环介导等温扩增法快速检测痰液标本中的结核分枝杆菌

目的由于结核病检测技术目前存在灵敏度低,检测周期长的问题,给结核病防治工作带来了诸多不便。多种基因检测技术的出现为结核病的诊断,提供了有利工具。本文通关过使用新型基因扩增法,LAMP法对痰标本中的结核分枝杆菌进行检测。方法采集54份肺结核疑似患者的临床痰标本,对每份样本使用LAMP法进行检测,并使用痰培养结果作为金标准。结果在直接检测痰标本的试验中LAMP的灵敏度为96%,特异性为100%。结论通过这项研究发现,使用LAMP技术用于痰标本中结核分枝杆菌的检测,可大大缩短检测周期,简化操作步骤,具有成本低、灵敏度高、特异性强的优点,有利于进行结合病的筛查和诊断。     

环介导等温扩增技术在肺结核诊断中的应用价值

目的评价环介导等温扩增技术(LAMP)在肺结核诊断中的应用价值。方法选取2016年1月至2019年1月于长治市人民医院就诊的295例可疑肺结核患者为研究对象,所有病例均送痰标本进行LAMP检测和涂片抗酸染色,分别计算LAMP及涂片抗酸染色法的阳性检出率、阳性预测值、阴性预测值等,并进行统计学分析。结果 295例患者中,临床诊断肺结核180例,非肺结核115例,LAMP和涂片抗酸染色法的灵敏度分别为83%、28%。与涂片抗酸染色法比较,LAMP的灵敏度明显高于涂片抗酸染色法。结论 LAMP具有较高的特异度和灵敏度,对肺结核尤其是痰涂片阴性的肺结核有很好的临床诊断价值和应用前景。     

环介导等温扩增在病原诊断中应用

经典的病原检测和诊断方法是体外培养和显微镜技术,这种方法在临床实验室仍然是一项核心技术。但由于临床上很多病原体难以被选择培养,从而限制了它们的诊断。尤其在发展中国家,这种敏感性较低的抹片显微镜检查往往会延误治     

环介导等温扩增技术的应用

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是针对靶基因的6个区域设计4种特异引物,利用一种链置换型DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)在恒温65℃左右保温几十分钟快速进行核酸扩增的方法.由于其具有快速、简便、特异性好、灵敏度高、成本低等优...     

环介导等温扩增技术及其在分子诊断中的应用

环介导等温扩增技术作为新兴的分子生物学技术,已经广泛应用于各种病原微生物的分子水平的研究,并且取得了令人鼓舞的成绩。文中就环介导等温扩增技术的原理及在分子诊断中的应用作一综述。     

环介导等温扩增法在淋巴结结核诊断中的应用研究

目的:总结环介导等温扩增(LAMP)在淋巴结结核诊断中的临床意义。方法:将2017年1月至2018年10月广州市胸科医院收治的124例淋巴结结核手术获取的淋巴结标本进行组织匀浆,然后运用LAMP法检测结核分枝杆菌,并对阳性病例进行药物敏感性检测,同时采用涂片检测、结核菌培养、Xpert方法,比较其阳性检测结果和敏感性、特异性。结果:LAMP检测法阳性率高于涂片检测、结核培养法,与Xpert法之间的无明显差别。结论:LAMP法在临床上对于淋巴结结核的检查阳性率高,且便捷、准确,时间由传统方法的数周缩短到2天以内。     

环介导等温扩增技术检测肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌

目的建立环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测肺结核患者痰标本和分枝杆菌阳性培养物中的结核分枝杆菌(MTB)。方法选择临床可疑肺结核患者痰标本121份、MTB阳性分离物14份,非结核分枝杆菌(NTM)阳性分离物14种共31株,用涂片抗酸染色镜检、罗氏固体培养基培养、LAMP技术分别进行检测,用LAMP技术对人MTB标准菌株H37Rv及卡介苗(BCG)进行检测,判断LAMP检出限并评价敏感性和特异性。结果涂片法抗酸杆菌检出率为38.02%(46/121),培养法MTB检出率为42.15%(51/121),LAMP法MTB检出率为49.28%(56/121),差异无统计学意义(χ2分别为3.146和1.247,P均>0.05)。对121例可疑肺结核患者痰标本进行MTB检测,以罗氏固体培养基培养结果为金标准,LAMP检测结果的敏感性为92.16%(47/51),特异性为87.14%(61/70),二者无显著性差异(χ2=1.247,P>0.05),且一致性强(kappa=0.78,P<0.01)。LAMP能准确分辨MTB和NTM阳性分离物,对H37Rv、BCG检测结果均为阳性;对H37Rv菌株的检出限为120 CFU/mL。结论 LAMP检测MTB敏感性和特异性高,操作简便易行、快速准确,不需要昂贵的检验设备,适于基层医院结核病诊断的推广和应用。     

环介导等温扩增法检测尿液中奇异变形杆菌临床价值

目的:探讨应用环介导等温扩增法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测泌尿系感染患者尿液中奇异变形杆菌的价值。方法:分别应用LAMP法、分离培养法检测50例泌尿系感染患者尿液标本中奇异变形杆菌,并进行比较。结果:LAMP法检出奇异变形杆菌阳性6例,分离培养法检出变形杆菌阳性5例,二者符合率83.3%。结论:LAMP法可用于尿液中奇异变形杆菌的初筛检测。     

生殖支原体环介导等温扩增检测方法的建立

目的建立检测生殖支原体(M.genitalium,Mg)的环介导等温扩增方法。方法根据Gen Bank公布的Mg核苷酸序列,设计4条特异性引物,进行PCR反应,对内、外引物浓度,d NTPs和Mg SO4浓度及Bst DNA聚合酶用量等进行优化,建立Mg LAMP的检测方法并进行特异性和敏感性评价;对20份HIV感染者的DNA样本分别进行LAMP和常规PCR检测。结果内、外引物浓度分别为1.6和0.2μmol/L,d NTPs浓度为1.6 mmol/L,Mg SO4浓度为12 mmol/L,Bst DNA聚合酶用量为8 U时,LAMP反应效果较好;用该体系检测同源关系较近的穿通支原体(M.penetrans,Mpe)、梨支原体(M.pirum,Mpi)均呈阴性;对Mg的检测灵敏度可达10-7;20份HIV感染者用LAMP法及常规PCR法各检出Mg阳性标本5份,两法的检测结果一致。结论建立的Mg LAMP检测方法的特异性、灵敏度较好,成本低廉,适合临床应用。     

环介导等温扩增法在常见性病病原体检测中的应用

<正>20世纪70年代后期,性病在我国一些地区死灰复燃,发病地区不断扩大,发病人数直线上升,危害日益严重,从沿海到内地,从城市到农村,从社会到家庭,性病疫情逐步扩散蔓延。据2002年全国对7种常见性病:非淋菌性尿道炎、尖锐湿疣、生殖器疱疹、梅毒、淋病、软下苷、性病淋巴肉芽肿累计报道为744 848例,发病率为58.15/10万。另外由于各种原因的漏诊和漏报,中国疾病预防控制中心性病麻风病防治中心的调查结     

离心沉淀集菌涂片法检查痰内结核分枝杆菌

目的 建立一种操作简单、阳性检出率高的痰涂片结核分枝杆菌检查方法。方法 采用离心沉淀集菌涂片技术，检测53例肺结核患者痰内结核 分枝杆菌，与漂浮集菌涂片、直接涂片法进行比较。结果 53例肺结核患者痰内结核分枝杆菌检出率改良离心沉淀集菌涂片法为62．3％，漂浮集菌涂片法为39.6%，直接涂片法为45.3%。结论 离心沉淀集菌涂片法痰内结核分枝杆菌检出率显著高于漂浮集菌涂片法和直接涂片法，值得推广应用。     

T-SPOT.TB在涂阴肺结核中的快速诊断价值

目的评价结核感染T细胞试验(T-SPOT.TB)在涂阴肺结核病诊断上的价值。方法利用T-SPOT.TB、TBDNA、TB-DOT 3种结核病诊断方法对112例确诊涂阴肺结核病患者和60例非结核病对照者分别进行检测。结果 T-SPOT.TB试验检测灵敏度为88.3%,TB-DNA、TB-DOT的灵敏度依次为25.9%、58.9%,与T-SPOT.TB试验相比,差异均有统计学意义(χ2=86.6,P0.05;χ2=23.3,P0.05);T-SPOT.TB试验特异度为96.7%,显著高于TB-DOT(78.3%),差异有统计学意义(χ~2=9.22,P0.05)。结论 T-SPOT.TB对涂阴肺结核病的敏感性和特异性都有明显的优势,可以作为涂阴肺结核病早期诊断的一种辅助检查手段,具快速准确的诊断价值。     

快速诊断技术在活动性肺结核的临床应用价值

目的探讨联合应用痰抗酸涂片、γ-干扰素体外释放试验(TB-IGRA)、TB-DNA在活动性肺结核诊断的临床应用价值。方法选取苏州第五人民医院肺结核患者803例,以肺部非结核疾病患者216例作对照,采用以上3种快速诊断技术进行检测,研究其在活动性肺结核的诊断效能。结果单一检测指标曲线下面积(AUC)两两比较,痰抗酸涂片检测AUC(0.675)最小,诊断效能最差,其敏感性及特异性分别为35.87%、99.07%;TB-IGRA检测AUC(0.771)最大,诊断效能最好,其敏感性及特异性分别为88.54%、65.74%。二联或三联组合检测两两比较,痰抗酸涂片+TB-IGRA、TB-IGRA+TB-DNA及痰涂片+TB-IGRA+TB-DNA的AUC较大,均大于痰抗酸涂片+TB-DNA,差异有统计学意义(P0.05),而痰抗酸涂片+TB-IGRA、TB-IGRA+TB-DNA及痰涂片+TB-IGRA+TB-DNA间差异无统计学意义(P0.05)。结论与单一指标诊断比较,多项指标联合诊断可提高其肺结核诊断的敏感性,从成本效益学角度考虑,痰抗酸涂片+TB-IGRA、TB-IGRA+TB-DNA联合检测AUC较大,检验效能较好。     

环介导等温扩增技术在下呼吸道感染常见病原体检测中的应用

目的应用环介导等温扩增技术(LAMP)检测下呼吸道感染患者标本中的13种病原体,为临床快速诊断感染性疾病提供依据。方法收集疑似下呼吸道感染患者痰标本103例、肺泡灌洗液45例,常规培养分离细菌、真菌,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)进行细菌鉴定,同时采用LAMP技术检测13种常见病原体(肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、流感嗜血杆菌、嗜肺军团菌、肺炎衣原体、肺炎支原体、结核分枝杆菌复合群),实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测45例肺泡灌洗液标本中肺炎支原体,LAMP法检出的结核分枝杆菌阳性标本用二代测序(NGS)技术验证。结果 148例标本中,质谱法检出率为42.6%(63/148),分离出病原菌81株;LAMP法检出率为68.2%(101/148),共检测出175种病原体。质谱法和LAMP法对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌的检出率差异无统计学意义(P>0.05),但LAMP法对肺炎链球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌的检出率高于质谱法(P<0.05)。LAMP法从45例肺泡灌洗液中检出26例肺炎支原体,而采用RT-qPCR检出23例。148例样本中,LAMP法检出2例结核分枝杆菌复合群,并使用NGS验证为阳性。结论与传统细菌培养鉴定相比,LAMP技术具有检测快速、准确、操作简便等优势,可为临床诊疗提供可靠依据。     

北京市朝阳区肺结核病实验室痰涂片镜检室间质控结果分析

目的对2006-2008所辖范围内的12家肺结核病防治站和12家开展抗酸杆菌（AFB）镜检的二级以上综合医院结核病实验室的痰涂片AFB镜检的质控结果进行评估。方法按照《中国结核病防治规划-痰涂片镜检质量保证手册》（EQA）的要求,对结核病实验室进行现场评价和盲法复检。结果2006-2008年痰涂片盲法复检总涂片数1671份,复检定性符合率为95.2 %、阳性定量符合率为70.2%,综合医院定性符合率95.6%、阳性定量符合率64.9%;肺结核防治站定性符合率为94.7%、阳性定量符合率为75.0%。痰涂片质量指标: 痰细胞、大小、厚薄、染色、脱落合格率分别为93.4%、66.1 %、75.4 %、91.0 %、97.1 %。结论在现场评估中,肺结核病防治站痰检人员固定,经培训后上岗,肺结核病防治站在实验室面积、仪器设备优于综合医院。综合医院痰检人员的学历和职称高于肺结核防治站。肺结核防治站的涂阳患者检出率高于综合医院。     

4种检测方法在结核病临床诊断中的应用价值

目的探讨结核分枝杆菌感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)、结核分枝杆菌快速培养试验、结核分枝杆菌抗体免疫球蛋白M(IgM)与免疫球蛋白G(IgG)联合检测,以及痰液或肺泡灌洗液涂片4种肺结核诊断方法的临床诊断价值。方法选取该院2014年10月至2015年5月临床初次诊断为结核病,且尚未用药的住院患者516例,对所有患者行T-SPOT.TB、结核分枝杆菌快速培养试验、结核分枝杆菌抗体IgM与IgG联合检测和痰液或肺泡灌洗液涂片检测,计算并比较各方法的灵敏度。结果 T-SPOT.TB的灵敏度(88.76%)高于结核分枝杆菌快速培养试验(45.74%)、结核分枝杆菌抗体IgM与IgG联合检测(72.87%)、痰液或肺泡灌洗液涂片(17.25%),差异均有统计学意义(P0.01)。结论 T-SPOT.TB在检测结核分枝杆菌感染、辅助结核病诊断方面具有很高的应用价值,同时联合其他检测方法可提高诊断率,满足不同的临床需要。     

结核感染T细胞检测在菌阴性肺结核诊断中的应用价值

目的评估结核感染T细胞检测在菌阴性肺结核的诊断价值。方法纳入包括菌阴性肺结核病患者145例、非结核肺部疾病患者45例共190例。所有研究对象进行结核感染T细胞检测,计算灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值等指标。结果结核感染T细胞检测对菌阴性肺结核诊断的灵敏度为85.5%,特异度为84.4%,阳性预测值为94.7%,阴性预测值为64.4%。不同年龄段间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论结核感染T细胞检测有较高的阳性预测值,适用于菌阴性肺结核病的临床辅助诊断。     

结核感染T细胞斑点试验诊断肺结核临床价值探讨

目的对比结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)、皮肤结核菌素试验、结核抗体和痰液或肺泡灌洗液涂片4种方法诊断肺结核的结果,选择临床最有价值的诊断方法。方法选择湖北省襄阳市中医院2010年12月至2012年12月非结核呼吸系统疾病患者48例和同期明确诊断为结核的患者42例为研究对象。对所有患者进行T-SPOT.TB、皮肤结核菌素试验、结核抗体和痰液或肺泡灌洗液涂片,计算并比较各种检查阳性率、敏感度和特异性。结果 T-SPOT.TB的结核抗体敏感性和特异性均高于皮肤结核菌素和痰液及肺泡灌洗液涂片,且具体数值相同;通过两两比较发现,T-SPOT.TB的阳性率均明显高于其他3种试验方法(P<0.05)。结论 T-SPOT.TB诊断结核具有很好的稳定性,值得临床推广使用。     

Development and clinical validation of a loop-mediated isothermal amplification method for the rapid detection of Neisseria meningitidis

Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) is an innovative technique that allows the rapid detection of target nucleic acid sequences under isothermal conditions without the need for complex instrumentation. The development, optimization, and clinical validation of a LAMP assay targeting the ctrA gene for the rapid detection of capsular Neisseria meningitidis were described. Highly specific detection of capsular N. meningitidis type strains and clinical isolates was demonstrated, with no cross-reactivity with other Neisseria spp. or with a comprehensive panel of other common human pathogens. The lower limit of detection was 6 ctrA gene copies detectable in 48 min, with positive reactions readily identifiable visually via a simple color change. Higher copy numbers could be detected in as little as 16 min. When applied to a total of 394 clinical specimens, the LAMP assay in comparison to a conventional TaqMan® based real-time polymerase chain reaction system demonstrated a sensitivity of 100% and a specificity of 98.9% with a κ coefficient of 0.942. The LAMP method represents a rapid, sensitive, and highly specific technique for the detection of N. meningitidis and has the potential to be used as a point-of-care molecular test and in resource-poor settings.     

涂阳肺结核患者TB-DNA定量、γ干扰素释放试验、结核抗体检测的价值

目的探讨肺结核(TB)-DNA定量、γ干扰素释放试验(T-SPOT.TB)、结核抗体检测对活动性肺结核辅助诊断的价值。方法回顾性分析2013年7月至2014年6月入院确诊为肺结核且抗酸杆菌痰涂片阳性51例患者的TB-DNA定量、TSPOT.TB、结核抗体检测指标。结果 T-SPOT.TB检测阳性率为90.2%,灵敏度最高;其次为TB-DNA定量,阳性率为74.5%;结核抗体检测阳性率仅为37.3%,灵敏度最低。结论 T-SPOT.TB检测不受标本采集的影响,灵敏度高,对活动性肺结核的辅助诊断具有较高价值。