黑果枸杞水提取物抑制UVB辐射后HaCaT细胞的凋亡及p16、p53蛋白表达

目的：明确黑果枸杞水提取物对中波紫外线(UVB)辐射引起的HaCaT细胞凋亡及p16、p53蛋白表达的影响。方法： 体外培养HaCaT细胞,分为对照组、UVB组、UVB+黑果枸杞水提取物组,UVB照射剂量为30 mJ/cm2 UVB,黑果枸杞水提取物浓度为2 mg/mL。流式细胞仪检测各组UVB照射后24 h细胞凋亡率,Western blot检测各组HaCaT细胞p16、p53蛋白的表达水平。结果：与对照组（6.12±1.19）%比较,UVB组HaCaT细胞凋亡率为(74.89±3.90)%、UVB+黑枸杞水提取物组为（57.52±2.93）%,差异有统计学意义（P<0.05）。对照组p16和p53蛋白水平为0.1±0.03和0.21±0.07,UVB组为0.28±0.06和0.5±0.04、UVB+黑枸杞水提取物组为0.15±0.025和0.25±0.01,差异均有统计学意义（Ps<0.05）。结论：黑果枸杞水提物可抑制UVB引起的HaCaT细胞凋亡以及p16、p53蛋白表达。     

过表达p53基因和中波紫外线照射对人皮肤成纤维细胞衰老的影响

目的建立稳定过表达野生型p53基因(wtp53)的人皮肤成纤维细胞系,探讨过表达p53基因及中波紫外线(UVB)照射对人皮肤成纤维细胞(HSF)衰老的影响。方法在脂质体lipofectamine TM 2000介导下,将含有wtp53的真核表达质粒pCMV-p53导入HSF中,经G418筛选抗性克隆,扩大培养,建立转染克隆细胞系。用RT-PCR,实时荧光定量PCR和蛋白印迹法分析目的基因及其蛋白表达。亚毒性剂量UVB照射细胞,以染色法检测SAβ-gal活性,MTT法检测细胞增殖能力。结果成功构建过表达p53的HSF细胞系,转染细胞中存在p53基因及蛋白的稳定过表达。过表达p53的细胞株不论UVB照射与否SAβ-gal活性均未见增高,过表达p53可使HSF的增殖能力减弱,但对UVB诱导的细胞生长停滞的影响并不显著。结论过表达p53不能促进HSF的复制衰老和UVB诱导的早期衰老,过表达p53引起的HSF增殖减弱可能与细胞凋亡有关而非衰老。     

RNA干扰p53基因对中波紫外线诱导的早衰和光致癌相关基因表达的影响

【摘要】 目的 探讨RNA干扰p53基因对中波紫外线（UVB）诱导的人皮肤成纤维细胞（HSF）早衰和光致癌相关基因表达的影响。 方法　利用已构建成功的RNA干扰抑制p53表达的HSF细胞系,加以反复多次亚毒性剂量UVB照射,衰老相关的β半乳糖苷酶（SA β-gal）染色法检测细胞衰老,定制实时定量PCR芯片,检测多种光致癌发生相关基因的表达,包括：参与细胞衰老通路的p53、p21、p19、p16、pRb,衰老相关基因纤维结合素（FN）、骨结合素（ON）、平滑肌22（SM22）,p53依赖的细胞凋亡相关基因bax和bcl-2,UVB诱导的癌基因缺氧诱导因子1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）以及负性调控p53的人双微球蛋白2基因（hdm2）。使用SPSS10.0软件对各组间数据进行配对t检验。 结果　抑制p53表达的HSF经UVB照射后SA β-gal活性（19.70% ± 0.85%）较照射前（12.77% ± 0.81%）有所增加（t = 6.45,P ＜ 0.05）,但显著低于正常HSF经UVB照射后（50.48% ± 5.30%,t = 7.86,P < 0.05）,与正常HSF组（18.50% ± 0.45%）差异无统计学意义（t = 2.57,P > 0.05）。基因检测结果表明,抑制p53表达可抑制衰老基因p21、p19、FN、ON、SM22等的表达,但p16通路并不受之影响,在UVB作用下,p16、pRb的表达显著增加,分别上调。抑制p53的表达可使抑凋亡基因bcl-2上调及促凋亡基因bax下调,癌基因HIF-1α、VEGF、hdm2表达明显增加。UVB照射对这些基因表达改变无明显影响。 结论　抑制p53表达能够延缓UVB诱导的早衰。UVB诱导的早衰具有p53依赖的相关肿瘤抑制作用。     

芒果苷抑制中波紫外线诱导人成纤维细胞提前衰老的相关研究

【摘要】 目的 研究芒果苷是否对反复亚毒性剂量中波紫外线（UVB）诱导的人二倍体成纤维细胞的早衰起抑制作用及其可能的机制。 方法 实验分成空白对照组（不做处理）,UVB-应激诱导的提前衰老（SIPS）组（单纯照光）,芒果苷4.0 mg/L组（单纯加药）,UVB + 芒果苷1.0 mg/L组、UVB + 芒果苷2.0 mg/L组、UVB + 芒果苷4.0 mg/L组（UVB照射联合药物处理）。成纤维细胞经5次UVB 10 mJ/cm2照射后,用细胞计数法（CCK8法）检测细胞增殖活性,β半乳糖苷酶染色（SA-β-Ga1）计算衰老细胞百分比,流式细胞仪测定细胞周期,蛋白印迹检测衰老相关蛋白p53、p21、p16含量,实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测基质金属蛋白酶1（MMP1）、基质金属蛋白酶3（MMP3）、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA和衰老相关基因p53、p21、p16 mRNA表达。采用单因素方差分析进行数据统计分析。 结果 UVB + 芒果苷1.0 mg/L组、UVB + 芒果苷2.0 mg/L组、UVB + 芒果苷4.0 mg/L组以及UVB-SIPS组细胞增殖活性（A450）依次为0.322 9 ± 0.011 3、0.336 1 ± 0.016 3、0.342 6 ± 0.014 4、0.288 2 ± 0.020 7（F = 110.08,P < 0.05）,β半乳糖苷酶染色阳性率依次为（88.83 ± 4.54）%、（46.33 ± 5.51）%、（32.17 ± 6.05）%、（93.67 ± 3.75）%（F = 283.54,P < 0.05;与UVB-SIPS组比较,除UVB + 芒果苷1.0 mg/L组外,其他两组均P < 0.05）;G1期细胞阻滞率依次为（72.19 ± 3.42）%、（60.99 ± 2.70）%、（49.80 ± 2.10）%、（82.09 ± 0.89）%（F = 156.01,P < 0.05）。与UVB-SIPS组相比,UVB + 各浓度芒果苷组细胞MMP1和MMP3 mRNA表达降低（F = 69.41、106.41,均P < 0.05）,Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA表达增加（F = 66.41、46.81,除UVB + 芒果苷1.0 mg/L组P > 0.05外,其他各组均P < 0.05）,衰老相关基因p53、p21、p16 mRNA表达降低（F = 265.60、151.82、329.85,均P < 0.05）,衰老相关蛋白p53、p21和p16的合成减少（F = 160.51、158.53、75.38,均P < 0.05）,各指标检测值的变化与芒果苷浓度之间呈一定依赖性。 结论 芒果苷可能通过下调p53、p21、p16基因的表达来抑制UVB诱导的人二倍体成纤维细胞的早衰。     

沉默miRNA-23a对UVB诱导成纤维细胞慢性光损伤的影响

【摘要】 目的 探讨沉默miRNA-23a对UVB照射所致成纤维细胞慢性光损伤的影响。 方法 将成纤维细胞分为空白对照组、UVB光损伤组、miRNA-23a 沉默组、UVB光损伤 + miRNA-23a沉默组。SA-β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）化学染色测定老化程度,流式细胞仪检测细胞周期,实时PCR法检测p53、p16、p21 mRNA的表达,免疫印迹法检测p53、p16、p21的蛋白表达量。 结果 UVB光损伤组与UVB光损伤 + miRNA-23a沉默组的SA-β-Gal细胞蓝染阳性率分别为（94.60 ± 2.58）%、（48.18 ± 3.70）%,两组间差异有统计学意义（P < 0.05）。G1期阻滞率分别为（85.06 ± 1.52）%、（57.48 ± 2.01）%,两组间差异有统计学意义（P < 0.05）。UVB光损伤 + miRNA-23a沉默组的p53、p16、p21 mRNA及蛋白表达量与UVB光损伤组相比,差异均有统计学意义（P < 0.05）。 结论 沉默miRNA-23a对UVB诱导成纤维细胞衰老有抑制作用,而miRNA-23a对下游衰老相关信号分子的抑制可能是其机制之一。     

人参皂苷和枸杞多糖对UVB诱导培养的成纤维细胞提早衰老的影响

目的 用重复亚毒性剂量UVB辐射培养的皮肤成纤维细胞,观察衰老相关的生物学标志的表达情况,并研究人参皂苷Rb1、Rg1和枸杞多糖对UVB诱导的提早衰老的影响,及对衰老相关的信号分子p16、p21和p53表达的影响。方法 给予培养的皮肤成纤维细胞10次、每次剂量为15 mJ/cm2的UVB辐射。用光镜观察细胞形态学改变,用透射电镜观察细胞超微结构,用β－半乳糖苷酶化学染色法检测衰老细胞,用流式细胞仪检测细胞周期,用RT-PCR检测p16、p21和p53 mRNA的表达水平。结果 三种中药单体对培养的成纤维细胞形态、β－半乳糖苷酶活性、细胞周期和p16、p21和p53 mRNA的表达均没有影响。UVB辐射后,细胞形态和超微结构发生改变;91.5%细胞β－半乳糖苷酶染色阳性;UVB辐射组的G1期细胞数（88.63% ± 4.67%）上升,与对照组（49.18% ± 5.53%）比较差异有统计学意义（P < 0.05）。UVB + 人参皂苷Rb1、UVB ＋ 人参皂苷Rg1、UVB ＋ 枸杞多糖组G1期细胞数分别为71.04% ± 1.64%、70.38% ± 2.58%、80.09% ± 3.46%,与UVB辐射组比较差异均有统计学意义（P均 < 0.05）。与对照组比较,UVB辐射组的p16、p21和p53 mRNA的表达明显增加（P < 0.05）。与UVB辐射组比较,三种中药单体能明显抑制UVB辐射细胞的p16 mRNA的表达（P均 < 0.05）,人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg1能明显抑制p21 mRNA的表达（P < 0.05）,人参皂苷Rb1和枸杞多糖能明显抑制p53 mRNA的表达（P < 0.05）。结论 人参皂苷Rb1、Rg1和枸杞多糖对UVB诱导培养的成纤维细胞提早衰老具有抑制作用,对p16、p21和p53 mRNA表达的下调作用是抑制作用的机制之一。     

黑果枸杞水提取物抑制UVB辐射后HaCaT细胞凋亡及p16、p53蛋白表达

目的:明确黑果枸杞水提取物对中波紫外线(UVB)辐射引起的HaC aT细胞凋亡及p16、p53蛋白表达的影响。方法:体外培养HaC aT细胞,分为对照组、UVB组、UVB+黑果枸杞水提取物组,UVB照射剂量为30 mJ/cm2,黑果枸杞水提取物浓度为2 mg/mL。流式细胞仪检测各组UVB照射12 h后Western blot检测各组HaC aT细胞p16、p53蛋白的表达水平。结果:与对照组(6.12±1.19)%比较,UVB组HaC aT细胞凋亡率为(74.89±3.90)%、UVB+黑果枸杞水提取物组为(57.52±2.93)%,差异有统计学意义(P0.05)。对照组p16和p53蛋白水平为0.1±0.03和0.21±0.07,UVB组为0.28±0.06和0.5±0.04、UVB+黑果枸杞水提取物组为0.15±0.025和0.25±0.01,差异均有统计学意义(Ps0.05)。结论:黑果枸杞水提取物可抑制UVB引起的HaC aT细胞凋亡以及p16、p53蛋白表达。     

UVB诱导人皮肤成纤维细胞的氧化应激损伤研究

目的 观察人皮肤成纤维细胞被UVB照射后的光损伤、凋亡、周期阻滞和氧化应激损伤状态,并检测氧化应激的相关信号蛋白p66Shc的表达情况。方法 用小剂量UVB多次照射培养的人皮肤成纤维细胞,以细胞衰老β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）化学染色法观察细胞衰老状态,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,ELISA法检测细胞内超氧化物歧化酶活性和丙二醛的含量,并以Western印迹法检测p66Shc蛋白的表达。结果 SA-β-Gal染色显示,培养的人皮肤成纤维细胞在UVB照射后呈强阳性染色;细胞凋亡率在未照射的对照组为0.96％,UVB照射组为37％;而细胞周期检测显示,经UVB照射的人皮肤成纤维细胞大部分阻滞于G0/G1期（80.07%）。细胞内超氧化物歧化酶水平对照组为（52.35 ± 4.97） ng/g蛋白,UVB照射组为（7.81 ± 0.68） ng/g蛋白（两组比较,P < 0.01）;而丙二醛水平两组分别为（3.52 ± 0.34） ng/g蛋白和（33.91 ± 3.20） ng/g蛋白（两组比较,P < 0.05）。人皮肤成纤维细胞经UVB照射诱导后24 h,p66Shc呈弱阳性表达,48 h后表达进一步增强。结论 培养的人皮肤成纤维细胞经UVB照射后进入氧化应激增强状态。p66Shc蛋白在此过程中表达逐渐增强。     

p53相关的细胞周期调控在UVB诱导的皮肤成纤维细胞早衰中的作用

目的探讨中波紫外线(UVB)诱导皮肤成纤维细胞(HSF)应激诱导的早衰(SIPS)后细胞周期调控的变化。探讨p53相关的生长停滞、细胞凋亡相关基因表达在UVB诱导的SIPS中的变化情况。方法对UVB诱导发生SIPS的HSF,流式细胞仪检测细胞周期;Western blot法检测衰老信号通路中p53,p21,p16的表达;实时荧光定量PCR芯片检测与p53相关的生长停滞(p53,p21,p16,p19)、凋亡(bax,bcl-2)基因的mRNA表达水平。结果流式细胞仪对UVB诱导的SIPS模型进行细胞周期检测发现,大部分细胞发生了G1期阻滞;衰老通路中p53,p21和p16的表达都明显增加;实时荧光定量PCR芯片检测发现,与生长停滞相关的抑癌基因p53,p21,p16,p19的表达均上调;p53下游的凋亡相关基因中的抑凋亡基因bcl-2表达稍上调,而凋亡基因bax表达下调。结论G1期阻滞和衰老信号通路蛋白表达增加进一步印证了UVB诱导HSF发生的SIPS。p53信号通路相关基因的表达变化提示UVB诱导的SIPS可能具有与p53相关的抗凋亡作用,但其中p53信号通路所起的作用还需更进一步的实验探索。     

RNA干扰p53基因表达对人皮肤成纤维细胞衰老的影响

目的 建立抑制p53基因表达的人皮肤成纤维细胞（HSF）,探讨抑制p53表达对HSF衰老的影响。方法 脂质体转染法将针对p53的shRNA的真核表达质粒pGCsi-p53导入HSF中,经G418筛选抗性克隆,扩大培养,建立稳定转染克隆细胞系。用RT-PCR、实时荧光定量PCR和蛋白印迹法分析目的基因及其蛋白表达。通过SA β-gal染色法检测细胞衰老,MTT法检测细胞增殖能力。 结果 成功建立RNA干扰抑制p53表达的HSF细胞系,转染细胞中p53基因及蛋白水平明显下调（P < 0.01）。SA β-gal染色结果显示,转染组衰老细胞百分比（13.47% ± 1.01%）与对照组（18.10% ± 0.66%）相比降低（P < 0.05）,MTT检测结果显示,转染组细胞增殖能力较对照组加快（P < 0.05）。结论 抑制p53表达能够延迟HSF的衰老,促进细胞增殖。     

EGCG对中波紫外线诱导HaCaT细胞p53基因和蛋白表达的实验研究

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对中波紫外线(UVB)照射诱导永生化角质形成细胞株-HaCaT细胞的p53 mRNA和p53蛋白表达的影响。方法:以一定剂量UVB照射HaCaT细胞,并以200μg/mL EGCG处理照射后的HaCaT细胞,分别用RT-PCR法和Western blot方法检测各处理条件下p53 mRNA和/或p53蛋白的表达水平。结果:30 mJ/cm2的UVB照射后HaCaT细胞的p53 mR-NA和p53蛋白表达逐渐增加,4 h达到峰值,4 h后随照射剂量增加而增加,24 h后有所恢复;加入EGCG可下调UVB诱导的表达作用。结论:UVB照射对HaCaT细胞p53 mRNA和p53蛋白的诱导表达有时效性与量效性,EGCG可下调UVB照射的这种诱导作用。     

MiR-146a 在长波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞光老化中作用机制的研究

目的：探讨长波紫外线（UVA）诱导人皮肤成纤维细胞（HSF）光老化中 miR-146a 的表达情况,以及上调 miR-146a 表达对其靶基因 Smad4及细胞光老化的影响。方法以10 J/cm2 UVA 照射 HSF （UVA 照射组）,分别在0、3、7、14 d 提取 RNA,实时定量 PCR 检测 miR-146a 的表达量。通过慢病毒转染上调 miR-146a 的表达（miR-146a 过表达组）,在7 d、14 d 后用荧光显微镜观察转染效率,并通过实时定量 PCR 验证细胞内miR-146a 表达量。空白对照组为正常培养的 HSF（不做任何处理）,miR-146a 过表达组为慢病毒转染 HSF 后,再用 UVA 照射。MTT 法检测空白对照组、UVA 照射组、miR-146a 过表达组、miR-146a 过表达组细胞增殖吸光度（A 值）,实时定量 PCR 检测各组细胞内老化相关基因 p53、p16和 p21 mRNA 的表达,Western 印迹法检测各组细胞内 Smad4蛋白表达。采用重复测量的方差分析、析因设计的方差分析进行统计学分析。结果重复测量的方差分析显示,随培养时间的延长,UVA 照射组和空白对照组 miR-146a 的表达量均逐渐下降（F =213.840, P <0.01）;UVA 照射组表达量低于空白对照组（F =52.55,P <0.01）,且照射时间越长,下调越明显。慢病毒转染HSF 后,细胞内均有较高的荧光表达,miR-146a 过表达组在第7天（10.31±0.17）与第14天时（9.65±0.19）的miR-146a 表达量差异无统计学意义（P >0.05）,但较空白对照组（分别为8.33±0.13和7.86±0.11）显著增高,组间差异有统计学意义（F =42.49,P <0.01）。析因设计的方差分析显示,UVA 照射对细胞增殖活性有抑制作用（P <0.01）,UVA 照射组、UVA + miR-146a 组细胞增殖均分别低于空白对照组、miR-146a 过表达组（P <0.01）;慢病毒转染上调 miR-146a 的表达对细胞增殖活性也有影响（P <0.01）,但 miR-146a 过表达组与空白对照组差异无统计学意义（P >0.05）,UVA + miR-146a 组显著高于 UVA 照射组（P <0.01）。实时定量 PCR 和 Western 印迹法结果显示,UVA 照射可上调 p21、p53、p16 mRNA 的表达（均 P <0.01）,同时对细胞内 Smad4蛋白表达有促进作用（P <0.01）;UVA 照射组、UVA + miR-146a 组 p21、p53、p16 mRNA 和 Smad4蛋白表达均分别高于空白对照组、miR-146a 过表达组（均 P <0.01）,而 miR-146a 过表达组与空白对照组相比差异均无统计学意义（均 P >0.05）, UVA + miR-146a 组均显著低于 UVA 照射组（均 P <0.01）。结论在 UVA 诱导光老化的 HSF 中,miR-146a 的表达受到抑制,上调其表达能够抑制 Smad4的表达,促进光老化细胞增殖,起到抗细胞光老化的作用。     

青海柴达木黑果枸杞水提物对中波紫外线诱导永生化角质形成细胞炎症因子分泌的影响

目的:研究青海柴达木黑果枸杞水提物对中波紫外线(UVB)诱导永生化角质形成细胞(HaCaT)炎症因子分泌的影响。方法:取处于对数生长期的HaCaT细胞,实验组在UVB照射后12 h加入不同浓度(0.5、1.0、2.0 g/L)的黑果枸杞水提物,正常对照组和UVB模型组只加入相同量的培养基。给药12 h后4℃下收集细胞培养上清液与细胞沉淀,测定5组细胞沉淀和上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的含量。结果:与正常对照组比较,UVB模型组HaCaT细胞合成与分泌的TNF-α和IL-6都增加(P0.05),实验组HaCaT细胞合成与分泌的TNF-α和IL-6都减少,且在一定浓度范围内呈剂量效应关系(P0.05)。结论:青海柴达木黑果枸杞水提物对光损伤HaCaT细胞的修复作用的机制之一可能是通过抑制炎症因子TNF-α和IL-6的合成与分泌实现。     

UVB照射诱导皮肤成纤维细胞早期衰老的研究

目的 探讨UVB诱导的细胞衰老与肿瘤发生的关系。方法 噻唑蓝（MTT）法检测UVB辐射后的细胞增殖情况,筛选诱导衰老适宜的亚毒性剂量和照射次数。染色法检测衰老相关的β-半乳糖苷酶（SA β-gal）活性。RT－PCR检测衰老相关基因纤维结合素（FN）、骨结合素（ON）和平滑肌22（SM22）的表达。结果 以10 mJ/cm2的亚毒性剂量连续5次照射人成纤维细胞后,衰老的生物学特征得以明显表现：①MTT法检测显示细胞增生能力的减弱。②照射组具有SA β-gal活性的阳性细胞明显增加,照射组和对照组的阳性率分别为82.0%和33.7%（P < 0.01）。③3种衰老相关基因FN、ON和SM22的表达亦明显增强,分别约为对照组细胞的2.7、2.0、2.3倍（P < 0.05）。结论 反复亚毒性剂量UVB照射人成纤维细胞,初步建立一种UVB诱导的应激诱导的早期衰老（SIPS）模型。     

绞股蓝皂苷对光损伤BALB/c小鼠皮肤p53、p21蛋白表达的影响

目的 探讨绞股蓝皂苷（GP）抗光损伤的作用机制。方法 80只雌性BALB/c小鼠随机分为8组,每组10只,分别为：空白对照组（未加任何处理）、UVB模型组、GP组Ⅰ（先涂GP后照UVB）、GP组Ⅱ（先照UVB后涂GP）、维生素E组Ⅰ（先涂维生素E乳膏后照UVB）、维生素E组Ⅱ（先照UVB后涂维生素E乳膏）、基质组Ⅰ（先涂基质后照UVB）、基质组Ⅱ（先照UVB后涂基质）。中波紫外线（UVB）照射BALB/c小鼠建立光损伤模型,根据以上分组对光损伤小鼠皮肤进行干预。运用蛋白Western印迹法检测各组小鼠表皮中p53蛋白、p21蛋白的表达。结果 BALB/c小鼠表皮p53蛋白的表达：空白组p53蛋白（0.11 ± 0.08）与UVB模型组（0.22 ± 0.12）相比低表达,GP组Ⅰ（0.44 ± 0.23）高于空白组（P < 0.01）,GP组Ⅱ（0.48 ± 0.24）高于空白组（P < 0.01）及UVB模型组（P < 0.05）,维生素E组Ⅰ（0.49 ± 0.29）及维生素E组Ⅱ（0.50 ± 0.27）均与GP组作用相似。小鼠表皮p21蛋白的表达各组间差异无统计学意义。结论 1.5% GP乳膏抗光损伤的作用机制之一可能与上调表皮细胞中p53蛋白表达量有关。     

自噬促进剂西罗莫司对中波紫外线诱导成纤维细胞提早衰老的影响

【摘要】 目的 研究自噬促进剂西罗莫司对反复亚毒性中波紫外线诱导提早衰老（UVB-SIPS）的影响。方法 人皮肤成纤维细胞分为6组,对照组、10 mg/L西罗莫司组、UVB组、UVB + 0.1 mg/L西罗莫司组、UVB + 1.0 mg/L西罗莫司组、UVB + 10.0 mg/L西罗莫司组。UVB照射剂量10 mJ/cm2每日1次共5次,对照组用含1%小牛血清的DMEM培养基培养5 d;西罗莫司组在每次换液后加入西罗莫司;西罗莫司 + UVB组在每次照射UVB后加入西罗莫司过夜。CCK-8检测细胞活性,β半乳糖苷酶化学染色法检测衰老细胞,吖啶橙染色检测细胞自噬,Western印迹检测衰老相关分子信号p53及自噬相关蛋白LC3-B及beclin 1的表达水平。数据用SPSS 16.0软件分析,多组间均数行单因素方差分析,结合t检验和LSD法。 结果 UVB + 0.1、1.0、10 mg/L西罗莫司组的细胞活性（A450值）分别为0.27 ± 0.02、0.36 ± 0.04、0.39 ± 0.04,呈浓度依赖性升高,与UVB组（0.26 ± 0.01）比较,差异均有统计学意义（均P ＜ 0．05）;3个组β半乳糖苷酶染色阳性细胞分别为92.50% ± 0.34%、42.40% ± 0.53%、6.20% ± 0.39%,与UVB组（95.10% ± 0.32%）比较,差异均有统计学意义（P ＜ 0．05）;3组吖啶橙染色荧光定量分别为36.43 ± 0.24、45.25 ± 0.33、48.69 ± 0.37,与UVB组（33.99 ± 0.32）比较,差异均有统计学意义（P ＜ 0．05 ）;3组p53、LC3-B及 beclin 1的表达与UVB组比较,差异均有统计学意义（P ＜ 0．05）。 结论 自噬促进剂西罗莫司在提高细胞自噬率的同时,可抑制UVB诱导的成纤维细胞提早衰老。 【关键词】 成纤维细胞; 细胞衰老; 紫外线; 西罗莫司; 自噬     

羟氯喹及没食子酸酯对HaCaT细胞光照射的影响

目的 探讨羟氯喹和绿茶活性成分表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对中波紫外线(UVB)损伤永生化角质形成细胞株(HaCaT细胞)的保护作用及其机制。方法 采用UVB定时及定量照射培养的HaCaT细胞,分别加入羟氯喹和EGCG干预处理,以RT-PCR法检测各受试组p53、p21、c-fos基因表达水平。结果 UVB照射后可明显增加HaCaT细胞中p53,p21,c-fos mRNA表达,羟氯喹和EGCG可不同程度地下调上述基因表达水平。结论 羟氯喹和EGCG的光保护作用在HaCaT细胞可能与其抑制p53,p21,c-fos基因表达有关。     

四氢嘧啶对人皮肤成纤维细胞衰老的影响

目的 探究四氢嘧啶(ectoine)对人皮肤成纤维细胞(HSFs)是否具有减缓衰老的功效及其具体机制。方法 采用不同浓度四氢嘧啶作用于HSFs 24 h, MTT法检测细胞活性，β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色观察细胞衰老情况，流式细胞术检测细胞调亡和活性氧(ROS)的水平，qPCR检测p16、p21、p53 mRNA的表达水平。结果 MTT结果显示，与对照组相比，各四氢嘧啶处理组对细胞无毒性作用，随着四氢嘧啶浓度增加，HSFs细胞凋亡率、ROS水平以及p16、p21、p53 mRNA表达水平均显著降低(P<0.05)。结论 四氢嘧啶可通过降低细胞凋亡率、抑制ROS活性和减少p16、p21、p53 mRNA的表达来减缓HSFs衰老，这将为今后开发以四氢嘧啶作为主要成分针对HSFs的抗衰老产品提供一定的理论依据。     

黑果枸杞多糖对中波紫外线诱导HaCaT细胞光损伤的保护作用

目的 探讨黑果枸杞多糖对HaCaT细胞光损伤的预防作用及机制.方法 采用超声辅助水提法提取柴达木黑果枸杞中的多糖成分.体外培养的HaCaT细胞分为3组,对照组:正常培养,不做其他处理;中波紫外线(UVB)组:30 mJ/cm2 UVB照射;实验组:30 mJ/cm2 UVB照射前6h加入2 g/L黑果枸杞多糖溶液.照射1h后继续培养12h,倒置显微镜观察细胞形态,MTS法测定细胞增殖,流式细胞仪测定细胞凋亡率,酶标法检测细胞丙二醛和谷胱甘肽过氧化物酶含量、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力,ELISA法检测上清液和细胞中白细胞介素1(IL-1)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平.结果 与对照组相比,UVB组细胞形态模糊不清,出现死亡漂浮现象;实验组细胞肿胀,但形态尚清楚.MTS结果显示,3组间细胞增殖吸光度值差异有统计学意义(F=48.88,P＜0.01),其中UVB组(1.72±0.12)显著低于对照组(2.34±0.11),实验组(2.11±0.10)又显著高于UVB组,差异均有统计学意义(P＜0.05).UVB组细胞凋亡率(82.41％±2.49％)显著高于对照组(3.98％±0.19％)和实验组(22.79％±0.97％),实验组细胞凋亡率明显高于对照组,各组间比较差异均有统计学意义(均P＜ 0.05).UVB组与对照组比较,丙二醛含量明显上升,SOD活性、谷胱甘肽过氧化物酶含量、CAT活性明显下降(均P＜0.05).同时,UVB组较对照组上清液中IL-1和TNF-oα含量及细胞中TNF-α含量均明显升高(均P＜0.05),但细胞中IL-1差异无统计学意义(P＞0.05).结论 黑果枸杞多糖对HaCaT细胞的光损伤有保护作用,其保护机制可能与减少细胞炎症物质的合成和口分泌及减少自由基有关.     

中波紫外线对HaCaT细胞核因子-κB和p53表达的影响

目的研究中波紫外线(UVB)对HaCaT细胞核因子-κB(NF-κB)和p53表达的影响。方法以60mJ/cm2的UVB照射HaCaT细胞后8h、16h和24h,采用real time PCR和western blot等技术检测NF-κB和p53的表达情况。结果 1与未处理组相比,UVB照射HaCaT细胞8h、16h和24h后,NF-κB mRNA水平升高程度分别为27%、32%和42%,p53 mRNA水平升高程度分别为13%、20%和28%;2未处理组HaCaT细胞NF-κB和p53蛋白的表达水平分别为0.3989±0.04802和0.3018±0.03605,UVB照射8h、16h和24h后,二者的表达均随时间延长而升高,NF-κB为0.4283±0.0195、0.5976±0.0401和0.8255±0.0214,p53为0.3925±0.0244、0.4595±0.0362和0.5811±0.0482,差异有统计学意义(P0.05)。结论 UVB可致HaCat细胞中NF-κB和p53表达水平升高。