组蛋白甲基转移酶SETD2在肾细胞癌发生中的作用机制

肾细胞癌是一种具有复杂遗传背景的癌症,研究表明,异常的表观遗传调控是肾细胞癌发生的主要原因之一。组蛋白甲基转移酶SETD2是一种重要的表观遗传分子,并且在肾细胞癌中具有很高的突变率。为了探究SETD2在肾细胞癌发生与发展中的作用和机制,该研究利用肾脏特异性敲除SETD2的基因小鼠模型与肾细胞癌表型分析,发现在VHL缺失的条件下,SETD2的缺失能够导致肾细胞癌的发生。转录组测序结果显示,SETD2的敲除导致了Wnt/β-catenin与FoxO信号通路的激活。该研究为肾细胞癌的治疗提供了新的靶点和思路。     

组蛋白共价修饰——组蛋白H3第4赖氨酸甲基化

染色体组蛋白的共价修饰在调节染色体结构,控制基因的转录等方面发挥重要的作用。组蛋白H3第4赖氨酸的甲基化作为共价修饰的方式之一,可以调控基因的转录激活。随着对组蛋白甲基化转移酶及相关作用蛋白研究的深入,人们对组蛋白H3第4赖氨酸的甲基化的功能也有了更深的了解。目前研究发现它与癌症也有很密切的关系。     

组蛋白H3K9甲基化的多重作用

组蛋白是染色质的核心，其尾部共价修饰在基因表达调控中有重要作用。赖氨酸甲基化是组蛋白共价修饰之一，在多种生物学过程有重要作用。Suv39h1作为第一个被发现的组蛋白赖氨酸甲基转移酶，可以催化H3K9甲基化。H3K9甲基化是异染色质蛋白（HP1）染色区的停泊位点（docking site)。研究表明，组蛋白H3K9甲基化在异染色质形成及基因转录调控中具有重要的作用。     

突触融合蛋白结合蛋白4对口腔鳞状细胞癌细胞增殖和迁移的影响

目的：观察突触融合蛋白结合蛋白4(STXBP4)在口腔鳞状细胞癌（OSCC）中的表达情况及其对OSCC细胞恶性生物学行为的影响。方法：（1）通过TIMER、GEPIA2、UALCAN、ENCORI、GEO和HPA数据库从mRNA和蛋白水平综合研究STXBP4在头颈鳞状细胞癌组织中的表达情况。采用qPCR和Western blot分别检测OSCC细胞系中STXBP4的mRNA和蛋白表达水平。（2）用RNA干扰技术下调SCC-9细胞中STXBP4表达,构建敲减组（si-STXBP4-1、si-STXBP4-2和si-STXBP4-3组）和阴性对照组（si-NC组）;通过慢病毒转染技术过表达CAL-27细胞中的STXBP4,构建过表达组（LV-STXBP4组）和阴性对照组（LV-NC组）。分别用CCK-8实验、平板集落形成实验和Transwell实验检测OSCC细胞活力、集落形成能力和迁移能力;用Western blot检测上皮-间充质转化（EMT）相关蛋白表达。（3）用裸鼠皮下移植瘤模型探究STXBP4在体内对OSCC细胞增殖的影响。结果：（1）TIMER、GEPIA2、UALCAN、EN...     

沉默TRIM27基因对鼻咽癌5-8F细胞增殖、侵袭与迁移的影响

目的:检测TRIM27蛋白在鼻咽癌组织和鼻咽部正常组织中的表达水平,观察沉默TRIM27对鼻咽癌5-8F细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法:通过免疫组化技术检测鼻咽癌组织和鼻咽部正常组织中TRIM27的表达水平,采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)和Western blot法分别检测5-8F细胞和NP69细胞中TRIM27的mRNA和蛋白表达水平;利用脂质体2000将TRIM27干扰序列转入5-8F细胞中;采用real-time PCR检测转染后细胞中TRIM27 mRNA表达水平的变化,Western blot法检测转染后细胞中TRIM27蛋白水平的变化;CCK-8法检测细胞活力的变化;细胞平板集落形成实验观察转染后细胞增殖能力的变化;Transwell实验检测细胞侵袭能力的变化;划痕实验观察细胞迁移能力的变化。结果:免疫组化结果显示TRIM27在鼻咽癌组织中的表达率高于鼻咽部正常组织;TRIM27基因沉默后5-8F细胞增殖、侵袭和迁移能力均明显受到抑制(P0.05)。结论:TRIM27在鼻咽癌5-8F细胞中可能充当癌基因的角色。沉默TRIM27基因可以明显抑制鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

组蛋白去甲基化酶含Jumonji结构域蛋白3(JMJD3)抑制人脐静脉内皮细胞增殖及侵袭和迁移

目的分析组蛋白特异性去甲基化酶含Jumonji结构域蛋白3(JMJD3)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的细胞周期、凋亡和迁移的影响。方法合成JMJD3的小干扰RNA(siRNA)、构建JMJD3过表达载体;阴性对照siRNA、si JMJD3或质粒p MSCV-PIG、p MSCV-JMJD3转染HUVEC 48 h后,通过荧光实时定量PCR检测JMJD3 mRNA的水平;流式细胞术检测各转染组HUVEC的细胞周期与凋亡的变化;TranswellTM实验和划痕实验检测转染后的HUVEC侵袭和迁移能力的变化。结果 HUVEC转染si JMJD3 48 h后JMJD3的表达水平下降,S期细胞增加、而G1期细胞明显减少。下调JMJD3后HUVEC的增殖能力增强,细胞凋亡减少,细胞侵袭、迁移能力增强。而在HUVEC转染JMJD3过表达质粒MSCV-JMJD3 48 h后,细胞内JMJD3水平增加,S期细胞显著减少,而G1期细胞则明显增加,同时HUVEC的增殖能力受到抑制,细胞凋亡增多,细胞侵袭和迁移能力减弱。结论 JMJD3具有抑制HUVEC增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡的作用。     

血清反应因子N端片段对鼻咽癌细胞增殖及迁移能力的影响

目的:探讨血清反应因子N端剪切片段(SRF-N)对鼻咽癌(NPC)细胞增殖和迁移能力的影响与机制.方法:应用SRF全长(SRF-Full,1～508 aa)、SRF-N(1～254 aa)及阴性对照(NC)慢病毒颗粒感染人NPC细胞系6-10B,经嘌呤霉素抗性筛选结合Western blot检测Flag标签化融合蛋白的...     

p38信号通路对SETD4在细胞中的表达和定位的影响

目的: 观察SETD4(SET domain containing 4)蛋白在不同细胞中的表达和定位情况,以及亚砷酸钠(NaAsO₂)刺激对细胞SETD4表达和定位的影响,探讨NaAsO₂诱导SETD4的改变是否依赖于p38信号通路。方法: 用Western blotting检测SETD4在不同细胞中蛋白的表达情况,用细胞免疫荧光技术检测SETD4在细胞中的定位;用NaAsO₂刺激 p38 ^+/+和 p38 ^-/-细胞,分别收集细胞总蛋白检测SETD4蛋白的表达变化,同时观察SETD4的定位和移位改变。结果: SETD4蛋白无论在鼠源还是人源的细胞中均有表达;细胞免疫荧光结果显示SETD4在整个细胞中分布,以胞质较多; p38 ^+/+和 p38 ^-/-细胞受NaAsO₂刺激后其SETD4蛋白的表达趋势一致,即均在6 h时有明显减少; p38 ^+/+细胞受NaAsO₂刺激后SETD4蛋白从胞质向胞核移位,而 p38 ^-/-细胞SETD4的移位现象不明显。结论: SETD4蛋白在不同种属及组织来源的细胞中均有表达,表现为全细胞分布,以胞质为主;NaAsO₂刺激可影响细胞SETD4蛋白的表达水平及定位,NaAsO₂诱导的SETD4移位改变有赖于p38 MAPK介导的信号通路。     

含十字形结构域蛋白-3对肺癌细胞增殖与迁徙的影响研究

为了解含十字形结构域蛋白-3(JMJD3)对肺癌细胞A549增殖与迁徙的影响,通过JMJD3表达质粒转染A549培养48h后,EDU染色及流式细胞术检测细胞增殖与凋亡,划痕实验检测细胞迁徙,RT-PCR检测p21mR-NA表达。结果显示,JMJD3转染后EDU阳性比例明显高于对照(JMJD3:40.75%±2.07%,对照:20.97%±1.5%,P<0.001);G1期细胞比例降低(JMJD3:47.80%±1.85%,对照:54.60%±0.95%,P=0.005)。转染JM-JD3后p21mRNA表达量为35.89%±3.71%,而对照为91.78%±3.74%,两组p21表达变化明显(P<0.001)。转染JMJD3质粒24h和48h后细胞迁徙距离分别为(0.47±0.27)cm和(0.96±0.40)cm,对照为(0.57±0.22)cm和(1.08±0.33)cm,两组无显著性差异(P>0.05)。JMJD3可促进A549细胞增殖,降低G1期细胞比例并下调p21mRNA表达,但对A549迁徙无明显影响。     

结缔组织生长因子siRNA对大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的观察结缔组织生长因子(CTGF)siRNA对CTGF表达及对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响。方法培养大鼠血管平滑肌细胞,用脂质体法将抗CTGF483siRNA进行转染,Western blot法检测转染效果,MTT法及划痕实验测定对VSMC增殖和迁移的影响。结果转染CTGF483siRNA组的CTGF表达明显低于未转染组,MTT法显示转染CTGF483siRNA后VSMCs增殖减慢,划痕试验证实转染CTGF483siRNA后VSMCs迁移受到抑制。结论CTGFsiRNA可以抑制VSMC增殖和迁移,有望为颈动脉粥样硬化性缺血性脑血管病的预防和治疗新靶点。     

M ETTL3促进HT29和LOVO细胞增殖和迁移的实验研究

目的 研究甲基转移酶样蛋白3(methyltransferase like 3,METTL3)在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)组织及细胞系中表达及其对HT29和LOVO细胞增殖和迁移能力的影响.方法 应用GE02R软件分析METTL3在Gene Expression Omnibus(GEO)数据...     

Calreticulin通过诱导细胞EMT促进鼻咽癌迁移和侵袭

目的:观察钙网蛋白(calreticulin,CRT)在鼻咽癌组织中的表达并分析其临床病理学意义,揭示其对鼻咽癌CNE2细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法:S-P免疫组化法检测CRT在52例鼻咽癌组织和57例鼻咽部良性病变组织中的表达情况,并分析其临床病理学意义;构建特异性干扰CRT基因的小干扰RNA干扰载体,瞬时转染鼻咽癌CNE2细胞,观察CRT低表达对CNE2细胞形态的影响;Transwell迁移和侵袭实验检测CRT低表达对CNE2细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot检测CRT低表达对上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、转化生长因子-β(TGF-β)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)等EMT相关蛋白表达的影响。结果:CRT在鼻咽癌组织中的阳性表达率为82.69%(43/52),在鼻咽部良性病变组织的阳性表达率为19.29%(11/57),CRT在鼻咽癌组织中表达显著增高(P0.05);CRT的阳性表达率与鼻咽癌分期及淋巴结转移呈正相关(P0.05)。敲降CRT呈低表达后,CNE2细胞由梭形演变为扁平和鹅卵石样,且细胞排列紧密,细胞的迁移侵袭能力减弱(P0.05)。敲降CRT呈低表达后,E-cadherin表达显著增高,vimentin、TGF-β以及MMP-9蛋白的表达降低(P0.05)。结论:Calreticulin在鼻咽癌组织中表达显著增高,且与鼻咽癌临床分期及淋巴结转移呈正相关。Calreticulin可诱导鼻咽癌CNE2细胞发生EMT,进而促进鼻咽癌的迁移和侵袭。     

PGRN基因沉默对人非小细胞肺癌A549细胞增殖及迁移的影响

目的:探讨小干扰RNA(small interference RNA,si RNA)介导的颗粒蛋白前体(progranulin,PGRN)基因沉默对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制。方法:分别用q PCR和Western blot法检测A549细胞和正常人支气管上皮(HBE)细胞中PGRN的m RNA和蛋白表达水平。采用脂质体转染法将PGRNsi RNA转染A549细胞,采用q PCR和Western blot法验证PGRN表达的变化;应用MTT实验检测细胞活力;活细胞计数法和结晶紫染色实验检测细胞增殖能力;划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移能力;并用Western blot法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Bcl-2和Bax的蛋白表达水平以及PGRN下游信号通路中细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和蛋白激酶B(Akt)的磷酸化水平。结果:PGRN在A549细胞中的m RNA和蛋白水平均明显高于HBE细胞(P0.05);转染PGRN-si RNA后A549细胞中PGRN的m RNA和蛋白水平均明显下调,细胞活力、增殖能力以及迁移能力均明显降低(P0.05)。沉默PGRN基因的表达,可下调PCNA、cyclin D1和Bcl-2的蛋白表达,而上调Bax的蛋白表达,且磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)和磷酸化的Akt(p-Akt)的蛋白水平明显降低(P0.05)。结论:PGRN基因沉默能明显抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖和迁移能力,PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路可能在该过程中发挥重要作用。     

β1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ对施万细胞增殖的影响

目的 探讨周围神经施万细胞表达β1，4-半乳糖基转移酶-Ⅰ(β-1，4-GalT-Ⅰ)对其增殖的影响。方法 将构建的正、反义β-1，4-GalT-Ⅰ表达质粒，转染到施万细胞中，分析转染细胞倍增时间、^3H-TdR掺人情况以及细胞周期变化。结果 转染正义β-1，4-GalT-Ⅰ后施万细胞的增殖受到抑制，这种作用随转染浓度增大而增强；在G1／G0期的细胞数目增加，S期的数目减少。而转染反义β-1，4-GalT-Ⅰ有相反的作用。结论 β-1，4-GalT-Ⅰ对施万细胞的增殖有抑制作用，可能在周围神经施万细胞的增殖调节中发挥重要作用。     

SMYD3过表达对人肝内胆管癌细胞miR-124表达及细胞增殖的影响

 目的：探讨肝内胆管癌细胞HCCC-9810中SET和MYND结构域含有蛋白3（SET and MYND domain-containing protein 3,SMYD3）过表达对miR-124表达及细胞增殖能力的影响。方法：瞬时转染 SMYD3 真核表达质粒后, Western blotting 检测细胞中SMYD3 蛋白水平的变化;qRT-PCR 检测细胞中SMYD3 mRNA 和miR-124 表达;甲基化特异性PCR检测miR-124-1、miR-124-2和miR-124-3基因启动子甲基化水平;CCK-8 和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力。结果：以空白组为对照,肝内胆管癌细胞HCCC-9810在转染pEGFP-SMYD3质粒后,SMYD3蛋白及 mRNA 表达均显著上升（P＜0.05）,miR-124-1、miR-124-2和miR-124-3基因启动子甲基化显著增加（P＜0.05）,miR-124表达明显下降（P＜0.05）,细胞增殖能力显著提高（P＜0.05）。结论：过表达 SMYD3可引起miR-124基因启动子甲基化增加,导致胆管癌细胞中miR-124 的表达下降,同时过表达SMYD3可增强细胞增殖能力。     

人组织激肽释放酶基因重组腺病毒转染对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨重组腺病毒介导的人组织激肽释放酶(hKLK1)基因转移对血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导下的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMCSHR)增殖和迁移的影响。方法:自行构建双顺反子重组腺病毒载体,携带强绿色荧光蛋白(EGFP)标志基因和目的基因hKLK1;用细胞计数法和四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞生长周期;蛋白免疫印迹法(Western blotting)测定细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p27Kip1、p21Cip1的表达。采用改良Boyden微孔膜双槽法测定VSMCSHR迁移。结果:(1)hKLK1基因转移呈感染复数依赖性(20-100MOI)抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR生长,100MOI时抑制率为39.3%;呈时间依赖性抑制VSMCSHR生长,第5d时达高峰,抑制率为35.2%。(2)hKLK1基因转移可显著抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR增殖,峰值抑制率为30.2%(P0.01);细胞周期阻滞于G0/G1期的VSMCSHR明显增多,最大阻滞率为36.4%(P0.01),而缓激肽B2受体特异性阻断剂Hoe140逆转了hKLK的抑制作用。(3)hKLK1基因转移明显上调PDGF-BB诱导VSMCSHR的p27Kip1、p21Cip1表达,Hoe140明显降低p27Kip1、p21Cip1表达。(4)hKLK1基因转移可明显抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR细胞迁移,抑制率为34.6%,且Hoe140不影响该抑制作用。结论:hKLK1基因转移可抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR增殖,主要由缓激肽B2受体介导的,通过上调细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p27Kip1、p21Cip1表达的途径。而hKLK1基因转移抑制VSMCSHR迁移效应可能不通过B2受体。