干扰素-γ水平影响系统性红斑狼疮小鼠体TLR9/MyD88/NF-κB p65信号通路的初步研究

目的 探究干扰素-γ(IFN-γ)水平对系统性红斑狼疮(SLE)小鼠体内Toll样受体9/髓样分化因子88/核因子κB亚基p65(TLR9/MyD88/NF-κB p65)信号通路的影响.方法 将30只SLE MRL/lpr小鼠随机分为模型组、空质粒组和IFN-γ siRNA组,空质粒组和IFN-γsiRNA组采用活体...     

贞芪扶正胶囊介导TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抑制慢性湿疹小鼠炎症反应

目的 探讨贞芪扶正胶囊对慢性湿疹小鼠炎症反应的抑制作用.方法 SPF级C57BL/6小鼠30只,按随机数字表法随机分为对照组(control组)、模型组(CAD组)与贞芪扶正胶囊组(ZQFZ组).观察各组小鼠双耳肿胀程度、双耳变应评分;HE染色观察病灶处皮肤病理学变化;ELISA法检测血清炎性因子TNF-α、IL-6及...     

桔梗总皂苷对胶原性关节炎大鼠的抗炎作用及对TLR/MyD88/NF-κB通路的影响

目的:探讨桔梗总皂苷对胶原性关节炎大鼠的抗炎作用及对Toll样受体4/髓样分子因子88/核因子-κB(TLR/MyD88/NF-κB)通路的影响,阐明桔梗总皂苷对类风湿性关节炎(RA)的治疗机制.方法:将70只大鼠根据随机数字法分为对照组、模型组、桔梗总皂苷(CKS)低剂量组、CKS高剂量组、雷公藤多苷组,每组14只....     

川芎嗪抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路减轻子宫内膜异位症大鼠炎症反应北大核心CSCD

目的探讨川芎嗪抑制Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子κB(NF-κB)信号通路减轻子宫内膜异位症(EMs)大鼠炎症反应的作用。方法自体子宫移植法构建EMs大鼠模型,随机分为EMs组、川芎嗪(低、中、高)剂量组、阳性药物组,每组各12只;进行假手术的12只大鼠作为假手术组。游标卡尺测定异位病灶体积,HE染色检测异位内膜组织病理学改变,ELISA检测血清性激素及炎症因子水平,qRT-PCR、Western blot、免疫荧光染色分别检测异位内膜组织中炎症因子mRNA表达、TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白表达及NF-κB p65入核情况。结果与假手术组比较,EMs组大鼠异位内膜组织出现明显病理损伤,血清雌二醇(E2)、孕激素(P)含量、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-1β、IL-6水平及异位内膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA、总蛋白TLR4、MyD88、p-NF-κB p65和核蛋白NF-κB p65表达水平升高,血清促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)含量降低(P<0.05),同时NF-κB p65蛋白大量入核;与EMs组比较,川芎嗪(低、中、高)剂量组和阳性药物组可缓解EMs模型大鼠的上述改变并降低异位病灶体积,且川芎嗪高剂量组和阳性药物组对EMs大鼠的作用效果较好且相近。结论川芎嗪可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路激活减轻EMs大鼠炎症反应。     

雷帕霉素减轻大鼠脑缺血再灌注损伤与TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关性

目的观察雷帕霉素对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及对TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的调节。方法 SD大鼠30只,随机分为三组,每组十只,分别为:假手术组(Sham组)、脑缺血再灌注损伤组(I/R组)和雷帕霉素预处理组(RAP组)。HE染色观察脑组织病理改变,TUNEL检测脑组织凋亡,ELISA检测脑损伤标志物和炎症因子的变化,Western blot检测脑组织TLR4、MyD88和NF-κB蛋白表达。结果雷帕霉素改善缺血再灌注造成的脑组织损伤,改善脑组织损伤造成的细胞凋亡,降低缺血再灌注损伤脑组织脑损伤标志物及炎症因子水平,雷帕霉素降低缺血再灌注损伤脑组织TLR4信号通路相关蛋白表达。结论雷帕霉素减轻大鼠脑缺血再灌注损伤与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关。     

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨黄芪多糖对肺癌小鼠免疫功能的影响及对Th1/Th2的调节作用

目的:探讨黄芪多糖(APS)对肺癌小鼠免疫功能的影响及对Th 1/Th2的调节作用及机制.方法:选取C57BL/6J野生型(TLR4+/+)和TLR4基因敲除(TLR4-/-)小鼠各50只,各随机分为5组:模型组、顺铂组(3 mg/kg)、APS高、中、低剂量组(400、200、100 mg/kg),每组10只,皮下注...     

金丝桃苷对支原体肺炎模型小鼠TLR-4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨金丝桃苷对支原体肺炎模型小鼠TLR-4/MyD88/NF-κB信号通路的影响。方法60只BALB/c小鼠通过随机数表法分为对照组(Control)、模型组(MP)及金丝桃苷组(Hyp),每组20只,采用支原体菌液滴鼻感染建立支原体肺炎小鼠模型。HE染色观察各组小鼠肺组织病理学变化;全自动生化分析仪检测血清中C-反应蛋白（CRP）、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶（AST）、乳酸脱氢酶(LDH)和心肌型肌酸激酶同工酶（CK-MB）水平,检测肺组织中活性氧簇（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）水平;酶联免疫方法（ELISA）检测血清白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;Western blot方法检测各组小鼠肺组织TLR-4、MyD88与NF-κB蛋白的表达。结果 金丝桃苷能够减轻MP感染小鼠肺组织的炎症反应;降低MP感染小鼠血清CRP、ALT、AST、LDH和CK-MB表达水平（P<0.01）;降低血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量（P<0.01）;降低MP感染小鼠肺组织ROS...     

人参皂苷Rg1通过TNF-α/TNFR1/RIPKs通路调控急性肾损伤致急性肺损伤的保护机制研究

目的 探讨人参皂苷Rg1对急性肾损伤致急性肺损伤的保护作用及其调控机制。方法将60只雄性昆明小鼠随机分成4组,每组15只：A组（假手术组）,B组（模型组）,C组（人参皂苷Rg1组）,D组（Nec-1对照组）。制备急性肾损伤模型,24 h后检测血清肌酐（serum creatinine,Scr）、尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）含量,测量肺组织湿/干重比,应用HE染色观察肺组织病理改变,ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-8(IL-8)等细胞因子表达,免疫组化和免疫印迹法检测肿瘤坏死因子受体1(tumor necrosis factor receptor 1,TNFR1)、肿瘤坏死因子受体蛋白激酶（receptor interacting protein kinase,RIPK）表达。结果与A组相比,B组Scr、BUN含量明显升高,C组、D组含量较B组均明显降低（P<0.01）;与A组相比,B组肺组织湿/干重比明显升高,C、...     

大补脾汤联合奥沙利铂对胃癌荷瘤小鼠瘤组织TLR4/MyD88/NF-κB信号通路及下游相关分子的影响北大核心CSCD

目的:研究大补脾汤联合奥沙利铂对胃癌荷瘤小鼠瘤组织TLR4/MyD88/NF-κB信号通路及下游相关分子的影响,探讨其可能的作用机制。方法:采用昆明小鼠建立胃癌荷瘤模型,造模成功后将小鼠随机分为5组:模型组、奥沙利铂组(10 mg/kg)、大补脾汤高、中、低剂量(21.58、10.79、5.40 g/kg)联合奥沙利铂组,每组10只。造模成功后开始给药,连续给药14 d;末次给药后次日眼球取血,处死小鼠,摘取肿瘤组织称重,计算抑瘤率;采用苏木素-伊红(HE)染色后观察瘤组织形态,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、免疫组化法(IHC)和Western blot分别检测小鼠肿瘤组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)和核因子κB(NF-κB)mRNA和蛋白相对表达,采用RT-qPCR检测小鼠肿瘤组织中TNF-α和IL-6 mRNA相对表达。结果:奥沙利铂组、大补脾汤高、中、低剂量联合奥沙利铂组瘤质量均较模型组显著降低(P<0.01),抑瘤率分别为37.12%、49.48%、42.10%、40.65%,大补脾汤高剂量联合奥沙利铂组与奥沙利铂组相比差异具有统计学意义(P<0.05);HE结果显示:与模型组相比,各给药组能明显降低肿瘤细胞密度,引起肿瘤细胞坏死;与模型组相比,各给药组肿瘤组织中TLR4、MyD88、TRAF6和NF-κB p65 mRNA和蛋白相对表达均显著降低(P<0.01,P<0.05);与奥沙利铂组相比,大补脾汤高、中剂量联合奥沙利铂组肿瘤组织中TLR4、MyD88、TRAF6和NF-κB p65 mRNA和蛋白相对表达均显著降低(P<0.05);与模型组相比,各给药组肿瘤组织中TNF-α和IL-6 mRNA相对表达均显著降低(P<0.01);与奥沙利铂组相比,大补脾汤高剂量联合奥沙利铂组肿瘤组织中TNF-α和IL-6 mRNA相对表达均显著降低(P<0.05)。结论:大补脾汤可通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路下调下游炎症因子TNF-α和IL-6的表达,调节免疫微环境,发挥抗肿瘤作用,抑制胃癌发生发展。     

H_2S通过抑制TLR4/MyD88/PI3K信号通路减轻尿源性脓毒血症诱导的急性肾损伤

目的:探讨硫化氢(H_2S)减轻尿源性脓毒血症诱导的急性肾损伤的作用机制。方法:40只新西兰白兔随机分为对照组、假手术组、脓毒血症模型组、脓毒血症模型Na HS处理组和脓毒血症模型Na HS联合TAK-242(TLR4抑制剂)处理组,每组8只。各组分别按分组处理72 h后,采用HE染色观察兔肾组织病理学变化;使用全自动生化分析仪检测血尿素氮(BUN)和血清肌酐(SCr)水平;采用ELISA法检测血液中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、肾损伤分子1(KIM-1)、降钙素原(PCT)以及炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平;采用Western blot检测TLR4/MyD88/PI3K信号通路相关蛋白的表达。结果:与对照组相比,脓毒血症兔肾组织呈现明显损伤,Na HS处理后肾脏病理明显改善,且血液中BUN、SCr、NGAL、KIM-1、PCT、IL-1β、IL-6和TNF-α水平显著提高(P 0.05),但Na HS处理或联合TAK-242处理后显著降低;脓毒血症兔肾脏组织中的TLR4、MyD88、p-PI3K和p-Akt蛋白水平显著升高;Na HS处理或抑制TLR4则显著抑制TLR4/MyD88/PI3K信号通路激活。结论:H_2S可能通过抑制TLR4/MyD88/PI3K信号通路减少炎症因子及肾损伤因子的释放,从而有效减轻尿源性脓毒血症诱导的急性肾损伤。     

正畸对牙龈炎大鼠牙周组织TLR4/NF-κB信号通路的调控作用研究

目的探讨正畸对牙龈炎大鼠牙周组织中TLR4/NF-κB信号通路相关分子表达的影响,为临床牙龈炎、牙周炎患者的正畸矫治提供实验依据。方法将100只大鼠随机分为4组,包括牙龈炎组、正常加力50 g组、正常对照组、牙龈炎加力50 g组(实验组),每组25只。丝线结扎法构建牙龈炎模型,正畸镍钛螺旋拉簧构建加力模型,分别于第1、3、5、7、14天处死,取大鼠双侧实验区近中侧牙周组织。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠牙周组织中白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)含量。Real-time PCR法、免疫组化测定大鼠牙周组织中TLR4、NF-κB p65的表达水平。结果实验组大鼠牙周组织中IL-1β、IL-6、TNF-α含量均明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);Real-time PCR、免疫组化结果显示,实验组大鼠牙周组织中TLR4、NF-κB p65的表达均明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。TLR4、NF-κB p65含量变化呈正态分布,第5～7天为高峰期。结论正畸力可促进牙龈炎大鼠TLR4/NF-κB炎性信...     

辛伐他汀通过NF-κB p65通路影响食管癌细胞增殖

目的:探究辛伐他汀(SIM)通过NF-κB p65通路对食管癌Eca109细胞增殖的影响。方法:采用不同浓度(2、4、8、16和32μmol/L)SIM处理食管癌Eca109细胞,MTT法检测食管癌Eca109细胞活力的变化,平板集落形成实验检测食管癌Eca109细胞平板集落形成率,Western blot法检测食管癌Eca109细胞增殖相关蛋白细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、c-Myc及NF-κB p65通路中p65和IκB-α蛋白的表达水平,ELISA法检测食管癌Eca109细胞培养上清液中NF-κB p65通路下游调控因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的水平。结果:与对照组比较,2、4、8和16μmol/L SIM对食管癌Eca109细胞活力的抑制呈浓度及时间依赖性(P<0.05),同一时点,16和32μmol/L SIM对食管癌Eca109细胞活力的抑制率无显著性差异(P>0.05)。16μmol/L SIM作用48 h时对食管癌细胞活力的抑制率为50.61%,接近半数抑制量IC50,因此采用该浓度及时间用于下游实验。与对照组比较,8...     

TLR4、MyD88、NF-κBmRNA在实验性自身免疫性肌炎小鼠淋巴结中的表达及意义

目的:研究TLR4、MyD88、NF-κB mRNA在实验性自身免疫性肌炎小鼠淋巴结中的表达情况,探讨TLR4在肌炎发病中的作用。方法:将30只雌性BALB/c小鼠随机分为5组(每组6只):第1组为正常对照组,其它4组分别为肌炎模型1周处理组、2周处理组、3周处理组和4周处理组,后4组均应用肌球蛋白诱导实验性自身免疫性肌炎模型(EAM)。采用实时荧光定量PCR方法检测各组小鼠淋巴结TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达水平。结果:(1)与正常小鼠相比,肌炎各组小鼠淋巴结中TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达均有统计学差异,表现为不同程度升高(P<0.01),第3组升高最为显著(P<0.01),第4组较第5组升高(P<0.01);(2)各组淋巴结中TLR4 mRNA表达水平与MyD88 mRNA、NF-κBmRNA表达水平均呈正相关(r=0.906,r=0.967,P<0.01),MyD88 mRNA表达水平与NF-κB mRNA表达水平呈正相关(r=0.919,P<0.01)。结论:TLR4在自身免疫性肌炎发生发展过程中发挥重要作用,且以MyD88依赖型信号途径为主,并通过激活NF-κB促进炎性因子释放。     

人参皂苷Rg1对脓毒症所致心肌损伤大鼠HMGB1/NF-κB通路的影响北大核心CSCD

目的:探讨人参皂苷Rg1(Rg1)对脓毒症所致心肌损伤大鼠的保护作用及其对高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/核因子-κB(NF-κB)通路的调节机制。方法:腹腔注射20 mg/kg脂多糖(LPS)构建脓毒症大鼠模型,并分为5组,每组10只,假手术组(Sham组)大鼠造模过程中腹腔注射等量生理盐水;造模前2 h,LPS+Rg1组大鼠灌胃15 mg/kg Rg1,心脏冠脉注射NF-κB-mimic-NC;LPS+Rg1+NF-κB-mimic组大鼠灌胃15 mg/kg Rg1,心脏冠脉注射NF-κB-mimic;LPS+NF-κB-mimic组大鼠灌胃等量生理盐水,心脏冠脉注射NF-κB-mimic;Sham组和LPS组大鼠灌胃等量生理盐水,心脏冠脉注射NF-κB-mimic-NC。心脏彩超检测大鼠左室收缩末内径(LVDs)、左室舒张末内径(LVDd)、左室射血分数(LVEF)、短轴缩短率(FS),TUNEL染色检测大鼠心肌细胞凋亡率;试剂盒检测大鼠血清TNF-α、IL-1β、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)含量;免疫荧光染色观察大鼠心肌组织caspase-3表达;免疫组化染色观察大鼠心肌组织HMGB1表达;Western blot心肌组织HMGB1、NF-κB表达。结果:与Sham组相比,LPS组、LPS+Rg1组、LPS+Rg1+NF-κB-mimic组、LPS+NF-κB-mimic组大鼠LVDs、LVDd、心肌细胞凋亡率、血清TNF-α、IL-1β、CK-MB和LDH含量、心肌组织HMGB1、NF-κB表达明显升高,LVEF、FS明显降低(均P<0.05);与LPS组相比,LPS+Rg1组、LPS+Rg1+NF-κB-mimic组大鼠LVDs、LVDd、血清TNF-α、IL-1β、CK-MB和LDH含量、心肌组织HMGB1、NF-κB表达明显降低,LVEF、FS明显升高,LPS+NF-κB-mimic组大鼠LVDs、LVDd、心肌细胞凋亡率、血清TNF-α、IL-1β、CK-MB和LDH含量、心肌组织HMGB1、NF-κB表达明显升高,LVEF、FS明显降低(均P<0.05);与LPS+Rg1组相比,LPS+Rg1+NF-κB-mimic组、LPS+NF-κB-mimic组大鼠LVDs、LVDd、心肌细胞凋亡率、血清TNF-α、IL-1β、CK-MB和LDH含量、心肌组织HMGB1、NF-κB表达明显升高,LVEF、FS明显降低(均P<0.05)。结论:Rg1可明显抑制脓毒症诱导的心肌组织炎症应激,降低心肌细胞凋亡率,改善心功能,可能与抑制HMGB1/NF-κB信号有关。     

三百棒通过调控TLR4/NF-κB信号通路对脂多糖诱导的RAW264.7细胞极化的影响

目的：探讨三百棒醇提物(TAAE)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核-巨噬细胞RAW264.7极化趋向以及其对炎症反应的影响。方法：用LPS诱导RAW264.7细胞建立炎症模型。CCK-8法检测细胞活力;ELISA检测细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10)的水平;Griess法检测细胞培养上清液中一氧化氮(NO)的分泌情况;荧光染色双标法观察巨噬细胞的极化状态;免疫荧光染色检测NF-κB定位及表达;Transwell检测TAAE对RAW264.7细胞迁移和趋化性的影响;RT-qPCR检测TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、Arg-1、NF-κB和TLR4的mRNA水平;Western blot检测iNOS、COX-2、TLR4、NF-κB、p-NF-κB、IκBα和p-IκBα蛋白水平。使用TLR4通路抑制剂TAK-242进一步验证TAAE对TLR4/NF-κB信号通路的影响。结果：与模型组相比较,TAAE降低LPS诱导的炎症模型RAW264.7细胞中M1型促炎因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)及NO水平,促使M2型抑炎因子(IL-10和Arg-1)分泌...     

人参皂苷Rg1对H_2O_2诱导的293T细胞NF-κB转录活性影响

目的:观察人参皂苷Rg1对H_2O_2诱导HEK293T细胞损伤过程中NF-κB转录活性的影响,探讨人参皂苷Rg1的抗氧化机制.方法:H_2O_2模拟氧化应激条件,MTT法和台盼蓝染色法检测人参皂苷Rg1对细胞生长的影响;以DCFH-DA为探针流式细胞仪检测细胞内ROS水平;利用双荧光素酶顺式报告系统,检测人参皂苷Rg1对荧光素酶报告基因NF-κB-Luc相对荧光素酶值的影响,以检测人参皂苷Rg1是否具有下调H_2O_2诱导的NF-κB转录激活的作用.结果:H_2O_2诱导损伤的293T细胞存活率随H_2O_2浓度的增高而下降,相同H_2O_2浓度下,人参皂苷Rg1预保护组细胞存活率较损伤组显著提高(P＜0.05);H_2O_2处理后细胞内自由基明显增加,其荧光强度增加了40%～50%,而给予有效浓度的人参皂苷Rg1后,荧光强度降低35%～40%;与正常对照组比较,H_2O_2模拟氧化应激条件下,HEK293T细胞中NF-κB荧光素酶报告活性明显升高(P＜0.05),而在人参皂苷Rg1预保护组则明显受到抑制(P＜0.05).结论:人参皂苷Rg1对H_2O_2所致的细胞氧化应激损伤具有明显的保护作用,其可能机制是有效地清除了细胞内过多的自由基,下调了转录因子NF-κB的转录活性,继而抑制了NF-κB通路的激活.     

朝医麻黄定喘汤对OVA诱导的过敏性哮喘豚鼠模型HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的：探讨朝医麻黄定喘汤对过敏性哮喘豚鼠气道炎症的影响,并探讨其作用机制是否与HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路有关。方法：选取50只雄性豚鼠随机分为正常对照组、模型组、低剂量（5 g/kg）麻黄定喘汤组、高剂量（20 g/kg）麻黄定喘汤组和地塞米松（0.5 mg/kg）组,每组各10只。除正常对照组外,其余4组均采用卵清蛋白（OVA）腹腔注射致敏和OVA气溶胶雾化激发制备哮喘豚鼠模型。最后一次雾化后观察豚鼠行为学改变;末次激发24 h后处死豚鼠,采集支气管肺泡灌洗液（BALF）,通过Diff-Quik染色进行炎症细胞计数;取肺组织标本,HE、PAS和Masson染色观察肺组织病理学变化;ELISA法检测BALF中IL-4、IL-5和IL-13含量;流式细胞术测定小鼠肺组织中IL-4和IFN-γ水平;Western blot检测肺组织中HMGB1、TLR4、MyD88和NF-κB蛋白表达;免疫组织化学及免疫荧光检测豚鼠肺组织中HMGB1表达。结果：麻黄定喘汤能有效减轻OVA诱导的哮喘豚鼠气道炎症,抑制杯状细胞增生和胶原纤维沉积,减少BALF中IL-4、IL-5和IL-13含量,...