原代人胚肺,肾细胞成功培养方法的改进

培养出广泛适合于基础与临床研究的原代人胚肺、人胚肾细胞，方法：分别用不同的培养基及不同浓度的血清，以改进的方法对原代人胚肺，肾细胞进行培养。结果：经水囊引产的３月大小的胚胎肺及肾，用ＭＥＭ及１６４０加上２０％的牛血清，对细胞的贴附及增殖十分有利。     

原代人胚肺、肾细胞成功培养方法的改进

目的：培养出广泛适合于基础与临床研究的原代人胚肺、人胚肾细胞。方法：分别用不同的培养基及不同浓度的血清,以改进的方法对原代人胚肺、肾细胞进行培养。结果：经水囊引产的３月大小的胚胎肺及肾,用ＭＥＭ及１６４０加上２０％的牛血清,对细胞的贴附及增殖十分有利,细胞生长状态良好。结论：经改进后的对人胚肺细胞和人胚肾细胞的原代培养,用含２０％的小牛血清的ＭＥＭ和１６４０的培养液对细胞的生长极为有利。     

人肾间质成纤维细胞的培养与鉴定

目的:探讨体外培养人肾间质成纤维细胞(humanrenalinterstitialfibroblasts,hRIFs)的方法。方法:取人肾乳头组织培养,通过细胞形态、免疫细胞化学染色和右旋缬氨酸选择性培养基培养等手段进行细胞鉴定。结果:培养细胞呈梭形、单个核,表达波形蛋白,在选择性培养基内逐渐死亡。结论:该培养方法能获高纯hRIFs。     

人胚细胞的体外培养

目的：为医学研究长期提供培养的人胚细胞。方法：体外培养人胚细胞，观察其生长特性、染色体数目以及冻存和复苏的条件。结果：培养的人胚肺、皮肤、肾、脾及脑组织中，肺和皮肤细胞在冻存前后增长速度较快而稳定，染色体数目为２ｎ＝４６，占８７％￣９１％；肾、脾细胞扩增缓慢；脑组织几乎不能扩增。结论：人胚肺和皮肤细胞可长期培养，可为医学研究提供二倍体细胞实验对象。     

人胚胎肾间质成纤维细胞培养及其鉴定

目的：探讨人胚胎肾脏成纤维细胞培养方法。方法：利用人胚胎肾脏肾髓质进行培养，然后通过细胞形态学，超微结构，免疫细胞化学等方法进行分析鉴定。结果：培养的细胞为长梭形，单核，超微结构为典型的成纤维细胞，并表达成纤维细胞表面抗原，波形蛋白，结蛋白，不表达角蛋白。结论：成功地培养出人胚胎肾间质成纤维细胞。     

树突状细胞体外培养体系的优化

目的：探讨无血清专用培养基从人外周血单个核细胞（DC）分离培养树突状细胞的优化方法。方法：取正常成人新鲜血液，经密度梯度离心法，利用连续贴壁的方法获得单个核细胞，采用无血清培养基经人重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）、重组人白介素-4（rhIL-4）和肿瘤坏死因子-α（TNF—α）诱导产生成熟DC，倒置显微镜观察树突状细胞结构，流式细胞仪检测DC表面标志物表达水平。结果：连续贴壁法无血清专用培养基体外分离培养人外周血DC，所获得DC数量和纯度均都多于以往一次贴壁分离含10％胎牛血清RPMI培养基培养的DC。培养1周的DC高表达CD83、HLA-DR、CD80、CD86、CD83^＋HLA—DR^＋及CD80^＋CD86^＋。结论：采用无血清专用培养基连续贴壁法可分离培养数量较大、纯度较高的人外周血来源的DC。     

人骨髓基质干细胞体外定向诱导分化为成骨细胞

目的：探讨人骨髓基质干细胞体外定向诱导成骨细胞的培养方法，为应用人骨髓基质干细胞进行骨科细胞治疗提供依据。方法：抽取人骨髓组织，梯度离心后置于含100ml／L小牛血清的DMEM培养液中，培养24h换液，待细胞完全贴壁融合长满瓶底后，胰酶消化，传代，换诱导培养基继续培养、扩增。倒置显微镜观察细胞的形态，结合细胞化学染色、免疫组织化学染色进行细胞鉴定，以及采用细胞增殖法（MTT比色试验）分别于1、2、4、6、8、d测细胞OD值，绘制细胞生长曲线。结果：传代细胞4～5d即可传代，在诱导培养基中2周形成多层结构，并聚集成黑色结节。培养细胞ALP染色强阳性，Ⅰ型胶原免疫组化染色呈黄褐色，细胞在接种后3～6d增殖最快。结论：本实验方法应用骨髓基质干细胞体外定向诱导所培养的细胞符合成骨细胞的形态特征和生物学特性。     

人表皮细胞的培养方法探讨

目的 探讨适合临床推广、应用的人表皮细胞培养方法。方法 对比人表皮细胞在无血清培养基K—SFM及有血清培养基DMBM中的生长情况。结果 人表皮细胞在无血清培养基K—SFM中生长快，细胞形态好，不易被成纤维细胞污染。结论 应用无血清培养基K—SFM培养人表皮细胞，方法简便，适合临床推广应用。     

人皮肤角质形成细胞的分离与原代无血清培养

目的：建立一种体外人皮肤角质形成细胞分离与原代培养的方法。方法：采用两步消化法对皮肤进行消化，获取角质形成细胞进行体外无血清培养基培养，进行细胞形态学观察、免疫组织化学、透射电镜鉴定及生长曲线的绘制与分析。结果：该方法可获取较多高纯度的角质形成细胞，且在体外可快速稳定增殖。结论：两步消化法和体外无血清培养是一种理想的皮肤角质形成细胞分离培养的方法。     

人支气管上皮细胞体外不同培养基培养效果比较

目的：比较胎牛血清培养基,小牛血清培养基对经纤维支气管镜（纤支镜）刷检人支气管上皮细胞培养存活率的差异。方法：采用不同细胞培养液,对经纤支镜刷检获得的人支气管上皮细胞进行原代培养,并通过倒置相差显微镜观察原代培养细胞,比较细胞的存活率。结果：胎牛血清培养基细胞成活率比其他培养基高。结论：胎牛血清培养液可提供较为满意的生长条件。     

毛乳头细胞的高效快捷培养方法

目的：为了提高分离毛乳头的效率和培养细胞的成功率，建立一种新的培养方法。方法：采用0.2%胶原酶直接消化人头皮毛囊下部的真皮组织，对分离出来的真皮鞘细胞和毛乳头细胞分别用DMEM培养基进行培养，结果：消化法显著降低了劳动强度，提高了培养成功率。加快了毛乳头细胞的生长。结论：消化法是一种简捷快速的、高效的培养毛乳头细胞的方法。     

表皮生长因子对体外长期孵育保存的人胎胰岛的支持作用

目的：研究表皮生长因子(EGF)对促进人胎胰岛增殖与分泌功能．方法：12个人胎胰岛分别在含有EGF(实验组)和不含有EGF(对照组)的培养基中孵育，观察胰岛B细胞的分布，测定培养基中和细胞内胰岛素浓度和胰岛素释放量．结果：培养结束后实验组胰岛B细胞明显高于对照组；培养基和胰岛B细胞中胰岛素释放量实验组高于对照组．结论：培养液中加入EGF能延长胰岛细胞存活期、促进胰岛细胞增殖和分泌功能．     

组织块法体外培养人胚胎神经干细胞

目的：探讨体外分离、培养人胚胎脑组织神经干细胞的实用方法。方法：从人胚胎脑额叶皮层分离组织块，采用DMEM／F12＋N2无血清培养基，进行体外培养、传代。采用免疫细胞化学法鉴定神经干细胞和分化后的其他细胞表型。结果：从人胚胎脑额叶皮层分离的细胞具有增殖和多向分化潜能，可进行传代培养，获得的细胞中大部分为Nestin表达阳性的细胞。诱导分化后可以出现NSE、GFAP表达阳性的细胞。结论：用上述方法分离培养的细胞具有神经干细胞的特性，并表达Nestin蛋白，认为是神经干细胞。此方法是一种具有实用价值的体外培养人胚胎脑神经干细胞的技术。     

人皮肤角质形成细胞的胰蛋白酶消化分离及无血清培养

目的 探索用DMEM—SF培养基对经胰蛋白酶两步消化分离的人角质形成细胞进行培养的方法和条件。方法 取临床整形外科手术后剩余皮肤，用0．25％的胰蛋白酶经冷和温两步消化分离后，用DMEM—SF、完全培养基于5％CO2、37℃培养，绘制生长曲线，并用单克隆抗角蛋白抗体和鼠—IgG免疫组化试剂盒进行细胞鉴定。结果 用胰蛋白酶两步消化分离的角质形成细胞在：DMEM—SF、培养基中可正常生长2周以上，生长曲线显示细胞在第4天进入对数生长期，第10天进入停滞期。鉴定显示角质形成细胞占95％以上。来源于3个不同个体的皮肤角质形成细胞经等量混合后培养与单独培养相比，细胞生长无统计学差异。结论 用胰蛋白酶对人皮肤进行冷和温两步消化分离的角质形成细胞，在DMEM—SF完全培养基中生长状况良好，其他细胞污染少，实验成本低廉，操作简单。     

羟乙基呱嗪乙硫磺酸对人骨髓间充质干细胞纯化培养的影响

目的：探讨羟乙基呱嗪乙硫磺酸对人骨髓间充质干细胞(hMSC)纯化培养的影响。方法：采用全髓直接接种法分离培养13～18周胎龄水囊引产新鲜胎儿股骨骨髓，贴壁细胞达90％以上融合时消化传代。传代细胞分别接种于含100ml／L胎牛血清的L-DMEM培养基(常规培养基)和加入15mmol／L羟乙基呱嗪乙硫磺酸(Hepes)的常规培养基(改良培养基)中，观察细胞生长情况，用酸度计监测培养基pH值变化情况，流式细胞仪鉴定细胞纯度及CD抗原表达情况。并诱导改良培养基培养的hMSC向成骨细胞分化，酶细胞化学法和全自动生化仪检测碱性磷酸酶(ALP)活性，鉴定hMSC的成骨分化能力。结果：2种培养基培养的hMSC在细胞形态、生长特性、CD抗原表达等方面相似，但改良培养基由于pH值较恒定而能提高hMSC纯度及细胞增殖速度，且诱骨分化后可形成矿化结节，ALP染色阳性。结论：Hepes能提高全髓直接接种法培养的hMSC纯度及细胞增殖速度，简化骨髓细胞分离程序，减少细胞损伤及受污染机会，利于hMSC培养的推广应用。     

表达马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因的Hela细胞的无血清培养

1 目的使用无血清培养基培养可稳定表达马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因（Brugia malayi cvstatin,Bm-CPI）的人宫颈癌细胞（Hela）。方法：将已获得的Bm-CPI稳定转染的Hela细胞株．进行无血清培养并观察Hela细胞的维持时间和培养过程中Hela细胞的形态变化。结果：无血清培养基培养Hela细胞可维持细胞的正常生长。结论：无血清培养基可以逐步代替含血清的培养基．为后续Hela细胞扩大培养和Bm-CPI基因重组蛋白纯化提供依据。     

镉诱导人胚肾细胞损伤分子机理的初步研究

目的：初步探讨镉诱导人胚肾细胞损伤的细胞分子机理。方法：采用MTT法，观察镉对人胚肾细胞损伤的影响；用流式细胞仪检测镉诱导人胚肾细胞凋亡；用分光光度计检测镉对肾细胞SOD活性的影响。结果：几种不同剂量的镉加入细胞作用24h，48h,72h后均能损伤肾细胞，抑制细胞生长；镉能诱导人胚肾细胞凋亡。并且能降低肾细胞SOD活性。结论：镉对人胚肾细胞生长有一定的抑制作用，能诱导人胚肾细胞凋亡及抑制肾细胞SOD活性。     

单核细胞源性趋化因子对培养的牛视网膜Mueller细胞的趋化作用

目的：研究单核细胞源性趋化因子对培养的牛视网膜Mueller细胞的趋化作用。方法：以刀豆蛋白A激活小牛的单核细胞，以此单核细胞条件培养基作为趋化因子的来源，用改良的Boyden小室微孔滤膜法检测其对培养的牛视网膜Mueller细胞的趋化活性，并检测经明胶结合处理掉纤维连接蛋白（FN）后条件培养基的活性。结果：该条件培养基对培养的Muller细胞具有趋化活性，且该条件培养基在经明胶处理后其趋化活性降低，但仍然存在。结论：该条件培养基对Mueller细胞趋化作用的物质成份不是单一的，是多种因素作用的结果，单核巨噬细胞系统在增殖玻璃体视网膜病变发病中具有重要的作用。     

杂色曲霉素体外对人胚肺细胞致恶性转化作用的研究

目的：研究杂色曲霉素对人肺组织的致癌作用。方法：以组织培养方法研究了杂色曲霉素体外对人胚肺细胞致恶性转化作用。结果：发现杂色曲霉素处理４周后，体外培养的人胚肺细胞增殖旺盛，并出现细胞异型性变化，并可见复层交叉生长的转化灶。杂色曲霉素处理２４周，处理细胞可在软琼脂培养基上形成集落，杂色曲霉素１μｇ／ｍｌ、３μｇ／ｍｌ组平均集落数分别为１５．３、１６．１个／皿。结论：杂色曲霉素可诱发体外培养的人胚肺细胞发生恶性转化     

人食管上皮细胞培养、冻存及复苏方法的实验研究

目的比较K-SFM无血清培养基及DMEM有血清培养基在人食管上皮细胞培养中的作用,并比较不同冻存方法对人食管上皮细胞复苏后存活率的影响,探讨适合应用于组织工程食管研究的人食管上皮细胞培养、冻存及复苏方法。方法人食管上皮细胞来源于食管癌患者手术切除的食管。采用组织块法和消化法培养,两种方法均分别加入K-SFM无血清培养基及DMEM有血清培养基。采用直接观察、锥虫蓝染色活力鉴定及细胞计数法绘制细胞生长曲线,对比细胞在不同培养基中的生长情况。分别以两种培养基配制的冻存液进行冻存,复苏后的细胞采用锥虫蓝染色法鉴定其存活率。结果细胞呈典型“铺路石”状排列,免疫组织化学检测细胞角蛋白呈阳性结果,证明培养的细胞为人食管上皮细胞。人食管上皮细胞在K-SFM无血清培养基中生长快,细胞形态好,不易被成纤维细胞污染。以K-SFM培养液配制的冻存液冻存的细胞复苏后的存活率明显高于以DMEM配制的培养液。结论应用K-SFM无血清培养基培养和冻存人食管上皮细胞的方法简便、培养效果好,适合推广应用。