合物。     

三七总皂苷对人胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

目的探讨三七总皂苷(Panax notoginseng,PNS)治疗胃癌(gastric cancer,GC)的潜在分子机制,为临床PNS治疗GC奠定理论基础。方法将培养的人胃癌SGC-7901细胞随机分为4组:对照组(C组,只加入生理盐水),低质量浓度组(L组,PNS:200μg·mL~(-1)),中质量浓度组(M组,PNS:50μg·mL~(-1))和高质量浓度组(H组,PNS:100μg·mL~(-1))。PNS给药24,48,72和96 h后,采用CCK-8法检测人胃癌SGC-7901细胞活力。使用流式细胞仪检测PNS对胃癌SGC-7901细胞周期的影响。在给PNS 48 h后,通过Hoechst-33342荧光染色探索胃癌SGC-7901细胞凋亡情况。通过Transwell试验,检测不同质量浓度PNS对SGC-7901细胞侵袭的影响。同时,利用蛋白免疫印迹实验检测PNS对胃癌SGC-7901细胞Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。结果 PNS能够抑制体外人胃癌SGC-7901细胞的增殖活力。给药24 h后,H组细胞活力明显低于C组(P<0.05);给药48和72 h后,3个实验组细胞活力均明显低于C组(P<0.05);给药48和72 h后,H组细胞活力均明显低于L组和M组;给药72 h后,M组细胞活力明显低于L组(P<0.05)。流式细胞仪结果显示,与C组比较,3个组G0/G1期细胞数量均明显增加,而S期细胞数量均明显减少(P<0.05);与L组比较,H组G0/G1期细胞数量均明显增加,而S期细胞数量均明显减少(P<0.05)。细胞凋亡实验结果表明,与C组比较,3个组细胞凋亡率均明显提高(P<0.05);与L组比较,M组、H组细胞凋亡率明显提高(P<0.05);与M组比较,H组细胞凋亡率明显提高(P<0.05)。Transwell侵袭实验结果显示,PNS能以质量浓度依赖方式抑制胃癌SGC-7901细胞的侵袭。与C组比较,3个组细胞穿膜数量明显减少(P<0.05);与L组和M组比较,H组细胞穿膜数量明显减少(P<0.05)。蛋白免疫印迹实验结果显示,与C组比较,3个组Bax蛋白表达明显增加(P<0.05);与L组比较,M组和H组Bax蛋白表达明显增加(P<0.05);与M组比较,H组Bax蛋白表达明显增加(P<0.05)。与C组比较,3个组Bcl-2蛋白表达明显减少(P<0.05);与L组比较,M组和H组Bcl-2蛋白表达明显减少(P<0.05)。结论 PNS能抑制SGC-7901细胞的增殖和侵袭,促进其凋亡。     

蒺藜果中两种新甾体皂苷的分离和鉴定

目的　研究蒺藜(Tribulus terrestris J.)果实的化学成分。方法　用各种色谱技术进行分离和纯化,用ESI/MS ,IR ,¹HNMR ,¹³CNMR ,DEPT ,¹H-¹H COSY ,¹H-¹³C COSY和HMBC等光谱技术鉴定结构。结果　从蒺藜果实中分得2个新甾体皂苷,经光谱鉴定化合物I为新海柯皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡糖基 (1→2 )-β-D-吡喃葡糖基 (1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷,化合物II为新海柯皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡糖基 (1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷。结论　化合物I和II为新化合物,分别命名为蒺藜皂苷A和B。     

蒺藜皂苷抗抑郁作用及机制研究

目的探讨蒺藜皂苷的抗抑郁作用及机制。方法采用孤立大鼠加慢性轻度不可预见性应激方法造抑郁大鼠模型,进行开放旷场,悬尾行为学测试,用LC-MS/MS液质联用法检测大鼠血液中5-羟色胺(5-HT)、γ氨基丁酸(GABA)、去甲肾上腺素(NE)、谷氨酸(Glu)含量变化。实时定量PCR检测海马吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)、核转录因子-κB(NF-κB)、炎性细胞因子白介素1β(IL-1β)基因表达。Western blot检测海马中吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)、细胞因子NF-κB(p65)蛋白水平表达。结果与空白组比较,模型组小鼠旷场运动距离、站立次数和悬尾不动时间明显增加(P<0.05),血液中5-羟色胺明显下降(P<0.05),海马中IDO、NF-κB、IL-1β基因表达上调,IDO、NF-κB蛋白水平明显上调(P<0.05)。与模型组比较,蒺藜皂苷给药组能明显减少慢性应激导致大鼠旷场运动距离、站立次数和悬尾不动时间(P<0.05)。蒺藜皂苷给药组能明显提高大鼠血液中5-羟色胺含量(P<0.05),上调海马中抗炎因子IL-10基因表达,明显下调IDO、IL-1β基因表达(P<0.05),明显下调IDO蛋白表达水平(P<0.05)。结论蒺藜皂苷能明显改善动物行为学,具有抗抑郁作用,其作用可能与提高血液中5-羟色胺水平,下调色氨酸前体代谢酶吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)、IL-1β基因表达和降低吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)蛋白表达水平有关。