围生期新生儿B族链球菌感染

曹云教授受《中国循证儿科杂志》编辑部委托,在＂第三届上海国际新生儿医学论坛＂会议期间,很荣幸邀请到美国哈佛大学波士顿儿童医院Michael Wessels教授和上海市（复旦大学附属）公共卫生临床中心妇产科蒋佩茹教授就围生期新生儿B族链球菌（GBS）感染进行讨论。     

B族链球菌表面蛋白LrrG的分段表达及其免疫原性和功能研究

目的研究LrrG蛋白不同片段的免疫原性及保护功能,为B族链球菌(GBS)蛋白疫苗及组分疫苗的研究奠定基础。方法采用生物信息学的方法预测LrrG蛋白的抗原表位,结合该蛋白的一级结构特征构建3个多肽片段(Gn、Gr、Gc)并重组表达;通过免疫动物及萃取组织液检测其免疫原性;体外调理吞噬试验检测各多肽片段的保护功能。结果成功构建和表达纯化了Gn、Gr、Gc多肽片段,且3个多肽片段均可在小鼠血清诱导产生较高水平的特异性IgG抗体,Gn免疫原性好于Gr、Gc。Gr、Gc 30μg剂量的免疫原性均好于其10μg和50μg剂量。除了Gr在肺、直肠组织产生的IgA抗体有较明显升高外,Gn、Gc对黏膜及血清IgA无明显刺激作用。体外调理吞噬试验表明3个多肽片段的抗体均具有促进吞噬细胞对GBS的吞噬功能。Gr、Gc的调理吞噬活性高于Gn,与B细胞表位预测结果相符。结论重组多肽片段均具有较强的免疫原性,在一定免疫剂量范围内,血清特异性IgG水平呈剂量依赖关系;皮下免疫对黏膜免疫影响不大;调理吞噬作用可能是LrrG蛋白具有保护作用的机制,3个多肽片段均具有潜在保护作用,支持将其作为GBS蛋白疫苗及组分疫苗的候选成分。     

B族链球菌表面蛋白Sip的制备及其免疫原性的研究

20世纪70年代以来，B族链球菌（Group B Streptococcus，GBs）成为引起新生儿感染的首位原因。疫苗是预防GBS疾病简便有效的方法，传统的荚膜多糖疫苗及单一的荚膜多糖结合疫苗因其保护作用范围有限而使其应用受到限制。用GBS表面保守的蛋白作为疫苗成分可能会对多种血清型GBS的感染提供保护作用，因此引起人们的关注。     

荧光PCR体系检测B族链球菌的性能验证

目的对荧光聚合酶链式反应(PCR)体系检测B族链球菌(group B Streptococcus,GBS)的精密度、准确性和检测限进行验证。方法取1例GBS-DNA为阳性的临床样本重复扩增10次,以验证精密度;扩增20例结果已知的临床样本,将结果与实际结果比对,以验证准确性;将阳性对照参考品稀释至10^4CFU/mL,重复扩增10次以验证检测限。结果重复扩增10次的检测结果均为阳性,且所有通道的CT值变异系数CV<5%;20例标本的检测结果比对完全相符,符合率为100%;稀释到检测限的10次重复实验结果均为阳性。结论荧光PCR体系检测GBS结果稳定、可靠,适用于医学实验室对GBS的检测。     

应用免疫层析法快速检测孕妇生殖道B族链球菌的临床研究

目的 运用免疫层析法快速检测B族链球菌(GBS),研究其应用于妇女孕期GBS感染的临床价值.方法 通过与微生物鉴定培养法的结果进行对比,研究免疫层析法的灵敏度、特异性和符合率.结果 免疫层析法的灵敏度、特异性和符合率分别为100％、96.3％、96.8％.结论 该方法和传统培养法具有较高一致性,且简便、灵敏,适合在临床检验使用.     

孕妇B族链球菌的检测及其临床价值

目的 探讨免疫层析法在检测孕妇B族链球菌(GBS)感染中的临床价值.方法 选取2014年12月至2015年12月间我院待产孕妇320例,各取2份阴道分泌物标本.1份用免疫层析法快速检测GBS;另1份用于接种THB培养基,第2天转至血平板,并对可疑菌落进行生化鉴定.同时对320例孕妇的妊娠结局进行随访.结果 免疫层析法检测出GBS感染41(12.81％)例,培养法检测出GBS感染36(11.25％)例,以细菌培养法为参考标准,免疫层析法的符合率为98.4％.通过临床跟踪随访,320例孕妇中有16例发生早产、胎膜早破等异常情况,其中有13例GBS阳性.结论 GBS与早产、胎膜早破等异常妊娠关系密切;免疫层析法较传统细菌培养法检出率无统计差异,且有步骤简单、省时等优点,适合应用于临床筛查GBS感染.     

B族链球菌表面蛋白C5a肽酶系统及鼻内黏膜免疫的研究

目的 研究B族链球菌表面蛋白C5a肽酶(streptococcal C5a peptidase,ScpB)系统及其鼻内途径免疫后在小鼠血清及肺、直肠、阴道等黏膜部位特异性抗体水平,探讨ScpB蛋白黏膜免疫应答的效果.方法 在大肠杆菌BL21中表达ScpB蛋白,亲和层析法进行纯化,质谱分析法对所纯化的蛋白进行鉴定.小鼠随机分为5组,每组10只.分别为对照组、皮下30μg组、鼻内5μg组、鼻内10μg组和鼻内30μg组.用ELISA法检测小鼠血清及黏膜萃取液中特异性抗体水平;调理吞噬试验检测SepB蛋白抗血清的保护性功能.结果 成功表达并纯化了ScpB蛋白;质谱分析和蛋白质库比较证实其为B族链球菌表面蛋白C5a肽酶的可能性分值为175;ELISA显示ScpB蛋白皮下30μg及鼻内不同剂量(5 μg、10 μg、30μg)免疫后均可诱发小鼠产生高水平特异性IgG抗体(P＜0.01),30 μg剂量组IgG大于5μg及10μg剂量组(P＜0.05);鼻内不同剂量(5μg、10μg、30μg)免疫后均可诱发小鼠产生高水平的黏膜特异性IgA抗体,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01);黏膜免疫组间无差异;30 μg ScpB蛋白皮下免疫后黏膜特异性IgA抗体与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).SepB抗血清对细菌具有调理吞噬作用,吞噬指数为12.3,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 B族链球菌表面蛋白C5a肽酶鼻内途径免疫小鼠后可在血清、肺及阴道、直肠等免疫近端和远端黏膜中产生相应高水平IgG及IgA抗体,上述ScpB抗体具有促进吞噬细胞吞噬B族链球菌的功能.     

妊娠晚期B族链球菌感染及干预措施对妊娠结局的影响

目的:探讨妊娠晚期孕妇B族溶血性链球菌(Group B streptococcus,GBS)感染情况,及产时预防性抗生素治疗对妊娠结局的影响.方法:对2018年3月至2020年3月本院行GBS筛查并最终分娩的1826例孕妇进行回顾性分析,其中GBS筛查阳性的66例为GBS阳性组,同期GBS筛查阴性的66例作为对照组;根...     

B族链球菌不同菌株对血小板的活化作用

 目的: 探索B族链球菌(GBS)不同菌株对血小板活化的作用及可能的机制。方法: 来自脓毒症伴血小板减少患者分离鉴定的6株GBS作为诱导剂,分别采用血小板聚集仪、流式细胞术、扫描电镜和Western blotting方法检测它们对血小板聚集率以及血小板膜蛋白CD62P、TLR2和TLR4表达的影响;进一步用TLR2和TLR4单克隆抗体封闭血小板表面TLR2和TLR4以检测它们与GBS诱导的血小板活化的关系。结果: 6株GBS中有3株可诱导血小板聚集,且能明显上调血小板TLR2和CD62P的表达(P < 0.05),但对血小板TLR4的表达没有影响;封闭血小板TLR2后,GBS诱导的血小板聚集率明显下降。结论: 部分GBS菌株可诱导血小板活化,血小板TLR2可能在这个过程中起重要作用。     

三种方法筛查孕妇B族链球菌的效果评价

目的 比较三种不同的方法检测B族链球菌的结果,对三种B族链球菌筛查方法进行效果评价.方法 收集我院2014年1月至2015年12月产科门诊孕35 ～ 37周孕妇1374例,采集孕妇的阴道拭子和肛周拭子标本,分别用血琼脂培养法,LIM肉汤增菌培养法和PCR方法检测B族链球菌.结果 1374例孕妇标本中,血琼脂培养法阳性60例,阳性检出率为4.4％,PCR方法检测阳性66例,阳性检出率为4.8％,LIM肉汤增菌培养法阳性128例,阳性检出率9.3％.三种筛查方法比较,LIM肉汤增菌培养法阳性率与PCR法,血琼脂培养法比较差异具有统计学意义.血琼脂培养法和PCR法筛查阳性率差异不具有统计学意义.以LIM肉汤增菌法为金标准,血琼脂培养法的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为46.9％,100％,100％,94.8％,PCR法的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为50％,99.6％,96.9％,95.1％.结论 LIM肉汤增菌培养法筛查B族链球菌的阳性率最高,血琼脂培养法和PCR法检测灵敏度较低,只能筛查出50％左右的GBS定植孕妇.建议临床筛查B族链球菌使用LIM肉汤增菌培养法筛查GBS,灵敏度高,特异性好.     

B族链球菌显色培养法评估及药物敏感性分析

目的 评估B族链球菌(group B streptococcus,GBS)显色培养法的诊断价值,为临床诊断提供依据.方法 收集380例孕34?37周孕妇阴道分泌物样本进行GBS培养,以传统培养24 h为比对法,记录显色培养法(6h、12h、24h)生长情况,评价其不同生长时间的灵敏度和特异性,并与比对法进行Kappa一...     

HMGB1诱导肺泡巨噬细胞释放促炎细胞因子

胞外高迁移率族蛋白B1(high mobility group box1,HMGB1)为近年发现的一种重要炎症介质,参与脓毒症、肺炎、关节炎、急性胰腺炎、缺血再灌注损伤、烫伤等许多疾病的发病过程[1-2]。     

链球菌蛋白对RAW264.7小鼠巨噬细胞免疫学活性的调节作用

目的:探讨链球菌蛋白对RAW264.7小鼠巨噬细胞免疫活性调节及其相关作用机制.方法:不同浓度的链球菌蛋白与RAW264.7小鼠巨噬细胞共同作用后,采用MTT 法检测细胞的增殖活化;吞噬中性红试验观察巨噬细胞的吞噬功能;生物化学法检测巨噬细胞上清液中TNF-α和IL-6 的含量;RT-PCR法检测细胞中TNF-α、IL-6和Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)的mRNA表达情况;流式细胞术检测细胞表面TLR2和TLR4的表达强度.结果:链球菌蛋白对巨噬细胞的生长增殖和吞噬功能有较强的刺激作用(P<0.05),促进TNF-α和IL-6的表达和分泌(P<0.05),并可上调巨噬细胞表面模式识别受体TLR2和TLR4的表达(P<0.05).结论:链球菌蛋白通过刺激RAW264.7小鼠巨噬细胞的增殖,增强细胞吞噬活性以及诱导细胞因子的产生等发挥其免疫调节作用.     

围产期孕妇B族链球菌感染的筛查方法对结果的影响

目的 通过比较聚合酶链反应（PCR）、显色平板法两种筛查方法,探讨围产期孕妇B族链球菌（GBS）感染的合适快速检测方法。方法 选取2016年5月~2018年5月我院152例常规产检的围产期孕妇,采集孕妇阴道分泌物后分别做PCR检测与显色平板法,并对结果进行质谱检测确认。比较两种方法对GBS的阳性检出率。结果 PCR检测方法的阳性检出率为 6.58%（10/152）,灵敏度为77.27%（17/22）,显色平板法的阳性检出率11.18%（17/152）,灵敏度为50.00%（10/22）。结论 两种筛查方法均能检测GBS,应用显色平板法对筛查围产期孕妇的GBS感染灵敏度更高。临床中对围产期孕妇的GBS 筛查采用显色平板培养的方法能提高GBS的检出率。     

B族链球菌恒温荧光探针检测方法的建立及方法学验证

目的 建立B族链球菌恒温荧光探针检测方法体系。方法 针对B族链球菌高度保守区域设计特异性引物和含RNA碱基的探针,建立B族链球菌酶切探针恒温扩增快速分子检测体系,并从检测限、灵敏度、特异性和抗干扰能力、精密度、准确性进行方法学验证。结果 该方法的检测限为10²CFU/mL,灵敏度为100.0%,能检测出B族链球菌的5种亚型(Ia、Ib、II、III、V型),对于其他细菌的检测均为阴性,显示该方法特异性良好。检测108份阴道拭子的临床标本,检测结果与临床培养结果相一致,准确性100.0%。精密度检测显示变异系数均小于5.0%,精密度良好。结论 该方法的灵敏度高,特异性和精密度良好,操作简便、高效快捷,30min即可扩增完成,可用于B族链球菌的快速检测。     

肺炎链球菌溶血素黏膜免疫抗定植保护作用的研究

目的 原核表达ΔA146 Ply蛋白,评价ΔA146 Ply黏膜免疫对肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)在宿主鼻咽部定植的保护作用.方法 IPTG诱导、Ni-NTA树脂纯化获得纯化的ΔA146 Ply蛋白,经黏膜免疫BALB/C小鼠,制备其特异性抗血清;进行体内抗定植实验,观察小鼠...     

围产期孕妇生殖道B族链球菌感染和耐药情况及其对妊娠结局的影响

目的 分析围产期孕妇生殖道B族链球菌(GBS)感染情况以及对妊娠结局的影响.方法 收集2014年1月至2017年1月期间在我院进行产前检查的476例35～ 37周孕妇生殖道分泌物,通过实时定量PCR技术以及培养法检测B族链球菌感染情况,对分离培养出的GBS菌株进行药敏试验,并将实时定量PCR检测GBS阳性孕妇按不同治疗方案分为A、B两组,A组孕妇分娩开始即静脉注射敏感性抗生素直至分娩结束,B组孕妇在发现GBS阳性时即口服抗生素7d,其余治疗方法同A组,分析两组治疗方案孕妇妊娠结局.结果 476例孕妇围产期生殖道分泌物经实时定量PCR检测GBS阳性者148例,阳性率为31.1％,细菌培养法检测阳性者38例,阳性率为8.0％.分离培养的38株GBS对青霉素、万古霉素、利奈唑胺、红霉素、左氧氟沙星、克林霉素的耐药率为0％、0％、0％、23.7％、31.6％、52.6％.A组孕妇宫内感染、胎膜早破、早产以及新生儿感染发生率均高于B组孕妇,两组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 围产期孕妇生殖道GBS感染发生率高,GBS感染可导致宫内感染、胎膜早破、早产以及新生儿感染等不良妊娠结局发生率增加,GBS感染后采用敏感性抗生素预防治疗可以改善孕妇妊娠结局.     

A族链球菌表面蛋白FbaA单克隆抗体FbaAmAb2的免疫功能研究

目的 通过侵袭抑制及攻毒试验检测A族链球菌表面蛋白FbaA的单克隆抗体FbaAmAb2的免疫功能,为进一步探索A族链球菌的致病机制和感染后的治疗策略奠定基础.方法 通过亚克隆、全菌ELISA方法筛选稳定分泌高效价FbaAmAb2的杂交瘤细胞,并将其接种子小鼠腹腔制备腹水.通过侵袭试验对FbaAmAb2能否阻止H因子与A族链球菌的结合进行研究.而后将获得的腹水倍比稀释为1:1、1:2、1:4、1:8、1:16行试管凝集试验,选定合适的稀释度被动免疫动物后用致死量A族链球菌(FbaA+)标准菌株(7.5×107个)攻击,连续观察15 d计算保护率.结果 侵袭试验中FbaAmAb2能够竞争性抑制H因子与A族链球菌表面蛋白FbaA的结合,减少了H因子介导的A族链球菌侵入上皮细胞的数量.与全菌结合的ELISA效价为1:1600,试管凝集效价为1:8.在单抗被动免疫试验中,腹水原液、1:2稀释组的动物保护率高达66.67％,1:4稀释组保护率为50％,经SPSS10.0统计软件分析各实验组与PBS组保护牢差异有统计学意义(P＜0.05).结论 FbaAmAb2有望用于紧急预防及治疗A族链球菌感染,并为深入研究A族链球菌的致病机制、治疗策略及疫苗预防方面提供新的靶标.     

高迁移率族蛋白B1:从核蛋白到新的细胞因子

对高迁移率族蛋白B1（HMGB1）的认识曾长期局限于其调节基因转录的核蛋白功能。由于其作为细菌内毒素致死性的晚期介质这一重要功能不久前被发现,HMGB1新的生物学活性及其作用机制引起广泛兴趣和深入研究。HMGB1具有细胞因子的各种共同特性,包括其自分泌和旁分泌的特征、其受体依赖性以及它与其他炎症细胞因子相互诱生与协同作用的网络性。在感染性和非感染性的炎症、损伤和细胞坏死中,HMGB1介导了以巨噬细胞为主的固有免疫应答,发挥了至关重要的前炎症细胞因子和趋化因子的作用,同时还发现其对神经突触和肿瘤细胞的生长的促进作用。以HMGB1为靶子的治疗策略,包括对其产生和释放的抑制以及对其与受体（已知RAGE、TLR2和TLR4）结合的拮抗措施,在实验动物获得了可喜的成功并给临床应用带来了希望。