利多卡因通过NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路介导的细胞焦亡抑制乳腺癌细胞增殖

目的 研究利多卡因能否通过调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路介导的细胞焦亡抑制乳腺癌细胞增殖。方法 将乳腺癌MCF-7细胞随机分为空白对照组（NC组），利多卡因组低、中、高剂量组（LIDO-L、M、H组）和LIDO-H+MCC950组，CCK-8法检测细胞增殖能力；Transwell小室法检测细胞侵袭能力；流式细胞仪和免疫荧光染色检测细胞焦亡；蛋白质印迹和qRT-PCR法检测细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白和mRNA表达。结果 和NC组相比，LIDO-L组、LIDO-M组、LIDO-H组MCF-7细胞存活率、细胞侵袭数目均明显降低，细胞焦亡率、细胞中GSDMD阳性细胞数、细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白表达及m RNA表达均明显增加（P<0.05）。和LIDO-H组相比，LIDO-H+MCC950组细胞存活率和侵袭细胞数目明显增加，细胞焦亡率和GSMDM阳性细胞数明显减少，细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白和mRNA表达明显降低（P<0.05）。结论 利多卡因可抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖和侵袭，其...     

TXNIP/NLRP3 信号通路在PCOS-IR 大鼠卵巢慢性炎症中的作用机制 研究

目的：研究硫氧还蛋白相互作用蛋白∕NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(TXNIP∕NLRP3)信号通路对多囊卵巢综合征（PCOS）-胰岛素抵抗（IR）大鼠卵巢慢性炎症的影响。方法：颈背部皮下注射脱氢表雄酮（DHEA）溶液0.2 ml(6 mg/100 g)建立PCOS-IR大鼠模型,建立成功的模型大鼠随机分为模型组、siRNA NC组、TXNIP siRNA组、RES干预组,每组8只,正常组8只。siRNA NC组、TXNIP siRNA组分别颈背部皮下注射5 nmol siRNA NC、TXNIP siRNA,5 d/次;RES干预组颈背部皮下注射50 mg/kg RES,正常组和模型组颈背部皮下注射等体积生理盐水,1次/d,10 d。放射免疫试剂盒检测血清中睾酮（T）、卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、雌二醇（E2）、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)水平,血糖仪检测血清中空腹血糖（FBG）水平,ELISA检测血清中空腹胰岛素（FINS）、IL-6、IL-1β、TNF-α水平,并计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、胰岛素敏感指数（ISI）。HE染色观察卵巢卵泡发育情况;q...     

基于 Caspase-1 细胞焦亡信号通路探讨栀子苷对脂多糖诱导 RAW264.7 细胞炎症的抑制作用

目的：探讨栀子苷对脂多糖（LPS）诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7 Caspase-1细胞焦亡经典信号通路的干预作用。方法：LPS诱导RAW264.7细胞构建炎症模型,以地塞米松为阳性对照,20、40、80μmol/L栀子苷干预细胞24 h。乳酸脱氢酶（LDH）细胞释放法检测细胞LDH释放;碘化丙啶（PI）荧光染色观察细胞存活情况;检测细胞上清中炎症因子IL-18、IL-1β、TNF-α和IL-6分泌水平;Western blot检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-18和IL-1β表达。结果：与正常对照组相比,模型组RAW264.7细胞中LDH释放量明显升高（P<0.01）,细胞形态学观察到有大量细胞被PI染色,细胞上清中IL-1β、IL-18、TNF-α和IL-6分泌水平显著升高（P<0.01）;NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-18和IL-1β蛋白表达显著升高（P<0.01）。与模型组相比,栀子苷各组和地塞米松组LDH释放减少（P<0.01）,有效抑制PI染色,细胞上清中炎症因子IL-1β、IL-18、TNF-α和IL-6...     

大豆苷元减轻高糖诱导的肾小管上皮细胞焦亡

目的 探讨大豆苷元(daidxein, DAI)调节NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3, NLRP3)/半胱天冬酶-1(caspase-1)信号通路对高糖诱导的肾小管上皮细胞焦亡的影响。方法 将HK-2细胞分为：对照组(NC组)(5.5 mmol/L D-葡萄糖)、HG组(30 mmol/LD-葡萄糖)、DAI-L、DAI-M、DAI-H组(30 mmol/LD-葡萄糖分别和25、50、100μmol/L DAI孵育HK-2细胞)、DAI-H+LPS组(30 mmol/LD-葡萄糖、100μmol/L DAI和1μg/mL LPS共同孵育HK-2细胞)。MTT法检测HK-2细胞增殖；流式细胞术检测HK-2细胞凋亡；ELISA法检测HK-2细胞炎性因子白介素-1β(IL-1β)、白介素18(IL-18)水平；采用扫描电镜观察细胞焦亡形态；免疫荧光染色检测细胞焦亡相关蛋白；Western blot检测NLRP3、cleaved-caspase-1、GSDMD-N蛋白表达。结果 NC组细胞呈圆球形，边界比较规则，而HG组细胞肿胀变大，边界不规则；HG组...     

硫化氢通过下调NLRP3/caspase-1信号通路抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞焦亡

目的:探讨缓释型硫化氢(H2S)供体GYY4137对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的血管内皮细胞焦亡的抑制作用及其分子机制。方法:以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)为研究对象,将其分为空白对照组、GYY4137干预组、oxLDL刺激组和oxLDL+GYY4137干预组。各组HUVECs经不同药物干预指定时间后,采用CCK-8法检测各组细胞活力;使用乳酸脱氢酶(LDH)释放测定和Hoechst 33342/碘化丙啶(PI)双荧光标记检测各组细胞死亡情况;采用亚甲基蓝比色法检测各组细胞中的H2S含量;采用Western blot实验观察各组细胞中细胞焦亡信号通路标志蛋白的表达。结果:oxLDL(50和100 mg/L)可使HUVECs活力显著降低(P0.05或P0.01),LDH释放及PI阳性细胞比例显著增加(P0.05或P0.01),且细胞中NLRP3、caspase-1(p20亚单位)、gasdermin D(GSDMD)、GSDMD-N及白细胞介素18(IL-18)蛋白水平显著升高(P0.05或P0.01),即HUVECs发生焦亡。而GYY4137干预则可降低HUVECs中NLRP3、caspase-1(p20)、GSDMD、GSDMD-N及IL-18蛋白水平(P0.05),抑制oxLDL诱导的细胞焦亡(P0.05),并使细胞活力增强(P0.05)。结论:H2S供体GYY4137可通过下调NLRP3/caspase-1细胞焦亡信号通路而抑制oxLDL诱导的血管内皮细胞焦亡。     

绿原酸通过ROS/TXNIP/NLRP3信号通路介导的细胞焦亡途径减轻脓毒症小鼠急性肺损伤

目的:探究绿原酸对脓毒症小鼠急性肺损伤的影响及活性氧/硫氧还蛋白互作蛋白/NOD样受体蛋白3(ROS/TXNIP/NLRP3)信号通路在其中的作用。方法:建立脓毒症小鼠模型,随机分为模型组、阳性对照(地塞米松)组及低剂量(5 mg/kg)、中剂量(10 mg/kg)、高剂量(20 mg/kg)绿原酸组,每组各12只,另取12只正常小鼠作为对照组。计数肺泡灌洗液中炎症细胞数量;测定肺组织湿重/干重(W/D)比值;HE染色观察肺组织病理改变;TUNEL法检测肺组织细胞凋亡;ELISA法测定肺泡灌洗液中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,相应试剂盒检测肺组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和活性氧(ROS)水平;Western blot法检测TXNIP、NLRP3蛋白、caspase-1及细胞焦亡关键蛋白Gasdermin D的N末端片段(GSDMD-N)的表达水平。结果:相较于对照组,模型组肺泡间隔增厚,肺泡内及肺泡间质水肿,炎症细胞数量显著增加,IL-1β、IL-6和TNF-α含量、W/D比值、细胞凋亡率、MDA和ROS水平以及TXNIP、NLRP3、caspase-1和GSDMD-N蛋白水平均显著升高(P0.05);而模型组SOD水平较对照组显著降低(P0.05)。相较于模型组,绿原酸低、中、高剂量组肺泡间隔增厚及水肿情况有所减轻,炎症细胞数量显著减少,IL-1β、IL-6和TNF-α含量、W/D比值、细胞凋亡率、MDA和ROS水平以及TXNIP、NLRP3、caspase-1和GSDMD-N蛋白水平显著降低(P0.05);而模型组SOD水平较对照组显著升高(P0.05);绿原酸高剂量组与阳性对照组上述指标差异无统计学意义(P0.05)。结论:绿原酸可能通过下调ROS/TXNIP/NLRP3信号通路表达水平,抑制炎症分子产生及细胞焦亡发生,有效减轻脓毒症小鼠肺损伤。     

犀角地黄汤合银翘散通过干预mtROS-NLRP3通路抑制流感病毒感染的巨噬细胞焦亡

目的:探究犀角地黄汤合银翘散(XDY)对流感病毒引起的炎症反应中巨噬细胞焦亡的作用及其机制。方法:将巨噬细胞J774A.1分为正常对照组(正常培养)、模型组(流感病毒PR8感染24 h)、XDY组(PR8感染+XDY作用24 h)、H_2O_2对照组(H_2O_2作用24 h)和H_2O_2+XDY组(H_2O_2+XDY作用24 h)。用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组细胞LDH的释放量,流式细胞术检测由caspase-1介导的细胞焦亡率,Western blot检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)和gasdermin D N端片段(GSDMD-N)蛋白表达量,ELISA检测白细胞介素1β(IL-1β)分泌水平,激光共聚焦显微镜观察活性氧簇(ROS)与线粒体的共定位和释放情况。结果:流感病毒感染及H_2O_2作用后,巨噬细胞LDH释放和GSDMD-N蛋白表达增多,caspase-1介导的细胞焦亡率升高,同时NLRP3蛋白表达、IL-1β分泌和线粒体ROS(mtROS)生成亦增多;与模型组和H_2O_2对照组相比,XDY可显著减少mtROS生成、NLRP3和GSDMD-N蛋白表达及IL-1β和LDH分泌,降低caspase-1介导的细胞焦亡率。结论:犀角地黄汤合银翘散通过干预mtROS-NLRP3炎症小体通路抑制巨噬细胞焦亡,这可能是其抗流感病毒引起的过度炎症反应的机制之一。     

小檗碱通过mtROS-NLRP3通路抑制H_(2)O_(2)诱导的巨噬细胞焦亡北大核心CSCD

目的:探究小檗碱(BBR)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的巨噬细胞焦亡的影响及mtROS-NLRP3通路在其中的调控作用。方法:以巨噬细胞J774A.1为研究对象,设置正常对照组(control组)、模型组(H_(2)O_(2)作用24 h)、BBR干预组(H_(2)O_(2)+BBR作用24 h)和ROS清除剂NAC干预组(H_(2)O_(2)+NAC作用24 h)。流式细胞术检测各组细胞活性氧簇(ROS)的生成,免疫荧光检测ROS与线粒体的共定位情况,实时荧光定量PCR检测各组细胞NLRP3、IL-1β的基因转录水平,Western blot检测NLRP3蛋白表达量,流式细胞术检测caspase-1的活化及其介导的细胞焦亡率,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组细胞LDH的释放量,ELISA检测IL-1β分泌水平。结果:与模型组相比,BBR干预后显著减少了H_(2)O_(2)诱导的巨噬细胞线粒体ROS(mtROS)的生成,下调了NLRP3和IL-1β的基因表达水平,减少了NLRP3蛋白的表达,降低了caspase-1活化水平及其介导的细胞焦亡率,同时减少了细胞上清液中LDH和IL-1β的释放。结论:小檗碱可能通过下调mtROS水平进而抑制NLRP3炎症体介导的细胞焦亡以减轻炎症反应。     

寿胎丸抑制滋养细胞miR-29c-3p/Caspase-8/GSDME焦亡信号轴治疗URSA的作用与机制研究

目的：探讨寿胎丸通过靶向miR-29c-3p/Caspase-8/GSDME信号通路减轻滋养细胞焦亡治疗不明原因复发性自然流产（URSA）的作用与关键机制。方法：全转录组高通量测序分析正常早孕妇女（NP组）和URSA患者绒毛组织中的差异mRNAs;Western blot检测Caspase-8、Caspase-3和GSDME表达及活化水平；qRT-PCR检测miR-29c-3p和CASP8 mRNA表达。体外调控HTR-8/SVneo细胞miR-29c-3p表达，分析其对Caspase-8和细胞焦亡相关分子表达及细胞培养上清中IL-1β、IL-18蛋白水平的影响。补肾固冲经典方剂寿胎丸含药血清作用于HTR-8/SVneo细胞后，观察miR-29c-3p、CASP8 mRNA表达和Caspase-8、Caspase-3及GSDME蛋白表达及活性，并检测培养上清中IL-1β与IL-18蛋白水平。CBA/J雌鼠和DBA/2雄鼠交配构建URSA小鼠模型，随机分为溶剂对照组、寿胎丸组、寿胎丸+INC组及寿胎丸+miR-29c-3p inhibitor组，观察各组胚胎吸收情况；检测各组胎盘组织中m...     

下调MAC30对乳腺癌细胞焦亡、血管生成及ATP1A2蛋白的作用机制

目的 探讨下调MAC30对乳腺癌细胞焦亡、血管生成及ATP1A2蛋白水平的影响。方法 MCF-7细胞制成单个细胞悬液,分为乳腺癌组（MCF-7细胞）、NC组（MCF-7细胞转染MAC30-NC-shRNA）、MAC30 shRNA组（MCF-7细胞转染MAC30-shRNA）、ATP1A2组（MCF-7细胞转染ATP1A2-shRNA）及MAC30 shRNA+ATP1A2组（MCF-7细胞转染MAC30-shRNA、ATP1A2-shRNA）。qRT-PCR检测各组MCF-7细胞中MAC30 mRNA表达以证实转染效率,采用CCK-8法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞焦亡率;体外血管形成实验检测血管形成数目;Western blot检测ATP1A2、SCr、AKT及PI3K水平。结果 乳腺癌组与NC组MCF-7细胞中MAC30 mRNA表达水平、MCF-7细胞焦亡率及MCF-7细胞血管形成数目比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。与乳腺癌组和NC组比较,MAC30 shRNA组、ATP1A2组及MAC30 shRNA+ATP1A2组MCF-7细胞中MAC30 mRNA表...     

脂多糖通过NLRP3诱导并促进慢性鼻窦炎人鼻黏膜上皮细胞焦亡北大核心CSCD

目的革兰氏阴性菌能够诱发并加重慢性鼻窦炎(CRS)炎症反应,但病理机制有待进一步证实,而细胞焦亡被证实与细菌性炎症反应密切相关,因此本研究重点探讨来源于革兰氏阴性菌的关键成分脂多糖(LPS)是否能够通过诱导并加剧CRS患者鼻黏膜上皮细胞焦亡来促进CRS的炎症进展。方法利用临床上对照组和CRS组患者的鼻黏膜组织,采用IHC检测焦亡相关蛋白的表达。提取并培养正常原代人鼻黏膜上皮细胞(N-HNEpCs)和CRS原代人鼻黏膜上皮细胞(CRS-HNEpCs)。随后将2种细胞分为4组(对照组、LPS 1 mg/L组、LPS 5 mg/L组和LPS 25 mg/L组);CCK-8检测细胞存活率,EthD-I荧光染色结合GSDMD检测细胞焦亡,免疫荧光技术、Western blot、RT-qPCR检测炎性介质IL-18、IL-1β和NLRP3炎症小体(NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1)的表达。结果IHC显示CRS患者鼻黏膜组织中NLRP3、cleaved Caspase-1、IL-18和IL-1β蛋白表达相较对照组显著增加(P<0.01)。体外实验结果表明,不同浓度的LPS刺激均可降低N-HNEpCs和CRS-HNEpCs的存活率(P<0.05),并可增加EthD-I荧光染色阳性细胞数和焦亡关键蛋白GSDMD的表达(P<0.05),且呈现出剂量依赖关系;免疫荧光技术、Western blot和RT-qPCR结果均显示5 mg/L LPS刺激后,N-HNEpCs和CRS-HNEpCs内炎性介质IL-18、IL-1β和NLRP3炎症小体的表达显著上调(P<0.05)。结论LPS可通过激活NLRP3炎症小体从而触发正常原代人鼻黏膜上皮细胞焦亡,并可进一步促进CRS原代人鼻黏膜上皮细胞焦亡进展,提示革兰氏阴性菌可能通过诱发鼻黏膜上皮细胞焦亡从而引起并加剧CRS病变。     

雪胆乙素通过抑制小鼠巨噬细胞中AMPK活性抑制NLRP3炎症小体活化和细胞焦亡

目的 本研究旨在探索雪胆乙素对ATP诱导的炎症小体活化和细胞焦亡的影响,并探讨其潜在的作用机制。方法利用第一信号（LPS）刺激巨噬细胞,再以第二信号（ATP）激活NLRP3炎症小体;采用Western blot检测caspase-1、GSDMD等蛋白的表达水平;ELISA检测细胞培养上清液中IL-1β的水平;免疫荧光染色检测雪胆乙素对LPS+ATP诱导的ASC斑点形成的影响;碘化丙锭（PI）染色法检测细胞死亡。结果 我们发现雪胆乙素处理能够抑制ATP诱导的巨噬细胞中ASC斑点的形成,并抑制LPS+ATP刺激下巨噬细胞中caspase-1的切割及活化;进一步抑制成熟IL-1β释放至培养液上清中;同时,雪胆乙素也能够明显抑制巨噬细胞中GSDMD-NT的形成以及细胞焦亡。另外,雪胆乙素能够抑制AMPK的磷酸化,而AMPK的激动剂AICAR促进成熟IL-1β的释放,以及可以明显逆转雪胆乙素对ATP诱导的细胞焦亡的抑制作用。结论 雪胆乙素可能通过抑制巨噬细胞中AMPK的活性而抑制NLRP3炎症小体活化与细胞焦亡。     

miR-320a通过靶向调控NLRP3对氧糖剥夺诱导的大鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的 探讨miR-320a对氧糖剥夺（oxygen-glucose deprivation,OGD）诱导的心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法 建立OGD诱导心肌H9C2细胞损伤模型，采用q RT-PCR法检测细胞中miR-320a和NLRP3 m RNA表达水平。双荧光素酶报告系统验证miR-320a与NLRP3的靶向关系。将miR-320a mimics及其阴性对照mimics-NC、NLRP3过表达质粒及其空载质粒分别或同时转染至H9C2细胞中，再进行OGD损伤诱导。采用CCK-8检测细胞增殖活性；比色法测定细胞上清液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活性；流式细胞术检测细胞凋亡水平；ELISA检测细胞IL-1β和IL-18水平；Western blot检测细胞中Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3、NLRP3、ASC和caspase-1蛋白表达水平。结果 OGD诱导的H9C2细胞中miR-320a表达水平明显降低，而NLRP3 mRNA表达水平明显升高（P<0.05）。双荧光素酶报告系统验证，miR-320a靶向负调控NL...     

缺血后处理通过抑制细胞焦亡减轻大鼠肺缺血/再灌注引发的肝损伤

目的：探讨细胞焦亡在大鼠肺缺血/再灌注（I/R）引发的肝脏损伤中的作用及缺血后处理（I-post-C对其干预的保护机制。方法：将32只SPF级SD雄性大鼠随机分为对照（control）组、I/R组、I/R+I-post-C组及I/R+INF39（细胞焦亡抑制剂）组,每组8只。普通光镜下观察肝脏组织形态;用相关化学试剂盒测定丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）和caspase-1活性;采用ELISA的方法检测血清中白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18水平;使用Western blot及免疫荧光法检测肝组织细胞焦亡相关蛋白的表达情况。结果：与control组相比,I/R组肝小叶结构紊乱,部分肝细胞出现水肿、空泡样变性和坏死,炎症细胞浸润,血清ALT和AST水平显著升高（P<0.01）;细胞焦亡相关指标核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(caspase-1)和gasdermin D N端片段（GSDMD-N）蛋白表达增加（P<0.05）;NLRP3的免疫荧光表达显著增强（P<0.01）;caspase-1活性显著上升（P<0...     

柯里拉京抑制LPS和ATP激活的NLRP3炎症小体和巨噬细胞焦亡

目的 探讨柯里拉京对细菌脂多糖(LPS)联合腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)诱导的巨噬细胞内NLRP3炎症小体活化和细胞焦亡的调控作用和机制。方法 采用CCK8试剂检测不同浓度柯里拉京对J774A.1细胞活力的影响;碘化丙啶(PI)染色和乳酸脱氢酶(LDH)释放检测柯里拉京对LPS+ATP诱导的细胞死亡的影响。Western blot法检测细胞上清液中炎症小体活化标志物caspase-1 p20(M_r20 000)和成熟IL-1β(M_r17 000)的表达水平,以及检测细胞内NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β前体(pro-IL-1β)和焦亡执行蛋白GSDMD的表达。ELISA检测细胞培养上清液中IL-1β的水平。活性氧(ROS)荧光探针H2DCFDA染色观察柯里拉京对ROS产生的影响。结果 柯里拉京浓度小于40μmol·L^-1时对细胞活性影响较小。柯里拉京减少LPS+ATP刺激的细胞内PI阳性细胞的比例和LDH的释放。柯里拉京抑制LPS+ATP刺激的巨噬细胞内GSDMD蛋白N末端(GSDMD-NT)的表达,以及...     

ECT2通过调控PI3K/AKT信号通路对胰腺癌细胞恶性行为、糖酵解及TH细胞分化的影响

目的 探讨上皮细胞转化序列2(ECT2)通过调控PI3K/AKT信号通路对胰腺癌细胞恶性行为、糖酵解及TH细胞分化的影响。方法 RT-qRCR检测人脐静脉内皮细胞系HUVEC及胰腺癌细胞中ECT2 mRNA表达，将胰腺癌Panc-1细胞株分为胰腺癌组（Panc-1细胞株正常培养）、NC组（Panc-1细胞株转染ECT2阴性对照）、ECT2 siRNA组（Panc-1细胞株转染ECT2 siRNA）、抑制剂组（Panc-1细胞株转染加入PI3K/AKT抑制剂LY294002,ECT2 siRNA+抑制剂组（Panc-1细胞株转染ECT2 siRNA加入PI3K/AKT抑制剂LY294002），采用RT-qRCR各组细胞中ECT2 mRNA表达；Transwell法检测各组Panc-1细胞侵袭能力；划痕实验检测迁移；流式细胞仪检测各组细胞IFN-γ及IL-4表达；免疫印迹分别检测糖酵解代表蛋白及PI3K/AKT表达。结果 胰腺癌组、NC组、ECT2 siRNA组、抑制剂组及ECT2 siRNA+抑制剂组的ECT2 mRNA比较分别为1.00±0.00、0.95±0.03、0.41±0.08...     

miR-22-3p靶向NLRP3表达对脑缺血再灌注损伤大鼠细胞焦亡的影响北大核心CSCD

目的:探究miR-22-3p对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠细胞焦亡的作用及其对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)表达的靶向调控机制。方法:选取2019年12月至2020年3月甘肃医学院附属医院收治的45例急性缺血性脑卒中患者(CIRI)作为研究对象,并选同期体检的健康志愿者40例作为对照组,qRT-PCR检测血清miR-22-3p和NLRP3等相关基因表达,并进行相关性分析;双荧光素酶基因报告分析miR-22-3p与NLRP3的关系;线栓法构建CIRI大鼠模型。Sham组大鼠在造模过程中仅暴露不结扎,造模手术前4 h,CIRI+mimic组大鼠侧脑室注射10µl miR-22-3p-mimic,CIRI+mimic+pc大鼠侧脑室注射10µl miR-22-3p-mimic和pcDNA3.1-NLRP3,Sham组和CIRI组大鼠侧脑室注射等剂量miR-22-3p-mimic-NC。TTC染色检测各组大鼠脑梗死面积,尼氏染色检测各组大鼠脑组织神经细胞活性;ELISA检测大鼠血清IL-1β和IL-18含量;免疫组化检测各组大鼠脑组织半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)表达;Western blot检测各组大鼠脑组织NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)表达。结果:与对照组相比,CIRI患者血清miR-22-3p、Akt、JAK1、PI3K、STAT3等基因表达明显下降,NLRP3、IL-1β、IL-18、Caspase-1、ASC等基因表达明显升高(P<0.05)。CIRI患者血清miR-22-3p与NLRP3(r=−0.80,P=0.000)、IL-1β(r=−0.20,P=0.002)、IL-18(r=−0.25,P=0.004)、Caspase-1(r=−0.35,P=0.005)、ASC(r=−0.30,P=0.001)等基因表达呈负相关。miR-22-3p靶向调控NLRP3表达。过表达miR-22-3p明显降低CIRI大鼠脑梗死面积,增强神经细胞活性,下调IL-1β和IL-18含量及Cas-pase-1、NLRP3、ASC表达。而pcDNA3.1-NLRP3能明显逆转这些抑制作用。结论:CIRI中,miR-22-3p能够靶向调控NLPR3表达抑制神经元细胞焦亡,发挥神经保护作用。     

硫氢化钠通过抑制经典细胞焦亡信号通路减轻巨噬细胞焦亡

目的：探讨硫化氢（hydrogen sulfide,H2S）供体硫氢化钠（sodium hydrosulfide,NaHS）对巨噬细胞焦亡的作用。方法：人髓系白血病单核细胞THP-1经佛波酯刺激并分化为巨噬细胞后,采用不同浓度的氧化低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL）和NaHS对其进行干预,并分为空白对照组、ox-LDL刺激组和NaHS+ox-LDL干预组。采用CCK-8法检测THP-1巨噬细胞活力;采用油红O染色和光镜分别观察THP-1巨噬细胞脂质蓄积和焦亡细胞形态;采用Hoechst 33342/碘化丙啶（propidium iodide,PI）荧光染色和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活性检测评估细胞焦亡程度;采用H2S检测试剂盒测定细胞内的H2S水平;采用试剂盒测定细胞中的caspase-1活性;采用Western blot分析细胞中焦亡关键蛋白的表达水平。结果：与空白对照组相比,ox-LDL(100和150 mg/L)可显著增加THP-1巨噬细胞中的PI阳性细胞比例、LDH释放、casp...     

LPS与ATP共同诱导小鼠原代腹腔巨噬细胞焦亡模型的建立

目的：探索脂多糖（LPS）和三磷酸腺苷（ATP）共同诱导小鼠原代腹腔巨噬细胞焦亡模型的最佳条件。方法：采用流式细胞仪F4/80和CD-11b染色检测巨噬细胞纯度,Annexin V-PE/7-AAD双染色法筛选出LPS和ATP共同诱导细胞焦亡的最适浓度及时间。巨噬细胞随机分为control组、LPS组、ATP组和LPS+ATP组;Western blot检测GSDMD、caspase-1、caspase-11、NLRP3、ASC、pro-IL-1β、pro-IL-18和HMGB1蛋白表达水平;ELISA检测培养上清中IL-1β和TNF-α表达水平;透射电镜（TEM）和扫描电镜（SEM）观察巨噬细胞焦亡形态。结果：巨噬细胞的纯度达到90%;500 ng/ml LPS 24 h+5 mmol/L ATP 4 h为诱导巨噬细胞焦亡的最佳组合方式;LPS+ATP组的GSDMD、caspase-1、caspase-11、NLRP3、ASC、pro-IL-1β、pro-IL-18和HMGB1的蛋白表达量明显高于对照组（P<0.05）;培养上清中IL-1β和TNF-α表达量显著高于对照组（P&...     

阿托伐他汀联合丙泊酚治疗能够抑制NLRP3炎症小体缓解大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的 探讨阿托伐他汀与丙泊酚联合治疗在大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用机制及其与NLRP3炎症小体之间的关系。方法 构建心肌细胞缺血再灌注模型;将大鼠随机分为假手术组（Sham）、模型组（MIRI）、阿托伐他汀组（Atorvastatin）、丙泊酚组（Propofol）和阿托伐他汀与丙泊酚联合组（Atorvastatin+Propofol）。应用TTC染色法检测各组大鼠心肌损伤面积;应用TUNEL染色法检测心肌细胞的凋亡情况;免疫荧光法检测ROS的表达水平;ELISA法检测心肌细胞中TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-18的表达情况;应用Western blot法检测NLRP3、Caspase-1、IL-1β及GSDMD-N的变化。结果 与模型组相比,阿托伐他汀和丙泊酚联合治疗组中大鼠的心肌梗死面积降低显著降低（P<0.05）;心肌细胞的凋亡率显著降低（P<0.05）;ROS的水平显著下降（P<0.05）;TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-18的表达明显下降（P<0.05）以及NLRP3、Caspase-1、IL-1β及GSDMD-N等蛋白的水平显著降低（P<0.05）。结论 阿托伐他汀与丙泊酚联合治疗能够降低心肌细胞的凋亡、氧化应激反应和炎症反应,其机制与下调NLRP3炎症小体及其相关的蛋白表达有关。