伸筋易骨法调控软骨细胞内钙离子浓度干预细胞代谢的机制研究

[目的]分析伸筋易骨法对L型钙通道活性及软骨细胞内钙离子浓度影响探讨伸筋易骨法防治膝骨性关节炎(KOA)的力学-生物转导机制。[方法]将50只日本大耳白兔编号并随机分成5组,观察组、对照组、模型组、空白组、假手术组各10只,采用改良的Hulth造模法模拟应力失常诱导的KOA模型,观察组以伸筋易骨法治疗,对照组给予关节腔注射玻璃酸钠注射液治疗。通过激光共聚焦显微镜检测各组原代软骨细胞内钙离子浓度,运用膜片钳技术检测各组软骨细胞L型钙通道电流密度。[结果]观察组、对照组原代软骨细胞内钙离子浓度均高于模型组,差异具有统计学意义(P0.05);观察组、对照组软骨细胞内L型钙通道电流密度均高于模型组,差异具有统计学意义(P0.05)。[结论]伸筋易骨法上调细胞表面L型钙通道活性,增加软骨细胞内钙离子浓度,进而发挥促软骨细胞合成代谢的作用,该机制可能是推拿手法或同类物理治疗发挥作用的重要原因之一。     

伸筋易骨矫形手法对兔膝关节软骨细胞代谢及Sox9表达的影响

[目的]探讨伸筋易骨矫形手法对兔膝关节软骨细胞代谢及Sox9表达的影响。[方法]将膝骨关节炎(KOA)模型兔随机分为3组,治疗组采用伸筋易骨矫形手法治疗,对照组采用关节腔注射玻璃酸钠治疗,模型组不做干预,同条件饲养,取材后分离膝骨关节软骨细胞体外培养,镜下观察并通过四甲基偶氮唑盐比色法(MMT)对比3组软骨细胞增殖情况;通过蛋白免疫印迹分析3组软骨细胞Sox9的表达变化。[结果]镜下观察治疗组、对照组关节软骨的增殖速度均快于空白组,其中治疗组增殖速度最快,MMT法检测治疗组软骨细胞增殖能力高于对照组(P0.05),蛋白免疫印迹分析显示治疗组Sox9表达高于对照组(P0.05)。[结论]伸筋易骨矫形手法具有提高软骨细胞增殖速度,增强软骨细胞增殖能力,同时该手法可以提高损伤软骨组织Sox9的表达水平,从而促进软骨细胞的合成代谢。     

伸筋易骨法调节兔膝关节周围软组织张力影响软骨形态的研究

[目的] 评价伸筋易骨法对膝关节周围软组织张力及软骨形态的影响,以探讨其对膝关节骨性关节炎（KOA）的治疗作用。[方法] 选择6~8月龄雌性健康新西兰大耳白兔50只,随机分为5组。其中模型组、推拿组、玻璃酸钠组采用Hulth造模法模拟KOA,正常组、假手术组不做干预。造模成功后,推拿组予伸筋易骨法治疗3周,玻璃酸钠组予局部关节内注射每周1次,共3周,模型组不予任何治疗。治疗结束后,测试股直肌、股二头肌张力,并取软骨组织进行HE染色后光镜下进行形态学观察,并进行Markin评分。分析推拿组与其余4组的异同。[结果] 模型组较正常组,股直肌FDD值和S值显著降低（P<0.05）,股二头肌FDD值和S值显著升高（P<0.05）。推拿组和玻璃酸钠组相较于模型组的股直肌FDD值和S值均显著升高（P<0.05））;推拿组和玻璃酸钠组相较于模型组股二头肌的FDD值和S值均显著降低（P<0.05）。推拿组和玻璃酸钠组相较于模型组,Mankin’s评分比较有统计学意义（P<0.05）。[结论] 伸筋易骨法可以显著增加关节周围肌肉的肌力、调节组织张力、改善关节活动功能,对保护膝关节周围软组织功能具有重要意义。     

温针灸对膝骨性关节炎兔软骨及软骨下骨形态学的影响

目的:观察温针灸对膝骨性关节炎(KOA)兔软骨及软骨下骨形态学的影响,探讨温针灸能否减轻关节软骨及软骨下骨的退变从而减缓KOA的发展。方法:40只雄性新西兰兔随机分为空白组、模型组、温针灸组及阿仑膦酸钠组,每组10只。采用管型石膏伸直位固定法固定兔右后肢6周制备KOA模型。温针灸组给予"内膝眼""外膝眼"及"鹤顶"温针灸治疗,每次15 min,每日1次,连续4周;阿仑膦酸钠组给予阿仑膦酸钠溶液灌胃(150μg·kg^-1·d^-1),连续4周。治疗结束后对所有新西兰兔膝关节行X线、磁共振成像(MRI)检查。X线结果采用K-L分级法对关节间隙、软骨下骨增生程度进行分级;MRI结果采用Recht分级法对软骨退变程度进行分级,采用WORMS评分法对骨髓水肿程度进行评分;HE染色法观察膝关节软骨组织形态学改变,采用Mankin评分评价软骨退变程度;扫描电镜观察膝关节软骨表面的形态学改变;透射电镜观察膝关节软骨细胞的超微结构。结果:与空白组比较,模型组K-L分级、Recht分级、WORMS评分及Mankin评分明显升高(P<0.05,P<0.01);扫描电镜显示模型组软骨缺损严重;透射电镜显示模型组软骨细胞变性肿胀,细胞器减少、形态紊乱,细胞外基质胶原纤维分布混乱。与模型组比较,温针灸组和阿仑膦酸钠组K-L分级、Recht分级、WORMS评分及Mankin评分明显降低(P<0.05,P<0.01)。扫描电镜显示,温针灸组软骨无明显缺损,软骨表面较平坦;阿仑膦酸钠组软骨有缺损,但再生软骨组织表面平坦。透射电镜显示,温针灸组软骨细胞形态基本正常,细胞器形态明显改善、数量明显增多,胞外基质胶原纤维较丰富,分布较为均匀;阿仑膦酸钠组细胞外形正常,细胞器数量较多,形态紊乱,胞外基质胶原纤维分布较混乱。与阿仑膦酸钠组比较,温针灸组Mankin评分降低(P<0.01)。结论:温针灸治疗可以有效减缓KOA兔软骨及软骨下骨退变,从而起到减缓KOA发展的作用。     

针砂马准灸对兔膝骨性关节炎软骨uPA、uPAR、PAI-1的影响

目的观察针砂马准灸对兔KOA模型软骨细胞中uPA、uPAR、PAI-1表达水平的影响,探究回医针砂马准灸治疗KOA的作用机理。方法 6月龄新西兰大耳兔40只,随机分为针砂马准灸组、艾灸组、模型组、空白组,每组10只。采取右后肢伸直位石膏管型固定法制备兔KOA模型,针砂马准灸组给予针砂马准灸治疗,艾灸组给予膝关节局部艾灸治疗,模型组每日在兔固定器上固定15分钟,空白组不予任何处理,6天为1疗程,共治疗2个疗程。治疗结束后采用HE染色法观察各组软骨的病理改变,并进行C.Colombo评分;RT-PCR及Western blot法检测各组关节软骨中uPA、uPAR、PAI-1 mRNA及蛋白的表达。结果 HE染色显示模型组兔KOA软骨表面大量细胞崩解、潮线不完整缺损、软骨下血管增生明显;与空白组比较,模型组C.Colombo评分升高,差异有统计学意义(P0.05);与模型组比较,针砂马准灸组及艾灸组C.Colombo评分降低,差异有统计学意义(P0.05)。与空白组比较,模型组KOA软骨细胞中uPA、uPAR蛋白及mRNA的表达升高,PAI-1蛋白及mRNA的表达降低,差异有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,针砂马准灸组及艾灸组兔KOA软骨细胞中uPA、uPAR蛋白及mRNA的表达降低,PAI-1蛋白及mRNA的表达升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论针砂马准灸治疗膝骨性关节炎的机制可能为通过激活uPA系统,提高PAI-1的表达,进一步抑制uPA、uPAR的表达,达到治疗作用。     

丹参注射液对体外培养兔膝关节软骨细胞MMP-9、TIMP-1表达的影响

目的:观察丹参注射液对体外培养兔膝关节软骨细胞MMP-9、TIMP-1表达情况的影响。方法:取12只6月龄新西兰大白兔关节软骨作体外细胞培养,培养后软骨细胞随机分为正常组、模型组、玻璃酸钠组、丹参组4组。采用Western blot法测定软骨细胞内MMP-9、TIMP-1蛋白表达,RT-PCR检测软骨细胞内MMP-9 mRNA、TIMP-1mRNA相对表达量。结果:Western Blot检测结果:相对正常组,OA模型组的软骨细胞组织中MMP-9、TIMP-1蛋白表达明显上调(P0.01);玻璃酸钠组MMP-9、TIMP-1蛋白表达低于空白模型组(P0.05),丹参组MMP-9、TIMP-1蛋白表达低于空白模型组(P0.01);丹参组MMP-9蛋白表达低于玻璃酸钠组,TIMP-1蛋白表达高于玻璃酸钠组。荧光定量PCR检测结果:与空白组相比,OA模型组家兔关节软骨组织MMP-9 mRNA相对表达量显著升高(P0.01),MMP-9/TIMP-1失衡;治疗后,与OA模型组相比,玻璃酸钠组、丹参组MMP-9mRNA相对表达量显著降低(P0.01),TIMP-1mRNA相对表达量显著升高(P0.01);与玻璃酸钠组相比丹参组MMP-9mRNA相对表达量显著降低(P0.01),TIMP-1mRNA相对表达量显著升高(P0.01)。结论:丹参注射液能够有效纠正MMP-9和TIMP-1在骨性关节炎软骨组织中异常表达,减轻软骨损伤,有效治疗骨性关节炎。     

丹参注射液对骨性关节炎模型兔膝关节软骨细胞p-IκBα表达影响的实验研究

目的:观察丹参注射液对体外培养骨性关节炎模型兔膝关节软骨细胞p-IκBα表达的影响。方法:取12只6月龄新西兰大白兔关节软骨作体外细胞培养,培养后软骨细胞随机分为正常组、模型组、玻璃酸钠组、丹参组4组。采用NO诱导凋亡,各组给予相应处理24 h,Western blot法检测各组软骨细胞p-IκBα的表达。结果:与正常组比较,模型组软骨细胞p-IκBα蛋白明显增强,差异有显著统计学意义(P0.01);玻璃酸钠组、丹参组p-IκBα蛋白相对表达量明显低于模型组,差异有显著统计学意义(P0.01);丹参组IκBα蛋白相对表达量明显低于玻璃酸钠组,差异有显著统计学意义(P0.01)。结论:丹参注射液可以通过抑制IκBα磷酸化,从而抑制NF-κB信号通路的激活,保护软骨下骨及软骨细胞,有效防治OA。     

屈膝点按叩揉法调控L型电压依赖性钙通道影响软骨细胞代谢的机制研究

[目的]通过分析屈膝点按叩揉法调控L型电压依赖性钙通道影响软骨细胞合成代谢,探讨该手法防治膝骨性关节炎(KOA)的分子机制。[方法]50只新西兰大耳白兔随机分成5组,运用Hulth造模法构建KOA兔模型,治疗组采用屈膝点按叩揉法治疗,阳性对照组采用关节腔注射玻璃酸钠注射液治疗,正常组、假手术组及模型组同条件饲养。通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法检测L型电压依赖性钙通道α1亚基及合成代谢相关蛋白的表达。[结果]治疗组、阳性对照组Cav1.2、Cav1.3、Cav1.4、PTHr P、ColⅡ蛋白的表达均高于模型组,差异具有统计学意义(P0.05),治疗组Cav1.2、Cav1.3、Cav1.4、PTHr P、ColⅡ蛋白的表达与阳性对照组相比无统计学差异(P0.05)。[结论]屈膝点按叩揉法通过影响L型电压依赖性钙通道蛋白,增加细胞内钙离子浓度,上调甲状旁腺激素相关蛋白(PTHr P)的表达,进而发挥促软骨细胞合成代谢的作用。     

玻璃酸钠联合bFGF促进兔膝关节全层软骨缺损修复的实验研究

目的:探讨玻璃酸钠加外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)促进兔膝关节全层软骨缺损修复的可行性。方法:选择12只实验家兔作为研究对象,研究时间2018年6月至2019年6月,相同方法制备兔膝关节软骨全层缺损模型,共计24膝,随机分为四组,每组6膝。玻璃酸钠组注射玻璃酸钠、bFGF组注射bFGF、联合组注射玻璃酸钠联合bFGF、对照组注射0.9%氯化钠注射液。比较四组大体观察结果与光镜观察结果。结果:大体观察结果显示,除了玻璃酸钠组与对照组比较无显著差异(P 0.05),其余各两组之间比较差异均有统计学意义(P 0.05),联合组 bFGF组玻璃酸钠组对照组;光镜观察结果显示,各两组之间比较差异均有统计学意义(P 0.05),联合组bFGF组玻璃酸钠组对照组。结论:玻璃酸钠联合bFGF对兔膝关节全层软骨缺损修复有一定的作用,相比单一玻璃酸钠注射或bFGF注射促进作用更好。     

右归丸经IL-6/STAT3信号通路对膝骨关节炎模型大鼠软骨组织退变的调控机制

目的:观察右归丸对膝骨关节炎(KOA)模型鼠软骨组织信号转导和转录激活因子3(STAT3)和白细胞介素-6(IL-6)表达水平的影响。方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、硫酸氨基葡萄糖组、右归丸高、中、低剂量组,每组10只。采用改良Hulth法制备大鼠KOA模型,假手术组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,右归丸高、中、低剂量组分别给予右归丸4.8,2.4,1.2 g·kg^-1灌胃,硫酸氨基葡萄糖组给予硫酸氨基葡萄糖0.17 g·kg^-1灌胃,连续给药8周。干预结束24 h后股动脉采血处死各组大鼠,取鼠膝关节软骨,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察各组软骨的病理改变,并进行Mankin评分;免疫组化法检测各组关节软骨组织中STAT3,超氧化物歧化酶3(SOD3)和Wnt抑制因子1(WIF1)的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测软骨组织中IL-6 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组关节软骨组中WIF1蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠软骨组织Makin评分明显升高,软骨组织STAT3在蛋白水平上的表达明显增加和IL-6 mRNA水平上的表达显著增加,WIF1在蛋白水平上的表达显著降低(P<0.01);模型组关节软骨边缘严重破坏,软骨细胞排列紊乱。与模型组比较,右归丸高剂量干预组大鼠软骨组织Makin评分,STAT3的在蛋白水平上的表达明显降低,右归丸各干预组IL-6 mRNA水平上的表达显著降低,WIF1在蛋白水平上的表达显著增加(P<0.05,P<0.01),软骨结构趋于正常,软骨细胞分布仅偶见不均,关节软骨表面欠光滑。结论:右归丸能显著改善KOA大鼠的关节软骨退变,抑制KOA中软骨组织的炎症反应,这可能与其抑制STAT3和IL-6的表达有关。     

伸筋易骨法治疗膝关节骨性关节炎临床观察

[目的]观察伸筋易骨法治疗膝关节骨性关节炎的临床疗效,检测伸筋易骨法对膝关节周围软组织的调节作用,为膝关节骨性关节炎提供一种安全、有效的治疗方法。[方法]将100例膝关节骨关节病患者随机分成2组,每组各50例,治疗组采用以五体辨证为特点的"伸筋易骨法"治疗,对照组予传统推拿手法治疗。[结果]2组患者症状与功能积分比较,伸筋易骨法的疗效明显好于传统推拿(P0.01),治疗前后2组肌肉张力比较,两组均可改善膝关节周围软组织功能(P0.05),但治疗组效果更优(P0.01)。[结论]实验表明传统推拿疗法和伸筋易骨法均对膝关节骨性关节炎有一定疗效,但伸筋易骨法的效果更为明显。     

海桐伸筋透骨汤治疗膝骨性关节炎的临床疗效观察

[目的]评价海桐伸筋透骨汤治疗早、中期膝骨性关节炎的疗效。[方法]118例膝骨性关节炎患者采用随机、平行对照的试验方法,分为对照组和观察组,对照组单纯使用玻璃酸钠注射治疗,观察组在对照组基础上使用海桐伸筋透骨汤热敷治疗,5周为1个疗程。治疗后,观察临床疗效,视觉模拟(VAS)评分变化及Lequesne指数评分变化。[结果]对照组总有效率为74.6%,观察组总有效率为95%,观察组总有效率明显高于对照组(P0.05)。在VAS评分和Lequesne指数评分中休息痛、运动痛、压痛、肿胀、晨僵及行走能力及总积分方面,观察组均明显优于对照组(P0.05)。[结论]海桐伸筋透骨汤治疗早、中期膝骨性关节炎有明显疗效,中西医结合疗法治疗膝骨性关节炎具有明显优势。     

中西医结合治疗膝关节退行性骨性关节炎的临床疗效观察

[目的]评价中西医结合疗法治疗膝关节退行性骨性关节炎(DOA)的疗效。[方法]采用随机、平行对照的试验方法,120例患者采用随机数字表法随机分成2组,试验组为伸筋透骨汤+玻璃酸钠,对照组为单纯玻璃酸钠组,疗程均为5周。所有患者经治疗后,均采用国际DOA的评分标准Lequesne指数评定膝关节休息痛、运动痛、压痛、肿胀、晨僵及行走能力并测量膝关节活动度。[结果]试验组总有效率为95.0%,对照组总有效率为70.0%,试验组总有效率与对照组相比,差异有显著性(P0.05)。试验组治疗5周后Lequesne指数评分、关节活动度与对照组相比均有改善,差异有显著性(P0.05)。[结论]中西医结合疗法能有效地治疗膝关节退行性骨性关节炎。     

摇法对KOA兔滑膜MMPs分泌功能的作用研究

[目的]研究推拿摇法对膝骨性关节炎(KOA)兔膝关节滑膜炎症影响及对滑膜基质金属蛋白酶(MMPs)分泌功能的作用.[方法]将50只新西兰大耳白兔编号后随机分为5组,其中模型组、塞来昔布组、摇法组采用关节腔木瓜蛋白酶注射造模,假模型组关节腔等剂量生理盐水注射,正常组不做干预,同条件、同期饲养,取材后HE染色观察滑膜组织炎...     

摩腹手法对睡眠剥夺大鼠脑内神经递质及Orexin-A的影响

[目的]观察和探讨摩腹手法对睡眠剥夺大鼠脑内神经递质及Orexin-A水平的影响。[方法]将Wistar大鼠30只随机分为正常对照组、模型对照组和摩腹手法组各10只,采用改良多平台水环境法对后两组大鼠进行睡眠剥夺造模,造模后正常对照组和模型对照组大鼠不作干预,摩腹手法组大鼠给予每日1次的摩腹治疗,持续14 d后,检测比较各组大鼠脑内5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)、γ-氨基丁酸(GABA)和食欲素A(Orexin-A)的水平。[结果]与正常对照组相比,模型对照组大鼠脑内5-HT、DA、NE、GABA和Orexin-A的水平均发生显著变化(P0.05)。与模型对照组相比,摩腹手法组大鼠脑内5-HT水平显著回升,DA、NE和Orexin-A水平均明显回落(P0.05),而GABA水平无统计学差异(P0.05)。[结论]摩腹手法可通过调节大鼠脑内5-HT、DA、NE和Orexin-A的水平,起到调节动物睡眠和觉醒状态的作用。     

Effect of holistic stratification acupotomy on lower limb function,MMP1 and MMP13 in bursal fluid of patients with knee osteoarthritis整体分层针刀疗法对KOA患者下肢功能及滑囊液

ObjectiveTo observe the differences in clinical effect on knee osteoarthritis (KOA) between the holistic stratification acupotomy and the joint injection with sodium hyaluronate so as to provide a safe and effective treatment for KOA.MethodsA total of 100 KOA patients were randomly divided into an acupotomy group and a sodium hyaluronate group, 50 patients in each one. In the acupotomy group, the holistic stratification acupotomy was adopted. In the sodium hyaluronate group, sodium hyaluronate injection was applied in the joints. The index of Western Ontario and McMaster University (WOMAC) and the expressions of MMP1 and MMP13 in bursal fluid of the patients were compared before and after treatment in the patients between two groups before and after treatment, and the clinical therapeutic effect was observed.ResultsAfter treatment, WOMAC score of each dimension and the concentrations of MMP1 and MMP13 in bursal fluid of the patients of either group were all lower than those before treatment (all P < 0.05). After treatment, WOMAC score of each dimension and the concentrations of MMP1 and MMP13 in bursal fluid in the acupotomy group were lower than the sodium hyaluronate group (all P < 0.05). The total effective rate in the acupotomy group was higher than that of the sodium hyaluronate group (P < 0.05).ConclusionBoth the holistic stratification acupotomy and the joint injection with sodium hyaluronate are effective on KOA in this trial. However, the therapeutic effect of holistic stratification acupotomy is remarkable, which is probably related to the improvements in inflammatory response.