细胞内p53蛋白LC-MS/MS定量方法及其应用

建立细胞样品中p53蛋白的LC-MS/MS定量方法,应用该定量方法测定放线菌素D作用下细胞中p53表达量的变化。采用免疫沉淀法提取细胞样品中的p53蛋白,对提取后的样品进行酶解,基于肽图分析选择特异性肽段VEYLDDR（m/z 455.2²⁺-681.21+）作为定量肽段,设计合成肽段VEYIEDR（m/z 462.1²⁺-695.2¹⁺）作为内标肽段,建立该肽段的LC-MS/MS定量方法,通过该肽段表征p53蛋白的量;应用该质谱定量方法对放线菌素D给药后的HCT116细胞中的p53蛋白的表达量进行测定。p53蛋白质谱定量方法学考证表明,方法的线性良好（R²=0.999 3）,范围2.2~112.3 pmol/mL;专属性好,基质中无干扰成分,批内批间精密度及稳定性均符合生物样品的测定要求;放线菌素D给药后细胞中p53蛋白的表达量呈给药浓度与给药时间依赖性增加。建立的细胞样品中p53蛋白的LC-MS/MS定量方法可以准确的测定细胞内的p53蛋白表达量。     

LC-MS/MS法检查中药制剂及保健食品中非法添加的16种镇静催眠药物

目的:建立准确、灵敏的LC-MS/MS方法甄别中药制剂及保健食品中可能添加的16种化学镇静催眠药物,以打击中药制剂及保健食品中非法添加化学药物现象。方法和结果:采用Waters Sunfire C18色谱柱,梯度洗脱:流动相A为20mmol/L醋酸铵溶液,流动相B为甲醇,检测波长为230 nm,流速为1 mL/min(分流比为4∶1)。选择正负离子全扫描方式检测临床常用的16种镇静催眠药物。利用质谱解析软件研究上述药物的质谱裂解规律,通过比较样品峰与对照品峰的一级质谱、二级质谱质荷比,确定样品中是否掺杂了化学药物。LC-MS/MS方法测定上述化学物质的最小检出量为1~40 ng。结论:该方法简便、快捷,灵敏度、准确性均可满足定性检查的要求。     

LC-MS/MS法测定人血浆中辛伐他汀浓度

目的：建立测定人血浆中辛伐他汀浓度的LC-MS/MS测定方法,并研究辛伐他汀片在人体内的药代动力学。方法：血浆样品经乙酸乙酯萃取后,在正离子检测方式下选择多反应监测扫描方式进行质谱分析。结果：血浆中的内源性物质对样品测定无干扰,专属性良好。辛伐他汀的线性范围为0.1~10ng/mL,最低定量限为0.1ng/mL,平均提取回收率为81.4%,日内、日间精密度和准确度均符合生物样品分析的要求。测定的辛伐他汀片在人体内T1/2为（2.46±1.25）h;Tmax为（1.96±1.00）h;Cmax为（1.70±1.48）ng/mL;AUC0-24为（7.08±5.27）ng.h/mL;AUC0-∞为（8.11±5.83）ng.h/mL。结论：该方法操作简便、灵敏度高、重现性好,可以满足本实验低浓度药物测定及药代动力学研究。     

LC-MS/MS法测定人血浆中辛伐他汀浓度

目的:建立测定人血浆中辛伐他汀浓度的LC-MS/MS测定方法,并研究辛伐他汀片在人体内的药代动力学。方法:血浆样品经乙酸乙酯萃取后,在正离子检测方式下选择多反应监测扫描方式进行质谱分析。结果:血浆中的内源性物质对样品测定无干扰,专属性良好。辛伐他汀的线性范围为0.1~10ng/mL,最低定量限为0.1ng/mL,平均提取回收率为81.4%,日内、日间精密度和准确度均符合生物样品分析的要求。测定的辛伐他汀片在人体内T1/2为(2.46±1.25)h;Tmax为(1.96±1.00)h;Cmax为(1.70±1.48)ng/mL;AUC0-24为(7.08±5.27)ng.h/mL;AUC0-∞为(8.11±5.83)ng.h/mL。结论:该方法操作简便、灵敏度高、重现性好,可以满足本实验低浓度药物测定及药代动力学研究。     

化妆品中糖皮质激素类非法添加物的LC-MS/MS分析

建立化妆品中醋酸可的松、泼尼松、泼尼松龙、曲安西龙、地塞米松和醋酸地塞米松等非法添加物的LC-MS/MS同时测定方法。化妆品经酸化甲醇(冰醋酸调pH为4.0)超声提取,正己烷除脂净化,HPLC-MS/MS分析,流动相为甲醇-0.1%甲酸(60∶40),色谱柱为岛津Shim-pack VP-ODS C18(150 mm×2.0 mm,5μm)。方法学试验表明:本方法可作为化妆品中非法添加糖皮质激素的常规分析方法。     

单克隆抗体药物在抗肿瘤治疗中的应用

通过淋巴细胞杂交技术或基因工程技术制备单克隆抗体药物已经成为生物制药领域的一个重要方面,由于单克隆抗体药物专一性强、疗效显著,为抗肿瘤治疗开辟了一条新的途径,因此成为近年来研究的热点药物之一.本文就目前应用于临床且疗效确切的单抗药物作一综述. 1 单克隆抗体 抗体是由B淋巴细胞转化而来的浆细胞分泌的,每个B淋巴细胞株只能产生一种它专有的、针对一种特异性抗原决定簇的抗体.这种从一株单一细胞系产生的抗体就叫单克隆抗体,简称单抗[1].这些抗体具有相同的结构和特性.抗体与特异性表达的肿瘤细胞表面蛋白质结合,从而阻碍蛋白质的表达,起到抗肿瘤作用.抗体还可使B淋巴细胞产生免疫反应,诱导癌细胞凋亡.早期单抗为鼠源性单抗,易被人体免疫系统识别,应用受到限制.     

苍耳草水溶性成分指纹图谱LC-MS/MS研究

目的 研究苍耳草水溶性化学成分。方法 建立苍耳草水溶性成分的指纹图谱,通过LC-MS/MS技术鉴定其化学成分。结果 对苍耳草药材中的5种酚酸类成分的化学归属进行了指认,推测其结构为咖啡酰奎宁酸和二咖啡酰奎宁酸。结论 苍耳草中特征化学成分的识别可以显著增强其质量控制的准确性和专属性。化学成分的定性与定量相结合,可有效控制苍耳草药材及其相关产品的质量。     

LC-MS/MS联用在线检测中成药中不同种类激素类成分的研究

目的建立液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)对中成药中掺加激素类成分进行检测,以方便监控,并保障用药安全。方法采用C18色谱柱(2.1×100 mm,3.5μm),流动相为乙腈:水(50:50),流速0.2 mL/min。样品在三重四级杆串联质谱中经ESI源离子化后以Full Scan,Daughter等方式进行测定。结果 LC-MS/MS在线同时检测法可以同时检测出样品中普通液相色谱检测法不能确定的激素类成分。结论本研究建立了一种简单易行的中成药中十种常见激素成分的定性检测方法 ,为中成药质量控制提供了一种稳定性好、精密度高、结果准确可靠的监控方法 。     

LC-MS/MS测定人血浆中哌甲酯

目的 建立LC-MS/MS测定人血浆中盐酸哌甲酯的浓度。方法 待测血浆1.0 mL，经1 mol·L^-1的氢氧化钠40 μL碱化后，用4 mL乙醚萃取处理，采用Eclipse XDB-C₁₈ (4.6 mm×150 mm，5 μm)色谱柱，以甲醇和水为流动相梯度洗脱，流速1.0 mL·min^-1。以电喷雾正离子源离子化，检测离子对盐酸哌甲酯为234.0/84.0，内标卡马西平为237.0/194.0。结果 血浆中内源性物质对测定无干扰，最低定量限为0.1 ng·mL^-1，在1~100 ng·mL^-1内盐酸哌甲酯线性关系良好(r=0.999 1)，日内、日间RSD均小于8%，样品分析时间为10 min。结论 该法专属性强、灵敏度高，操作简便快速，测定结果可靠，适于进行盐酸哌甲酯血药浓度监测。     

LC-MS/MS快速测定生物检材中乌头碱的含量

目的 建立快速测定生物检材中乌头碱的LC-MS/MS方法。方法 生物检材经乙醚-二氯甲烷(3∶2)提取后,用Venusil Mp-C₁₈柱进行分离,采用ESI多反应监测(MRM)扫描方式。结果 测定的线性范围为3~5 000 ng·mL^-1,RSD<1.8%,日间和日内精密度分别为2.5%和4.6%,提取回收率为85.61%~89.04%。结论 该方法简便、快捷,适用于生物检材中乌头碱的快速测定。     

LC-MS/MS测定大鼠血浆中没食子酸丙酯浓度

目的没食子酸丙酯是从中药赤芍中提取的有效成分没食子酸经酯化反应而成的化学药物。文中建立LC(液相)-MS(质谱)/MS方法研究大鼠口服没食子酸丙酯后的体内药代动力学。方法采用LC-MS/MS测定大鼠血浆中没食子酸丙酯的浓度,以没食子酸乙酯为内标,血浆样品用乙腈沉淀蛋白,色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(3.5μm,100 mm×2.1 mm,I.D.),流动相为甲醇-乙腈-10 mmol/L醋酸铵内含0.1%甲酸水溶液(10∶25∶65,V/V/V),流速0.25 ml/min,柱温30℃。结果没食子酸丙酯的线性范围为5.0~500.0 ng/ml(r=0.998 4),最低定量检测浓度达5.0 ng/ml(S/N>10),提取回收率>75%,日内和日间精密度RSD<15%。结论本法操作简单,选择性好,灵敏度高,费时少,适用于没食子酸丙酯在大鼠体内的药代动力学研究。     

LC-MS/MS法测定大鼠血浆中的罗哌卡因

目的：建立测定大鼠血浆中罗哌卡因的高效液相色谱串联质谱法。方法色谱柱为Agela MP C18（2.1 mm×50 mm,3μm）。采用电喷雾离子源（ESI）正离子多反应监测（MRM）扫描分析,罗哌卡因和内标（咪达唑仑）的检测离子分别为m/z 275.2/126.1和326.0/291.0。结果罗哌卡因的线性范围为0.5～250 ng/ml,相关系数r为0.9946,批内精密度为1.32%～6.74%,基质效应在95.5%～102.6%,回收率为89.8%～104.7%。结论本法操作简单、方法准确可靠、检测灵敏度高,可用于罗哌卡因大鼠体内的药代动力学研究。     

LC-MS/MS法对法罗培南钠中有关物质的研究

采用LC-MS/MS法对法罗培南钠中有关物质进行鉴定研究。采用Lichrospher ODS-3色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以0.2%醋酸铵-0.5%甲酸水溶液-乙腈为流动相,线性梯度洗脱,对法罗培南钠有关物质进行分离;LC-PDA测定各有关物质的紫外吸收,柱后添加乙腈辅助LC-MS/MS测定各有关物质的二级质谱,并进行解析。在所建立的条件下,法罗培南钠及其各有关物质分离良好,检测出5个有关物质,对其进行结构解析。结果显示,法罗培南钠原料药中的有关物质为其降解产物和聚合物。制剂中有关物质的种类和含量较原料药均有所增加,加热处理样品后有关物质含量显著增加。建立的LC-MS/MS法有效地分离分析了法罗培南钠及有关物质,为其质量控制和工艺优化提供参考。     

同时测定人肝微粒体中9种CYP450酶活性的LC-MS/MS方法

目的 建立一种同时测定人肝微粒体中9种CYP450酶活性的LC-MS/MS方法(鸡尾酒法),用于评估药物对CYP450酶活性的影响,以预判药物间发生相互作用的可能性.方法 使用9种不同酶的底物作为探针与人肝微粒体共同孵育,硝苯地平作为内标物质.用Agilent 1290系列液相色谱仪进行洗脱,所有代谢产物均在多反应监测...     

LC-MS/MS法定量检测恩格列净原料药中杂质的含量

目的：建立一种LC-MS/MS法用于定量检测恩格列净原料药中杂质X（简称EPLZ-X）的含量。方法采用Thermo BDS C18（4.6 mm ×100 mm,2.4μm）色谱柱,以乙腈-水（75∶25,V/V）为流动相,流速0.7 ml/min。质谱扫描方式选用正离子模式,用于定量的多反应监测（MRM）离子对为m/z 785→m/z 475（CE为43 V）和m/z 785→m/z 418（CE为50 V）。结果在0.5~100.6 ng/ml范围内线性关系良好,低、中和高浓度质控样品的日内精密度分别为5.9%、5.4%和7.9%。日间精密度分别为6.3%、11.8%和10.7%,加样回收率分别为105.1%、109.8%、102.6%,最低定量下限为0.5 ng/ml。结论使用此法成功测定了3批原料药中该杂质的含量,均符合要求（不得超过60×10-6 g）。本法专属性强,灵敏度高,可用于其他批次样品的分析。     

LC-MS/MS法测定人血浆中地高辛的浓度及其在儿童患者中的应用

建立了简单、快速、可靠的LC-MS/MS法测定人血浆中地高辛的浓度.以地高辛-d3为内标,血浆样品经液液萃取法处理后进样.色谱柱为Kinetex C18(2.1 mm×50 mm,2.6 μm;Phenomenex),流动相为均含1 mmol/L醋酸铵和1 mmol/L甲酸的水溶液和乙腈溶液(55∶45),采用等度洗脱...     

LC-MS/MS定性分析大鼠尿液中益智提取物的成分及其代谢产物

目的 通过LC-MS/MS法检测大鼠尿液中益智提取物中10种活性成分的存在形式.方法 采用LC-MS/MS法检测灌胃给药后0~4 h、4~8 h、8~24 h大鼠尿液中的益智代谢产物,与给药前大鼠空白尿液MRM图进行比对.结果 实验组大鼠尿液中9种主要活性成分均以原形化合物的形式存在,而未发现山柰酚及其葡萄糖酸代谢产物.结论 大鼠灌胃益智提取物后,益智活性成分在大鼠尿液中的物质形式以原形为主,为理解这些物质在大鼠体内的消除途径提供部分参考依据.     

LC-MS/MS测定乌头属中药中8个生物碱含量

目的 :建立LC-MS/MS测定乌头属中药8种生物碱含量的方法。方法 :以甲醇-水(水相含0.1%甲酸和2.5 mM醋酸铵溶液)为流动相,C18柱分离,采用ESI(+)源,MRM监测,对制川乌、制草乌、制附子药材饮片中的双酯型生物碱(乌头碱、新乌头碱、次乌头碱),单酯型生物碱(苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱),胺醇型生物碱(乌头原碱、新乌头原碱)进行含量测定。结果 :上述8种生物碱的线性关系良好,精密度、重复性的RSD都低于6%,加样回收率为95.77%~101.90%。结论 :该方法简便、快速、精密度高、重复性好,可应用于乌头属中药的质量控制。     

LC-MS/MS法测定人尿液中索法酮的浓度及其尿药排泄研究

目的:建立测定人尿液中索法酮浓度的LC-MS/MS方法,用于研究健康受试者口服索法酮后药物在体内的尿药排泄特征?方法:尿液经甲醇处理后,进行LC-MS/MS分析?色谱柱为Poroshell 120 SB-C18柱,柱温为30℃?流动相为甲醇∶2 mmol/L 醋酸铵(85∶15),流速为0.20 ml/min?负离子模式下使用电喷雾离子化和多反应离子监测?2名健康志愿者单次口服索法酮胶囊200 mg后,测定尿药浓度并研究尿药排泄特征?结果:索法酮的最低定量限为1 ng/ml,在1~500 ng/ml范围内线性关系良好,高中低3个浓度的批内?批间差均小于6%,基质效应在93.1%~114.8%范围内,提取回收率为84.7%~93.6%?尿液中索法酮的累积排泄率小于0.01%?结论:所建立的LC-MS/MS分析方法能快速?准确地测定尿液中索法酮的浓度?     

LC-MS/MS法鉴定替米沙坦氨氯地平双层片中有关物质

建立LC-MS/MS法对替米沙坦氨氯地平双层片的有关物质进行鉴定。双层片中的替米沙坦层及氨氯地平层分别取样和反相高效液相色谱线性梯度法分析测定,替米沙坦及氨氯地平均与其有关物质分离良好。检测出替米沙坦中14个有关物质峰,对其中主要7个有关物质经二级质谱测定和解析鉴定了它们的结构,同时检测出氨氯地平中2个为英国药典收载的有关物质。